實(shí)驗(yàn)一凝集試驗(yàn)

關(guān)于實(shí)驗(yàn)一凝集試驗(yàn)第一頁，共二十三頁，2022年，8月28日免疫血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)特異性與交叉性抗原和抗體的結(jié)合為弱能量的非共價(jià)健結(jié)合結(jié)合溫度應(yīng)在0℃~40℃范圍內(nèi),pH在4～9范圍內(nèi)抗原抗體反應(yīng)的階段性第一階段：無可見反應(yīng)。第二階段：可見階段，表現(xiàn)為凝集、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合等。帶現(xiàn)象：

前帶現(xiàn)象抗體過多；后帶現(xiàn)象抗原過多

實(shí)驗(yàn)一凝集反應(yīng)

第二頁，共二十三頁，2022年，8月28日抗原、抗體的比例適當(dāng)?shù)谌?，共二十三頁?022年，8月28日抗原、抗體的比例與形成免疫復(fù)合物的大小前帶現(xiàn)象后帶現(xiàn)象第四頁，共二十三頁，2022年，8月28日免疫血清學(xué)反應(yīng)的影響因素1.電解質(zhì)

2.溫度

3.酸堿度第五頁，共二十三頁，2022年，8月28日目的意義：熟悉玻板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)的操作技術(shù)。掌握凝集反應(yīng)中陰性和陽性結(jié)果的判定。第六頁，共二十三頁，2022年，8月28日基本原理：

細(xì)菌等顆粒性抗原與特異性抗體結(jié)合后，在有電解質(zhì)的情況下，會(huì)出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，稱為凝集反應(yīng)。直接凝集反應(yīng)可分為玻片凝集與試管凝集。凝集試驗(yàn)是疾病診斷及體內(nèi)抗體水平測定的常用方法。第七頁，共二十三頁，2022年，8月28日

凝集試驗(yàn)可根據(jù)抗原的性質(zhì)、反應(yīng)的方式分為直接凝集試驗(yàn)(簡稱凝集試驗(yàn))和間接凝集試驗(yàn)。凝集試驗(yàn)直接凝集試驗(yàn)間接凝集試驗(yàn)試管法玻片法間接凝集試驗(yàn)反向間接凝集試驗(yàn)分類:第八頁，共二十三頁，2022年，8月28日第九頁，共二十三頁，2022年，8月28日玻片法

玻片法為一種定性試驗(yàn)。此法簡便快速，適用于新分得細(xì)菌的鑒定或分型。也可用已知的診斷抗原懸液，檢測待檢血清中是否存在相應(yīng)抗體。第十頁，共二十三頁，2022年，8月28日

試管法

為一種定量試驗(yàn)，用已知抗原以檢測待測血清中是否存在相應(yīng)抗體和測定該抗體的含量，以協(xié)助臨床診斷或供流行病學(xué)調(diào)查。第十一頁，共二十三頁，2022年，8月28日器材及試劑:抗原和血清：布氏桿菌凝集抗原、布氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清、待檢血清生理鹽水、玻片、試管、加液槍、接種環(huán)等。第十二頁，共二十三頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)步驟:一、虎紅平板凝集試驗(yàn)：1.材料準(zhǔn)備1.1抗原、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清。1.2受檢血清應(yīng)新鮮，無明顯蛋白凝塊，無溶血和無腐敗氣味。1.3潔凈的玻璃板，其上劃分成4cm2的方格。1.4吸管或分裝器，適于滴加0.03ml。1.5牙簽或火柴桿，供攪拌用。第十三頁，共二十三頁，2022年，8月28日2.操作方法2.1將玻璃板上各格標(biāo)記受檢血清號(hào)，然后加相應(yīng)血清0.03mL。2.2在受檢血清旁滴加抗原0.03mL。2.3用牙簽類小棒攪動(dòng)血清和抗原使之混合。2.4每次試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陰、陽性血清對照。第十四頁，共二十三頁，2022年，8月28日3.判定3.1在陰、陽性血清對照成立的條件下，方可對被檢血清進(jìn)行判定。3.2受檢血清在4min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判為陽性(十)，無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性(一)。第十五頁，共二十三頁，2022年，8月28日第十六頁，共二十三頁，2022年，8月28日玻板凝集與試管凝集的關(guān)系

玻板凝集

80μl40μl20μl10μl

相當(dāng)于試管凝集

1：251：501：1001：200第十七頁，共二十三頁，2022年，8月28日二、試管凝集試驗(yàn)：每份血清用4支試管，別取對照管3支，共7支。各管按下表所示加入0.5%石炭酸生理鹽水，后加0.2ml被檢血清至第一管中，混勻，吸出1.5ml棄去，再吸0.5ml至第二管，混勻，吸0.5ml至第三管，依次至第四管，混勻，吸棄0.5ml，第五管中不加待測血清，第六管中加1:25稀釋的布氏桿菌陽性血清0.5ml，第七管中加1:25稀釋的陰性血清0.5ml。第十八頁，共二十三頁，2022年，8月28日3.各管加入20倍稀釋的抗原后，七管同時(shí)混勻，37℃

，4-10h，取出后室溫18-24h，觀察并記錄結(jié)果；第十九頁，共二十三頁，2022年，8月28日結(jié)果判定：++++：液體完全透明，菌體完全被凝集呈傘狀沉于管底，沉淀物呈片狀、塊狀或顆粒狀，即100%凝集+++：液體略呈混濁，菌體大部分被凝集沉于管底，即75%凝集++：液體不甚透明，管底有明顯凝集沉淀，振蕩時(shí)有塊狀或小片絮狀物，即50%凝集+：液體透明度不顯，有不甚顯著的沉淀或僅有沉淀的痕跡，即25%凝集-：液體不透明，管底無凝集。第二十頁，共二十三頁，2022年，8月28日第二十一頁，共二十三頁，2022年，8月28日

確定血清凝集價(jià)時(shí)，應(yīng)該出現(xiàn)++以上凝集現(xiàn)象的最高稀釋度為準(zhǔn)。判定標(biāo)準(zhǔn)：牛、馬和駱駝凝集價(jià)1：10