抗感染中藥作用機理研究方法概況

抗感染中藥作用機理研究方法概況內(nèi)容摘要】目的：為了對中藥抗感染機制研究方法有一個系統(tǒng)了解，以便更好指點臨床前新藥研發(fā)。方法：綜述近年來抗感染中藥在臨床應(yīng)用和作用機制實驗方面的文獻研究。結(jié)果：當前對抗感染中藥的研究重要從整體動物模型、體內(nèi)體外實驗、細胞模型、細胞因子和蛋白基因等多條理進行，并證明抗感染中藥重要通過對免疫系統(tǒng)、炎癥介質(zhì)以及相關(guān)蛋白、基因的影響而發(fā)揮其抗感染作用。結(jié)論：選用適宜的研究方法能夠揭示中藥抗感染機制，研究開發(fā)具有抗感染作用的中藥將產(chǎn)生良好的經(jīng)濟價值和社會價值。【本文關(guān)鍵詞語】抗感染；中藥；作用機理；綜述感染性疾病(infectiousdiseases)是由病毒、支原體、衣原體、立克次體、細菌、真菌、分支桿菌、寄生蟲等所引起的疾病，是臨床幾大疾病之一，嚴重危害著人類的生命與健康?？股氐某霈F(xiàn)與應(yīng)用在預(yù)防和治療感染性疾病方面發(fā)揮了宏大作用，但同時抗生素的濫用也帶來了更為嚴重的問題。藥是一個偉大的寶庫，很多中藥制劑與抗生素類藥物相比，臨床療效好，毒副作用小。在人類面臨細菌耐藥性和抗生素不良反應(yīng)不斷增長的嚴峻形勢下，抗感染中藥制劑的應(yīng)用大大豐富了現(xiàn)代感染性疾病治療學的內(nèi)容，對抗感染中藥制劑的研究與探尋求索顯得愈加主要與迫切。當前，抗感染中藥制劑在臨床上已經(jīng)得到了較廣泛的應(yīng)用，不僅品種繁多、劑型多樣，而且對特定的感染具有多方面綜合作用，療效甚佳。在抗感染中藥的實驗研究方面，已進行了多角度、多條理的研究。現(xiàn)從研究方法角度對抗感染中藥的研究狀態(tài)綜述如下。1從整體動物實驗角度，廣泛對抗感染中藥的作用機理進行了系統(tǒng)的研究動物模型是研究疾病和藥物的主要工具，整體動物模型能夠比較真實、全面反映疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸特點。抗感染中藥的研究中大量使用了感染動物模型，并用之來客觀評價此類藥物的藥效以及藥理作用機制。馬忠麗等[1]復(fù)制金黃色葡萄球菌感染引起的豚鼠皮膚瘡瘍模型，研究斂瘍散對模型的作用。顯示模型動物瘡瘍部分的紅腫、分泌物、瘡口得到良好的改善，膿液中溶菌酶的水平治療后也的明顯的提升。吳捷等[2]討論八正合劑治療泌尿系統(tǒng)感染性疾病的藥理學作用基礎(chǔ)，八正合劑治療泌尿系統(tǒng)感染性疾病的作用機制重要與其去除尿路細菌、抑制細菌經(jīng)尿路上行引起感染，減輕腫脹、發(fā)熱、疼痛等炎性反應(yīng)癥狀有關(guān)。張國紅等[3]研究百草圣打針液抗感染作用：將大腸桿菌注入小鼠的膀胱后觀察藥物對細菌上行感染腎臟的抑制造用；家兔靜脈打針大腸桿菌內(nèi)毒素后觀察藥物對細菌內(nèi)毒素引起機體發(fā)熱的影響；采取大鼠足趾炎性腫脹模型觀察藥物對炎性腫脹及機械壓迫足趾疼痛的抑制造用。結(jié)果百草圣打針液治療動物感染性疾病的作用機制重要與其去除體內(nèi)細菌感染和減輕發(fā)熱、腫脹、疼痛等炎癥反應(yīng)有關(guān)。李萍等[4]研究陳氏“黑藥膏〞抗感染作用。選用雄性c57bl小鼠，分別腹腔打針2ml黑藥膏和蒸餾水，翌日反復(fù)打針，隔日采集小鼠眼眶血及腹腔液，做血淋巴細胞轉(zhuǎn)換率、腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數(shù)測定。結(jié)果顯示黑藥膏能激活小鼠腹腔游走巨噬細胞，提升其吞噬能力，其抗菌機理可能是，促進創(chuàng)面膿液的滲出，膿液中溶菌酶含量增高，巨噬細胞的增殖，被激活的巨噬細胞能處理抗原，又能直接殺傷細菌和抑制細菌生長；機體的防御機體加強，進而到達抗感染作用。2體內(nèi)外抑菌實驗的采取，為抗感染中藥抗菌靶標和抗菌譜的的定位奠定了基礎(chǔ)抑菌實驗是直接用來評價抗感染藥物抗炎、抗菌作用性能的經(jīng)典實驗方法，根據(jù)不同作用環(huán)境分為體內(nèi)和體外抑菌實驗。抑菌實驗?zāi)軌蛘鎸嵉胤从晨垢腥局兴帉毦?、病毒的抑制〔ed50、抗菌率〕、殺滅能力〔ld50〕，以及具體表現(xiàn)出細菌對藥物的耐藥率等指標。段琚華等[5]采取體內(nèi)外抑菌實驗討論肺炎沖劑治療小兒支氣管肺炎的療效及機理。結(jié)果顯示體外抗菌試驗對金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、肺炎克雷伯桿菌、流感嗜血桿菌、溶血性鏈球菌、綠膿桿菌均有抑制造用；體內(nèi)抗菌實驗對肺炎球菌、肺炎克雷伯桿菌感染小鼠的ed50測定分別為3.3306和3.5768g。李蔚林等[6]對中藥加味五味消毒飲治療皮膚細菌惑染的機理，從抗菌活性和對人體免疫功能的影響等方面作了討論。該方煎液對金葡菌、溶鏈菌、四聯(lián)球菌、大腸、綠膿桿菌普遍具有抗菌作用，其總有效抗菌率81.25％，耐藥率18.75％。肖冰等[7]對以章亮厚主任醫(yī)師治療慢性支氣管炎的經(jīng)歷體驗方制造而成的顆粒劑速咳寧進行抑菌、抗感染實驗研究,實驗結(jié)果表示清楚:速咳寧可抑制金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌、甲型鏈球菌的生長及對抗炎性鼠耳的腫脹,可減少患者痰液上皮脫落細胞與炎癥細胞的數(shù)量及降低痰液dna含量、提升siga水平。有研究表示清楚[8]，黃連解毒湯有較慢的抗菌作用，對革蘭氏陰性(g-)和革蘭氏陽性(g+)球菌、桿菌和阿米巴原蟲等均有抑制造用，且不會產(chǎn)生耐藥性。進一步研究揭示，黃連解毒湯可使各種細菌產(chǎn)生細胞質(zhì)水腫和細胞壁溶解等變性作用。李偉芳等[9]觀察三金膠囊的抑菌作用，結(jié)果三金膠囊對體內(nèi)感染金葡菌、甲型鏈球菌等小鼠有保衛(wèi)作用，體外對金葡菌等9種細菌有明顯抑菌作用，灌胃后尿液則試具有抑菌作用。3細胞模型的采取，將抗感染中藥作用機理的討論引入了細胞水平領(lǐng)域細胞模型是從細胞層面研究藥物的作用以及作用機制，它能夠從細胞的生理病理改變的角度具體表現(xiàn)出藥物的直接作用?？垢腥舅庍x用的細胞模型較多，既有正常生理性細胞模型，也有病理性的疾病細胞模型，研究的條理有單純細胞宏觀變化，亦有從細胞rna改變角度進行。陸原等[10]采取細胞模型探尋求索中藥復(fù)方尿路清對解脲支原體〔uu〕感染非淋球菌性尿道炎〔ngu〕的作用機理,為中醫(yī)藥治療本病提供抑菌根據(jù)。結(jié)果顯示尿路清對63株uu的最小抑菌濃度(mic)臨床株的最小抑菌濃度(mic)范圍為0.48mg/ml～15.63mg/ml,mic50≤1.95mg/ml,mic90≤3.91mg/ml，14種和未定型uu血清型別中，除11型、1型、2型、3型對尿路清的敏感性均較高(mic≤3.91mg/ml)?？梢?，中藥尿路清對63株不同血清型、耐藥(四環(huán)素、紅霉素)菌株uu顯示出了較強的體外抑菌作用。王毅等[11]以培養(yǎng)內(nèi)皮細胞為實驗對象，討論中藥黃岑抗細菌感染及其毒血癥作用的可能機制，結(jié)果顯示黃岑甙能減輕內(nèi)毒素對內(nèi)皮細胞膜構(gòu)造約損傷作用，尤其對細胞連接的保衛(wèi)作用較為明顯。同時發(fā)現(xiàn)黃岑甙能抑制內(nèi)毒素所致的細胞蛋白分泌功能加強，蛋白水解酶的釋放以及氧自在基的產(chǎn)生等。陰宏[12]以絲裂霉素〔mimc〕生成骨髓抑制模型，研究補中益氣湯的抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(mrsa)作用，結(jié)果顯示補中益氣湯使外周血白細胞數(shù)恢復(fù)至正常值的65％，可恢復(fù)巨噬細胞的吞噬殺菌功能和分泌白介素－1(il－1)β功能；促進ifn－γ的產(chǎn)生；抑制mrsa感染小鼠體內(nèi)感染，16h感染小鼠體內(nèi)細菌的增殖；延長mrsa感染小鼠的存活期。鄺棗園等[13]研究鞘氨醇激酶(sk)在肺炎衣原體感染血管內(nèi)皮細胞的影響以及黃芩苷對其的干涉，采取體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞ecv304細胞,待長成單層后參加肺炎衣原體(cpn)為模型組,參加cpn與黃芩苷，肺炎衣原體感染能夠刺激skmrna表達增長,中藥黃芩苷對skmrna的表達有一定抑制造用。4細胞因子、蛋白組學以及基因技術(shù)的引入，對中藥抗感染機理的研究愈加深切進入細胞因子是由機體活化的免疫細胞和非免疫細胞合成和分泌的一類非抗體、非補體的可溶性小分子的多肽活性物質(zhì)，以白介素為代表的一類細胞因子在感染性疾病中飾演側(cè)重要的角色。而近年興起的蛋白組學與基因技術(shù)也被逐步運用于抗感染藥物的研究，能更微觀地解釋此類藥物的作用機制。張瑞等[14]研究“抗支口服液〞對大鼠肺炎支原體(mp)模型的作用及其作用機理，證明抗支口服液的機理可能是通過降低tnfa含量，削弱或阻斷了對中性粒細胞及內(nèi)皮細胞外表粘附受體的激活，進而抑制了肺組織產(chǎn)生過度的炎癥反應(yīng)；同時，由于減弱了tnfa與il1協(xié)同反應(yīng),減輕了感染反應(yīng)，減小了ck介導(dǎo)的炎癥作用，進而抑制肝細胞分泌急性反應(yīng)蛋白(akp)以參與炎癥急性期反應(yīng)。張豪杰等[15]討論芩連合劑對幽門螺桿菌(hp)延緩乙酸性胃潰瘍愈合的治療作用及其作用機制,中藥組與hp+乙酸組相比潰瘍底部及四周胞漿中bfgfmrna表達明顯加強，并能顯著提升胃黏膜pcna標記指數(shù)的陽性率?？梢娷诉B合劑能有效拮抗nctc11637株hp對慢性胃潰瘍的延緩愈合，其加速潰瘍愈合的重要機理與促進潰瘍四周血管生成因子bfgf表達和促進胃黏膜細胞增殖等有關(guān)。趙楊等[16]討論中藥金葉敗毒制劑拮抗人巨細胞病毒(hcmv)感染的機理，結(jié)果顯示金葉敗毒制劑可有效抑制感染細胞內(nèi)hcmvdna復(fù)制及病毒自受染細胞內(nèi)釋放，并能促進tnfa、il－6蛋白分泌，調(diào)節(jié)免疫功能，發(fā)揮拮抗hcmv感染、保衛(wèi)細胞的效用。熊天琴[17]采取圖象分析技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附、免疫組織化學、細胞培養(yǎng)等現(xiàn)代研究手段,初次從細胞水安然平靜分子水平上對辛夷揮發(fā)油(vombp)治療過敏性鼻炎的藥效和機理作了較系統(tǒng)的研究。結(jié)果證明辛夷揮發(fā)油可能通過降低th2細胞因子il4的水平，調(diào)整th1/th2平衡的失調(diào)，從變應(yīng)性鼻炎發(fā)生的始動環(huán)節(jié)抑制疾病的發(fā)生、發(fā)展而到達治療的目的；阻攔細胞間粘附分子icam1在炎癥部位血管內(nèi)皮細胞外表的高表達，抑制了血管內(nèi)皮細胞與嗜酸性粒細胞的粘附經(jīng)過，進而抑制了嗜酸性粒細胞向炎癥部位浸潤,發(fā)揮抗過敏作用。張代娟等[18]采取rtpcr及westernblot分析stlr4mrna及蛋白水平的改變,用elisa方法檢測tnfα分泌的變化討論中藥成分青心酮對raw264.7細胞炎癥反應(yīng)時可溶性toll樣受體4mrna、蛋白表達及tnfα分泌的影響,經(jīng)青心酮處理后在炎癥反應(yīng)時,stlr4mrna及蛋白表達均上調(diào)。5結(jié)束語和瞻望綜上所述，抗感染中藥的藥理作用研究方法較多，條理清楚。當然，在詳細的研究中單獨采取某一方法、某一條理的情況不多，往往是多種方法的綜合使用、多條理的綜合研究。在抗感染機制方面，研究表示清楚中藥既可直接抗菌而治療感染性疾病，又可通過調(diào)節(jié)免疫功能、加強機體免疫力，而調(diào)動本身潛力抗感染，到達治療疾病的目的。當前，這些抗感染機制研究還是比較粗淺的,對詳細的作用經(jīng)過了解不夠具體,尤其是在細胞和分子水平的研究還比較少。除此之外，中藥是天然產(chǎn)品,一味藥中包括許多成分,而且存在一味藥中的許多成分均有抗炎作用的現(xiàn)象,對于這些成分在抗炎經(jīng)過中能否起協(xié)同作用,其互相之間是怎樣作用的并不清楚,就需要研究者綜合采取各種已有的研究方法，以至是引入最新的科技結(jié)果對這些方面進行深切進入研究[19]。中藥資源豐富，中藥復(fù)方制劑、單味中藥、中藥有效部位和有效成分等很少有耐藥性報道，在耐抗生素菌株越來越多的今天，研究開發(fā)中藥抗感染制劑具有廣泛前景。【以下為參考文獻】1張漢慶，覃劍，等.中藥“斂瘍散"對慢性皮膚潰瘍的作用機制研究[j].雜志，2007，15〔4〕：18－23.2吳捷，曹舫，劉傳鎬，等.八正合劑抗感染作用的實驗研究[j].中草藥，2002，33〔6〕：523.3張國紅，王剛，鄧學兵,等.百草圣打針液抗感染作用的實驗研究[j].四川畜牧獸醫(yī)，2003，30〔3〕：15.4李萍，朱凌云.“陳氏〞黑藥膏抗感染作用的實驗研究[j].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2004，2o〔l4〕：1396.5段琚華，劉曉萍，羅世杰，等.肺炎沖劑治療小兒支氣管肺炎臨床及實驗研究[j].，2002，11〔1〕：7.6肖冰，何浩，章亮厚.速咳寧抑菌、抗感染的實驗研究[j].新中醫(yī)，1996，28〔12〕：48-50.7李蔚林，劉軍，黃德寅，等.加味五味消毒飲治療皮膚細菌感染的機理研究[j].青海醫(yī)藥雜志，1998，28〔8〕：3-4.8金航.關(guān)于漢方藥對各種細菌抗藥力的變化及形態(tài)的影響[j].國外醫(yī)學·中醫(yī)中藥分冊，1998，7(1)：15-17.9李偉芳，周軍，李茂，等.三金膠囊抗菌作用的實驗研究[j].，2o03，l0〔2〕：92-93.10陸原，陳達燦，國維，等.中藥復(fù)方對臨床耐藥菌株不同血清型uu的藥敏實驗[j].，2001，17〔6〕：41-43.11王毅，朱佩芳，王正國，等.黃岑甙對內(nèi)皮細胞保衛(wèi)作用及其生化機理[j].中國中醫(yī)急癥，1994，3〔6〕：260-262.12陰宏.補中益氣湯對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染動物的抗菌作用[j]．國外醫(yī)學·中醫(yī)中藥分冊，1999，21(3)：37-39.13鄺棗園，吳偉，黃玲，等.鞘氨醇激酶在肺炎衣原體感染中的變化及黃芩苷的干涉[j].浙江中醫(yī)雜志，2006，41〔8〕：477－479.14張瑞，張鵬宇，劉丹，等.抗支口服液對肺炎支原體感染大鼠tnfa水平的影響[j].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，002，12〔8〕：483-484.15張豪杰，周庚生，顧偉忠，等.芩連合劑對幽門螺桿菌相關(guān)性慢性胃潰