家畜傳染病學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

家畜傳染病學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

家畜傳染病學(xué)實(shí)驗(yàn)須知

家畜傳染病往往借助人類的活動(dòng)而傳播，有些是人獸共患傳染病，如炭疽、布氏桿菌病、結(jié)核、狂犬病等。因?yàn)樵诩倚髠魅静W(xué)實(shí)驗(yàn)的對(duì)象和材料，與病畜和病原微生物有關(guān)，所以學(xué)生在操作過程中稍有疏忽，就有可能引起疫病流行，甚至感染人身，危及生命，于是實(shí)驗(yàn)時(shí)必須遵守以下規(guī)定。

1．在實(shí)驗(yàn)時(shí)必須穿工作服，當(dāng)接觸或操作危險(xiǎn)材料時(shí)，須穿戴膠靴、圍裙、手套及眼鏡，用后應(yīng)立即消毒清洗后，方可再用。在操作時(shí)，一定嚴(yán)肅認(rèn)真，勿以手指或其他器物等接觸口唇、眼、鼻和面部，手和面部有傷口時(shí)，應(yīng)防止危險(xiǎn)材料的接觸。

2．使用危險(xiǎn)材料應(yīng)行無菌操作，盛危險(xiǎn)材料的器皿要牢固，以免操作過程破裂，以防液體流出，造成污染。用過的尸體、內(nèi)臟、血液以及廢棄的培養(yǎng)基、生物制品等，須嚴(yán)加，消毒或深埋。用過的棉球、紗布等污物，放在固定容器中，統(tǒng)一處理，不得隨意拋棄。萬一危險(xiǎn)材料滴出或打翻，或發(fā)生其他意外，應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)老師及時(shí)處理。如手指或皮膚受污染，立即將手浸入消毒液中15min，然后用清水洗干凈。

3．實(shí)驗(yàn)完畢，將操作臺(tái)面用消毒液消毒一下，自身的手也須消毒和洗刷干凈前方得離開實(shí)驗(yàn)室。

4．實(shí)驗(yàn)前應(yīng)對(duì)本次實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒂嘘P(guān)內(nèi)容和操作技術(shù)進(jìn)行預(yù)習(xí)；實(shí)驗(yàn)時(shí)在老師指導(dǎo)下進(jìn)行，并遵守實(shí)驗(yàn)程序，均不可潦草應(yīng)付或不動(dòng)手；實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)作好記錄，特別是實(shí)驗(yàn)內(nèi)存、方法及結(jié)果應(yīng)詳細(xì)記錄，認(rèn)真做好作業(yè)。

5．愛惜藥械和儀器，特別對(duì)精密儀器一定要按照教師指導(dǎo)的方法和步驟進(jìn)行操作，不可粗心大意，以免發(fā)生損壞。

實(shí)驗(yàn)一家畜傳染病的臨診記錄和表報(bào)

目

的

1．認(rèn)識(shí)傳染病臨診記錄和表報(bào)工作的意義。

2．熟悉家畜傳染病的主要表格及其使用方法。

內(nèi)容及方法

一、

傳染病臨診記錄和表報(bào)工作的實(shí)際意義

有關(guān)家畜傳染病防治工作的部門，應(yīng)建立制度，堅(jiān)持作好臨診記錄和表報(bào)工作。臨診記錄和表報(bào)做得好壞，反映有關(guān)獸醫(yī)機(jī)構(gòu)和人員的業(yè)務(wù)水平和工作質(zhì)量。沒有詳細(xì)的臨診記錄，就無從進(jìn)行全面的統(tǒng)計(jì)和對(duì)疾病的正確分析，因而也就不可能擬定出有預(yù)見性的防疫方案和有效的家畜保健措施。

二、

有關(guān)家畜傳染病的主要表格

1．家畜衛(wèi)生卡片畜牧場、農(nóng)場和機(jī)關(guān)單位的養(yǎng)畜場，均應(yīng)建立家畜卡片制度，進(jìn)行家畜健康史的登記。每頭或每群家畜填寫衛(wèi)生卡片一張，由有關(guān)的獸醫(yī)人員或獸醫(yī)機(jī)構(gòu)統(tǒng)一管理。格式見表1?？ㄆ幪?hào)最好和畜號(hào)統(tǒng)一起來，即括號(hào)內(nèi)標(biāo)明畜別，后面填畜號(hào)。健康史欄著重寫以下內(nèi)容：原產(chǎn)地家畜傳染病流行情況簡介；其親代何時(shí)患過何種傳染病；該家畜在入場或建立卡片以前何時(shí)患過何種疾病或接受過何種預(yù)防注射及檢疫。

2．家畜傳染病防疫措施登記表也可稱為免疫接種和檢疫登記簿。各農(nóng)牧場、獸醫(yī)診

療部門和各級(jí)獸醫(yī)防治機(jī)構(gòu)均可使用。格式如表2。

3．疫情登記表供各級(jí)獸疫防治機(jī)構(gòu)作為地區(qū)的根本流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)資料。格式如表3。

4．畜禽檢疫(驗(yàn))證明畜禽及畜禽產(chǎn)品在長途運(yùn)輸時(shí)，在啟運(yùn)前須經(jīng)有關(guān)獸醫(yī)單位進(jìn)行必要的檢疫(驗(yàn))，并經(jīng)預(yù)防接種或消毒后簽發(fā)檢疫(驗(yàn))證明；檢疫(驗(yàn))證明有：畜禽產(chǎn)地檢疫證明、畜禽產(chǎn)品檢疫(驗(yàn))證明、畜禽及畜禽產(chǎn)品運(yùn)載工具消毒證明和畜禽運(yùn)輸檢疫證明，檢疫(驗(yàn))證明的格式由農(nóng)業(yè)部監(jiān)制。檢疫(驗(yàn))證明一式2～3聯(lián)，第一聯(lián)存根，第二聯(lián)交畜(貨)主，第三聯(lián)同貨隨行，格式如表4—I、4—Ⅱ、4—Ⅱ。運(yùn)輸時(shí)應(yīng)遵守的特殊要求，如需用不漏水的車船、沿指定路線，在限定日期內(nèi)運(yùn)達(dá)指定地點(diǎn)和中途不得停留等限制，可在備注欄內(nèi)詳細(xì)注明。

5．其他在獸疫防治、診斷檢驗(yàn)和有關(guān)的研究工作實(shí)踐中，還需要其他一些記錄表和報(bào)表，如家畜傳染病病歷、家畜傳染病門診病畜登記簿、家畜傳染病住院病畜登記簿、獸醫(yī)診斷室診斷記錄表等，這些表報(bào)與一般獸醫(yī)診療部門所用的根本相同。

復(fù)習(xí)題與作業(yè)

1．試述臨診記錄和表報(bào)工作的實(shí)際意義。

2．試將附發(fā)的四種表格各填寫一份。

實(shí)驗(yàn)二消

毒

目

的

1．結(jié)合生產(chǎn)實(shí)踐掌握畜禽舍、土壤、糞便等消毒方法。

2．檢查消毒質(zhì)量的方法。

內(nèi)容及方法

一、消毒的器械和消毒劑

1．噴霧器用于噴灑消毒的器具稱為噴霧器，與吸入或壓力唧筒相似。噴霧器有兩種，

一種是手動(dòng)噴霧器，另一種是機(jī)動(dòng)噴霧器。前者有背攜式和手壓式兩種(圖1—Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，常用于小量消毒；后者有背攜式和擔(dān)架式兩種(圖1—Ⅳ、Ⅴ)，常用于大面積消毒。

消毒液在裝入噴霧器之前，應(yīng)先充分溶解過濾，以免可能存在的殘?jiān)氯麌婌F器的噴嘴。

2．火焰噴燈是利用汽油或煤油作為燃料的一種工業(yè)用噴燈，常用以消毒被病原體污染了的各種金屬制品，如鼠籠、兔籠、雞籠等。

3．化學(xué)消毒劑消毒劑是防疫工作中的重要武器之一，是消滅被傳染原污染在外界環(huán)境中的病原微生物，可切斷傳播途徑，預(yù)防傳染病的發(fā)生和蔓延。近年來，我國集約化養(yǎng)殖業(yè)開展很快，而消毒劑日益受到重視?；瘜W(xué)消毒劑品種較多，現(xiàn)介紹幾種常用消毒劑。

(1)二氯異氰尿酸鈉(優(yōu)氯凈)Sodiumdichloroisocyanurata含有效氯60％左右，易溶

于水，殺菌譜廣，對(duì)細(xì)菌、病毒、真菌及細(xì)菌芽胞有較強(qiáng)的殺滅作用。用具的消毒(0.5％～10％，15～60min)；地面的消毒(5％~10％，350～1000ml／m2，1～3h)。同類產(chǎn)品三氯異氰尿酸(Trichloroisocynccricacid)含有效氯90％，溶解度低..

(2)農(nóng)福NewFormulaFarmFluid醋酸、混合酚與烷基苯磺酸復(fù)配的水溶液，易溶于水。對(duì)細(xì)菌和病毒有殺滅作用。1％～1.3％溶液用于畜禽噴灑消毒，1.7％溶液用器具和車輛消毒。相近產(chǎn)品毒菌凈(復(fù)合酚)，易溶于水，0.33％溶液用于細(xì)菌性傳染病的畜舍、用具消毒；1％溶液用于病毒性傳染病的畜舍、籠具消毒。

(3)百毒殺Deciquam222，Bromo-sept50新型季銨鹽類消毒劑，屬陽離子型外表活性劑，水溶性低，對(duì)馬立克氏病病毒、新城疫病毒有較強(qiáng)滅活，對(duì)芽胞和IBDV效力差。環(huán)境消毒時(shí)取本晶lml參加3L水中。飲水消毒時(shí)，取lml參加10～20L水中。

(4)碘伏Iodophors碘與外表活性劑的不定型結(jié)合物，在溶液中逐漸釋放碘，對(duì)細(xì)菌、病毒、真菌和細(xì)菌芽胞有殺滅作用，殺菌濃度為5—10mg／L。

(5)過氧乙酸滅菌譜廣，對(duì)細(xì)菌、病毒、真菌和芽胞有較強(qiáng)滅菌作用。0.5％溶液用于噴灑畜、禽舍、地面和食槽。70℃以上易引起爆炸。

(6)漂白粉為次氯酸鈣，是一種廣泛應(yīng)用的消毒劑，殺菌效力強(qiáng)。10％～20％乳劑用于畜、禽舍、環(huán)境的消毒，在5～log／m3水中，可作飲水消毒。

(7)福爾馬林為38％～40％甲醛的水溶液，有較強(qiáng)殺菌作用。主要用于熏蒸消毒，用量為250ml／m3空間。還有固體福爾馬林，置容器上加熱熏蒸消毒。

二、畜、禽舍的消毒

畜、禽舍的消毒分兩個(gè)步驟進(jìn)行，第一步先進(jìn)行機(jī)械清掃，第二步是化學(xué)消毒液消毒。

機(jī)械清掃是搞好畜、禽舍環(huán)境衛(wèi)生最根本的一種方法。據(jù)試驗(yàn)，采用清掃方法，可以使雞舍內(nèi)的細(xì)菌數(shù)減少21.5％，如果清掃后再用清水沖洗，那么雞舍內(nèi)細(xì)菌數(shù)即可減少54％～60％；清掃；沖洗后再用藥物噴霧消毒，雞舍內(nèi)的細(xì)菌數(shù)即可減少90％。

用化學(xué)消毒液消毒時(shí)，消毒液的用量一般是以畜、禽舍內(nèi)每平方米面積用1L藥液。消毒時(shí)，先噴灑地面，然后墻壁，先由離門遠(yuǎn)處開始，噴完墻壁后再噴天花板，最后再開門窗通風(fēng)，用清水刷洗飼槽，將消毒藥味除去。在進(jìn)行聲、禽舍消毒時(shí)也應(yīng)將附近場院以及病畜、禽污染的地方和物品同時(shí)進(jìn)行消毒。

1．畜、禽舍的預(yù)防消毒在一般情況下，每年可進(jìn)行兩次(春秋各一次)。在進(jìn)行畜、禽舍預(yù)防消毒的同時(shí)，但凡家畜(禽)停留過的處所都需進(jìn)行消毒。在采取“全進(jìn)全出〞管理方法的機(jī)械化養(yǎng)畜(禽)場，應(yīng)在全出后進(jìn)行消毒。產(chǎn)房的消毒，在產(chǎn)仔前應(yīng)進(jìn)行一次，產(chǎn)仔頂峰時(shí)進(jìn)行屢次，產(chǎn)仔結(jié)束后再進(jìn)行一次。

畜、禽舍預(yù)防消毒時(shí)常用的液體消毒劑有10％～20％的石灰乳和5％～10％的漂白粉溶液。

畜、禽舍預(yù)防消毒也可用氣體消毒。所用藥品是福爾馬林和高錳酸鉀。方法是按照畜、禽舍面積計(jì)算所需用的藥品量。一般每立方米空間，用福爾馬林25ml，水12.5ml，高錳酸鉀25g(或以生石灰代替)。計(jì)算好用量以后將水與福爾馬林混合。畜、禽舍的室溫不應(yīng)低于正常的室溫(15～18℃)。將畜、禽舍內(nèi)的管理用具、工作服等適當(dāng)?shù)胤_，箱子與柜櫥的門都開放。再在畜、禽舍內(nèi)放置幾個(gè)金屑容器，然后把福爾馬林與水的混合液倒人容器內(nèi)，將牲畜遷出，畜、禽舍門窗緊閉，其后將高錳酸鉀倒人，用木棒攪拌，經(jīng)幾秒鐘即見有淺藍(lán)色刺激眼鼻的氣體蒸發(fā)出來，此時(shí)應(yīng)迅速離開畜、禽舍，將門關(guān)閉。經(jīng)過12～24h前方可將門窗翻開通風(fēng)。倘假設(shè)急需使用畜、禽舍，那么需用氨蒸氣來中和甲醛氣。按畜、禽舍每l00m3取500g氯化銨，lkg生石灰及750ml的水(加熱到75℃)。將此混合液裝于小桶內(nèi)放人畜、禽舍?；蛘哂冒彼畞泶?，即按每l00m3畜、，禽舍用25％氨水1250ml，中和20～30min后，翻開畜、禽舍門窗通風(fēng)20~30min，此后即可飼養(yǎng)畜、禽。

在集約化飼養(yǎng)場，為了預(yù)防傳染病平時(shí)可用消毒劑進(jìn)行“帶畜消毒〞。如用0.3％過氧乙酸對(duì)雞舍進(jìn)行氣霧消毒，對(duì)雞舍地面、墻壁、雞被羽外表上常在菌和腸道菌有較強(qiáng)的殺滅作用。如0.3％過氧乙酸按30ml／m3劑量噴霧消毒，對(duì)雞群和產(chǎn)蛋雞均無不良影響?！皫笙鲸暦ㄔ谝卟×餍袝r(shí)，可作為綜合防制措施之一，及時(shí)進(jìn)行消毒對(duì)撲滅疫病起到一定作用。0.5％以下濃度的過氧乙酸對(duì)人畜無害，為了減少對(duì)工作人員的刺激，在消毒時(shí)可配戴口罩。

2．畜、禽舍的臨時(shí)消毒和終末消毒發(fā)生各種傳染病而進(jìn)行臨時(shí)消毒及終末消毒時(shí)，用來消毒的消毒劑隨疫病的種類不同而異，一般腸道菌、病毒性疾病可選用上述所介紹的幾種消毒劑，如5％漂白粉乳劑，1％～2％氫氧化鈉熱溶液。但如發(fā)生細(xì)菌芽胞引起的傳染病(如炭疽、氣腫疽等)時(shí)，那么需使用10％～20％漂白粉乳劑、10％～20％氫氧化鈉熱溶液或其他強(qiáng)力消毒劑。在消毒畜、禽舍的同時(shí)，在病畜、禽舍、隔離舍的出入口處應(yīng)放置，設(shè)有消毒液的麻袋片或草墊。

三、地面土壤的消毒

被病畜(禽)的排泄物和分泌物污染的地面土壤，可用5％～10％漂白粉溶液、百毒殺或10％氫氧化鈉溶液消毒。停放過芽胞菌所致傳染病(如炭疽、氣腫疽等)病畜尸體的場所，或者是此種病畜倒斃的地方，應(yīng)嚴(yán)格加以消毒，首先用10％～20％漂白粉乳劑或5％~10％優(yōu)氯凈噴灑地面，然后將表層土壤掘起30cm左右，撤上千漂白粉并與土混合，將此表土運(yùn)出掩埋。在運(yùn)輸時(shí)應(yīng)用不漏土的車以免沿途漏撒，如無條件將表土運(yùn)出，那么應(yīng)多加干漂白粉的用量(1m2面積加漂白粉5kg)，將漂白粉與土混合，加水濕潤后原地壓平。

四、糞便的消毒

傳染病病畜、禽糞便的消毒有多種方法，如燃燒法、化學(xué)藥品消毒法、掩埋法和生物熱消毒法等。實(shí)踐中最常用的是生物熱消毒法，此法能使非芽胞病原微生物污染的糞便變?yōu)闊o害，且不喪失肥料的應(yīng)用價(jià)值。

糞便的生物熱消毒法通常有兩種，一種為發(fā)酵池法，另一種為堆糞法。

1．發(fā)酵池法此法適用于飼養(yǎng)大量家畜的農(nóng)牧場，多用于稀薄糞便(如牛、豬糞)的發(fā)酵。其設(shè)備為距農(nóng)牧場200～250m以外無居民、河流、水井的地方挖筑兩個(gè)或兩個(gè)以上的發(fā)群池(池的數(shù)量與大小決定于每天運(yùn)出的糞便數(shù)量)。池的邊緣與池底用磚砌后再抹以水泥，使不透水。待倒人池內(nèi)的糞便快滿時(shí)，在糞便外表鋪一層干草，上面蓋一層泥土封嚴(yán)，經(jīng)1～3個(gè)月即可掏出作肥料用。幾個(gè)發(fā)酵池可依次輪換使用。

2．堆糞法此法適用于干固糞便(如馬、羊、雞糞等)的處理。在距農(nóng)牧場100～200m

以外韻地方設(shè)一堆糞場。堆糞的方法如下：在地面挖一淺溝，深約20cm，寬約1．5～2m，長度不限，隨糞便多少而定。先將非傳染性的糞便或蒿稈等堆至25cm厚，其上堆放欲消毒的糞便、墊草等，高達(dá)1～1．5m，然后在糞堆外面再鋪上l0cm厚的非傳染性的糞便或谷香草，并覆蓋l0cm厚的沙子或泥土。如此堆放3個(gè)星期到3個(gè)月，即可用以肥田。

當(dāng)糞便較稀時(shí)，應(yīng)加些雜草，太干時(shí)倒人稀糞或加水，以促其迅速發(fā)酵。處理牛糞時(shí)，因牛糞較稀不易發(fā)酵，可以摻馬糞或干草，其比例為4份牛糞加1份馬糞或干草。

五、污水的消毒

被原體污染的污水，可用沉淀法、過濾法、化學(xué)藥品處理法等進(jìn)行消毒。比擬實(shí)用

的是化學(xué)藥品處理法。方法是先將污水處理池的出水管用一木閘門關(guān)閉，將污水引^6水池后，參加化學(xué)藥品(如漂白粉或生石灰)進(jìn)行消毒。消毒藥的用量視污水量而定(一般

1L污水用2～5g漂白粉)。消毒后，將閘門翻開，使污水流人滲井或下水道。

六、皮革原料和羊毛的消毒

皮革原料和羊毛的消毒，通常是用福爾馬林氣體在密閉室中蒸熏，但此法可損壞皮毛品質(zhì)，且穿透力低，較深層的物品難于到達(dá)消毒的目的。目前廣泛利用環(huán)爭乙烷氣體來進(jìn)行消毒。此法對(duì)細(xì)菌、病毒、立克次氏體及霉菌均有良好的消毒作用，對(duì)皮毛等畜產(chǎn)品中的炭疽桿菌芽胞也有較好的消毒效果。消毒時(shí)必須在密閉的專用消毒室或密閉良好的容器(常用聚乙烯或聚氯乙烯薄膜制成的蓬布)內(nèi)進(jìn)行。環(huán)氧乙烷的用量，如消毒病原體繁殖型，每立方米用300～400g，作用8h；如消毒芽胞和霉菌，每立方米用700～950g左右，作用24h。環(huán)氧乙烷的消毒效果與濕度、溫度等因素有關(guān)，一般認(rèn)為，相對(duì)濕度為30％～50％，溫度在18℃以上，38～54℃以下，最為適宜。環(huán)氧乙烷的沸點(diǎn)為10．7℃，沸點(diǎn)m766溫度為易揮發(fā)的液體，遇明火易燃易爆，對(duì)人有中等毒性，應(yīng)防止接觸其液體和吸入其氣體。

七、消毒質(zhì)量的檢查

為了驗(yàn)證消毒的效果，可對(duì)消毒對(duì)象進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查。方法是在消毒以后由地面(在

畜、禽舍的家畜后腳停留的地方)、墻壁上、畜、禽舍墻角以及飼槽上取樣品，用小解剖月在上述各部位劃出大小為10cmX10cm的正方形數(shù)塊，每個(gè)正方形都用滅菌的濕棉簽(干棉簽的重量為o．25～o．33g)擦拭1～2min，將棉簽置于中和劑(30m1)中并沾上中和劑然后壓出、沾上、壓出，如此進(jìn)行數(shù)次之后，再放人中和劑內(nèi)5～l0min，用鑷子將棉簽擰干，然后把它移人裝有滅菌水(30ml)的罐內(nèi)。

當(dāng)以漂白粉作為消毒劑時(shí)，可應(yīng)用30ml的次亞硫酸鹽中和之；堿性溶液用0．01％醋酸30ml中和；福爾馬林用氫氧化銨(1％～2％)作為中和劑。當(dāng)以克遼林、來蘇兒及其他藥劑消毒時(shí)，沒有適當(dāng)?shù)闹泻蛣?，而是在滅菌的水中洗?次，時(shí)間為5~l0min，依次地把棉簽從一個(gè)罐內(nèi)移人另一個(gè)罐內(nèi)。

送到實(shí)驗(yàn)室去的滅菌水里的樣品在當(dāng)天把棉簽擰干和將液體攪拌之后，將此洗液的樣品接種在遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基上。為此，用滅菌的刻度吸管由小罐內(nèi)吸取0．3ml的材料傾人瓊脂．平皿外表，用巴氏吸管作成的“刮〞，在瓊脂平皿外表涂布，然后仍用此“刮〞涂布第二個(gè)瓊脂平皿外表。將接種了的平皿置于37℃溫箱內(nèi)，24h檢查初步結(jié)果，48h后檢查最后結(jié)果。如在遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)可疑菌落時(shí)，即用常規(guī)方法鑒別這些菌落。如無腸道桿菌培養(yǎng)物存在時(shí)，證明所進(jìn)行的消毒質(zhì)量是良好的，有腸道桿菌生長，說明消毒質(zhì)量不良。

復(fù)習(xí)題與作業(yè)

1．試述消毒的種類和意義。

2．分別列舉適用于殺滅芽胞菌、非芽胞菌和病毒的化學(xué)消毒藥。

3．糞便生物熱消毒的原理為何?

4．如何進(jìn)行畜、禽舍消毒質(zhì)量的微生物學(xué)檢查?

實(shí)驗(yàn)三傳染病病畜(禽)尸體的處理

目

的

結(jié)合生產(chǎn)實(shí)踐，掌握尸體的運(yùn)送及處理方法。

內(nèi)容及方法

一、尸體的運(yùn)送

尸體運(yùn)送前，工作人員應(yīng)穿戴工作服、口罩、風(fēng)鏡、膠鞋及手套。運(yùn)送尸體應(yīng)用特制的運(yùn)尸車(車的內(nèi)壁襯釘鐵皮，以防漏水)。裝車前應(yīng)將尸體各天然孔用蘸有消毒液的濕紗布、棉花嚴(yán)密填塞，小動(dòng)物和禽類可用塑料袋盛裝，以免流出糞便、分泌物、血液等污染周圍環(huán)境。在尸體躺過的地方，應(yīng)用消毒液噴灑消毒，如為土壤地面，應(yīng)鏟去表層土，連同尸體一起運(yùn)走。運(yùn)送過尸體的用具、車輛應(yīng)嚴(yán)加消毒，工作人員用過的手套、衣物及膠鞋等亦應(yīng)進(jìn)行消毒。

二、處理尸體的方法

尸體的處理方法有多種，各具優(yōu)缺點(diǎn)，在實(shí)際工作中應(yīng)根據(jù)具體情況和條件加以選

擇。

1.掩埋法這種方法雖不夠可靠，但比擬簡單，所以在實(shí)際工作中仍常應(yīng)用。

(1)墓地的選擇選擇遠(yuǎn)離住宅、農(nóng)牧場、水源、草原及道路的僻靜地方；土質(zhì)宜干而多孔(沙土最好)，以便尸體加快腐敗分解；地勢高、地下水位低，并避開山洪的沖刷；墓地應(yīng)筑有2m高的圍墻，墻內(nèi)挖一個(gè)4m深的圍溝，設(shè)有大門，平時(shí)落鎖。

(2)挖坑坑的長度和寬度以能容納側(cè)臥之尸體即可，從坑沿到尸體外表不得少于1．5～2m。

(3)掩埋坑底鋪以2～5cm厚的石灰，將尸體放入，使之側(cè)臥，并將污染的土層、捆尸體的繩索一起拋入坑內(nèi)，然后再鋪2～5cm厚的石灰，填土夯實(shí)。尸體掩埋后，上面應(yīng)作0．5m高的墳丘。

2．燃燒法這是消滅尸體最徹底的方法，可在焚尸爐中進(jìn)行。如無焚尸爐，那么可挖掘焚尸坑。焚尸坑有以下幾種：

(1)十字坑按十字形挖兩條溝，溝長2．6m，寬0．6m，深0．5m。在兩溝交叉處坑底堆放干草和木柴，溝沿橫架數(shù)條粗濕木棍，將尸體放在架上，在尸體的周圍及上面再放上木柴，然后在木柴上倒以煤油，并壓以磚瓦或鐵皮，從下面點(diǎn)火，直到把尸體燒成黑炭為止，并把它掩埋在坑內(nèi)。

(2)單坑挖一長2．5m，寬1．5m，深0．7m的坑，將取出的土堵在坑沿的兩側(cè)。坑內(nèi)用木柴架滿，坑沿橫架數(shù)條粗濕木棍，將尸體放在架上，以后處理如(1)法。

(3)雙層坑先挖一長、寬各2m，深0．75m的大溝，在溝的底部再挖一長2m、寬lm、深0．75m的小溝，在小溝溝底鋪以干草和木柴，兩端各留出18～20cm的空隙，以便吸人空氣，在小溝溝沿橫架數(shù)條粗濕木棍，將尸體放在架上，以后處理如(1)法。

3．化制法這是一種較好的尸體處理方法，因它不僅對(duì)尸體作到無害化處理，并保存了有價(jià)值的畜產(chǎn)品，如工業(yè)用油脂及骨、肉粉。此法要求在有一定設(shè)備的化制廠進(jìn)行?；剖w時(shí)，對(duì)烈性傳染病，如鼻疽、炭疽、氣腫疽、羊快疫等病畜尸體可用高壓滅菌；對(duì)于普通傳染病可先切成4～5kg的肉塊，然后在水鍋中煮沸2～3h。

4．發(fā)酵法這種方法是將尸體拋入專門的尸體坑內(nèi)，利用生物熱的方法將尸體發(fā)酵分解以到達(dá)消毒的目的。這種專門的尸體坑是貝卡里氏設(shè)計(jì)出來的，所以叫做貝卡里氏坑。建筑貝卡里氏坑應(yīng)選擇遠(yuǎn)離住宅、農(nóng)牧場、草原、水源及道路的僻靜地方。尸坑為圓井形，深9～l0m，直徑3m，坑壁及坑底用不透水材料作成(可用水泥或涂以防腐油的木料)。坑口高出地面約30cm，坑口有蓋，蓋上有小的活門(平時(shí)落鎖)，坑內(nèi)有通氣管。如有條件，可在坑上修一小屋?？觾?nèi)尸體可以堆到距坑口1．5m處。經(jīng)3～5個(gè)月后，尸體完全腐敗分解，此時(shí)可以挖出作肥料。

如果土質(zhì)干硬，地下水位又低，加之條件限制，可以不用任何材料，直接按上述尺寸挖一深坑即可，但需在距坑口lm處用磚頭或石頭向上砌一層坑緣，上蓋木蓋，坑口應(yīng)高出地面30cm，以免雨水流入。

復(fù)習(xí)題與作業(yè)

1．運(yùn)送尸體時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)?

2．常用的處理尸體方法共有幾種?各述其優(yōu)缺點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)四免疫接種

目

的

1．結(jié)合生產(chǎn)實(shí)踐掌握免疫接種的方法和步驟。

2．熟悉獸醫(yī)生物制品的保存、運(yùn)送和用前檢查方法。

內(nèi)容及方法

一、免疫接種的方法

免疫接種的方法很多，主要有注射免疫法、經(jīng)口免疫法、氣霧免疫法等。

1．注射免疫法注射免疫法中可分為皮下接種、皮內(nèi)接種、肌肉接種和靜脈接種等四種。

(1)皮下接種法對(duì)馬、牛等大家畜皮下接種時(shí)，一律采用頸側(cè)部位，豬在耳根前方，家禽在胸部、大腿內(nèi)側(cè)。根據(jù)藥液的濃度和家畜的大小而異，一般用16～20號(hào)針頭，長約1．2～2．5cm。家禽那么應(yīng)采用針孔直徑小于20號(hào)的針頭。

皮下接種的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單，吸收較皮內(nèi)接種為快，缺點(diǎn)是使用劑量多。而且同一疫苗，應(yīng)用皮下接種時(shí)，其反響較皮內(nèi)為大。大局部常用的疫苗和免疫血清，一般均采用皮下接種。

(2)皮內(nèi)接種法馬的皮內(nèi)接種采用頸側(cè)、眼瞼部位。牛及羊除頸側(cè)外，可在尾根或肩胛中央部位。豬大多在耳根后。雞在肉髯部位。

現(xiàn)用獸醫(yī)生物制品用作皮內(nèi)接種的，僅有羊痘弱毒菌苗、豬瘟結(jié)晶紫疫苗等少數(shù)制品，其他均屬于診斷液方面。一般使用專供皮內(nèi)注射的注射器(容量2～l0ml)，0．6～1．2cm長的螺旋針頭(針孔直徑19—25號(hào))，也可使用藍(lán)心注射器(容量lml)和相應(yīng)的注射針頭。

皮內(nèi)接種的優(yōu)點(diǎn)是使用藥液少，同樣的疫苗皮內(nèi)注射較之于皮下注射反響小。同時(shí)，真皮層的組織比擬致密，神經(jīng)末梢分布廣泛，特別是豬的耳根皮內(nèi)比其他部位容易保持清潔。同量藥液皮內(nèi)注射時(shí)所產(chǎn)生的免疫力較皮下注射為高。

皮內(nèi)接種的缺點(diǎn)是手續(xù)比擬麻煩。提高工作人員的操作技術(shù)，可以克服這一缺點(diǎn)。

(3)肌肉接種法馬、牛、豬、羊的肌肉接種，一律采用臀部和頸部兩個(gè)部位。雞可在胸肌部接種。

現(xiàn)有獸醫(yī)生物制品，除豬瘟弱毒疫苗、牛肺疫弱毒疫苗以及在某些情況下接種血清采用肌肉接種外，其他生物制品一般都不應(yīng)用此法進(jìn)行接種。一般使用16～20號(hào)針頭，長約2．5～3．7cm。

肌肉接種的優(yōu)點(diǎn)是藥液吸收快，注射方法也較簡便。其缺點(diǎn)是在一個(gè)部位不能大量注射。同時(shí)臀部接種如部位不當(dāng)，易引起跛行。

(4)靜脈接種法馬、牛、羊的靜脈接種，一律在頸靜脈部位，豬在耳靜脈部位。雞那么在翼下靜脈部位。

現(xiàn)用獸醫(yī)生物制品中的免疫血清，除了皮下或肌肉接種外，亦可采用靜脈接種，特別在急于治療傳染病患畜時(shí)。疫苗、菌苗、診斷液一般不作靜脈注射。馬、牛、羊的靜脈接種部位在左右頸側(cè)均可，一般以右側(cè)較方便。根據(jù)家畜的大小和注射劑量的多寡，一般使用14～20號(hào)針頭，長約2．5～3．7cm。豬的靜脈接種在耳朵正面下翼的兩那么。一般使用19～23號(hào)針頭，長約2．5～5cm。

靜脈接種的優(yōu)點(diǎn)是可使用大劑量，奏效快，可以及時(shí)搶救病畜。缺點(diǎn)是手續(xù)比擬麻煩，如設(shè)備與技術(shù)不完備時(shí)，難以進(jìn)行。此外，如所應(yīng)用的血清為異種動(dòng)物者，可能引起過敏反響(血清病)。

2．經(jīng)口免疫法分飲水免疫和喂食免疫兩種。前者是將可供口服的疫苗混于水中，畜、禽通過飲水而獲得免疫，后者是將可供口服的疫苗用冷的清水稀釋后拌人飼料，’畜、禽通過吃食而獲得免疫。疫苗經(jīng)口免疫時(shí)，應(yīng)按畜、禽頭數(shù)和每頭畜、禽平均飲水量或吃食量，準(zhǔn)確計(jì)算需用的疫(菌)苗劑量。免疫前，應(yīng)停水或停料半天，夏季停水或停料時(shí)間可以縮短，以保證飲喂疫(菌)苗時(shí)，每頭畜、禽都能飲入一定量的水或吃入一定量的料。飲水免疫時(shí)，一定要增加飲水器，讓每頭畜、禽同時(shí)都能飲到足夠量的水。稀釋疫(菌)苗應(yīng)當(dāng)用清潔的水，禁用含漂白粉的自來水?；煊幸?菌)苗的飲水和飼料一般不應(yīng)超過室溫。已稀釋的疫(菌)苗，應(yīng)迅速飲喂。本法具有省時(shí)、省力的優(yōu)點(diǎn)，適用規(guī)模化養(yǎng)畜、禽場的免疫。缺點(diǎn)是由于畜、禽的飲水量或吃食量有多有少，因此進(jìn)人每頭畜、禽體內(nèi)的疫(菌)苗量不同，出現(xiàn)免疫后畜、禽的抗體水平不均勻，較離散，不能象其他免疫法那樣準(zhǔn)確一致。

3．氣霧免疫法此法是用氣泵產(chǎn)生的壓縮空氣通過氣霧發(fā)生器(即噴頭)，將稀釋疫苗噴出去，使疫(菌)苗形成直徑1～10／μm的霧化粒子，均勻地浮游在空氣之中，畜、禽通過呼吸道吸人肺內(nèi)，以到達(dá)免疫。雞感染支原體病時(shí)禁用氣霧免疫，因?yàn)槊庖吆笸ぐl(fā)支原體病發(fā)生，雛雞首免時(shí)使用氣霧免疫應(yīng)慎重，以免發(fā)生呼吸道疾病而造成損失。

氣霧免疫的裝置由氣霧發(fā)生器(即噴頭)及動(dòng)力機(jī)械組成?？梢虻刂埔?，利用各種氣泵或用電動(dòng)機(jī)、柴油機(jī)帶動(dòng)空氣壓縮泵。無論以何種方法做動(dòng)力，都要保持每平方厘米有2kg以上的壓力，才能到達(dá)疫(菌)苗霧化的目的。

霧化粒子大小與免疫效果有很大關(guān)系。一般粒子大小在1～10／lμm為有效粒子。氣霧發(fā)生器的有效粒子在70％以上者為合格。測定霧化粒子大小時(shí)，用一拭好的蓋玻片，周圍涂以凡士林油，在蓋玻片中央滴一小滴機(jī)油，用拇指印食指持蓋玻片，機(jī)油液面朝噴頭，在距噴頭10～30cm處迅速通過，使霧化粒子吹于機(jī)油面上，然后將蓋玻片液面朝下放于凹玻片上，在顯微鏡下觀察，移動(dòng)視野，用目測微尺測量其大小(方法與測量細(xì)菌大小相同)，并計(jì)算其有效粒子率。

(1)室內(nèi)氣霧免疫法此法需有一定的房舍設(shè)備。免疫時(shí)，疫(菌)苗用量主要根據(jù)房舍大小而定，可按下式計(jì)算：

疫(菌)苗用量＝；D×A／T×V

式中：D——方案免疫劑量；

A——免疫室容積(1)；

T——免疫時(shí)間(分鐘)；

V——呼吸常數(shù)，即動(dòng)物每分鐘吸人的空氣量(L)，如對(duì)綿羊免疫，即為3～6。

疫(菌)苗用量計(jì)算好以后，即可將動(dòng)物趕人室內(nèi)，關(guān)閉門窗。操作者將噴頭由門窗縫伸A室內(nèi)，使噴頭保持與動(dòng)物頭部同高，向室內(nèi)四面均勻噴射。噴射完畢后，讓動(dòng)物在自內(nèi)停留20～30min。操作人員要注意自身防護(hù)，戴上大而厚的口罩，如出現(xiàn)病癥，應(yīng)及時(shí)就醫(yī)。

(2)野外氣霧免疫法疫(菌)苗用量主要以動(dòng)物數(shù)量而定。以羊?yàn)槔?，如?000只，每羊免疫劑量為50億活菌，那么需50000億，如果每瓶疫苗含活菌4000億，那么需12．5瓶，月500ml滅菌生理鹽水稀釋。實(shí)際應(yīng)用時(shí)，往往要比實(shí)際用量略高一些。免疫時(shí)，將畜群趕入四周有矮墻的圈內(nèi)。操作人員手持噴頭，站在畜群中，噴頭與動(dòng)物頭部同高，朝動(dòng)物頭部方向噴射。操作人員要隨時(shí)走動(dòng)，使每一動(dòng)物都有吸人時(shí)機(jī)。如遇微風(fēng)，操作者應(yīng)站在上風(fēng)向，以免霧化粒子被風(fēng)吹走。噴射完畢，讓動(dòng)物在圈內(nèi)停留數(shù)分鐘即可放出。野外氣霧免疫時(shí)，操作者更應(yīng)注意自身防護(hù)，要穿工作衣褲和膠靴，戴大而厚的口罩，如出現(xiàn)病癥，應(yīng)及時(shí)就醫(yī)。

氣霧免疫時(shí)，如霧化粒子過大或過小，溫度過高，濕度過高或過低，野外免疫時(shí)風(fēng)力過大、風(fēng)速過急，均可影響免疫效果。本法具有省時(shí)、省力的優(yōu)點(diǎn)，適于大群動(dòng)物的免疫，缺點(diǎn)是需要的疫(菌)苗數(shù)量較多。

二、免疫接種用生物制品的保存、運(yùn)送和用前檢查

1．保存獸醫(yī)生物制品應(yīng)保存在低溫、陰暗、枯燥的場所，滅活菌(死苗)、致弱的細(xì)菌性菌苗、類毒素、免疫血清等應(yīng)保存在2～15℃，防止凍結(jié)；致弱的病毒性疫苗，如豬瘟弱毒疫苗、雞新城疫弱毒疫苗等，應(yīng)置放在0℃以下，凍結(jié)保存。

2．運(yùn)送要求包裝完善，盡快運(yùn)送，運(yùn)送途中防止日光直射和高溫。致弱的病毒性疫苗應(yīng)放在裝有冰塊的廣口瓶或冷藏箱內(nèi)運(yùn)送。

3．用前檢查獸醫(yī)生物制品在使用前，均需詳細(xì)檢查，如有以下情況之一者，不得使用：沒有瓶簽或瓶簽?zāi)：磺?，沒有經(jīng)過合格檢查的；過期失效的；制品的質(zhì)量與說明書不符，如色澤、沉淀有變化，制品內(nèi)有異物、發(fā)霉和有臭味的；瓶塞不緊或玻璃破裂的；沒有按規(guī)定方法保存的。不能使用的疫(菌)苗應(yīng)立即廢棄，致弱的活苗應(yīng)煮沸消毒或予以深埋。

三、家畜免疫接種前及接種后的護(hù)理與觀察

免疫接種前，應(yīng)對(duì)家畜進(jìn)行健康檢查(包括體溫檢查)，根據(jù)檢查結(jié)果，作如下處理：完全健康的家畜可進(jìn)行自動(dòng)免疫接種；衰弱、妊娠后期的家畜不能進(jìn)行自動(dòng)免疫接種，而應(yīng)注射免疫血清；疑似病畜和發(fā)熱病畜應(yīng)注射治療量的免疫血清或給予其他治療。

經(jīng)受自動(dòng)免疫的家畜，應(yīng)有較好的護(hù)理和管理?xiàng)l件，要特別注意控制家畜的使役，以防止過分勞累和接種疫(菌)苗后出現(xiàn)的暫時(shí)性抵抗力降低而產(chǎn)生不良后果。有時(shí)，家畜接種疫(菌)苗后可能會(huì)發(fā)生反響，故在接種后應(yīng)詳細(xì)觀察7～10天。如有反響，可給予適當(dāng)治療，反響極為嚴(yán)重的，可予以屠宰。

四、免疫接種的組織及接種時(shí)的注意點(diǎn)

在某一地區(qū)或農(nóng)牧場進(jìn)行免疫接種時(shí)的組織工作好壞，決定著免疫接種的結(jié)果和成效，其內(nèi)容包括：對(duì)飼養(yǎng)人員講解有關(guān)接種工作的根本原理及其在防制家畜傳染病上的重要性、接種后家畜的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件等；準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)膱龅睾捅６üぞ?；?zhǔn)備給家畜編號(hào)的器具；編訂登記表冊(cè)。

接種時(shí)，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：工作人員需穿著工作服及膠鞋，必要時(shí)戴口罩，工作前后均應(yīng)洗手消毒，工作中不準(zhǔn)吸煙和吃食；注射器、針頭、鑷子等，臨用時(shí)煮沸消毒至少15分鐘，注射時(shí)每頭家畜須調(diào)換一個(gè)針頭，如針頭缺乏，也應(yīng)每吸液一次調(diào)換一個(gè)針頭；針筒排氣溢出的藥液，應(yīng)吸積于酒精棉花上，并將其收集于專用瓶內(nèi)，用過的酒精棉花或碘酒棉花和吸人注射器內(nèi)未用完的藥液也應(yīng)收集于或注入專用瓶內(nèi)，集中后燒毀之。

復(fù)習(xí)題與作業(yè)

1．試述免疫接種在獸疫防治上的意義。

2．常用的免疫接種法有幾種，各有哪些優(yōu)缺點(diǎn)？

實(shí)驗(yàn)五病料的取材和送檢

目

的

結(jié)合病例診斷工作，學(xué)會(huì)被檢病料的采取、保存、包裝和記錄的方法

內(nèi)容及方法

一、病料的采取

1．剖檢前檢查凡發(fā)現(xiàn)患畜(包括馬、牛、羊及豬等)急性死亡時(shí)，必須先用顯微鏡檢查其末梢血液抹片中是否有炭疽桿菌存在。如疑心是炭疽，那么不可隨意剖檢，只有在確定不是炭疽時(shí)方可進(jìn)行剖檢。

2．取材時(shí)間內(nèi)臟病料的采取，須于死亡后立即進(jìn)行，最好不超過6h，否那么時(shí)間過長，由腸內(nèi)侵入其他細(xì)菌，易使尸體腐敗，影響病原微生物的檢出。

3．器械的消毒刀、剪、鑷子、注射器、針頭等煮沸消毒30min。器皿(玻璃制品、陶制品、琺瑯制品等)可用高壓滅菌或-干烤滅菌。軟木塞、橡皮塞置于0．5％石炭酸水溶液中煮沸10min。采取一種病料，使用一套器械和容器，不可混用。

4．病料采取應(yīng)根據(jù)不同的傳染病，相應(yīng)地采取該病常侵害的臟器或內(nèi)容物。如敗血性傳染病可采取心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)、胃、腸等；腸毒血癥采取小腸及其內(nèi)容物；有神經(jīng)病癥的傳染病采取腦、脊髓等。如無法估計(jì)是哪種傳染病，可進(jìn)行全面采取。檢查血清抗體時(shí)，采取血液，凝固后析出血清，將血清裝入滅菌小瓶送檢。為了防止雜菌污染，病變檢查應(yīng)待病料采取完畢后再進(jìn)行。各種組織及液體的病料采取方法如下。

(1)膿汁用滅菌注射器或吸管抽取或吸出膿腫深部的膿汁，置于滅菌試管中。假設(shè)為開口的化膿灶或鼻腔時(shí)，那么用無菌棉簽浸蘸后，放在滅菌試管中。

(2)淋巴結(jié)及內(nèi)臟將淋巴結(jié)、肺、肝、脾及腎等有病變的部位各采取1～2cm3的小方塊，分別置于滅菌試管或干皿中。假設(shè)為供病理組織切片的材料，應(yīng)將典型病變局部及相連的健康組織一并切取，組織塊的大小每邊約2cm左右，同時(shí)要防止使用金屬容器，尤其是當(dāng)病料供色素檢查時(shí)(如馬傳貧、馬腦炎及焦蟲病等)，更應(yīng)注意。

(3)血液

血清：以無菌操作吸取血液l0ml，置于滅菌試管中，待血液凝固(經(jīng)1～2天)析出血清后，吸出血清置于另一滅菌試管內(nèi)，如供血清學(xué)反響時(shí)，可于每毫升中參加5％石炭酸水溶液1～2滴。

全血：采取10ml全血，立即注入盛有5％檸檬酸鈉lml的滅菌試管中，搓轉(zhuǎn)混合片刻后即可。

心血：心血通常在右心房處采取，先用燒紅的鐵片或刀片烙燙心肌外表，然后用滅菌的尖刃外科刀自烙燙處刺一小孔，再用滅菌吸管或注射器吸出血液，盛于滅菌試管中。

(4)乳汁乳房先用消毒藥水洗凈(取乳者的手亦應(yīng)事先消毒)，并把乳房附近的毛刷濕，最初所擠的3—4股乳汁棄去，然后再采集l0ml左右乳汁于滅菌試管中。假設(shè)僅供顯微鏡直接染色檢查，那么可于其中參加0．5％的福爾馬林液。

(5)膽汁先用燒紅的刀片或鐵片烙燙膽囊外表，再用滅菌吸管或注射器刺人膽囊內(nèi)吸取膽汁，盛于滅菌試管中。

(6)腸用燒紅刀片或鐵片將欲采取的腸外表烙燙后穿一小孔，持滅菌棉簽插入腸內(nèi)，以便采取腸管粘膜或其內(nèi)容物；亦可用線扎緊一段腸道(約6cm)兩端，然后將兩端切斷，置于滅菌器皿內(nèi)。

(7)皮膚取大小約10cmXl0cm的皮膚一塊，保存于30％甘油緩沖溶液中，或10％飽和鹽水溶液中，或10％福爾馬林液中。

(8)胎兒將流產(chǎn)后的整個(gè)胎兒，用塑料薄膜、油布或數(shù)層不透水的油紙包緊，裝入木箱內(nèi)，立即送往實(shí)驗(yàn)室。

(9)小家畜及家禽將整個(gè)尸體包入不透水塑料薄膜、油紙或油布中，裝入木箱內(nèi)，送往實(shí)驗(yàn)室。

(10)骨頭需要完整的骨頭標(biāo)本時(shí)，應(yīng)將附著的肌肉和韌帶等全部除去，外表撤上食鹽，然后包于浸過5％石炭酸水或0．1％升汞液的紗布或麻布中，裝于木箱內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。

(11)腦、脊髓如采取腦、脊髓作病毒檢查，可將腦、脊髓浸入50％甘油鹽水液中或?qū)⒄麄€(gè)頭部割下，包人浸過0．1％升汞液的紗布或油布中，裝入木箱或鐵桶中送檢。

供顯微鏡檢查用的膿汁、血液及粘液；可用載玻片作成抹片；組織塊可作成觸片，然后在兩塊玻片之間靠近兩端邊沿處各墊一根火柴棍或牙簽十以免抹片或觸片上的病料互相接觸。如玻片有多張，可按上法依次墊火柴棍或牙簽重疊起來，最上面的一張玻片上的涂、抹面應(yīng)朝下，最后用細(xì)線包扎，玻片上應(yīng)注明口碼，并另附說明。

二、病料的保存

病料采取后，如不能立即檢驗(yàn)，或需送往有關(guān)單位檢驗(yàn)，應(yīng)當(dāng)參加適量的保存劑，使病料盡量保持新鮮狀態(tài)。

1．細(xì)菌檢驗(yàn)材料的保存將采取的臟器組織塊，保存于飽和的氯化鈉溶液或30％甘油緩沖鹽水溶液中，容器加塞封固。如系液體，可裝在封閉的毛細(xì)玻管或試管運(yùn)送；飽和氯化鈉溶液的配制法是：蒸餾水l00ml，氯化鈉38～39g，充分?jǐn)嚢枞芙夂?，用?shù)層紗布過濾，高壓滅菌后備用。30％甘油緩沖鹽水溶液的配制法是：中性甘油30ml，氯化鈉牛5g，堿性磷酸鈉l0g，加蒸餾水至l00ml，混合后高，壓滅菌備用。

2．病毒檢驗(yàn)材料的保存將采取的臟器組織塊，保存于50％甘油緩沖鹽水溶液或雞蛋生理鹽水中，容器加塞封固，50％甘油緩沖鹽水溶液的配制法是：氯化鈉2．5g，酸性磷酸鈉0．46g，堿性磷酸鈉10．74g，溶于l00ml中性蒸餾水中，加純中性甘油150ml，中性蒸餾水50ml，混合分裝后，高壓滅菌備用。雞蛋生理鹽水的配制法是：先將新鮮的雞蛋外表用碘酒消毒，然后翻開將內(nèi)容物傾入滅菌容器內(nèi)，按全蛋9份參加滅菌生理鹽水1份，搖勻后用滅菌紗布過濾，再加熱至56～58℃，持續(xù)30min，第2天及第3天按上法再加熱一次，即可應(yīng)用。

3．病理組織學(xué)檢驗(yàn)材料的保存將采取的臟器組織塊放人10％福爾馬林溶液或95％酒精中固定；固定液的用量應(yīng)為送檢病料的10倍以上。如用10％福爾馬林溶液固定，應(yīng)在24h后換新鮮溶液一次。嚴(yán)寒季節(jié)為防病料凍結(jié)，可將上述固定好的組織塊取出，保存于甘油和10％福爾馬林等量混合液中。

三、病料的運(yùn)送

裝病料的容器要一一標(biāo)號(hào)，詳細(xì)記錄，并附病料送檢單(格式如表5)。病料包裝容器要牢固，做到平安穩(wěn)妥，對(duì)于危險(xiǎn)材料、怕熱或怕凍的材料要分別采取措施。一般病原學(xué)檢驗(yàn)的材料怕熱，應(yīng)放入加有冰塊的保溫瓶或冷藏箱內(nèi)送檢，如無冰塊，可在保溫瓶內(nèi)放入氯化銨450～500g，加水1500m1，上層放病料，這樣能使保溫瓶內(nèi)保持0℃達(dá)24h。供病理學(xué)檢驗(yàn)的材料放在10％福爾馬林溶液中，不必冷藏。包裝好的病料要盡快運(yùn)送，長途以空運(yùn)為宜。

復(fù)習(xí)題與作業(yè)

1．試述正確采取病料和運(yùn)送病料的實(shí)際意義。

2．現(xiàn)有疑似豬瘟病豬尸體，以及疑似腦炎病馬尸體各一具，試分別表達(dá)其病料采取、包裝和運(yùn)送方法。

實(shí)驗(yàn)六家畜傳染病的疫情調(diào)查和統(tǒng)計(jì)

目

的

學(xué)會(huì)家畜傳染病疫情調(diào)查的一般方法和調(diào)查資料的初步統(tǒng)計(jì)。

內(nèi)容及方法

一、家畜傳染病疫情調(diào)查的工程

1．農(nóng)牧場及居民點(diǎn)的名稱及地址。

2．疫場或疫點(diǎn)的一般特征：包括地理情況；地形特點(diǎn)；氣象資料(季節(jié)、天氣、雨量等)；農(nóng)牧場的獸醫(yī)干部和畜牧干部人數(shù)、文化程度、技術(shù)水平和對(duì)職責(zé)的態(tài)度；該居民點(diǎn)與鄰近居民點(diǎn)在經(jīng)濟(jì)和業(yè)務(wù)上的聯(lián)系；家畜數(shù)目(按種類)、品種和用途。

3．疫場的獸醫(yī)衛(wèi)生特征：

(1)動(dòng)物的飼養(yǎng)(共同的或是單個(gè)的)、護(hù)理和使役。

(2)畜、禽舍及其鄰近地區(qū)的狀況(從衛(wèi)生觀點(diǎn)來看)。

(3)飼料的品質(zhì)和來源地，其保藏、調(diào)配和飼喂的方法。

(4)水源的狀況和飲水處(水井、水池、小河等)的情況。

(5)放牧場地的情況和性質(zhì)。

(6)有無昆蟲和蜱——傳染病的傳遞者，它們大量出現(xiàn)的時(shí)間。

(7)畜、禽舍內(nèi)有無嚙齒動(dòng)物。

(8)廄肥的清理及其保存，廄肥貯存場所的位置和狀況。

(9)預(yù)防消毒和一般預(yù)防措施的執(zhí)行情況。

(10)尸體的處理、利用和消滅的方法；有無運(yùn)尸體的專用車。

(11)獸墓、尸體發(fā)酵坑和廢物利用場的位置、其設(shè)備和衛(wèi)生狀況，獸醫(yī)監(jiān)督等。

(12)有無檢疫室、隔離室、屠宰場、產(chǎn)房及其獸醫(yī)衛(wèi)生狀況。

(13)污水處理及排出情況。

4．一般流行病學(xué)資料：

(1)農(nóng)牧場補(bǔ)充牲畜的條件、預(yù)防檢疫規(guī)那么的執(zhí)行情況。

(2)何時(shí)由該場運(yùn)出家畜和原料以及運(yùn)往何處。

(3)該農(nóng)牧場的家畜何時(shí)患過何種傳染病、患病家畜數(shù)和死亡數(shù)。

(4)鄰近地區(qū)的疫情。

5．該次傳染病流行過程的特征：

(1)診斷結(jié)果。

(2)所采用的診斷方法。

(3)鑒別診斷。

(4)最早一些病例出現(xiàn)的時(shí)間。

(5)在發(fā)現(xiàn)最早的一些病例之前有無不明顯的病例。

(6)推測傳染源推測傳染病爆發(fā)的原因或傳染病由外面?zhèn)魅撕蛡鞑サ耐緩郊坝欣趥魅静〉膫鞑l件(是否由于放牧場、貯水池、飼料、處理尸體欠妥，昆蟲、蜱和嚙齒動(dòng)物所引起；是否由于動(dòng)物去過市場和疫點(diǎn)，或從這些地方運(yùn)來，以及飼料和生的畜產(chǎn)品帶人引起)。

(7)按照月、日登記發(fā)病率。

(8)患病的和死亡的家畜總數(shù)，死亡家畜的數(shù)目和患病家畜的比例(病死率)。

(9)傳染病的散播情況。

(10)臨床資料明顯型的、頓挫型的、典型的、非典型的和并發(fā)的病例數(shù)目。

(11)隱性病畜(帶菌者、帶毒者)的數(shù)目(按細(xì)菌學(xué)、血清學(xué)、變態(tài)反響等檢查的資料)。

(12)病理變化的資料(指出主要的和最為特征的變化)。

(13)已采取的措施及其效果(如緊急預(yù)防接種、隔離、消毒等)。

6．補(bǔ)充資料執(zhí)行和解除封鎖的日期，封鎖規(guī)那么有無破壞，最終的措施是如何進(jìn)行的，等等。

7．結(jié)論。

8．建議。

調(diào)查者簽名：

調(diào)查的日期：

上述格式所包括的內(nèi)容，只適用于疫區(qū)的一般調(diào)查，如果調(diào)查特定傳染病的流行病學(xué)特征及其發(fā)生、開展以及終熄的規(guī)律時(shí)，還須另訂適于該特定傳染病的調(diào)查工程。

二、家畜傳染病疫情調(diào)查材料的初步整理

由于調(diào)查所獲得的原始材料是復(fù)雜而紊亂的，說明不了什么問題，只是—堆數(shù)字而已，所以應(yīng)當(dāng)把它們整理成有系統(tǒng)的資料，再進(jìn)一步地研究和處理。

1．依次表統(tǒng)計(jì)處理的第一步，是將原始數(shù)字由小而大，按次序排列成一依次表，此種排列方法名為整列。由依次表可以看出數(shù)字大概變異的情形來。最小數(shù)與最大數(shù)之差叫做“全距〞。全距愈大，表示變異愈大，反之那么表示變異愈小。這種方法是最粗放的，一般用于小樣本得到的少數(shù)(10～30個(gè))數(shù)字材料。

2．次數(shù)分布表由大樣本所得到的大量數(shù)字材料，整理的方法比擬復(fù)雜，一般多采用次數(shù)分布表。其法是按數(shù)字的大小分組，在某一限度之內(nèi)者歸為一組，在另一限度之內(nèi)者歸為另一組，然后按每組的次數(shù)排列成表。所謂次數(shù)(一般以f代表)，即在各組中變數(shù)(一般以x為代表)出現(xiàn)的次數(shù)。對(duì)非連續(xù)性變數(shù)，并且變異范圍較小的樣本，可以采用其自然單位進(jìn)行分組。

例1：70個(gè)村豬瘟的發(fā)病數(shù)為：7、10、12、10、11、13、10、8、10、12、9、11、10、7、11、11、10、11、13、10、10、14、10、11、12、11、9、13、10、10、8、10、14、1l、12、12、11、10、12、13、11、12、11、9、8、9、10、8、13、10、12、10、9、11、9、10、10、8、11、11、13、9、11、9、10、13、10、11、11、9(單位：頭)。

上列變數(shù)中每村發(fā)病數(shù)量最小為7頭，最多為14頭。了解這個(gè)變異范圍以后，即可按次序排列如下表。

如果樣本的變異范圍非常大，或者屬于連續(xù)性變數(shù)，在兩效之間可以有無數(shù)其他變數(shù)，這樣的變數(shù)整理主要用“組距方法〞。其步驟及方法如下：

(1)

首先決定組數(shù)組數(shù)的多少系根據(jù)觀察總次數(shù)(n)的大小而有不同，一般按以下情況分組：當(dāng)n：40～—60時(shí)，分成6～8組；當(dāng)n＝60～100時(shí)，分成7～10組；當(dāng)n＝100～200時(shí)，分成9～12組；當(dāng)n：200～500時(shí)，分成12～17組。這樣看來，上列資料可分為6組。

(2)

決定組距以組數(shù)除全距，取其商數(shù)的近似整數(shù)作為組距。

最大值－最小值１２－７５

組距〔ｉ〕＝＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＝＿＿＿＿＝――＝０.８＝１

組距６６

(3)決定各組的組限根據(jù)已確定的組數(shù)和組距，確定各組的組限，然后將各組的組限由小而大，自上而以下于表的第一行，例如第一組為7.0～7.99，第二組為8.0～8.99．．．．．．等。

(4)計(jì)算中價(jià)例如第一組的中價(jià)為7.5，第二組的中價(jià)為8.5……等。將中價(jià)列于表的第二行。

(5)將所有數(shù)字依其大小分別記于各組，再總計(jì)各組出現(xiàn)的次數(shù)，列在表的最后一行。這樣次數(shù)分布表

3．次數(shù)分布圖調(diào)查數(shù)字的分布情形，尚可利用圖解法表示，此種圖名為次數(shù)分布圖。常用的有以下各種：

(1)一般條圖表示變量(指標(biāo)的參數(shù))之間比照、變異和構(gòu)成。以同樣寬的直條長度表示事物的數(shù)量多少，可以比照，用絕對(duì)數(shù)與相對(duì)數(shù)均可(圖4)。繪圖時(shí)，要注意各直條寬度及各條間的間隔要相等，間隔的寬度約為條寬的一半到與條相等；各直條除有自然順序的資料之外，應(yīng)由高到矮依次排列；各直條須有共同的基線，從“0〞開始，如直條過長，中間可用折線折斷，用數(shù)字標(biāo)明。

(2)構(gòu)成條圖以長條代表整體，即100％，長條中各段的長度代表其百分此。把長穿長8條之旁。構(gòu)成條圖是專為表示組成成分的比例的

(3)圓面圖以圓面積內(nèi)所占局部大小，說明事物總體的構(gòu)成。繪制時(shí)以全面積為100％，每3.6°角的面積為1％?？梢杂闷浒俜直葦?shù)乘以3.6即可知該數(shù)所占角的面積，用量角器繪制；各局部角面積的排列，應(yīng)按順時(shí)針方向依次排列，而且要從12點(diǎn)鐘處開始；圓內(nèi)各局部應(yīng)標(biāo)明百分?jǐn)?shù)，如將兩種相似的資料比照時(shí)，應(yīng)取直徑相同之圓，且圓內(nèi)各局部排列次序也應(yīng)一致。

(4)自然線圖把觀察的數(shù)據(jù)(相對(duì)數(shù)或絕對(duì)數(shù))直接點(diǎn)在座標(biāo)圖上，用線連接各點(diǎn)，表示指標(biāo)的分布、動(dòng)態(tài)、趨勢和相關(guān)等特點(diǎn)。作圖時(shí)，以橫軸表示時(shí)間或其他變量，縱軸表示指標(biāo)的數(shù)據(jù)(相對(duì)數(shù)或絕對(duì)數(shù))；用線條連接各點(diǎn)，以線條的起伏表現(xiàn)現(xiàn)象變動(dòng)的趨勢；縱軸一定從“0〞開始，橫軸那么可根據(jù)需要而定?？v軸尺度距離應(yīng)與橫軸的間隔相適應(yīng)?？v軸和橫軸總長度之比一般為7：5或5：7。如需在同一圖內(nèi)有不同曲線相比擬時(shí)，那么線條不宜太多(一般少于4條)，而且要用粗細(xì)、虛實(shí)和不同符號(hào)標(biāo)志出來(如圖6)。

(5)半對(duì)數(shù)線圖當(dāng)變化的數(shù)據(jù)的基數(shù)不同，或指標(biāo)變化速度特大而資料本身要反映其變動(dòng)連勢時(shí)，可用半對(duì)數(shù)線圖。這種線圖的縱軸為對(duì)數(shù)尺度，橫軸為等距的算數(shù)尺度，組合一起叫半對(duì)數(shù)。如甲乙兩縣乙腦死亡的變化情況如下表.

甲乙兩縣乙腦病死率的比擬

甲

乙

1960

1970

100/10萬

25/10萬

4．統(tǒng)計(jì)表經(jīng)過整理和計(jì)算得出的數(shù)量結(jié)果(統(tǒng)計(jì)指標(biāo))，例如各組的均數(shù)或百分?jǐn)?shù)，可以用表格的形式表達(dá)出來，以便使資料的主要內(nèi)容一目了然，易于比擬，并可免除繁瑣．的文字說明。

統(tǒng)計(jì)表一般包括有表號(hào)、標(biāo)題(表目)、，表頭、表身、說明或腳注等局部。表頭指表上端兩橫線之間的局部，由文字排列成假設(shè)干列，最左側(cè)一列為主詞所在位置，右側(cè)各列為賓詞——縱表目所在位置。表身指表頭兩橫線以下的局部，其最左側(cè)為表達(dá)主詞即被說明事物特征的所在位置——橫標(biāo)目，其右側(cè)為表達(dá)賓詞特征的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)，填寫統(tǒng)計(jì)指標(biāo)的方格總稱表體。說明或腳注(包括資料來源)放在表最下方橫線的下邊。如下兩表所示。

上列豬傳染性胃腸炎發(fā)病和死亡統(tǒng)計(jì)表中，①為主詞(有時(shí)可留空)，②為賓詞，⑧為橫標(biāo)目，④為縱標(biāo)目(賓詞與縱標(biāo)目之間也可加一橫線隔開)，⑤為表體中的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)。

設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)表時(shí)，要注意以下各點(diǎn)：內(nèi)容要簡明，標(biāo)題要明確(包括何事、何時(shí)、何地)；統(tǒng)計(jì)指標(biāo)的單位一律附于標(biāo)目之后，表體方格內(nèi)不再寫單位，只寫阿拉伯?dāng)?shù)字，較復(fù)雜的單位也可在腳注中加以說明；表內(nèi)盡量少用線條，最根本的線條是三條橫線，第一條將標(biāo)題與縱標(biāo)目隔開，第二條將縱標(biāo)目與橫標(biāo)目和表體隔開，第三條封閉(結(jié)束)表格，并與腳注隔開；表內(nèi)盡量少用文字說明，必要時(shí)可在欲說明處的右上角加星號(hào)，然后在表格底下加腳注(用同樣星號(hào))說明之。

復(fù)習(xí)題與作業(yè)

1．家畜傳染病疫情調(diào)查及統(tǒng)計(jì)的意義是什么?

2．試設(shè)計(jì)布氏桿菌病或豬氣喘病疫區(qū)疫情調(diào)查表格。

實(shí)驗(yàn)七炭疽的診斷和防治

目

的

掌握炭疽實(shí)驗(yàn)室診斷的步驟和方法、熟悉炭疽的治療要點(diǎn)、學(xué)會(huì)炭疽的預(yù)防接種技術(shù)。

內(nèi)容及方法

一、

炭疽病畜的生前檢查

流行病學(xué)：應(yīng)了解病畜所在地區(qū)以往有無炭疽的發(fā)生、流行形式、發(fā)病季節(jié)、動(dòng)物種類、發(fā)病和死亡情況、采取哪些相應(yīng)的措施、對(duì)尸體如何處理以及近年來炭疽預(yù)防接種工作進(jìn)行等情況。

臨診檢查：除精神、食欲、結(jié)膜、體溫等一般檢查外，應(yīng)特別注意喉部、腹下等處有無腫脹、腫脹的性質(zhì)，病畜有無疝痛癥(應(yīng)與真疝痛區(qū)別)，糞便是否帶血。

二、

炭疽的實(shí)驗(yàn)室診斷

1．檢驗(yàn)材料的采取疑為炭疽死亡的動(dòng)物尸體，通常不作剖檢，應(yīng)先自末梢血管采血涂片鏡檢，作初步診斷。不進(jìn)行剖檢的尸體可作局部解剖采取小塊脾臟，然后將切口用浸透了濃漂白粉液的棉花或紗布堵塞，妥為包裝后送檢。

2．鏡檢取病畜瀕死時(shí)或剛死亡動(dòng)物的血液作涂片標(biāo)本，最好用瑞氏或姬姆薩染色法染色，牛羊炭疽?？梢姷綌?shù)量很多的有莢膜炭疽桿菌，單個(gè)或成對(duì)存在，偶有短鏈，菌端成方形，莢膜呈深紅紫色；豬炭疽要采取病變部淋巴結(jié)或滲出液涂片檢查。

3．培養(yǎng)檢查無菌采取病畜瀕死期或剛死動(dòng)物的病理材料，直接接種于普通瓊脂平板及肉湯中，置37℃培養(yǎng)18～24h，檢查有無炭疽桿菌生長。如果檢查材料已經(jīng)陳舊或污染時(shí)；可將血液或組織乳劑先放到肉湯中加溫65～70℃經(jīng)10min，殺死無芽胞的細(xì)菌，然后吸取0.5m1，接種于普通瓊脂平板進(jìn)行別離培養(yǎng)。

檢查生長的菌落，如有疑似炭疽的菌落，那么應(yīng)取得純培養(yǎng)。為了鑒定別離的細(xì)菌為炭疽桿菌，必須接種各種培養(yǎng)基，觀察菌體的形態(tài)，菌落的形態(tài)及生化反響，同時(shí)接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察菌體的致病能力。炭疽桿菌與偽炭疽桿菌有某些類似之處，可參照表7予以鑒別。

上述的試驗(yàn)中，以運(yùn)動(dòng)力測定、莢膜形成、致病力，以及卵磷脂酶試驗(yàn)較為重要。

4．串珠試驗(yàn)炭疽桿菌在適當(dāng)濃度青霉素溶液作用下，菌體腫大形成串珠，這種反響為炭疽桿菌所特有，因此可用此法與其他需氧芽胞桿菌相鑒別。取培養(yǎng)4～12h的肉湯培養(yǎng)物三管，其中二管各及時(shí)參加每毫升含5單位和10單位青霉素溶液0.5ml(最終濃度含0.5和1.0單位)混勻，另一管加生理鹽水0.5ml，作為對(duì)照。置37℃孵育1～4h(時(shí)間過久，串珠繼續(xù)腫脹，容易破裂)，取出參加20％福爾馬林溶液0.5ml，固定10min后，涂片顯微鏡檢查，找到典型串珠狀者可判定為炭疽桿菌。

5．Ascoli試驗(yàn)這是一種熱沉淀反響，已被用于檢查可疑尸體的感染獸皮、器官和組織中炭疽桿菌(炭疽免疫血清能與炭疽芽胞桿菌的抗原浸出物形成一種沉淀物)。這種試驗(yàn)是有一定特異性，仍在許多國家應(yīng)用。操作方法，采集1g左右可疑病畜的組織，經(jīng)研磨碎后，用5～10ml含10％醋酸的碳酸生理鹽水稀釋，煮沸5min，冷卻后過濾即成抗原。然后取一支小試管，參加0.5ml抗炭疽血清，再小心將抗原濾液置于其上，如在15min內(nèi)，在抗原和血清接觸面形成一種環(huán)狀混濁的沉淀環(huán)，那么表示陽性反響。本試驗(yàn)應(yīng)設(shè)正常血清和正常組織作對(duì)照。

6．炭疽桿菌莢膜熒光抗體染色：

(1)抗炭疽桿菌沉淀素?zé)晒饪贵w的制備取生物制品廠所生產(chǎn)的炭疽沉淀血清，或用炭疽桿菌免疫家兔制得抗血清，用硫酸銨沉淀提純所得球蛋白與異硫氰酸熒光素標(biāo)記。

(2)以病死畜的血液或脾臟涂片，固定后滴加標(biāo)記過的抗體，滿蓋玻片，置室溫或37℃染色30min，傾去熒光抗體液，采用pH8的PBS浸洗10min(中間換液一次)，最后用蒸餾水輕輕沖洗2次，晾干。

(3)在熒光顯微鏡下檢查，找到菌體周圍有發(fā)光的莢膜，菌體較暗或不被染色，可判為陽性。如發(fā)現(xiàn)不帶莢膜而發(fā)均勻熒光的桿菌，那么不能判定為炭疽桿菌。

三、

炭疽的預(yù)防接種和治療

1．炭疽的預(yù)防接種在疫區(qū)對(duì)易感染家畜每年應(yīng)進(jìn)行炭疽芽胞苗預(yù)防注射。炭疽芽胞苗有兩種：

(1)無毒炭疽芽胞苗一歲以上的馬、牛皮下注射lml，一歲以下的馬和牛及豬和綿羊皮下注射0.5ml。但不適用于山羊的預(yù)防注射。

(2)二號(hào)炭疽芽胞苗馬、牛、羊和豬皮下注射lml。注射后一周產(chǎn)生免疫力，免疫期為一年。

2．緊急預(yù)防接種適用于發(fā)生炭疽的核心地區(qū)或發(fā)生炭疽后，對(duì)健康家畜或有被感染

危險(xiǎn)的健康家畜進(jìn)行緊急預(yù)防接種。可采用抗炭疽血清和無毒炭疽芽胞苗或二號(hào)炭疽芽胞苗同時(shí)注射，使被注射家畜先產(chǎn)生被動(dòng)免疫，繼而產(chǎn)生自動(dòng)免疫。注射方法是在一側(cè)頸部皮下注射10-20ml的抗炭疽血清，另一側(cè)頸部皮下注射炭疽芽胞苗。此種緊急預(yù)防注射的免疫期為半年。另一種用抗炭疽血清進(jìn)行緊急預(yù)防注射，使被注射的家畜迅速獲得被動(dòng)免疫。大家畜皮下注射30～40ml，豬羊?yàn)?5～20ml。如疑有潛伏感染時(shí)，大家畜皮下注射或靜脈注射100～250ml，豬羊?yàn)?0～120ml。此種緊急預(yù)防注射免疫期為10～14天。

3.炭疽的治療

(1)血清療法馬牛一次用量為100～300ml，豬羊30～80ml。用血清治療炭疽癰時(shí)，可行局局部點(diǎn)注射。

(2)抗生素、磺胺類藥療法青霉素馬牛按每公斤體重2000～4000單位；鏈霉素馬每次2g，每日肌肉注射2次?；前粪奏っ抗矬w重0.2g，每4h內(nèi)服一次。

復(fù)習(xí)題與作業(yè)

1．簡述炭疽的綜合性診斷要點(diǎn)和炭疽病畜的治療原那么。

2．進(jìn)行炭疽預(yù)防接種時(shí)應(yīng)注意哪些?

實(shí)驗(yàn)八鏈球菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷

目

的

初步掌握馬腺疫鏈球菌和豬、羊鏈球菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷步驟和方法。

內(nèi)容及方法

一、檢查材料的采集

1.采取腺疫病馬的鼻液和頜下淋巴結(jié)的膿汁，或以無菌注射器抽取未破潰的淋巴結(jié)內(nèi)的膿汁，放人滅菌的試管或小瓶送檢，或用滅菌的棉球，蘸取鼻漏或膿汁置于盛有25％甘油鹽水的試管或小瓶中，但甘油鹽水的分裝量不宜過多，以將棉球潤濕為宜。在送檢的病料中，不可參加其他的防腐劑或抗生素。在惡性腺疫時(shí)，除采取膿汁和鼻漏外，也可采取臟器和淋巴結(jié)。

2．豬、羊鏈球菌病可采取腫脹的淋巴結(jié)，頸部淋巴結(jié)；敗血性鏈球菌病時(shí)，采取病畜的鼻漏、唾液、氣管分泌物、血液、肝、脾、腎、肺、肌肉和膿腫的關(guān)節(jié)等。

二、檢查方法

1．涂片鏡檢將新鮮病料(心血、肝、脾、腎、肺、腦、淋巴結(jié)或胸水等)制成涂片，用革蘭氏法染色或堿性美藍(lán)染色法染色后鏡檢。鏈球菌的直徑為0.5～1.0μm，圓形或橢圓形，成對(duì)或3～5個(gè)菌體排列成短鏈。偶而可見30～70個(gè)菌體相連接的長鏈，但不成叢、成堆，不運(yùn)動(dòng)，無芽胞，偶見有莢膜存在。革蘭氏染色陽性，經(jīng)數(shù)日培養(yǎng)的老齡鏈球菌可染成革蘭氏陰性。

2．別離培養(yǎng)將膿汁或其他分泌物、排泄物劃線接種于血液瓊脂平板上，置37℃培養(yǎng)24h或更長。已干涸的病料棉拭可先浸于無菌的腦心浸液或肉湯中，然后擠出0.5ml進(jìn)行培養(yǎng)。為了提高鏈球菌的別離串，先將培養(yǎng)基置于37℃溫箱中預(yù)熱2～6h。培養(yǎng)基中加有5％無菌的綿羊血液，細(xì)菌生長良好并可發(fā)生溶血。有的實(shí)驗(yàn)室用牛血瓊脂平板進(jìn)行劃線接種培養(yǎng)較為滿意。鏈球菌在普通培養(yǎng)基上多生長不良。

鏈球菌在血液瓊脂上呈小點(diǎn)狀，培養(yǎng)24h溶血不完全，48～72h菌落直徑大約為lmm，呈露珠狀，中心渾濁，邊緣透明，有些粘性菌株融合粘連，菌落呈單凸或雙凸，有α—溶血(綠色)，β—溶血(完全透明)或γ—溶血(無變化)，這在鏈球菌的鑒定中是很重要的。多數(shù)具有致病性的鏈球菌呈β—溶血。

3．動(dòng)物接種將病料制成5～10倍生理鹽水懸液，接種家兔和小鼠，劑量為兔腹腔注射1～2ml，小鼠皮下注射0.2～0.3ml。接種后的家兔于12～26h死亡；小鼠于18～24h死亡。死后采心血、腹水、肝、脾抹片鏡檢，均見有大量單個(gè)、成對(duì)或3～5個(gè)菌體相連的球菌。也可用細(xì)菌培養(yǎng)物制成的菌液或肉湯培養(yǎng)物接種家兔或小鼠。

三、培養(yǎng)特性

1．馬腺疫鏈球菌營養(yǎng)要求較高，初次別離時(shí)，培養(yǎng)基里需要加血液、血清或腹水。在血液瓊脂平板上形成透明、閃光、微隆起有粘性的露珠狀菌落，產(chǎn)生明顯的β型溶血，直徑達(dá)2mm以上。強(qiáng)毒菌的菌落外表常呈顆粒構(gòu)造。于弱擴(kuò)大下觀察最為明顯。在血清肉湯中培養(yǎng)24～48h輕微渾濁，在管底很快形成粘稠沉淀。上部又變?yōu)橥该?，這是形成長鏈菌株的特征。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以小鼠最為敏感，腹腔接種肉湯培養(yǎng)物，在2～10天內(nèi)因敗血癥或膿毒血癥而死亡。

2.豬鏈球菌本菌在有氧及無氧環(huán)境中都能生長。呈灰白色、半透明、露滴狀菌落。在血液瓊脂平板上生長良好，菌落周圍呈β型溶血。在血清肉湯及厭氧肉湯中均勻渾濁，繼而于管底形成沉淀，上部澄清，不形成菌膜。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，小鼠、家兔、倉鼠、鴿等對(duì)此菌敏感，而豚鼠雞、鴨等那么無感受牲。

據(jù)我國8個(gè)省區(qū)別離的28株豬鏈球菌，先以蘭斯菲爾德氏(Lanceheld)血清學(xué)方法分群(Group)；其次根據(jù)溶血性能，生長耐性和生化特性定種；并通過血清學(xué)交互吸收試驗(yàn)以環(huán)狀沉淀反響方法分型。結(jié)果說明：其中一株為蘭氏D群糞鏈球菌〔S.faecalis〕；2株可疑為R群鏈球菌，其余25株C群鏈球菌中，4株為類馬鏈球菌〔S.equisimilis〕，21株為獸疫鏈球菌〔S.zooepidemicus〕。

3．羊鏈球菌羊鏈球菌在組織涂片中，以瑞特氏染色，見許多是有蘋膜的雙球菌。少數(shù)是短鏈狀。在胸水、腹水以及營養(yǎng)豐富的液體培養(yǎng)基中長成長鏈。本菌在血液瓊脂平板上形成淡灰色半透明、濕潤、粘稠的菌落，呈β型溶血。在馬丁肉湯中培養(yǎng)呈中等混濁。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，家兔和小鼠最為敏感。小鼠腹腔接種后很快死亡。用本菌培養(yǎng)物給家兔接種，劑量為70～100個(gè)菌(強(qiáng)毒株)，于10天內(nèi)死亡。

我國各地別離的羊鏈球菌，據(jù)初步研究，多屬蘭氏C群鏈球菌，與獸疫鏈球菌根本一致，但對(duì)動(dòng)物的易感性、血清型、水楊苷發(fā)酵等特性又與獸疫鏈球菌有差異，故有人建議命名為獸疫鏈球菌綿羊變種

四、

生化特性

幾種主要鏈球菌的生化特性見表8。

復(fù)習(xí)題與作業(yè)

1．表達(dá)鏈球菌病實(shí)驗(yàn)室診斷的步驟和方法。

2．比擬引起馬腺疫、豬鏈球菌病和羊鏈球菌病的病原體的異同點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)九巴氏桿菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷

目

的

初步掌握巴氏桿菌病的微生物學(xué)診斷步驟和方法。

內(nèi)容及方法

1．檢查材料大家畜取新鮮的實(shí)質(zhì)器官(肝、脾、腎、患病的肺臟等)、管狀骨、心血(焊封于毛細(xì)管內(nèi))，另做心血和實(shí)質(zhì)器官的涂片數(shù)張；小動(dòng)物或家禽可取完整的尸體。

2．鏡檢將病料涂片染色(美藍(lán)染色、革蘭氏染色、瑞氏染色、姬姆薩染色等)鏡檢時(shí)，多殺性巴氏桿菌呈卵圓形，有明顯的兩極性染色，并可看到兩極之間兩側(cè)的連線。血片用瑞氏或姬姆薩染色時(shí)，兩極性菌呈藍(lán)色或淡青色，紅細(xì)胞染成淡紅色(家禽紅細(xì)胞含有紫色的核)。

3．培養(yǎng)將病料分別接種于鮮血瓊脂和普通肉湯，在37℃進(jìn)行培養(yǎng)。多殺性巴氏桿菌在鮮血瓊脂上呈較平坦、半透明的露滴樣菌落，不溶血；在普通肉湯中呈均勻混濁，以后便有沉淀，振搖時(shí)沉淀物呈辮狀升起。當(dāng)分得純培養(yǎng)后，可由培養(yǎng)物作涂片檢查(多殺性巴氏桿菌在從培養(yǎng)基上所作的涂片中，大局部不表現(xiàn)兩極染色性，而常呈球桿狀或雙球狀)，并根據(jù)其形態(tài)學(xué)：染色性(革蘭氏染色)、培養(yǎng)特性、發(fā)酵性狀及膽汁試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。本菌的主要生化特性如表9。

表9多殺性巴氏桿菌的主要生化特性

運(yùn)動(dòng)力

靛基質(zhì)試驗(yàn)

膽汁試驗(yàn)

葡萄糖

甘露醇

蔗糖

衛(wèi)茅醇

乳糖

鼠李糖

-

+

-

A+

A

A

A

-

-

4．動(dòng)物試驗(yàn)將病料研磨成糊狀，用滅菌生理鹽水稀釋成1：5～1：10乳劑，接種于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮下或肌肉內(nèi)，劑量為0.2～0.5ml。豬、牛、羊等家畜的病料可用小鼠或家兔；家禽的病料可用鴿、雞或小鼠。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如于接種后18～24h左右死亡，那么采取心血及實(shí)質(zhì)臟器作涂片鏡檢和接種培養(yǎng)基進(jìn)行別離培養(yǎng)。根據(jù)病原菌的形態(tài)、染色、培養(yǎng)、生化等特性加以鑒定。在采取材料作培養(yǎng)、鏡檢完畢后，尚須對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體進(jìn)行剖檢作病理變化觀察。在接種局部可見到肌肉及皮下組織發(fā)生水腫和發(fā)炎灶；胸腔和心包有漿液性纖維素性滲出物；心外膜有多數(shù)出血點(diǎn)；淋巴結(jié)水腫并增大；肝臟淤血(如用雞接種，尚可見到密布之小點(diǎn)壞死灶)。

復(fù)習(xí)題與作業(yè)

1．試述家畜、家禽巴氏桿菌病的微生物學(xué)檢查程序。

2．當(dāng)豬群中同時(shí)有豬肺疫和豬瘟存在的可疑時(shí)，從豬體分得巴氏桿菌是否可以確定豬肺疫的診斷?為什么?

實(shí)驗(yàn)十結(jié)核病的檢疫

目

的

掌握牛結(jié)核菌素變態(tài)反響的診斷方法。

內(nèi)容及方法

牛結(jié)核菌素變態(tài)反響診斷有三種方法，即皮內(nèi)反響、點(diǎn)眼反響及皮下反響。我國現(xiàn)在主要采用前兩種方法，而且前兩法最好同時(shí)并用。1985年以來，我國逐漸推廣改用提純核素來診斷檢疫結(jié)核病。

一、

老結(jié)核菌素變態(tài)反響

(一)工作準(zhǔn)備在實(shí)驗(yàn)前先做好以下準(zhǔn)備工作：

1．老結(jié)核菌素(O．T)。

2．所需的藥品器械卡尺、酒精、來蘇爾、脫脂棉、紗布、注射器、針頭、煮沸消毒鍋、鑷子、毛剪、消毒盤、鼻鉗、點(diǎn)眼管、記錄表、工作服、帽、口罩、線手套及膠靴等。

3．將牛只編號(hào)，術(shù)部剪毛。

(二)操作方法

1．牛結(jié)核菌素皮內(nèi)反響：

注射部位：在頸側(cè)中部上1／3處剪毛(3個(gè)月內(nèi)犢?？稍诩珉尾?直徑約10cm，用卡尺測量術(shù)部中央皮皺厚度。

注射劑量：用結(jié)核菌素原液，3個(gè)月以內(nèi)的小牛0.1ml；3個(gè)月至1歲牛0.15ml；12個(gè)月以上的牛0.2ml，必須注射于皮內(nèi)。

觀察反響：皮內(nèi)注射后，應(yīng)分別在72、120h進(jìn)行兩次觀察，注意肩部有無熱、痛、腫脹等炎性反響，并以卡尺測量術(shù)部腫脹面積及皮皺厚度。

在第72h觀察后，對(duì)呈陰性及可疑反響的牛只，須在原注射部位，以同一劑量進(jìn)行第二回注射。第二回注射后應(yīng)于第48h(即120h)再觀察一次。

判定：

(1)陽性反響局部發(fā)熱，有痛感，并呈現(xiàn)不明顯的彌漫性水腫，質(zhì)地如面團(tuán)，腫脹面積在35mm×45mm以上，或上述反響較輕，而皺皮厚度在原測量根底上增加8mm以上者，為陽性反響，其記錄符號(hào)為(+)。

(2)疑似反響局部炎性水腫不明顯，腫脹面積在35mm×45mm以下者，皮厚增加在5～8mm間，為疑似反響，其記錄符號(hào)為(土)。

(3)陰性反響局部無炎性水腫，或僅有無熱堅(jiān)實(shí)及界限明顯的硬塊，皮厚增加不超過5mm者，為陰性反響，其記錄符號(hào)為(一)。

2．結(jié)核菌素點(diǎn)眼反響牛結(jié)核菌素點(diǎn)眼，每次進(jìn)行兩回，間隔3～5天。

方法：點(diǎn)眼前對(duì)兩眼作詳細(xì)檢查，正常時(shí)方可點(diǎn)眼，有眼病或結(jié)膜不正常者，不可作點(diǎn)眼檢疫。結(jié)核菌素一般點(diǎn)于左眼，左眼有眼病可點(diǎn)于右眼，但須在記錄上說明。用量為3～5滴，約0．2～0．3ml。點(diǎn)眼后，注意將牛栓好，防止風(fēng)沙侵入眼內(nèi)，防止陽光直射牛頭部以及牛與周圍物體摩擦。

觀察反響：點(diǎn)眼后，應(yīng)于3、6、9h各觀察一次，必要時(shí)可觀察第24h的反響。應(yīng)觀察兩眼的結(jié)膜與眼瞼腫脹的狀態(tài)，流淚及分泌物的性質(zhì)和量的多少，由于結(jié)核菌素而引起的食欲減少或停止以及全身戰(zhàn)栗、呻吟、不安等其他變態(tài)反響，均應(yīng)詳細(xì)記錄。陰性和可疑的牛72h后，于同一眼內(nèi)再滴一次結(jié)核菌素，觀察記錄同上。

判定：

(1)陽性反響有兩個(gè)大米粒大或2mm×10mm，以上的呈黃白色的膿性分泌物自眼角流出，或散布在眼的周圍，或積聚在結(jié)膜囊及其眼角內(nèi)，或上述反響較輕，但有明顯的結(jié)膜充血、水腫、流淚并有其他全身反響者，為陽性反響。

(2)疑似反響有兩個(gè)大米?；?mm×10mm以上的灰白色、半透明的粘液性分泌物積聚在結(jié)膜囊內(nèi)或眼角處，并無明顯的眼瞼水腫及其他全身病癥者，判為疑似反響。

(3)陰性反響無反響或僅有結(jié)膜輕微充血，流出透明漿液性分泌物者，為陰性反響。

3．綜合判定結(jié)核菌素皮內(nèi)注射與點(diǎn)眼反響兩種方法中的任何一種呈陽性反響者，即判定為結(jié)核菌素陽性反響牛；兩種方法中任何方法為疑似反響者，判定為疑似反響牛。

4．復(fù)檢在健康牛群中(即無一頭變態(tài)反響陽性的牛群)經(jīng)第二次檢疫判定為可疑牛，要單獨(dú)隔離飼養(yǎng)，1個(gè)月后作第二次檢疫，仍為可疑時(shí)，經(jīng)半個(gè)月作第三次檢疫，如仍為可疑，可繼續(xù)觀察一定時(shí)間后再進(jìn)行檢疫，根據(jù)檢疫結(jié)果作出適當(dāng)處理。

如果在牛群中發(fā)現(xiàn)有開放性結(jié)核牛，同群牛如有可疑反響的牛只，也應(yīng)視為被感染。通過兩回檢疫均為可疑者，即可判為結(jié)核菌素陽性牛。

檢疫結(jié)果可按表10記錄。

三、

提純結(jié)核菌素(PPD)變態(tài)反響

(一)材料準(zhǔn)備牛型提純結(jié)核菌素、酒精棉、卡尺、1～2．5ml注射器、針頭、工作服、帽、口罩、膠鞋、記錄表、線手套等。如果凍干菌素，還需準(zhǔn)備稀釋用注射用水或滅菌的生理鹽水，帶膠塞的滅菌小瓶。

1.注射部位及術(shù)前處理將牛只編號(hào)后在頸側(cè)中部上1／3處剪毛(或提前一天剃毛)，3個(gè)月以內(nèi)的犢牛，也可在肩胛部進(jìn)行，直徑約10cm，用卡尺測量術(shù)部中央皮皺厚度，作好記錄。如術(shù)部有變化時(shí)，應(yīng)另選部位或在對(duì)側(cè)進(jìn)行。

2．注射劑量不管牛只大小，一律皮內(nèi)注射1萬國際單位。即將牛型提純結(jié)核菌素稀釋成每毫升含10萬國際單位后，皮內(nèi)注射0.1ml。如用2.5ml注射器，應(yīng)再加等量注射用水皮內(nèi)注射0.2ml。凍干提純結(jié)核菌素稀釋后應(yīng)當(dāng)天用完。

3．注射方法先以75％酒精消毒術(shù)部，然后皮內(nèi)注入定量的牛型提純結(jié)核菌素，注射后局部應(yīng)出現(xiàn)小泡，如注射有疑問時(shí)，應(yīng)另選15cm以外的部位或?qū)?cè)重作。

4．注射次數(shù)和觀察反響皮內(nèi)注射后經(jīng)72h時(shí)判定，仔細(xì)觀察局部有無熱痛、腫脹等炎性反響，并以卡尺測量皮皺厚度，作好詳細(xì)記錄。對(duì)疑似反響牛應(yīng)即在另一側(cè)以同一批菌素同一劑量進(jìn)行第二回皮內(nèi)注射，再經(jīng)72h后觀察反響。

如有可能，對(duì)陰性和疑似反響牛，于注射后96h、120h再分別觀察一次，以防個(gè)別牛出現(xiàn)較遲。的遲發(fā)型變態(tài)反響。

5．結(jié)果判定

(1)陽性反響局部有明顯的炎性反響。皮厚差等于或大于4mm以上者，其記錄符號(hào)為(+)。對(duì)進(jìn)出口牛的檢疫，凡皮厚差大于2mm者，均判為陽性。

〔2〕疑似反響局部炎性反響不明顯，皮厚差在2.1—3.9mm間，其記錄符號(hào)為(土)。

(3)陰性反響無炎性反響。皮厚差在2mm以下，其記錄符號(hào)為(一)。

6．凡判定為疑似反響的牛只，于第一次檢疫30天后進(jìn)行復(fù)檢，其結(jié)果仍為可疑反響時(shí)，經(jīng)30～45天后再綠檢，如仍為疑似反響，應(yīng)判為陽性。

附錄一其他家畜結(jié)核病締核菌素診斷法

1．馬、綿羊、山羊和豬僅使用牛結(jié)核菌素(O．T)一回皮內(nèi)注射法進(jìn)行檢疫。

2．注射部位及劑量馬位于左頸中部上1／3處；豬和綿羊在左耳根外側(cè)；山羊在肩胛部。劑量：成年家畜為0.2ml，3個(gè)月至1年的幼畜為0.15ml，3個(gè)月以下的幼畜為0.1ml。除豬用結(jié)核菌素原液外，馬、綿羊和山羊那么用稀釋的結(jié)核菌素(結(jié)核菌素1份，加滅菌0.5％石炭酸蒸餾水3份)。

3．觀察反響時(shí)間及判定標(biāo)準(zhǔn)于注射后48h、72h進(jìn)行再次觀察。豬、綿羊或山羊，可按牛的判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。

4．判定為疑似反響的馬、綿羊、山羊和豬經(jīng)25～30天后于第一次注射后的對(duì)側(cè)再作一次復(fù)檢，如仍為疑似反響時(shí)，可參照對(duì)疑似反響牛只方法處理。

附錄二感染禽型結(jié)核菌或副結(jié)核菌牛群的診斷方法

如果牛群有感染禽型結(jié)核菌或副結(jié)核菌病可疑時(shí)，可以應(yīng)用牛、禽兩型提純結(jié)核菌素的比擬試驗(yàn)進(jìn)行診斷。其方法和判定如下：

1．注射部位及術(shù)前處理將牛只編號(hào)后在同一頸側(cè)的中部選兩個(gè)注射點(diǎn)。一點(diǎn)在上1／3處，一點(diǎn)在下1／3處。剪毛(或提前一天剃毛)直徑約10cm，用卡尺測量術(shù)部中央皮皺厚度，作好記錄。兩個(gè)注射點(diǎn)之間的距離不得少于10cm，注射點(diǎn)距離頸項(xiàng)頂端和頸靜脈溝也不得少于10cm。如術(shù)部皮膚有變化時(shí)，選對(duì)側(cè)頸部進(jìn)行。

2.注射劑量在上1／3處皮內(nèi)注射禽型提純結(jié)核菌素0.1ml(每毫升含25000國際單位)，在下1／3處皮內(nèi)注射牛型提純結(jié)核菌素0.1m1(每毫升含10萬國際單位)。不管大小牛只，注射劑量相同。如用2.5ml注射器注射劑量(0.1m1)不易掌握，應(yīng)加等量生理鹽水或注射用水稀釋后皮內(nèi)注射0.2m1，凍干菌素稀釋后應(yīng)當(dāng)天用完。

3．注射方法以75％酒精消毒術(shù)部，然后皮內(nèi)注射定量的牛、禽兩種提純結(jié)核菌素。

注射后局部應(yīng)出現(xiàn)小泡，如