動(dòng)物細(xì)胞工程課件-002

動(dòng)物細(xì)胞工程應(yīng)用龍江一中李啟國

動(dòng)物細(xì)胞工程應(yīng)用龍江一中李啟國1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植動(dòng)物細(xì)胞工程常用2皮膚燒傷，如果創(chuàng)面很小（不大于硬幣）只要保持清潔，甚至深度燒傷，也可能自愈。如果下層真皮受損面積較大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自燒傷病人自身未燒傷的部位（自體植皮），也可取自其他活人或尸體（異體植皮）等。自體植皮是永久性的，取自其他人或動(dòng)物的植皮是暫時(shí)性的，是在創(chuàng)面愈合過程中為保護(hù)創(chuàng)面而采取的措施，10～14天后就要被身體排斥。

如果一個(gè)大面積燒傷的病人來說，自體皮膚有限，其他渠道的皮膚來源不足。如何才能獲得大量的自體健康皮膚？皮膚燒傷，如果創(chuàng)面很?。ú淮笥谟矌牛┲灰３智鍧崳?人耳鼠“人耳鼠”再出風(fēng)頭2001年，一只特別的活老鼠在北京引起轟動(dòng)——這是有著一對(duì)紅眼睛的、尾巴長長的、渾身沒毛的小白鼠。值得一提的是，這只小白鼠的背上，竟長著一只幾乎與身子一般大小的“人耳”。這只老鼠背上的“人耳”是由上海市第九人民醫(yī)院副院長、整復(fù)外科主任曹誼林教授利用組織工程技術(shù)復(fù)制出來的。

在京展出的數(shù)天，盡管門票高達(dá)20元，但還是有將近20萬人，心甘情愿地掏錢一睹“人耳鼠”的風(fēng)采。

人耳鼠的出現(xiàn)，透露了怎樣的信息？人耳鼠“人耳鼠”再出風(fēng)頭在京展出的數(shù)天，盡管門票高達(dá)4一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.發(fā)展歷史:20世紀(jì)初，人們不知道神經(jīng)纖維是由神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)向外突出形成的，還是由神經(jīng)細(xì)胞周圍的其他細(xì)胞融合而成的。生物學(xué)家們就這個(gè)問題展開了激烈的爭論。1907年，美國生物學(xué)家哈里森(Harrison)從蝌蚪的脊索中分離出神經(jīng)組織，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培養(yǎng)。蝌蚪的神經(jīng)組織存活了好幾周，并且從神經(jīng)細(xì)胞中長出了神經(jīng)纖維。哈里森的實(shí)驗(yàn)不僅解決了神經(jīng)纖維的起源問題，而且開創(chuàng)了動(dòng)物組織培養(yǎng)的先河。此后，在許多科學(xué)家的不懈努力下，動(dòng)物組織培養(yǎng)不斷改進(jìn)并逐漸發(fā)展成為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.發(fā)展歷史:52、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用和概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物有機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖.2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用和概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是6動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過程

幼齡動(dòng)物取動(dòng)物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)單個(gè)細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)剪碎組織的目的？胰蛋白酶處理的目的？動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過程幼齡動(dòng)物取動(dòng)物器官剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)7動(dòng)物細(xì)胞工程課件_0028有關(guān)概念原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。（分裝前的細(xì)胞培養(yǎng)）傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。有關(guān)概念原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。（分9有關(guān)概念

細(xì)胞株：傳代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。

細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。

細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。有關(guān)概念細(xì)胞株：傳代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長10動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液（分解彈性纖維）原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎細(xì)胞株細(xì)胞系動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞11動(dòng)物組織細(xì)胞培養(yǎng)要求一體外培養(yǎng)特點(diǎn):大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞要附在物體上表面生長，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)營養(yǎng)要求更嚴(yán)格，除氨基酸、維生素、鹽類、葡萄糖外，還需要血清。對(duì)環(huán)境適應(yīng)性差，對(duì)環(huán)境敏感，包括：PH、溶解氧、溫度、剪切力等比微生物要求更高。動(dòng)物組織細(xì)胞培養(yǎng)要求一體外培養(yǎng)特點(diǎn):12二、培養(yǎng)條件

細(xì)胞在體外培養(yǎng)中所需的條件

與體內(nèi)細(xì)胞基本相同。

【討論】多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，討論以下問題：1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些物質(zhì)？提示：充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境。2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？提示：無菌、無毒的環(huán)境。二、培養(yǎng)條件

細(xì)胞在體外培養(yǎng)中所需的條件

與體內(nèi)細(xì)胞基本相同131）恒定的溫度:37℃，

維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng)，溫度上升不超過39℃時(shí)，細(xì)胞代謝與溫度成正比；人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí)，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-41℃1小時(shí)，細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-42℃1小時(shí)，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡，個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí)，細(xì)胞全部死亡。低溫下會(huì)使細(xì)胞代謝速率降低1）恒定的溫度:37℃，

維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長，必須有142）PH：7.2-7.４當(dāng)PH低于6或高于7.6時(shí)的生長會(huì)受到影響，甚至死亡。用來檢測PH的變化：紅色--pH7.4，橙色--pH7.0，黃色--pH6.5，藍(lán)紅色--pH7.6，紫色--pH7.8。2）PH：7.2-7.４當(dāng)PH低于6或高于7.6時(shí)的生長會(huì)受153)氣體：二氧化碳有調(diào)節(jié)PH的作用。氧氣為生物新陳代謝所必須氣體是人體細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。

3)氣體：二氧化碳有調(diào)節(jié)PH的作用。164）營養(yǎng)—培養(yǎng)基：在保證細(xì)胞滲透壓的情況下，培養(yǎng)液里的成分要滿足細(xì)胞進(jìn)行代謝所需要的各種營養(yǎng)，如包括十幾種必需氨基酸及其他多種非必需氨基酸、維生素、碳水化合物,促生長因子，微量元素及無機(jī)鹽類等。只有滿足了這些基本條件，細(xì)胞才能在體外正常存活、生長。4）營養(yǎng)—培養(yǎng)基：在保證細(xì)胞滲透壓的情況下，培175)、無污染環(huán)境

培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細(xì)胞生存的首要條件。當(dāng)細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時(shí)，與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對(duì)微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中，保持細(xì)胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時(shí)清除等，是維持細(xì)胞生存的基本條件。

5)、無污染環(huán)境

培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細(xì)胞生存的首要18三.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體健康細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植細(xì)胞的生理、藥理、病理研究

用于篩選抗癌藥物

三.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)19植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基蔗糖植物激素葡萄糖動(dòng)物血清植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系快速繁殖、培育無病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)201、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？２、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？３、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的呢？４、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？沒有是成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理。思考題1、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？２、動(dòng)物細(xì)胞培21６、細(xì)胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？８、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問題呢？蛋白質(zhì)和磷脂能注意時(shí)間的控制思考題５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)細(xì)胞間的成份是蛋白質(zhì)６、細(xì)胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？８22９、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？１０、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)取材時(shí)，一般是取胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官，請(qǐng)解釋原因？不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mpH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適pH較接近胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官分裂、增殖旺盛思考題９、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？１０、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)2311、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)表面為何要光滑、無毒？12、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖？13、如此時(shí)細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求，應(yīng)該怎樣辦？易于培養(yǎng)細(xì)胞貼壁，進(jìn)行生長增殖當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞分裂就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫接觸抑制。將貼滿細(xì)胞壁的細(xì)胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。這樣的過程叫做傳代培養(yǎng)思考題11、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)表面為何要光滑、無毒？12、培養(yǎng)瓶中的2414、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直傳代下去嗎？16、有些為何能一直傳下去？17、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是為了得到這些細(xì)胞嗎？上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)不都能發(fā)生突變，朝著癌細(xì)胞方向發(fā)展不全是思考題14、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直2518、人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？保存10代以內(nèi)的細(xì)胞，因?yàn)?0－50部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細(xì)胞方向發(fā)展。細(xì)胞培養(yǎng)耗費(fèi)大量物力、人力、財(cái)力，因此及時(shí)凍存細(xì)胞很有必要，通常情況下，10代以內(nèi)的細(xì)胞可以冷凍保存，-70℃可以保存一年，或者保存于液氮中。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用37度水浴快速復(fù)蘇的方法。思考題19、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體18、人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？保存10代以內(nèi)的細(xì)26一、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1、動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度不同受精卵>胚胎干細(xì)胞>多能干細(xì)胞>單能干細(xì)胞>體細(xì)胞一、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1、動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程27核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）2、動(dòng)物體細(xì)胞核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移如入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中.使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）2、動(dòng)物283.培育過程去核卵細(xì)胞體細(xì)胞核細(xì)胞核移植重組細(xì)胞電脈沖刺激早期胚胎(或重組胚胎）胚胎移植母體子宮妊娠、出生個(gè)體4、原理動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性3.培育過程去核卵細(xì)胞體細(xì)胞核細(xì)胞核移植重組細(xì)胞電脈沖刺激早29卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎30二.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景二.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景31動(dòng)物體細(xì)胞核移植是一種無性繁殖技術(shù)，用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物。其意義：1、有利于遺傳疾病的治療，優(yōu)良品種的培育2、對(duì)物種的優(yōu)化、瀕危動(dòng)物的保護(hù)和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的擴(kuò)群有重要意義3、降低畜牧業(yè)的成本，縮短育種年限，提高生產(chǎn)效率動(dòng)物體細(xì)胞核移植是一種無性繁殖技術(shù)，用核移植的方法得到的動(dòng)物32體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：克隆的成功率低許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：克隆的成功率低33

1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞（）

A．細(xì)胞系B．細(xì)胞株C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞2、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是-----（）A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

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3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于----（）A.培養(yǎng)基不同；B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行；C.動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能；D.動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株。A教學(xué)反饋1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞（）34動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體35小結(jié)兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢小結(jié)兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)36一、動(dòng)物細(xì)胞融合

細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)兩個(gè)細(xì)胞正在融合受精作用一、動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)兩個(gè)細(xì)胞正在融合受37動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合38細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺(tái)病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法仙臺(tái)病毒39用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核40細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)誘導(dǎo)劑：仙臺(tái)病毒聚乙二醇

電融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合的仙臺(tái)病毒必須滅活。

細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)誘導(dǎo)劑：仙臺(tái)病毒41二、單克隆抗體什么是抗體？抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。二、單克隆抗體什么是抗體？42B淋巴細(xì)胞與抗體

１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。３．每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。B淋巴細(xì)胞與抗體１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體43單克隆抗體由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。纬苫蛐拖嗤募?xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。

特點(diǎn)：

特異性強(qiáng)、靈敏度高

單克隆抗體由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。纬苫?4如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能45

單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體制備過程注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融46思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物47單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用主要有：1、臨床診斷2、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤

資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)“病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，48植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較49動(dòng)物的胚胎移植解決某些妊娠時(shí)間長、每胎產(chǎn)子數(shù)量少的優(yōu)良種畜的繁殖速度問題。動(dòng)物的胚胎移植解決某些妊娠時(shí)間長、每50胚胎移植技術(shù)試管動(dòng)物（嬰兒）培養(yǎng)過程卵細(xì)胞精子體外受精受精卵胚胎新個(gè)體母體子宮內(nèi)孕育、產(chǎn)出胚胎移植技術(shù)試管動(dòng)物（嬰兒）培養(yǎng)過程卵細(xì)胞精子體外受精受精卵51植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程52植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)和理論基礎(chǔ)植物細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)是：

植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)是植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交概念：細(xì)胞的全能性是指生物體的細(xì)胞具有使后代細(xì)胞形成完整個(gè)體的潛能。原因：是生物體的每一個(gè)細(xì)胞都含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)及發(fā)育為完整個(gè)體所必需的全部基因。植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)和理論基礎(chǔ)植物細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)是：53細(xì)胞的全能性當(dāng)植物細(xì)胞脫離了原來所在植物體的器官或組織而處于離體狀態(tài)時(shí)，在一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株。在生物的個(gè)體發(fā)育中，由于基因在特定時(shí)間和空間下選擇性地表達(dá)而形成不同器官，因此，要實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的全能性，首先必須使生物體的細(xì)胞處于離體狀態(tài)。受精卵的全能性最高；其次是生殖細(xì)胞（尤其是卵細(xì)胞）；體細(xì)胞的全能性比生殖細(xì)胞低得多。

細(xì)胞的全能性當(dāng)植物細(xì)胞脫離了原來所在植物體的54植物組織培養(yǎng)的概念植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。植物組織培養(yǎng)的概念植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人55植物組織培養(yǎng)的過程離體的植物器官、組織或細(xì)胞脫分化（又叫去分化）愈傷組織（排列疏松而無規(guī)則，高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞）再分化根或芽等器官植物體植物組織培養(yǎng)的條件：適宜的養(yǎng)料和激素，適宜的溫度和無菌條件植物組織培養(yǎng)的過程離體的植物器官、組織或細(xì)胞脫分化（又叫去分56離體的植物器官、組織或細(xì)胞愈傷組織根芽植物體脫分化再分化脫分化由高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細(xì)胞的脫分化。再分化脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)又可以重新分化成根或芽等器官，這一過程稱為植物細(xì)胞的再分化。二、植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)過程離體的植物器官、組織或細(xì)胞愈傷組織根植物體脫分化再分化脫分化57動(dòng)物細(xì)胞工程課件_00258相關(guān)問題1、在植物組培過程中，為什么要進(jìn)行一系列的消毒，滅菌，并且要求無菌操作？2、為什么切取胡蘿卜根的形成層，其他部分也能培養(yǎng)成小植株嗎？相關(guān)問題1、在植物組培過程中，為什么要進(jìn)行一系列的消毒，滅菌59植物體細(xì)胞雜交的概念將不同種植物的體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。（不同種生物之間存在著生殖隔離，所以用傳統(tǒng)的有性雜交方法是不可能做到這一點(diǎn)的）植物體細(xì)胞雜交的概念將不同種植物的體細(xì)胞，在60相關(guān)問題（1）要想讓兩個(gè)來自不同植物的體細(xì)胞融合在一起，遇到的第一個(gè)障礙是什么？（2）有沒有一種溫和的去細(xì)胞壁的方法？（3）為什么兩個(gè)原生質(zhì)體能發(fā)生融合，這與細(xì)胞膜的什么特性有關(guān)？（4）如果兩個(gè)來源不同的原生質(zhì)體發(fā)生融合形成了雜種細(xì)胞，下一步該對(duì)此細(xì)胞做何種處理？（5）如何將雜種細(xì)胞培育成雜種植株？相關(guān)問題（1）要想讓兩個(gè)來自不同植物的體細(xì)胞融合在一起，遇到61植物體細(xì)胞雜交過程植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞細(xì)胞分裂分化發(fā)育愈傷組織雜種植株植物體細(xì)胞雜交過程植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原62植物體細(xì)胞雜交過程原生質(zhì)體制備（酶解法去細(xì)胞壁）原生質(zhì)體融合（人工誘導(dǎo)）

雜種細(xì)胞的篩選和培養(yǎng)（形成愈傷組織）雜種植株的再生與鑒定物理法：離心、振動(dòng)、電刺激等化學(xué)法：聚乙二醇等試劑纖維素酶、果膠酶等植物體細(xì)胞雜交過程原生質(zhì)體制備（酶解法去細(xì)胞壁）物理法：離心63問題為什么“番茄—馬鈴薯”超級(jí)雜種植株沒有如科學(xué)家所想像的那樣，地上長番茄、地下結(jié)馬鈴薯？主要原因是：生物基因的表達(dá)不是孤立的，它們之間是相互調(diào)控、相互影響的，所以馬鈴薯—番茄雜交植株的細(xì)胞中雖然具備兩個(gè)物種的遺傳物質(zhì)，但這些遺傳物質(zhì)的表達(dá)受到相互干擾，不能再像馬鈴薯或番茄植株中的遺傳物質(zhì)一樣有序表達(dá)，雜交植株不能地上長番茄、地下結(jié)馬鈴薯就是很自然的了。問題為什么“番茄—馬鈴薯”超級(jí)雜種植株沒有如科學(xué)家所想像的那64問題自然界中有一種含有葉綠體的原生動(dòng)物──眼蟲，說明植物的細(xì)胞器同樣可以在某些動(dòng)物細(xì)胞中存活，請(qǐng)?zhí)接懀簞?dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞之間可以實(shí)現(xiàn)雜交嗎？如果理論上可行，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)出具體實(shí)驗(yàn)方案。問題自然界中有一種含有葉綠體的原生動(dòng)物──眼蟲，說明植物的細(xì)65異想天開異想天開66植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用繁殖植物的新途徑微型育種作物脫毒人工種子育種新方法單倍體育種誘導(dǎo)突變體細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用繁殖植物的新途徑67概念：應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)，快速繁殖植物（也叫快速繁殖技術(shù)）原理：植物細(xì)胞的全能性優(yōu)點(diǎn)：繁殖率高，可大批量生產(chǎn)取材少培養(yǎng)周期短保持優(yōu)良性狀微型繁殖概念：應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)，快速繁殖植物（也叫快速繁殖技術(shù)）微型68作物脫毒病毒在作物體內(nèi)逐年積累，會(huì)導(dǎo)致作物產(chǎn)量降低，品質(zhì)變差分生區(qū)附近（莖尖、根尖）的病毒極少，甚至沒有采用莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)作物脫毒病毒在作物體內(nèi)逐年積累，會(huì)導(dǎo)致作物產(chǎn)量降低，品質(zhì)變差69人工種子結(jié)構(gòu)：人工薄膜+胚狀體（不定芽、頂芽、腋芽）優(yōu)點(diǎn)：不受氣候、季節(jié)、地域的限制保留優(yōu)良性狀時(shí)間短，占地少技術(shù)：組織培養(yǎng)原理：細(xì)胞全能性人工種子結(jié)構(gòu)：70養(yǎng)分、無機(jī)鹽、有機(jī)碳源、農(nóng)藥、抗生素、有益菌生長調(diào)節(jié)劑養(yǎng)分、無機(jī)鹽、有機(jī)碳源、農(nóng)藥、抗生素、有益菌71單倍體育種方法：花藥離體培養(yǎng)技術(shù)：組織培養(yǎng)獲得單倍體秋水素處理單倍體的幼苗，使染色體加倍優(yōu)點(diǎn)：明顯縮短了育種年限后代穩(wěn)定遺傳單倍體育種方法：72突變體的利用利用組織培養(yǎng)時(shí)，分裂狀態(tài)的細(xì)胞易受培養(yǎng)條件和外界壓力（如射線，化學(xué)物質(zhì)等）的影響而產(chǎn)生突變的原理，誘導(dǎo)并篩選出對(duì)人類有用的突變體。突變體的利用利用組織培養(yǎng)時(shí)，分裂狀態(tài)的細(xì)胞易受培養(yǎng)條件和外界73細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)紅豆杉與紫杉醇人參皂甘的生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)紅豆杉與紫杉醇人參皂甘的生產(chǎn)74植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用繁殖植物的新途徑微型育種作物脫毒人工種子育種新方法單倍體育種誘導(dǎo)突變體細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用繁殖植物的新途徑75動(dòng)物細(xì)胞工程應(yīng)用龍江一中李啟國

動(dòng)物細(xì)胞工程應(yīng)用龍江一中李啟國76動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植動(dòng)物細(xì)胞工程常用77皮膚燒傷，如果創(chuàng)面很?。ú淮笥谟矌牛┲灰３智鍧崳踔辽疃葻齻?，也可能自愈。如果下層真皮受損面積較大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自燒傷病人自身未燒傷的部位（自體植皮），也可取自其他活人或尸體（異體植皮）等。自體植皮是永久性的，取自其他人或動(dòng)物的植皮是暫時(shí)性的，是在創(chuàng)面愈合過程中為保護(hù)創(chuàng)面而采取的措施，10～14天后就要被身體排斥。

如果一個(gè)大面積燒傷的病人來說，自體皮膚有限，其他渠道的皮膚來源不足。如何才能獲得大量的自體健康皮膚？皮膚燒傷，如果創(chuàng)面很?。ú淮笥谟矌牛┲灰３智鍧崳?8人耳鼠“人耳鼠”再出風(fēng)頭2001年，一只特別的活老鼠在北京引起轟動(dòng)——這是有著一對(duì)紅眼睛的、尾巴長長的、渾身沒毛的小白鼠。值得一提的是，這只小白鼠的背上，竟長著一只幾乎與身子一般大小的“人耳”。這只老鼠背上的“人耳”是由上海市第九人民醫(yī)院副院長、整復(fù)外科主任曹誼林教授利用組織工程技術(shù)復(fù)制出來的。

在京展出的數(shù)天，盡管門票高達(dá)20元，但還是有將近20萬人，心甘情愿地掏錢一睹“人耳鼠”的風(fēng)采。

人耳鼠的出現(xiàn)，透露了怎樣的信息？人耳鼠“人耳鼠”再出風(fēng)頭在京展出的數(shù)天，盡管門票高達(dá)79一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.發(fā)展歷史:20世紀(jì)初，人們不知道神經(jīng)纖維是由神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)向外突出形成的，還是由神經(jīng)細(xì)胞周圍的其他細(xì)胞融合而成的。生物學(xué)家們就這個(gè)問題展開了激烈的爭論。1907年，美國生物學(xué)家哈里森(Harrison)從蝌蚪的脊索中分離出神經(jīng)組織，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培養(yǎng)。蝌蚪的神經(jīng)組織存活了好幾周，并且從神經(jīng)細(xì)胞中長出了神經(jīng)纖維。哈里森的實(shí)驗(yàn)不僅解決了神經(jīng)纖維的起源問題，而且開創(chuàng)了動(dòng)物組織培養(yǎng)的先河。此后，在許多科學(xué)家的不懈努力下，動(dòng)物組織培養(yǎng)不斷改進(jìn)并逐漸發(fā)展成為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.發(fā)展歷史:802、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用和概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物有機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖.2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用和概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是81動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過程

幼齡動(dòng)物取動(dòng)物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)單個(gè)細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)剪碎組織的目的？胰蛋白酶處理的目的？動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過程幼齡動(dòng)物取動(dòng)物器官剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)82動(dòng)物細(xì)胞工程課件_00283有關(guān)概念原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。（分裝前的細(xì)胞培養(yǎng)）傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。有關(guān)概念原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。（分84有關(guān)概念

細(xì)胞株：傳代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。

細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。

細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。有關(guān)概念細(xì)胞株：傳代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長85動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液（分解彈性纖維）原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎細(xì)胞株細(xì)胞系動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞86動(dòng)物組織細(xì)胞培養(yǎng)要求一體外培養(yǎng)特點(diǎn):大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞要附在物體上表面生長，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)營養(yǎng)要求更嚴(yán)格，除氨基酸、維生素、鹽類、葡萄糖外，還需要血清。對(duì)環(huán)境適應(yīng)性差，對(duì)環(huán)境敏感，包括：PH、溶解氧、溫度、剪切力等比微生物要求更高。動(dòng)物組織細(xì)胞培養(yǎng)要求一體外培養(yǎng)特點(diǎn):87二、培養(yǎng)條件

細(xì)胞在體外培養(yǎng)中所需的條件

與體內(nèi)細(xì)胞基本相同。

【討論】多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，討論以下問題：1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些物質(zhì)？提示：充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境。2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？提示：無菌、無毒的環(huán)境。二、培養(yǎng)條件

細(xì)胞在體外培養(yǎng)中所需的條件

與體內(nèi)細(xì)胞基本相同881）恒定的溫度:37℃，

維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng)，溫度上升不超過39℃時(shí)，細(xì)胞代謝與溫度成正比；人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí)，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-41℃1小時(shí)，細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-42℃1小時(shí)，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡，個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí)，細(xì)胞全部死亡。低溫下會(huì)使細(xì)胞代謝速率降低1）恒定的溫度:37℃，

維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長，必須有892）PH：7.2-7.４當(dāng)PH低于6或高于7.6時(shí)的生長會(huì)受到影響，甚至死亡。用來檢測PH的變化：紅色--pH7.4，橙色--pH7.0，黃色--pH6.5，藍(lán)紅色--pH7.6，紫色--pH7.8。2）PH：7.2-7.４當(dāng)PH低于6或高于7.6時(shí)的生長會(huì)受903)氣體：二氧化碳有調(diào)節(jié)PH的作用。氧氣為生物新陳代謝所必須氣體是人體細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。

3)氣體：二氧化碳有調(diào)節(jié)PH的作用。914）營養(yǎng)—培養(yǎng)基：在保證細(xì)胞滲透壓的情況下，培養(yǎng)液里的成分要滿足細(xì)胞進(jìn)行代謝所需要的各種營養(yǎng)，如包括十幾種必需氨基酸及其他多種非必需氨基酸、維生素、碳水化合物,促生長因子，微量元素及無機(jī)鹽類等。只有滿足了這些基本條件，細(xì)胞才能在體外正常存活、生長。4）營養(yǎng)—培養(yǎng)基：在保證細(xì)胞滲透壓的情況下，培925)、無污染環(huán)境

培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細(xì)胞生存的首要條件。當(dāng)細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時(shí)，與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對(duì)微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中，保持細(xì)胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時(shí)清除等，是維持細(xì)胞生存的基本條件。

5)、無污染環(huán)境

培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細(xì)胞生存的首要93三.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體健康細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植細(xì)胞的生理、藥理、病理研究

用于篩選抗癌藥物

三.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)94植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基蔗糖植物激素葡萄糖動(dòng)物血清植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系快速繁殖、培育無病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)951、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？２、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？３、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的呢？４、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？沒有是成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理。思考題1、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？２、動(dòng)物細(xì)胞培96６、細(xì)胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？８、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問題呢？蛋白質(zhì)和磷脂能注意時(shí)間的控制思考題５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)細(xì)胞間的成份是蛋白質(zhì)６、細(xì)胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？８97９、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？１０、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)取材時(shí)，一般是取胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官，請(qǐng)解釋原因？不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mpH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適pH較接近胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官分裂、增殖旺盛思考題９、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？１０、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)9811、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)表面為何要光滑、無毒？12、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖？13、如此時(shí)細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求，應(yīng)該怎樣辦？易于培養(yǎng)細(xì)胞貼壁，進(jìn)行生長增殖當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞分裂就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫接觸抑制。將貼滿細(xì)胞壁的細(xì)胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。這樣的過程叫做傳代培養(yǎng)思考題11、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)表面為何要光滑、無毒？12、培養(yǎng)瓶中的9914、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直傳代下去嗎？16、有些為何能一直傳下去？17、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是為了得到這些細(xì)胞嗎？上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)不都能發(fā)生突變，朝著癌細(xì)胞方向發(fā)展不全是思考題14、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直10018、人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？保存10代以內(nèi)的細(xì)胞，因?yàn)?0－50部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細(xì)胞方向發(fā)展。細(xì)胞培養(yǎng)耗費(fèi)大量物力、人力、財(cái)力，因此及時(shí)凍存細(xì)胞很有必要，通常情況下，10代以內(nèi)的細(xì)胞可以冷凍保存，-70℃可以保存一年，或者保存于液氮中。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用37度水浴快速復(fù)蘇的方法。思考題19、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體18、人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？保存10代以內(nèi)的細(xì)101一、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1、動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度不同受精卵>胚胎干細(xì)胞>多能干細(xì)胞>單能干細(xì)胞>體細(xì)胞一、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1、動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程102核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）2、動(dòng)物體細(xì)胞核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移如入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中.使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）2、動(dòng)物1033.培育過程去核卵細(xì)胞體細(xì)胞核細(xì)胞核移植重組細(xì)胞電脈沖刺激早期胚胎(或重組胚胎）胚胎移植母體子宮妊娠、出生個(gè)體4、原理動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性3.培育過程去核卵細(xì)胞體細(xì)胞核細(xì)胞核移植重組細(xì)胞電脈沖刺激早104卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎105二.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景二.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景106動(dòng)物體細(xì)胞核移植是一種無性繁殖技術(shù)，用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物。其意義：1、有利于遺傳疾病的治療，優(yōu)良品種的培育2、對(duì)物種的優(yōu)化、瀕危動(dòng)物的保護(hù)和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的擴(kuò)群有重要意義3、降低畜牧業(yè)的成本，縮短育種年限，提高生產(chǎn)效率動(dòng)物體細(xì)胞核移植是一種無性繁殖技術(shù)，用核移植的方法得到的動(dòng)物107體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：克隆的成功率低許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：克隆的成功率低108

1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞（）

A．細(xì)胞系B．細(xì)胞株C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞2、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是-----（）A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

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3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于----（）A.培養(yǎng)基不同；B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行；C.動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能；D.動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株。A教學(xué)反饋1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞（）109動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體110小結(jié)兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢小結(jié)兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)111一、動(dòng)物細(xì)胞融合

細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)兩個(gè)細(xì)胞正在融合受精作用一、動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)兩個(gè)細(xì)胞正在融合受112動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合113細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺(tái)病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法仙臺(tái)病毒114用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核115細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)誘導(dǎo)劑：仙臺(tái)病毒聚乙二醇

電融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合的仙臺(tái)病毒必須滅活。

細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)誘導(dǎo)劑：仙臺(tái)病毒116二、單克隆抗體什么是抗體？抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。二、單克隆抗體什么是抗體？117B淋巴細(xì)胞與抗體

１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。３．每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。B淋巴細(xì)胞與抗體１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體118單克隆抗體由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。纬苫蛐拖嗤募?xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。

特點(diǎn)：

特異性強(qiáng)、靈敏度高

單克隆抗體由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。纬苫?19如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能120

單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體制備過程注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融121思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物122單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用主要有：1、臨床診斷2、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤

資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)“病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，123植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較124動(dòng)物的胚胎移植解決某些妊娠時(shí)間長、每胎產(chǎn)子數(shù)量少的優(yōu)良種畜的繁殖速度問題。動(dòng)物的胚胎移植解決某些妊娠時(shí)間長、每125胚胎移植技術(shù)試管動(dòng)物（嬰兒）培養(yǎng)過程卵細(xì)胞精子體外受精受精卵胚胎新個(gè)體母體子宮內(nèi)孕育、產(chǎn)出胚胎移植技術(shù)試管動(dòng)物（嬰兒）培養(yǎng)過程卵細(xì)胞精子體外受精受精卵126植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程127植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)和理論基礎(chǔ)植物細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)是：

植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)是植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交概念：細(xì)胞的全能性是指生物體的細(xì)胞具有使后代細(xì)胞形成完整個(gè)體的潛能。原因：是生物體的每一個(gè)細(xì)胞都含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)及發(fā)育為完整個(gè)體所必需的全部基因。植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)和理論基礎(chǔ)植物細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)是：128細(xì)胞的全能性當(dāng)植物細(xì)胞脫離了原來所在植物體的器官或組織而處于離體狀態(tài)時(shí)，在一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株。在生物的個(gè)體發(fā)育中，由于基因在特定時(shí)間和空間下選擇性地表達(dá)而形成不同器官，因此，要實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的全能性，首先必須使生物體的細(xì)胞處于離體狀態(tài)。受精卵的全能性最高；其次是生殖細(xì)胞（尤其是卵細(xì)胞）；體細(xì)胞的全能性比生殖細(xì)胞低得多。

細(xì)胞的全能性當(dāng)植物細(xì)胞脫離了原來所在植物體的129植物組織培養(yǎng)的概念植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。植物組織培養(yǎng)的概念植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人130植物組織培養(yǎng)的過程離體的植物器官、組織或細(xì)胞脫分化（又叫去分化）愈傷組織（排列疏松而無規(guī)則，高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞）再分化根或芽等器官植物體植物組織培養(yǎng)的條件：適宜的養(yǎng)料和激素，適宜的溫度和無菌條件植物組織培養(yǎng)的過程離體的植物器官、組織或細(xì)胞脫分化（又叫去分131離體的植物器官、組織或細(xì)胞愈傷組織根芽植物體脫分化再分化