實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察課件

實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察1一、實驗目的初步掌握（小鼠）骨髓細胞染色體標本的制備原理和方法鞏固顯微鏡的操作技術了解小鼠的染色體形態(tài)特征一、實驗目的初步掌握（小鼠）骨髓細胞染色體標本的制備原理和方2二、實驗原理染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。染色體異常也稱染色體發(fā)育不全。目前已確認染色體病綜合征100余種，智力低下和生長發(fā)育遲滯是染色體病的共同特征。21三體綜合征；18三體綜合征、貓叫綜合征二、實驗原理染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。318三體綜合征18三體綜合征4二、實驗原理染色體標本的觀察廣泛應用于一些疾病的臨床診斷中。例如白血病、惡性血液病等的診斷。染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。

二、實驗原理染色體標本的觀察廣泛應用于一些疾病的臨床診斷中5

骨髓細胞數(shù)量多且分裂旺盛，可直接進行染色體標本的制備。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。人骨髓染色體抽取骨髓細胞數(shù)量多且分裂旺盛，可直接進行染色體標本的制備。取6

怎樣才能制備一個好的染色體標本？獲得大量處于有絲分裂中期的細胞。使細胞膜破裂，且染色體能夠完整并較分散的釋放出來。怎樣才能制備一個好的染色體標本？7低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。細胞懸液不能太稀，要呈乳白色；染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。棄上清，加固定液0.形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。075mol/LKCl低滲液、Giemsa染液獲得大量處于有絲分裂中期的細胞。3．低滲處理是實驗成敗的關鍵，注意低滲時間；固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。低滲：用吸管吹打骨髓細胞使其分散，加入預溫37℃的低滲液至8ml,將離心管至37℃水浴鍋中，保溫至少30min后取出，使細胞充分吸水膨脹。染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。4．固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用，固定要充分；18三體綜合征、貓叫綜合征雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。小鼠骨髓要沖洗干凈，以收集足夠的骨髓細胞；低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全。固定、制細胞懸液：加固定液5ml吹打混勻秋水仙素處理：秋水仙素溶液可抑制紡錘體的形成，使正在分裂的骨髓細胞停止在細胞分裂中期，積累大量中期分裂相細胞。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。預固定：終止低滲作用，使細胞離心時不易破裂，固定維持細胞形態(tài)結構。高距離滴片：使細胞膜易于破裂，獲得中期染色體標本，在顯微鏡下觀察染色體的結構和數(shù)量。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。8三、實驗器材和試劑1.器材

蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙2、試劑

100ug秋水仙素液、0.075mol/LKCl低滲液、Giemsa染液三、實驗器材和試劑1.器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿91.秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對其進行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。四、實驗步驟

注意：剪去少量骨質，避免骨髓細胞丟失；擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；用0.075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。2.取材：頸椎脫臼法處死

取兩后肢股骨紗布擦凈肌肉剪去股骨兩頭，暴露骨髓腔低滲液(5ml)沖洗至離心管內收集骨髓細胞1.秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/10頸椎脫臼法處死小鼠頸椎脫臼法處死小鼠113.低滲：用吸管吹打骨髓細胞使其分散，加入預溫37℃的低滲液至8ml,將離心管至37℃水浴鍋中，保溫至少30min后取出，使細胞充分吸水膨脹。

低滲不足，則細胞膨脹不夠，滴片時細胞不破裂。

低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全?？諝獯荡蚍ǎ河梦芟鹉z頭內的空氣混勻液體。3.低滲：用吸管吹打骨髓細胞使其分散，加入預溫37℃的低滲124.預固定：加1ml新配制固定液混勻1500r/min，5min棄上清液。

固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；離心需要配平。作用：終止低滲；維持細胞的膨脹狀態(tài)；防止離心破裂5.固定、制細胞懸液：加固定液5ml吹打混勻

固定15min離心1500r/min，5min

棄上清，加固定液0.2~0.4ml

吹打成細胞懸液，準備制片使用。制備細胞懸液時，根據具體情況加固定液，以懸液呈現(xiàn)乳白色為宜。

4.預固定：加1ml新配制固定液混勻136.滴片：冰片傾斜30°,細胞懸液距離玻片30cm高，在不重疊位置滴1～2滴，用口吹散細胞，過火焰干燥。

注意：載玻片預冷、高度、吹散、不可使載玻片燙手。7.染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。（染色盤中進行）8.小鼠染色體觀察：低倍鏡、高倍鏡下尋找染色體分散的中期分裂相.6.滴片：冰片傾斜30°,細胞懸液距離玻片30cm高，在14小鼠骨髓染色體10×10小鼠骨髓染色體10×1015小鼠骨髓染色體10×40小鼠骨髓染色體10×4016小鼠骨髓染色體10×40固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；吹打成細胞懸液，準備制片使用。固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；固定15min離心1500r/min，5min雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；獲得大量處于有絲分裂中期的細胞。染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。5．載玻片要潔凈并預冷，滴片要有一定的高度；小鼠骨髓染色體10×10擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。高距離滴片：使細胞膜易于破裂，獲得中期染色體標本，在顯微鏡下觀察染色體的結構和數(shù)量。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。小鼠骨髓染色體10×40小鼠染色體觀察：低倍鏡、高倍鏡下尋找染色體分散的中期分裂相.秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對其進行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。小鼠骨髓染色體10×4017實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察課件18實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。低滲：用吸管吹打骨髓細胞使其分散，加入預溫37℃的低滲液至8ml,將離心管至37℃水浴鍋中，保溫至少30min后取出，使細胞充分吸水膨脹?？酒瑫r溫度不能太高。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。秋水仙素處理：秋水仙素溶液可抑制紡錘體的形成，使正在分裂的骨髓細胞停止在細胞分裂中期，積累大量中期分裂相細胞。1500r/min，5min棄上清液。小鼠骨髓染色體10×10細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全。雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。075mol/LKCl低滲液、Giemsa染液烤片時溫度不能太高。注意：剪去少量骨質，避免骨髓細胞丟失；固定15min離心1500r/min，5min低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。數(shù)目觀察：小鼠2倍體細胞染色體，數(shù)目2n=40條。其中19對為常染色體，一對為性染色體，染色體的核型分為4組。雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察數(shù)目觀察：小鼠2倍體細胞染色19形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。注意：剪去少量骨質，避免骨髓細胞丟失；染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙棄上清，加固定液0.器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙1．掌握好秋水仙素的濃度和處理時間；雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。低滲：用吸管吹打骨髓細胞使其分散，加入預溫37℃的低滲液至8ml,將離心管至37℃水浴鍋中，保溫至少30min后取出，使細胞充分吸水膨脹。染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。預固定：加1ml新配制固定液混勻4．固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用，固定要充分；染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；1．掌握好秋水仙素的濃度和處理時間；秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對其進行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。小鼠骨髓染色體10×40雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。4ml低滲液(5ml)沖洗至離心管內收集骨髓細胞形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。小鼠骨髓染色體10×40低滲液(5ml)沖洗至離心管內收集骨髓細胞初步掌握（小鼠）骨髓細胞染色體標本的制備原理和方法獲得大量處于有絲分裂中期的細胞。染色體標本的觀察廣泛應用于一些疾病的臨床診斷中。形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。初步掌握（小鼠）骨髓細胞染色體標本的制備原理和方法染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。空氣吹打法：用吸管橡膠頭內的空氣混勻液體。染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。5．載玻片要潔凈并預冷，滴片要有一定的高度；固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。空氣吹打法：用吸管橡膠頭內的空氣混勻液體。2、試劑100ug秋水仙素液、0.低滲液(5ml)沖洗至離心管內收集骨髓細胞2、試劑100ug秋水仙素液、0.低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。細胞懸液不能太稀，要呈乳白色；小鼠骨髓染色體10×40小鼠骨髓染色體10×40預固定：終止低滲作用，使細胞離心時不易破裂，固定維持細胞形態(tài)結構。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。小鼠染色體觀察：低倍鏡、高倍鏡下尋找染色體分散的中期分裂相.075mol/LKCl低滲液、Giemsa染液吹打成細胞懸液，準備制片使用。其中19對為常染色體，一對為性染色體，染色體的核型分為4組。4ml染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對其進行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。4．固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用，固定要充分；低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。1．掌握好秋水仙素的濃度和處理時間；染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。小鼠骨髓染色體10×10075mol/LKCl低滲液、Giemsa染液獲得大量處于有絲分裂中期的細胞。器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白?？酒瑫r溫度不能太高。秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對其進行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙注意：剪去少量骨質，避免骨髓細胞丟失；小鼠骨髓染色體10×40細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。注意：剪去少量骨質，避免骨髓細胞丟失；預固定：終止低滲作用，使細胞離心時不易破裂，固定維持細胞形態(tài)結構。滴片：冰片傾斜30°,細胞懸液距離玻片30cm高，在不重疊位置滴1～2滴，用口吹散細胞，過火焰干燥。高距離滴片：使細胞膜易于破裂，獲得中期染色體標本，在顯微鏡下觀察染色體的結構和數(shù)量。數(shù)目觀察：小鼠2倍體細胞染色體，數(shù)目2n=40條。細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全。雄性XY,雌性XX,Y染色體最小?？諝獯荡蚍ǎ河梦芟鹉z頭內的空氣混勻液體。擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；高距離滴片：使細胞膜易于破裂，獲得中期染色體標本，在顯微鏡下觀察染色體的結構和數(shù)量。4ml取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。吹打成細胞懸液，準備制片使用。小鼠骨髓染色體10×40染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。棄上清，加固定液0.形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。1500r/min，5min棄上清液。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。低滲液(5ml)沖洗至離心管內收集骨髓細胞075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。預固定：加1ml新配制固定液混勻固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察高距離滴片：使細胞膜易于破裂，獲得中期染色體標本，在顯微鏡下觀察染色體的結構和數(shù)量。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。吹打成細胞懸液，準備制片使用。低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全。秋水仙素處理：秋水仙素溶液可抑制紡錘體的形成，使正在分裂的骨髓細胞停止在細胞分裂中期，積累大量中期分裂相細胞?？諝獯荡蚍ǎ河梦芟鹉z頭內的空氣混勻液體。細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全。染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。小鼠骨髓染色體10×40小鼠骨髓染色體10×10低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙吹打成細胞懸液，準備制片使用。秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對其進行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。骨髓細胞數(shù)量多且分裂旺盛，可直接進行染色體標本的制備。形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。小鼠骨髓染色體10×40形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。注意：載玻片預冷、高度、吹散、不可使載玻片燙手。雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。預固定：加1ml新配制固定液混勻雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。棄上清，加固定液0.秋水仙素處理：秋水仙素溶液可抑制紡錘體的形成，使正在分裂的骨髓細胞停止在細胞分裂中期，積累大量中期分裂相細胞。小鼠骨髓染色體10×40染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。小鼠骨髓染色體10×10雄性XY,雌性XX,Y染色體最小?？諝獯荡蚍ǎ河梦芟鹉z頭內的空氣混勻液體。低滲液(5ml)沖洗至離心管內收集骨髓細胞5．載玻片要潔凈并預冷，滴片要有一定的高度；小鼠骨髓染色體10×404．固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用，固定要充分；雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。1500r/min，5min棄上清液。吹打成細胞懸液，準備制片使用。染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。小鼠骨髓染色體10×40雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。棄上清，加固定液0.3．低滲處理是實驗成敗的關鍵，注意低滲時間；吹打成細胞懸液，準備制片使用。小鼠骨髓染色體10×10怎樣才能制備一個好的染色體標本？雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。棄上清，加固定液0.小鼠骨髓染色體10×40小鼠骨髓染色體10×40075mol/LKCl低滲液、Giemsa染液雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。5．載玻片要潔凈并預冷，滴片要有一定的高度；1500r/min，5min棄上清液。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊?？酒瑫r溫度不能太高。4ml075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。小鼠染色體觀察：低倍鏡、高倍鏡下尋找染色體分散的中期分裂相.小鼠染色體觀察：低倍鏡、高倍鏡下尋找染色體分散的中期分裂相.注意：載玻片預冷、高度、吹散、不可使載玻片燙手。五、注意事項1．掌握好秋水仙素的濃度和處理時間；2．離心前需要配平；3.小鼠骨髓要沖洗干凈，以收集足夠的骨髓細胞；3．低滲處理是實驗成敗的關鍵，注意低滲時間；4．固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用，固定要充分；5．載玻片要潔凈并預冷，滴片要有一定的高度；6.細胞懸液不能太稀，要呈乳白色；7.烤片時溫度不能太高。8.沖洗染液時水流要緩慢，以免細胞流失過多。形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。4ml低滲作用:20實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察21一、實驗目的初步掌握（小鼠）骨髓細胞染色體標本的制備原理和方法鞏固顯微鏡的操作技術了解小鼠的染色體形態(tài)特征一、實驗目的初步掌握（小鼠）骨髓細胞染色體標本的制備原理和方22二、實驗原理染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。染色體異常也稱染色體發(fā)育不全。目前已確認染色體病綜合征100余種，智力低下和生長發(fā)育遲滯是染色體病的共同特征。21三體綜合征；18三體綜合征、貓叫綜合征二、實驗原理染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。2318三體綜合征18三體綜合征24二、實驗原理染色體標本的觀察廣泛應用于一些疾病的臨床診斷中。例如白血病、惡性血液病等的診斷。染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。

二、實驗原理染色體標本的觀察廣泛應用于一些疾病的臨床診斷中25

骨髓細胞數(shù)量多且分裂旺盛，可直接進行染色體標本的制備。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。人骨髓染色體抽取骨髓細胞數(shù)量多且分裂旺盛，可直接進行染色體標本的制備。取26

怎樣才能制備一個好的染色體標本？獲得大量處于有絲分裂中期的細胞。使細胞膜破裂，且染色體能夠完整并較分散的釋放出來。怎樣才能制備一個好的染色體標本？27低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。細胞懸液不能太稀，要呈乳白色；染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。棄上清，加固定液0.形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。075mol/LKCl低滲液、Giemsa染液獲得大量處于有絲分裂中期的細胞。3．低滲處理是實驗成敗的關鍵，注意低滲時間；固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。低滲：用吸管吹打骨髓細胞使其分散，加入預溫37℃的低滲液至8ml,將離心管至37℃水浴鍋中，保溫至少30min后取出，使細胞充分吸水膨脹。染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。4．固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用，固定要充分；18三體綜合征、貓叫綜合征雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。小鼠骨髓要沖洗干凈，以收集足夠的骨髓細胞；低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全。固定、制細胞懸液：加固定液5ml吹打混勻秋水仙素處理：秋水仙素溶液可抑制紡錘體的形成，使正在分裂的骨髓細胞停止在細胞分裂中期，積累大量中期分裂相細胞。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。預固定：終止低滲作用，使細胞離心時不易破裂，固定維持細胞形態(tài)結構。高距離滴片：使細胞膜易于破裂，獲得中期染色體標本，在顯微鏡下觀察染色體的結構和數(shù)量。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。28三、實驗器材和試劑1.器材

蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙2、試劑

100ug秋水仙素液、0.075mol/LKCl低滲液、Giemsa染液三、實驗器材和試劑1.器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿291.秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對其進行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。四、實驗步驟

注意：剪去少量骨質，避免骨髓細胞丟失；擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；用0.075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。2.取材：頸椎脫臼法處死

取兩后肢股骨紗布擦凈肌肉剪去股骨兩頭，暴露骨髓腔低滲液(5ml)沖洗至離心管內收集骨髓細胞1.秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/30頸椎脫臼法處死小鼠頸椎脫臼法處死小鼠313.低滲：用吸管吹打骨髓細胞使其分散，加入預溫37℃的低滲液至8ml,將離心管至37℃水浴鍋中，保溫至少30min后取出，使細胞充分吸水膨脹。

低滲不足，則細胞膨脹不夠，滴片時細胞不破裂。

低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全?？諝獯荡蚍ǎ河梦芟鹉z頭內的空氣混勻液體。3.低滲：用吸管吹打骨髓細胞使其分散，加入預溫37℃的低滲324.預固定：加1ml新配制固定液混勻1500r/min，5min棄上清液。

固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；離心需要配平。作用：終止低滲；維持細胞的膨脹狀態(tài)；防止離心破裂5.固定、制細胞懸液：加固定液5ml吹打混勻

固定15min離心1500r/min，5min

棄上清，加固定液0.2~0.4ml

吹打成細胞懸液，準備制片使用。制備細胞懸液時，根據具體情況加固定液，以懸液呈現(xiàn)乳白色為宜。

4.預固定：加1ml新配制固定液混勻336.滴片：冰片傾斜30°,細胞懸液距離玻片30cm高，在不重疊位置滴1～2滴，用口吹散細胞，過火焰干燥。

注意：載玻片預冷、高度、吹散、不可使載玻片燙手。7.染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。（染色盤中進行）8.小鼠染色體觀察：低倍鏡、高倍鏡下尋找染色體分散的中期分裂相.6.滴片：冰片傾斜30°,細胞懸液距離玻片30cm高，在34小鼠骨髓染色體10×10小鼠骨髓染色體10×1035小鼠骨髓染色體10×40小鼠骨髓染色體10×4036小鼠骨髓染色體10×40固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；吹打成細胞懸液，準備制片使用。固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；固定15min離心1500r/min，5min雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；獲得大量處于有絲分裂中期的細胞。染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。5．載玻片要潔凈并預冷，滴片要有一定的高度；小鼠骨髓染色體10×10擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。高距離滴片：使細胞膜易于破裂，獲得中期染色體標本，在顯微鏡下觀察染色體的結構和數(shù)量。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。小鼠骨髓染色體10×40小鼠染色體觀察：低倍鏡、高倍鏡下尋找染色體分散的中期分裂相.秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對其進行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。小鼠骨髓染色體10×4037實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察課件38實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。低滲：用吸管吹打骨髓細胞使其分散，加入預溫37℃的低滲液至8ml,將離心管至37℃水浴鍋中，保溫至少30min后取出，使細胞充分吸水膨脹?？酒瑫r溫度不能太高。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。秋水仙素處理：秋水仙素溶液可抑制紡錘體的形成，使正在分裂的骨髓細胞停止在細胞分裂中期，積累大量中期分裂相細胞。1500r/min，5min棄上清液。小鼠骨髓染色體10×10細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全。雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。075mol/LKCl低滲液、Giemsa染液烤片時溫度不能太高。注意：剪去少量骨質，避免骨髓細胞丟失；固定15min離心1500r/min，5min低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。數(shù)目觀察：小鼠2倍體細胞染色體，數(shù)目2n=40條。其中19對為常染色體，一對為性染色體，染色體的核型分為4組。雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察數(shù)目觀察：小鼠2倍體細胞染色39形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。注意：剪去少量骨質，避免骨髓細胞丟失；染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙棄上清，加固定液0.器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙1．掌握好秋水仙素的濃度和處理時間；雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。低滲：用吸管吹打骨髓細胞使其分散，加入預溫37℃的低滲液至8ml,將離心管至37℃水浴鍋中，保溫至少30min后取出，使細胞充分吸水膨脹。染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。預固定：加1ml新配制固定液混勻4．固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用，固定要充分；染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；1．掌握好秋水仙素的濃度和處理時間；秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對其進行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。小鼠骨髓染色體10×40雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。4ml低滲液(5ml)沖洗至離心管內收集骨髓細胞形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。小鼠骨髓染色體10×40低滲液(5ml)沖洗至離心管內收集骨髓細胞初步掌握（小鼠）骨髓細胞染色體標本的制備原理和方法獲得大量處于有絲分裂中期的細胞。染色體標本的觀察廣泛應用于一些疾病的臨床診斷中。形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。初步掌握（小鼠）骨髓細胞染色體標本的制備原理和方法染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。空氣吹打法：用吸管橡膠頭內的空氣混勻液體。染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。5．載玻片要潔凈并預冷，滴片要有一定的高度；固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白?？諝獯荡蚍ǎ河梦芟鹉z頭內的空氣混勻液體。2、試劑100ug秋水仙素液、0.低滲液(5ml)沖洗至離心管內收集骨髓細胞2、試劑100ug秋水仙素液、0.低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。細胞懸液不能太稀，要呈乳白色；小鼠骨髓染色體10×40小鼠骨髓染色體10×40預固定：終止低滲作用，使細胞離心時不易破裂，固定維持細胞形態(tài)結構。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。小鼠染色體觀察：低倍鏡、高倍鏡下尋找染色體分散的中期分裂相.075mol/LKCl低滲液、Giemsa染液吹打成細胞懸液，準備制片使用。其中19對為常染色體，一對為性染色體，染色體的核型分為4組。4ml染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對其進行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。4．固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用，固定要充分；低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全。低滲作用:使細胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。1．掌握好秋水仙素的濃度和處理時間；染色體是組成細胞核的基本物質，是基因的載體。小鼠骨髓染色體10×10075mol/LKCl低滲液、Giemsa染液獲得大量處于有絲分裂中期的細胞。器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白?？酒瑫r溫度不能太高。秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對其進行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙注意：剪去少量骨質，避免骨髓細胞丟失；小鼠骨髓染色體10×40細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。注意：剪去少量骨質，避免骨髓細胞丟失；預固定：終止低滲作用，使細胞離心時不易破裂，固定維持細胞形態(tài)結構。滴片：冰片傾斜30°,細胞懸液距離玻片30cm高，在不重疊位置滴1～2滴，用口吹散細胞，過火焰干燥。高距離滴片：使細胞膜易于破裂，獲得中期染色體標本，在顯微鏡下觀察染色體的結構和數(shù)量。數(shù)目觀察：小鼠2倍體細胞染色體，數(shù)目2n=40條。細胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時期。低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全。雄性XY,雌性XX,Y染色體最小。空氣吹打法：用吸管橡膠頭內的空氣混勻液體。擦凈血跡和肌肉細胞以免影響觀察；高距離滴片：使細胞膜易于破裂，獲得中期染色體標本，在顯微鏡下觀察染色體的結構和數(shù)量。4ml取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。吹打成細胞懸液，準備制片使用。小鼠骨髓染色體10×40染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。棄上清，加固定液0.形態(tài)特征觀察：端著絲粒染色體“U”“V”。1500r/min，5min棄上清液。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。低滲液(5ml)沖洗至離心管內收集骨髓細胞075mol/LKCl收集足量細胞，反復沖洗直到股骨發(fā)白。預固定：加1ml新配制固定液混勻固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需現(xiàn)配；器材蠟盤、手術剪、小鑷子、平皿、注射器、10ml離心管、吸管、量筒、預冷載玻片、試管架、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、乙醚酒精、擦鏡紙染色體是染色質在細胞分裂期的存在形式。實驗三小鼠骨髓染色體制備與觀察高距離滴片：使細胞膜易于破裂，獲得中期染色體標本，在顯微鏡下觀察染色體的結構和數(shù)量。取材方便，操作簡單和無需無菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動物等染色體的常用方法。吹打成細胞懸液，準備制片使用。低滲過度，則細胞提前破裂，染色體觀察不全。秋水仙素處理：秋水仙素溶液可抑制紡錘體的形成，使正在分裂的骨髓細胞停止在細胞分裂中期，積累大量中期分裂相細胞。空氣吹打法：用吸管橡膠頭內的空氣混