HE的染色基本原理課件

HE的染色基本原理浙江省腫瘤醫(yī)院病理科李筠HE的染色基本原理浙江省腫瘤醫(yī)院病理科李筠一、細(xì)胞核的染色原理一、細(xì)胞核的染色原理

細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要成份，去氧核糖核酸（DNA），DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條鏈上的磷酸基向外，帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色，蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色，軟骨基質(zhì)，鈣鹽顆粒呈深藍(lán)，粘液呈灰藍(lán)。細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要成份，去氧核糖核酸（DNA細(xì)胞核軟骨基質(zhì)鈣鹽顆粒粘液灰藍(lán)色藍(lán)色細(xì)胞核軟骨基質(zhì)鈣鹽顆粒粘液深藍(lán)色細(xì)胞核軟骨基質(zhì)粘液灰藍(lán)色藍(lán)色細(xì)胞核軟骨基質(zhì)粘液深藍(lán)色二、細(xì)胞漿的染色原理二、細(xì)胞漿的染色原理

細(xì)胞漿內(nèi)主要成份是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的染色與PH值有密切關(guān)系，當(dāng)PH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)4.7~5.0時(shí)，胞漿對(duì)外不顯電性，同時(shí)酸或堿性染粒不易染色，當(dāng)PH調(diào)劑6~8時(shí)，大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，表現(xiàn)酸性電離，而帶負(fù)電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，同時(shí)胞核也被染色，核和胞漿難以區(qū)分（陰離子）的染料染色。伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陰離子）結(jié)合而使細(xì)胞漿染色。結(jié)果：細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，如：胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈僅先強(qiáng)的鮮紅，膠原纖維呈桔粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈桔紅色；與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對(duì)比。細(xì)胞漿內(nèi)主要成份是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的彈力纖維粉紅色胞漿嗜酸性顆粒鮮紅膠原纖維桔粉紅紅血球桔紅彈力纖維粉紅色胞漿嗜酸性顆粒鮮紅膠原纖維桔粉紅紅血球桔紅質(zhì)量好HE具備條件質(zhì)量好HE具備條件1.細(xì)胞核與細(xì)胞漿藍(lán)紅相映，鮮艷亮麗；2.胞核鮮明、核膜、核染色質(zhì)顆粒均清晰可見(jiàn)；3.組織或一般結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及假物質(zhì)成分均能顯示出來(lái)。1.細(xì)胞核與細(xì)胞漿藍(lán)紅相映，鮮艷亮麗；三、HE染色中二甲苯、酒精和水洗的作用

三、HE染色中二甲苯、酒精和水洗的作用

1.二甲苯的作用：

二甲苯可以溶解切片中的石蠟，以使染液可以進(jìn)入細(xì)胞和組織，因此，石蠟的存在妨礙水和染料進(jìn)入細(xì)胞，染色后二甲苯起透明切片的作用，以利于光線(xiàn)的透過(guò)。1.二甲苯的作用：

二甲苯可以溶解切片中的石蠟2.酒精的作用：

酒精用于蘇木素前，由高→低是為了洗脫用于脫蠟的二甲苯使水能進(jìn)入細(xì)胞和組織中，伊紅染色以后酒精由低→高逐漸脫去組織中水份，為二甲苯進(jìn)入細(xì)胞創(chuàng)造條件，否則組織切片透明度達(dá)不到光學(xué)顯微鏡觀(guān)察時(shí)透光度的要求，在顯微鏡下不可能清晰的細(xì)胞和組織結(jié)構(gòu)。2.酒精的作用：

酒精用于蘇木素前，由高→低是3.水洗的作用：

在脫蠟酒精之后用水洗切片，使切片進(jìn)入水，才能使蘇木精染液進(jìn)入細(xì)胞核中，使細(xì)胞核染色。3.水洗的作用：

在脫蠟酒精之后用水洗切片，使水洗目的：①切片清潔，提高切片質(zhì)量；②切片著色均勻；③防止不清潔的切片污染染液，保持染液的清潔和純度。

染色之后的水洗：為洗去未與切片結(jié)合染液

分化以后的水洗：中止分化作用

伊紅染色后的水洗：洗去未結(jié)合的染液，以防止大量伊紅進(jìn)入染缸水洗目的：①切片清潔，提高切片質(zhì)量；②切片著色均勻；③防止不四、分化和藍(lán)化作用四、分化和藍(lán)化作用1.分化作用

蘇木素染色后，用水洗去未結(jié)合在切片中染液，但是對(duì)細(xì)胞核中結(jié)合過(guò)多的染料和細(xì)胞漿中吸附的染料必須用分化液1%鹽酸酒精脫去，才能保證細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色的分明，把這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為染色的分化作用。1.分化作用蘇木素染色后，用水洗去未結(jié)合在2.藍(lán)化作用

分化之后蘇木精在酸性條件下處紅色離子狀態(tài)，在堿性條件下則處于藍(lán)色離子狀態(tài)，而呈藍(lán)色，所以分化之后用水洗去酸而中止分化，而用弱堿水使蘇木素染上細(xì)胞核變呈藍(lán)色，稱(chēng)藍(lán)化作用，一般分用自來(lái)水浸洗變藍(lán)，也可用稀氨水或溫水。2.藍(lán)化作用分化之后蘇木精在酸性條件下處紅蘇木素、伊紅染色方法

（自動(dòng)染色機(jī)程序）蘇木素、伊紅染色方法

（自動(dòng)染色機(jī)程序）二甲苯5分鐘

二甲苯5分鐘

二甲苯3分鐘

無(wú)水乙醇5分鐘

無(wú)水乙醇3分鐘

無(wú)水乙醇3分鐘

水洗5分鐘

蘇木素13分鐘

水洗3分鐘伊紅8秒

水洗2秒

85%酒精5秒

95%酒精5秒

無(wú)水乙醇3分鐘

無(wú)水乙醇5分鐘

無(wú)水乙醇5分鐘

正丁醇5分鐘

二甲苯5分鐘二甲苯5分鐘

二甲苯5分鐘五、媒染染料五、媒染染料

有些染料直接對(duì)組織染色時(shí)，由于染料與組織間的作用力弱，有時(shí)甚至無(wú)作用，因此組織著色很淺，甚至不著色，我們必須將這些染料先與媒染劑結(jié)合生成色淀的染料稱(chēng)為媒染染料（此類(lèi)染料多為天染染料，如蘇木精、卡紅）。有些染料直接對(duì)組織染色時(shí)，由于染料與組織間的作用六、媒染劑六、媒染劑

凡由于和組織及染料結(jié)合，生成色淀，并促進(jìn)染色的金屬離子鹽類(lèi)或金屬原子的含氧酸等稱(chēng)為媒染劑。

間接染色過(guò)程中，媒染染料+媒染劑結(jié)合=色淀+組織結(jié)合

媒染劑+組織然后再與染料結(jié)合，生成組織——媒染劑——染料結(jié)合物，從而使組織著色凡由于和組織及染料結(jié)合，生成色淀，并促進(jìn)染色的七、促染劑七、促染劑

指只增強(qiáng)染料的染色能力，但不參與染色反應(yīng)的一類(lèi)物質(zhì)。常見(jiàn)：伊紅染液中冰醋酸。指只增強(qiáng)染料的染色能力，但不參與染色反應(yīng)的一類(lèi)八、染色過(guò)程中易出現(xiàn)的問(wèn)題及原因八、染色過(guò)程中易出現(xiàn)的問(wèn)題及原因（一）染色過(guò)程中易出現(xiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)（一）染色過(guò)程中易出現(xiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)1.在進(jìn)行染色操作前，進(jìn)一步了解組織來(lái)源，固定、脫水、透明、包埋、切片的方法，因?yàn)檫@些處理因素對(duì)組織染色的效果都有直接影響，特別是固定液和固定時(shí)間與染色效果有特別重要的關(guān)系。1.在進(jìn)行染色操作前，進(jìn)一步了解組織來(lái)源，固定、脫水、透明2.染液的配制

時(shí)間：配制后染液不能久存再用

PH：如顯示酸性粘液物質(zhì)

配制方法及條件皆可直接影響染色效果

如配制Hannis明礬蘇木素染液加入氧化汞

溫度過(guò)高或溫度過(guò)低，從而影響染色2.染液的配制

時(shí)間：配制后染液不能久存再用

3.保持染色劑和各種用具的清潔

4.染色時(shí)間問(wèn)題：與染液新舊、溫度、不同固定液固定時(shí)間長(zhǎng)短3.保持染色劑和各種用具的清潔

4.染色時(shí)間問(wèn)題：與染液（二）切片脫落（二）切片脫落切片脫落組織處理不當(dāng)切片方面原因染色過(guò)程中切片脫落組織處理不當(dāng)切片方面原因染色過(guò)程中1.由于組織處理不當(dāng)所致①組織本身的原因，如凝血塊、血栓、干涸成過(guò)硬的組織及組織碎屑等；②組織透明不足，石蠟不能浸透，切片時(shí)免強(qiáng)切出的片子脫蠟時(shí)大收縮，入水或染液后易脫落；③組織脫水透明過(guò)度，浸蠟時(shí)間長(zhǎng)或溫度太高，引起組織收縮硬脆，不易切片完整切片。1.由于組織處理不當(dāng)所致①組織本身的原因，如凝血塊、血栓、2.切片方面原因①切片過(guò)厚；②薄片水溫低，附貼不牢或附貼下含氣泡；③烤片時(shí)間長(zhǎng)或溫度高，蛋白甘油沒(méi)能發(fā)揮貼附作用；④載玻片清洗的不潔凈，含有油賦或混入塵污導(dǎo)臟東西。2.切片方面原因①切片過(guò)厚；3.染色過(guò)程中的原因①脫蠟時(shí)未經(jīng)自高至低的各級(jí)酒精的緩沖調(diào)解逐漸加水，用水急沖，振蕩過(guò)甚；②染液或試劑的酸堿度不適宜或停留時(shí)間較久，如HE返藍(lán)所用堿性溶液過(guò)大時(shí)易引起脫落；③染液或用具不潔凈。3.染色過(guò)程中的原因①脫蠟時(shí)未經(jīng)自高至低的各級(jí)酒精的緩沖調(diào)（三）染色不均（三）染色不均①組織取材固定不當(dāng)，如：組織取材過(guò)大或過(guò)厚，所用固定液濃度不對(duì)時(shí)，不能將組織固定透或固定不完全；

②切片厚薄不均或切片時(shí)出現(xiàn)橫紋也能引起不均；

③染色處理不當(dāng)引起染色不均的原因①組織取材固定不當(dāng)，如：組織取材過(guò)大或過(guò)厚，所用固定液濃度不a.組織脫蠟不徹底；

原因：試劑陳舊，溫度低

b.染液試劑量少時(shí)；

c.分化劑濃度大，分化過(guò)強(qiáng)；

原因：進(jìn)行急速分化或在分化后沒(méi)有迅速入水，使之終止分化均可造成染色不均

d.染色或分化時(shí)、組織切片上有氣泡時(shí)，則氣泡內(nèi)的組織可能染不上色或沒(méi)分化著，使之染色不均。a.組織脫蠟不徹底；

原因：試劑陳舊，溫度低

b.（四）模糊不清（四）模糊不清①取材時(shí)組織已經(jīng)腐敗自溶或取材后沒(méi)能及時(shí)固定和固定液濃度不夠而組織出現(xiàn)自溶時(shí)，在染色組織切片上，往往是一片模糊；

②組織切片脫蠟不徹底，造成染色染不上或著色很淡，鏡檢時(shí)呈現(xiàn)模糊不清；

③染色后脫水不徹底，肉眼所見(jiàn)為云霧狀，鏡下模糊不清；

④封固切片時(shí)因空氣潮濕，封片遲緩或呼吸造成切片上水珠，亦可出現(xiàn)模糊不清。①取材時(shí)組織已經(jīng)腐敗自溶或取材后沒(méi)能及時(shí)固定和固定液濃度不夠（五）切片污染（五）切片污染①組織碎屑污染；

②染液及試劑污染；

③灰塵污染；

④霉菌污染。①組織碎屑污染；

②染液及試劑污染；

③灰塵污染；

④霉菌污九、易褪色的原因九、易褪色的原因①染料的性質(zhì)及染料與組織的作用問(wèn)題特染過(guò)程中，如：VG染色其與組織形成的顏色不牢固，再加苦味酸能夠分化及氧化酸性復(fù)紅；②制片過(guò)程中原因所致這類(lèi)褪色是指在不因褪色的時(shí)間內(nèi)而出現(xiàn)褪色，如：HE的結(jié)果在幾個(gè)月內(nèi)就褪色了，這是因該造成其褪色的原因如下：①染料的性質(zhì)及染料與組織的作用問(wèn)題a.

固定不佳或或時(shí)間過(guò)久，固定液PH值不適宜；

b.

脫水前組織沒(méi)有經(jīng)過(guò)流水沖洗；

c.

染色時(shí)染液的酸堿度不適宜，如：HE染色時(shí)用堿性大的溶液返藍(lán)，并經(jīng)自來(lái)水長(zhǎng)時(shí)間沖洗，就不易褪色，特別是伊紅染液加促染劑冰蠟酸過(guò)多時(shí)，染色結(jié)果保持時(shí)間很短；a.固定不佳或或時(shí)間過(guò)久，固定液PH值不適宜；

b.脫水d.

組織切片染色后脫水透明失當(dāng)；

e.

封固時(shí)組織切片內(nèi)混入水分，含有氣泡封固劑稀或用量少，蓋玻片小或不平，蓋玻片位置不適當(dāng)或被移動(dòng)等，不但可致切片染色模糊不清，而且亦易褪色；

f.

染色后的切片長(zhǎng)期地置于日光或強(qiáng)烈高溫的燈光下，尤其是暴曬于日光下最容易引起切片褪色，另外，將封固后的切片加溫烤干或室溫過(guò)高時(shí)，一切能加速氧化易引起褪色。d.組織切片染色后脫水透明失當(dāng)；

e.封固時(shí)組織切片內(nèi)混十、染液的配制十、染液的配制1.邁耶（Mayer）氏蘇木素染液：

蘇木素0.5g鉀明礬25g碘酸鈉0.1g

水合氯醛25g檸檬酸0.5g蒸餾水500ml

先將蘇木精加入煮沸的蒸餾水內(nèi)，攪拌充分溶解后，再次依次加入鉀明礬和碘酸鈉，至鉀明礬全部溶解，然后加入水合氯醛和檸檬酸，加熱煮沸后5分鐘，冷卻后過(guò)濾，放置8~12小時(shí)即可。1.邁耶（Mayer）氏蘇木素染液：蘇木3.伊紅：伊紅y（醇溶）2.4g酒精1000ml微波爐高火2分鐘攪拌溶解冷卻后加3ml的冰醋酸3.伊紅：伊紅y（醇溶）2.4g2.吉爾（Gill）改良蘇木素蘇木素2g無(wú)水乙醇250ml硫酸鋁17.6g碘酸鈉0.2g冰醋酸20ml蒸餾水250ml

先將蘇木素溶于無(wú)水乙醇中，再將硫酸鋁溶于蒸餾水中。兩液溶解后將其混合，加入碘酸鈉，最后加人冰醋酸。2.吉爾（Gill）改良蘇木素蘇木素2g3.促染液：碳酸氫鉀1g硫酸鎂10g自來(lái)水500ml3.促染液：碳酸氫鉀1g謝謝！謝謝！HE的染色基本原理浙江省腫瘤醫(yī)院病理科李筠HE的染色基本原理浙江省腫瘤醫(yī)院病理科李筠一、細(xì)胞核的染色原理一、細(xì)胞核的染色原理

細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要成份，去氧核糖核酸（DNA），DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條鏈上的磷酸基向外，帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色，蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色，軟骨基質(zhì)，鈣鹽顆粒呈深藍(lán)，粘液呈灰藍(lán)。細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要成份，去氧核糖核酸（DNA細(xì)胞核軟骨基質(zhì)鈣鹽顆粒粘液灰藍(lán)色藍(lán)色細(xì)胞核軟骨基質(zhì)鈣鹽顆粒粘液深藍(lán)色細(xì)胞核軟骨基質(zhì)粘液灰藍(lán)色藍(lán)色細(xì)胞核軟骨基質(zhì)粘液深藍(lán)色二、細(xì)胞漿的染色原理二、細(xì)胞漿的染色原理

細(xì)胞漿內(nèi)主要成份是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的染色與PH值有密切關(guān)系，當(dāng)PH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)4.7~5.0時(shí)，胞漿對(duì)外不顯電性，同時(shí)酸或堿性染粒不易染色，當(dāng)PH調(diào)劑6~8時(shí)，大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，表現(xiàn)酸性電離，而帶負(fù)電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，同時(shí)胞核也被染色，核和胞漿難以區(qū)分（陰離子）的染料染色。伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陰離子）結(jié)合而使細(xì)胞漿染色。結(jié)果：細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，如：胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈僅先強(qiáng)的鮮紅，膠原纖維呈桔粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈桔紅色；與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對(duì)比。細(xì)胞漿內(nèi)主要成份是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的彈力纖維粉紅色胞漿嗜酸性顆粒鮮紅膠原纖維桔粉紅紅血球桔紅彈力纖維粉紅色胞漿嗜酸性顆粒鮮紅膠原纖維桔粉紅紅血球桔紅質(zhì)量好HE具備條件質(zhì)量好HE具備條件1.細(xì)胞核與細(xì)胞漿藍(lán)紅相映，鮮艷亮麗；2.胞核鮮明、核膜、核染色質(zhì)顆粒均清晰可見(jiàn)；3.組織或一般結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及假物質(zhì)成分均能顯示出來(lái)。1.細(xì)胞核與細(xì)胞漿藍(lán)紅相映，鮮艷亮麗；三、HE染色中二甲苯、酒精和水洗的作用

三、HE染色中二甲苯、酒精和水洗的作用

1.二甲苯的作用：

二甲苯可以溶解切片中的石蠟，以使染液可以進(jìn)入細(xì)胞和組織，因此，石蠟的存在妨礙水和染料進(jìn)入細(xì)胞，染色后二甲苯起透明切片的作用，以利于光線(xiàn)的透過(guò)。1.二甲苯的作用：

二甲苯可以溶解切片中的石蠟2.酒精的作用：

酒精用于蘇木素前，由高→低是為了洗脫用于脫蠟的二甲苯使水能進(jìn)入細(xì)胞和組織中，伊紅染色以后酒精由低→高逐漸脫去組織中水份，為二甲苯進(jìn)入細(xì)胞創(chuàng)造條件，否則組織切片透明度達(dá)不到光學(xué)顯微鏡觀(guān)察時(shí)透光度的要求，在顯微鏡下不可能清晰的細(xì)胞和組織結(jié)構(gòu)。2.酒精的作用：

酒精用于蘇木素前，由高→低是3.水洗的作用：

在脫蠟酒精之后用水洗切片，使切片進(jìn)入水，才能使蘇木精染液進(jìn)入細(xì)胞核中，使細(xì)胞核染色。3.水洗的作用：

在脫蠟酒精之后用水洗切片，使水洗目的：①切片清潔，提高切片質(zhì)量；②切片著色均勻；③防止不清潔的切片污染染液，保持染液的清潔和純度。

染色之后的水洗：為洗去未與切片結(jié)合染液

分化以后的水洗：中止分化作用

伊紅染色后的水洗：洗去未結(jié)合的染液，以防止大量伊紅進(jìn)入染缸水洗目的：①切片清潔，提高切片質(zhì)量；②切片著色均勻；③防止不四、分化和藍(lán)化作用四、分化和藍(lán)化作用1.分化作用

蘇木素染色后，用水洗去未結(jié)合在切片中染液，但是對(duì)細(xì)胞核中結(jié)合過(guò)多的染料和細(xì)胞漿中吸附的染料必須用分化液1%鹽酸酒精脫去，才能保證細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色的分明，把這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為染色的分化作用。1.分化作用蘇木素染色后，用水洗去未結(jié)合在2.藍(lán)化作用

分化之后蘇木精在酸性條件下處紅色離子狀態(tài)，在堿性條件下則處于藍(lán)色離子狀態(tài)，而呈藍(lán)色，所以分化之后用水洗去酸而中止分化，而用弱堿水使蘇木素染上細(xì)胞核變呈藍(lán)色，稱(chēng)藍(lán)化作用，一般分用自來(lái)水浸洗變藍(lán)，也可用稀氨水或溫水。2.藍(lán)化作用分化之后蘇木精在酸性條件下處紅蘇木素、伊紅染色方法

（自動(dòng)染色機(jī)程序）蘇木素、伊紅染色方法

（自動(dòng)染色機(jī)程序）二甲苯5分鐘

二甲苯5分鐘

二甲苯3分鐘

無(wú)水乙醇5分鐘

無(wú)水乙醇3分鐘

無(wú)水乙醇3分鐘

水洗5分鐘

蘇木素13分鐘

水洗3分鐘伊紅8秒

水洗2秒

85%酒精5秒

95%酒精5秒

無(wú)水乙醇3分鐘

無(wú)水乙醇5分鐘

無(wú)水乙醇5分鐘

正丁醇5分鐘

二甲苯5分鐘二甲苯5分鐘

二甲苯5分鐘五、媒染染料五、媒染染料

有些染料直接對(duì)組織染色時(shí)，由于染料與組織間的作用力弱，有時(shí)甚至無(wú)作用，因此組織著色很淺，甚至不著色，我們必須將這些染料先與媒染劑結(jié)合生成色淀的染料稱(chēng)為媒染染料（此類(lèi)染料多為天染染料，如蘇木精、卡紅）。有些染料直接對(duì)組織染色時(shí)，由于染料與組織間的作用六、媒染劑六、媒染劑

凡由于和組織及染料結(jié)合，生成色淀，并促進(jìn)染色的金屬離子鹽類(lèi)或金屬原子的含氧酸等稱(chēng)為媒染劑。

間接染色過(guò)程中，媒染染料+媒染劑結(jié)合=色淀+組織結(jié)合

媒染劑+組織然后再與染料結(jié)合，生成組織——媒染劑——染料結(jié)合物，從而使組織著色凡由于和組織及染料結(jié)合，生成色淀，并促進(jìn)染色的七、促染劑七、促染劑

指只增強(qiáng)染料的染色能力，但不參與染色反應(yīng)的一類(lèi)物質(zhì)。常見(jiàn)：伊紅染液中冰醋酸。指只增強(qiáng)染料的染色能力，但不參與染色反應(yīng)的一類(lèi)八、染色過(guò)程中易出現(xiàn)的問(wèn)題及原因八、染色過(guò)程中易出現(xiàn)的問(wèn)題及原因（一）染色過(guò)程中易出現(xiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)（一）染色過(guò)程中易出現(xiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)1.在進(jìn)行染色操作前，進(jìn)一步了解組織來(lái)源，固定、脫水、透明、包埋、切片的方法，因?yàn)檫@些處理因素對(duì)組織染色的效果都有直接影響，特別是固定液和固定時(shí)間與染色效果有特別重要的關(guān)系。1.在進(jìn)行染色操作前，進(jìn)一步了解組織來(lái)源，固定、脫水、透明2.染液的配制

時(shí)間：配制后染液不能久存再用

PH：如顯示酸性粘液物質(zhì)

配制方法及條件皆可直接影響染色效果

如配制Hannis明礬蘇木素染液加入氧化汞

溫度過(guò)高或溫度過(guò)低，從而影響染色2.染液的配制

時(shí)間：配制后染液不能久存再用

3.保持染色劑和各種用具的清潔

4.染色時(shí)間問(wèn)題：與染液新舊、溫度、不同固定液固定時(shí)間長(zhǎng)短3.保持染色劑和各種用具的清潔

4.染色時(shí)間問(wèn)題：與染液（二）切片脫落（二）切片脫落切片脫落組織處理不當(dāng)切片方面原因染色過(guò)程中切片脫落組織處理不當(dāng)切片方面原因染色過(guò)程中1.由于組織處理不當(dāng)所致①組織本身的原因，如凝血塊、血栓、干涸成過(guò)硬的組織及組織碎屑等；②組織透明不足，石蠟不能浸透，切片時(shí)免強(qiáng)切出的片子脫蠟時(shí)大收縮，入水或染液后易脫落；③組織脫水透明過(guò)度，浸蠟時(shí)間長(zhǎng)或溫度太高，引起組織收縮硬脆，不易切片完整切片。1.由于組織處理不當(dāng)所致①組織本身的原因，如凝血塊、血栓、2.切片方面原因①切片過(guò)厚；②薄片水溫低，附貼不牢或附貼下含氣泡；③烤片時(shí)間長(zhǎng)或溫度高，蛋白甘油沒(méi)能發(fā)揮貼附作用；④載玻片清洗的不潔凈，含有油賦或混入塵污導(dǎo)臟東西。2.切片方面原因①切片過(guò)厚；3.染色過(guò)程中的原因①脫蠟時(shí)未經(jīng)自高至低的各級(jí)酒精的緩沖調(diào)解逐漸加水，用水急沖，振蕩過(guò)甚；②染液或試劑的酸堿度不適宜或停留時(shí)間較久，如HE返藍(lán)所用堿性溶液過(guò)大時(shí)易引起脫落；③染液或用具不潔凈。3.染色過(guò)程中的原因①脫蠟時(shí)未經(jīng)自高至低的各級(jí)酒精的緩沖調(diào)（三）染色不均（三）染色不均①組織取材固定不當(dāng)，如：組織取材過(guò)大或過(guò)厚，所用固定液濃度不對(duì)時(shí)，不能將組織固定透或固定不完全；

②切片厚薄不均或切片時(shí)出現(xiàn)橫紋也能引起不均；

③染色處理不當(dāng)引起染色不均的原因①組織取材固定不當(dāng)，如：組織取材過(guò)大或過(guò)厚，所用固定液濃度不a.組織脫蠟不徹底；

原因：試劑陳舊，溫度低

b.染液試劑量少時(shí)；

c.分化劑濃度大，分化過(guò)強(qiáng)；

原因：進(jìn)行急速分化或在分化后沒(méi)有迅速入水，使之終止分化均可造成染色不均

d.染色或分化時(shí)、組織切片上有氣泡時(shí)，則氣泡內(nèi)的組織可能染不上色或沒(méi)分化著，使之染色不均。a.組織脫蠟不徹底；

原因：試劑陳舊，溫度低

b.（四）模糊不清（四）模糊不清①取材時(shí)組織已經(jīng)腐敗自溶或取材后沒(méi)能及時(shí)固定和固定液濃度不夠而組織出現(xiàn)自溶時(shí)，在染色組織切片上，往往是一片模糊；

②組織切片脫蠟不徹底，造成染色染不上或著色很淡，鏡檢時(shí)呈現(xiàn)模糊不清；

③染色后脫水不徹底，肉眼所見(jiàn)為云霧狀，鏡下模糊不清；

④封固切片時(shí)因空氣潮濕，封片遲緩或呼吸造成切片上水珠，亦可出現(xiàn)模糊不清。①取材時(shí)組織已經(jīng)腐敗自溶或取材后沒(méi)能及時(shí)固定和固定液濃度不夠（五）切片污染（五）切片污染①組織碎屑污染；

②染液及試劑污染；

③灰塵污染；

④霉菌污染。①組織碎屑污染；

②染液及試劑污染；

③灰塵污染；

④霉菌污九、易褪色的原因九、易褪色的原因①染料的性質(zhì)及染料與組織的作用問(wèn)題特染過(guò)程中，如：VG染色其與組織形成的顏色不牢固，再加苦味酸能夠分化及氧化酸性復(fù)紅；②制片過(guò)程中原因所致這類(lèi)褪色是指在不因褪色的時(shí)間內(nèi)而出現(xiàn)褪色，如：HE的結(jié)果在幾個(gè)月內(nèi)就褪色了，這是因該造成其褪色的原因如下：①染料的