基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

PAGEPAGE10《基礎(chǔ)生物化學(xué)》課程實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱一、課程的性質(zhì)和任務(wù)“基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)”是采用生物化學(xué)的原理和方法探究植物生命現(xiàn)象化學(xué)本質(zhì)的實(shí)驗(yàn)科學(xué)。它是植物生產(chǎn)類、環(huán)境資源類各專業(yè)重要的專業(yè)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課程。本課程講授基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)方面的基本理論，著重進(jìn)行實(shí)驗(yàn)技術(shù)方面的系統(tǒng)訓(xùn)練，并安排綜合實(shí)驗(yàn)及綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告寫作訓(xùn)練。二、教學(xué)內(nèi)容和方法教學(xué)內(nèi)容分為基礎(chǔ)生化實(shí)驗(yàn)理論講授（4學(xué)時(shí)）和實(shí)驗(yàn)操作（28學(xué)時(shí)）兩部分，以實(shí)驗(yàn)操作為主。實(shí)驗(yàn)理論講授離心技術(shù)、電泳技術(shù)、層析技術(shù)和分光光度1-2114-81組，每人獨(dú)立操作。課程安排與基礎(chǔ)生物化學(xué)理論課程同步，在第4學(xué)期進(jìn)行。三、教學(xué)目的和要求通過(guò)實(shí)驗(yàn)理論學(xué)習(xí)、實(shí)驗(yàn)技術(shù)訓(xùn)練及實(shí)驗(yàn)技術(shù)的綜合應(yīng)用，提高學(xué)生的實(shí)驗(yàn)技能，培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰蛣?chuàng)新思維能力，為應(yīng)用生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)手段進(jìn)行科學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)前要求預(yù)習(xí)，檢查預(yù)習(xí)報(bào)告。基本實(shí)驗(yàn)每人獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)操作并交實(shí)驗(yàn)4-8（或處理11（或處理，以組統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，每人撰寫1告。教學(xué)結(jié)束后，在教材的思考題范圍內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)筆試。四、考核方式及辦法實(shí)驗(yàn)成績(jī)以預(yù)習(xí)5%，操作15%，實(shí)驗(yàn)報(bào)告40%，綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告10%30%，進(jìn)行綜合評(píng)定。實(shí)驗(yàn)課指導(dǎo)教師可以一次考核實(shí)驗(yàn)或多次檢察現(xiàn)場(chǎng)評(píng)定預(yù)習(xí)和操作成績(jī)；實(shí)驗(yàn)報(bào)告和綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告成績(jī)以批閱分?jǐn)?shù)評(píng)定，實(shí)驗(yàn)筆試在期末進(jìn)行全校統(tǒng)考。五、配套的實(shí)驗(yàn)教材或指導(dǎo)書（2出版社，2007、2。六、適用專業(yè)植物生產(chǎn)類和環(huán)境資源類各專業(yè)。在選擇實(shí)驗(yàn)內(nèi)容時(shí)可考慮與專業(yè)結(jié)合。七、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：(28學(xué)時(shí))在下列實(shí)驗(yàn)中選做28學(xué)時(shí)，并開設(shè)2-3組綜合實(shí)驗(yàn)或設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)序號(hào)序號(hào)項(xiàng)目學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)類型實(shí)驗(yàn)類別實(shí)驗(yàn)要求每組人數(shù)5種子粗脂肪測(cè)定(索氏殘余法)1-2演示或技能型專業(yè)基礎(chǔ)自選86淀粉酶活性的測(cè)定3技能及研究型專業(yè)基礎(chǔ)自選17過(guò)氧化氫酶活性測(cè)定3技能型專業(yè)基礎(chǔ)必選18硝酸鹽含量的測(cè)定（紫外吸收法）3技能及研究型專業(yè)基礎(chǔ)必選19谷物蛋白含量的快速測(cè)定(雙縮脲法)3技能及研究型專業(yè)基礎(chǔ)必選210植物體內(nèi)可溶性糖的測(cè)定(蒽酮法)3技能及研究型專業(yè)基礎(chǔ)必選211谷物賴氨酸含量的測(cè)定(茚三酮比色法)3技能及研究型專業(yè)基礎(chǔ)必選21酵母1酵母RNA的提取和鑒定(或植物DNA的提取和鑒定)影響酶作用的因素聚丙烯酰胺凝膠園盤電泳分離過(guò)氧化物同工酶3驗(yàn)證型專業(yè)基礎(chǔ)必選123驗(yàn)證型專業(yè)基礎(chǔ)必選134專業(yè)基礎(chǔ)必選4氨基酸的薄層層析3技能型專業(yè)基礎(chǔ)必選8112分光光度技術(shù)及應(yīng)用12技能綜合型136綜合研究型專業(yè)基礎(chǔ)89、1011（和11組合）（的材料組合）自選1不同谷物的蛋白質(zhì)及賴氨酸含量比較必選2-414不同蔬（野）菜硝酸鹽含量比較3設(shè)計(jì)型必選4-81、離心技術(shù)DNARNA。2、電泳技術(shù)電泳的概念、分類、用途、聚丙烯酰胺凝膠電泳分離物質(zhì)的基本原理：凝膠3、層析技術(shù)層析法分離物質(zhì)的原理,層析法發(fā)展簡(jiǎn)史及層析法分類、薄層層析分離物質(zhì)的原理，操作及應(yīng)用實(shí)例。4、分光光度技術(shù)T的工作原理、應(yīng)用范圍。實(shí)驗(yàn)一酵母RNA的提取和鑒定(或植物DNA的提取和鑒定)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆誅NA或RNA提取及鑒定的基本原理及方法，學(xué)習(xí)普通離心機(jī)的使用。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：裂解細(xì)胞，乙醇沉淀法提取DNA或RNA；酸水解，檢測(cè)其組成成分。（三）主要儀器設(shè)備：離心機(jī)、天平、水浴鍋、試管、燒杯、離心管等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫實(shí)驗(yàn)二影響酶作用的因素（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模杭由顚?duì)酶性質(zhì)的認(rèn)識(shí)，并學(xué)會(huì)淀粉酶（粗酶液）的提取。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：利用碘溶液檢測(cè)不同溫度和pH下淀粉是否被淀粉酶分解；分別以淀粉和蔗糖為底物判斷淀粉酶的專一性。（三）主要儀器設(shè)備：水浴鍋、電爐、乳缽、漏斗及漏斗架、試管、燒杯、量筒、移液管、鑷子等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫實(shí)驗(yàn)三聚丙烯酰胺凝膠園盤電泳分離過(guò)氧化物同工酶（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)聚丙烯酰胺圓盤電泳的基本原理和操作技術(shù)，掌握過(guò)氧化物同功酶的分離方法，并比較不同材料過(guò)氧化物同功酶的區(qū)別。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：配制PAGEHO22示膠條上的酶譜帶并比較不同材料間的差異（三）主要儀器設(shè)備：離心機(jī)、電泳儀及花籃式電泳槽、扭力天平、微量進(jìn)樣器、長(zhǎng)針頭注射器、乳缽、燒杯、移液管、試管、洗耳球等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫實(shí)驗(yàn)四氨基酸的薄層層析（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模壕毩?xí)用薄層層析法分離、鑒定植物組織中的氨基酸，并掌握該方法的一般原理和操作技術(shù)。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：將硅膠G于玻板上制成薄層板，在薄層板的一端點(diǎn)樣，用有機(jī)溶劑展層，茚三酮顯色，測(cè)出樣點(diǎn)的Rf值并加以比較。（三）主要儀器設(shè)備：離心管、電子天平等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫實(shí)驗(yàn)五種子粗脂肪測(cè)定(索氏殘余法)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)掌握索氏法提取種子粗脂肪的測(cè)定技術(shù)。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：利用索氏提取器循環(huán)抽提樣品中的脂質(zhì)，稱量殘余的樣品求出粗脂肪含量。（三）主要儀器設(shè)備：索氏提取器、干燥器、燒瓶、電熱恒溫水浴鍋、電熱鼓風(fēng)干燥箱、天平等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫實(shí)驗(yàn)六淀粉酶活性的測(cè)定（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)淀粉酶活性測(cè)定原理及方法，了解種子萌發(fā)過(guò)程中的淀粉酶活性變化。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：用水研磨樣品，離心，提取淀粉酶；分光光度法測(cè)定淀粉降解生成的還原糖的量，以單位重量樣品在一定時(shí)間內(nèi)生成的還原糖的量表示酶活力并加以比較。（三）主要儀器設(shè)備：分光光度計(jì)、離心機(jī)、恒溫水浴、具塞刻度試管、刻度吸管、容量瓶等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫實(shí)驗(yàn)七過(guò)氧化氫酶活性測(cè)定(氧量法)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^(guò)本實(shí)驗(yàn)了解過(guò)氧化氫酶的作用，掌握其測(cè)定方法并比較不同植物或同一植物不同生理狀態(tài)下過(guò)氧化氫酶活性的大小。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：用水研磨樣品，靜置，取上清液作為過(guò)氧化氫酶液；加入過(guò)氧化氫酶氣體測(cè)量?jī)x中與H2O2反應(yīng)，根據(jù)放出氧氣的體積計(jì)算過(guò)氧化氫酶活性并加以比較。（三）主要儀器設(shè)備：過(guò)氧化氫酶氣體測(cè)量?jī)x、單枝旁枝管（鄧氏管代反應(yīng)瓶（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫實(shí)驗(yàn)八硝酸鹽含量的測(cè)定（紫外吸收法）（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)硝酸鹽的測(cè)定方法并了解硝酸鹽測(cè)定的意義。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：用氨緩沖液從樣品中提取硝酸根離子，加活性炭除去色素，蛋白質(zhì)沉淀劑除去蛋白質(zhì)及混濁物，得到無(wú)色透明溶液，用紫外分光光度法測(cè)出吸光度，再求出硝酸鹽含量。（三）主要儀器設(shè)備：紫外分光光度計(jì)、容量瓶、刻度吸管、乳缽等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫實(shí)驗(yàn)九谷物蛋白含量的快速測(cè)定(雙縮脲法)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)谷物蛋白含量的快速測(cè)定方法，并比較不同谷物蛋白質(zhì)含量的高低。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：在濃堿液中，蛋白質(zhì)與硫酸銅結(jié)合生成紫色和紫紅色絡(luò)合物，用分光光度法測(cè)出該絡(luò)合物的吸光度，即可求出蛋白質(zhì)含量。（三）主要儀器設(shè)備：722（帶塞漏斗、小燒杯等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫實(shí)驗(yàn)十植物體內(nèi)可溶性糖的測(cè)定(蒽酮法)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆蛰焱y(cè)糖的基本技術(shù)，并學(xué)會(huì)分光光度計(jì)的使用。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：水提取樣品中糖，過(guò)濾，濾液與蒽酮-硫酸反應(yīng)顯藍(lán)綠色，用分光光度法測(cè)出該藍(lán)綠色溶液的吸光度，即可求出可溶性糖含量。（三）主要儀器設(shè)備：721杯等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫實(shí)驗(yàn)十一谷物賴氨酸含量的測(cè)定(茚三酮比色法)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)用比色法快速測(cè)定谷物種子的賴氨酸含量，了解測(cè)定賴氨酸含量的意義。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：茚三酮與樣品蛋白質(zhì)中的賴氨酸ε-NH反應(yīng)生成紫紅色的絡(luò)合物，用分光光度2法測(cè)出該絡(luò)合物的吸光度，即可求出賴氨酸含量。（三）主要儀器設(shè)備：分光光度計(jì)、水浴鍋、容量瓶、燒杯、移液管、漏斗、電子天平等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫實(shí)驗(yàn)十二綜合實(shí)驗(yàn)：分光光度技術(shù)及應(yīng)用（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?生熟練掌握可見和紫外分光光度法測(cè)定各類生化物質(zhì)和各種生理指標(biāo)的基本實(shí)驗(yàn)721、722752各型分光光度計(jì)。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：在以下實(shí)驗(yàn)中選擇4個(gè)1、淀粉酶活性的測(cè)定（見實(shí)驗(yàn)6）2、硝酸鹽含量測(cè)定（見實(shí)驗(yàn)8）3、谷物蛋白含量的測(cè)定（見實(shí)驗(yàn)9）4、植物體內(nèi)可溶性糖含量測(cè)定（見實(shí)驗(yàn)10）5、谷物賴氨酸含量測(cè)定（見實(shí)驗(yàn)11）（三）主要儀器設(shè)備：各型分光光度計(jì)、水浴鍋、容量瓶、燒杯、移液管、漏斗、電子天平等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫各實(shí)驗(yàn)完成后按教材6-7頁(yè)“實(shí)驗(yàn)報(bào)告”格式撰寫各次實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)報(bào)告。（六）考核標(biāo)準(zhǔn)14721722范（有效數(shù)字記錄?？己朔椒槊咳霜?dú)立操作，教師現(xiàn)場(chǎng)評(píng)分。2筆試考核：期末筆試試卷綜合題考核：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作或回歸方程計(jì)算，相對(duì)偏差和絕對(duì)偏差計(jì)算，分光光度技術(shù)的基本實(shí)驗(yàn)步驟和應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)十三綜合實(shí)驗(yàn)：不同谷物的蛋白質(zhì)及賴氨酸含量比較（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模汗任锛爸瞥善?米飯、米線、面條、饅頭等)是人類的主食，其蛋白質(zhì)、賴氨酸含量的高低決定其營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)，含量高者，營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)較佳。通過(guò)分析比較，了解谷物及制成品的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)及烹調(diào)損失，為合理膳食提供依據(jù)。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：1實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備米線、面條、饅頭等材料，烘干、磨粉（過(guò)602～42 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容谷物蛋白含量的測(cè)定（9）谷物賴氨酸含量測(cè)定（8人一組、每組做4個(gè)樣品，1人做1個(gè)樣品、2人互為重復(fù)。3 數(shù)據(jù)處理照每個(gè)實(shí)驗(yàn)的計(jì)算公式計(jì)算，每組將數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照、核實(shí)，列表或作圖比較。（三）主要儀器設(shè)備：可見分光光度計(jì)、水浴鍋、容量瓶、燒杯、移液管、漏斗、電子天平等。（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：植物生理生化實(shí)驗(yàn)室（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫6-7合實(shí)驗(yàn)完成以每組的數(shù)據(jù)、按照自然科學(xué)期刊上的論文格式、參考教材186-187頁(yè)“綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告寫作指導(dǎo)”每人完成一篇綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告。實(shí)驗(yàn)十四設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)：不同蔬（野）菜硝酸鹽含量比較（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簱?jù)統(tǒng)計(jì)、人體攝取的硝酸鹽約80%來(lái)自蔬菜。蔬菜中硝酸鹽含量