生姜粗提物對白色念珠菌體外抑菌實驗研究

生姜粗提物對白色念珠菌體外抑菌實驗研究韓金榮1，楊冬華2，陳巖3(1.寧夏師范學院醫(yī)學院臨床醫(yī)學教研室；2.寧夏師范學院醫(yī)學院形態(tài)學教研室；3.寧夏師范學院醫(yī)學院臨床醫(yī)學教研室，寧夏固原756099)摘要采用索氏提取法，對生姜中的多種抑菌成分進行粗提取，再通過抑菌實驗，測定生姜粗提物對白色念珠菌的抑菌效果。生姜為一味傳統(tǒng)的中藥，具有發(fā)汗解表、溫中止嘔、溫肺止咳的功效，但原生姜粗提物對白色念珠菌具有明顯的抑制作用，抑菌圈直徑為16mm,生姜粗提物最小抑菌濃度為10-3。白色念珠菌作為條件致病菌常常引起皮膚粘膜的感染，如女性感染后常引起陰道炎導致不孕等病證，這樣為白色念珠菌性陰道炎的治療提供依據(jù)。關(guān)鍵詞生姜粗提物；白色念珠菌；體外抑菌TheStudyontheGingerextractonCandidaalbicansofbacteriostasisinvitroHANJin-rong1,YANGDong-hua2(1.TheclinicalteachingandresearchofMedicalSchoolofNingxiaTeachers’Unversity,2.TheMophologyteachingandresearchofMedicalSchoolofNingxiaTeachers’Unversity,Guyuan,NingxiaHuiAutonomousRegion756099,China)Abstract:Thispaperextractsmanyantibacterialcomponentsfromtheginger,usingtheSoxhletextractionmethodanddoingantibacterialexperimentsoastotesttheantibacterialeffect.TheresultsshowthatthegingerisatraditionalChinesemedicinewithdiaphoresis,nourishingthespleenandthestomachandrelievingthecough,buttheoriginalgingerextracthasobviousinhibitiveeffectonCandidaalbicans,amongwhichthediameterofbacteriostaticcircleis16mmandtheminimalconcentrationagainstbacteriais10－3.Asconditionspathogenicbacteria,Candidaalbicansoftencauseinfectionforskinandmucousmembrane,suchasfemaleinfertilityafterinfection,vaginitisdiseaseandsoon,soastoprovidethebasisforthetreatmentofCandidavaginitis.Keywords:Gingerextract;candidaalbicans;antibacterialactivityinvitro生姜是姜科植物姜(ZingiberofficinaleRosc)的新鮮根莖，是臨床廣泛應(yīng)用的傳統(tǒng)中藥，民間多用來治療外感風寒輕癥，也是一種香辛類蔬菜，既有營養(yǎng)價值，又是調(diào)味增香和殺菌品［1］，對心腦血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)等有廣泛的藥理活性［2］?，F(xiàn)已證實其主要藥理作用包括抗炎、抗氧化、降低膽固醇、抗動脈粥樣硬化、抗微生物、抗過敏、抗突變、增強免疫功能、輻射防護作用和抗月中瘤等［3?5］。白色念珠菌(candidaalbicans)，是一種真菌，通常存在于正常人的口腔、上呼吸道、腸道及陰道，一般在正常機體中數(shù)量少，不引起疾病，當機體免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制約作用失調(diào)，則本菌大量繁殖并改變生長形式即芽生菌絲相，侵入細胞引起疾病。為條件致病性真菌。劉端等于2010年在微量元素與健康研究發(fā)表了《生姜提取物的體外抑菌效果研究》一文，發(fā)現(xiàn)生姜乙醇粗提物對酵母菌有明顯的抑制作用，酵母菌和白色念珠菌均屬真菌，卻未發(fā)現(xiàn)對白色念珠菌抑制作用的文獻。本實驗采取索氏提取法，針對生姜中含有的多種抑菌成分進行粗提取，再通過抑菌實驗，測定生姜粗提物對白色念珠菌體外抑菌效果。1儀器與材料儀器霉菌培養(yǎng)箱MJ-160B（常州市恒久儀器制造有限公司）；生物安全柜HR40-HA2（青島海爾特種電器有限公司）；立式自動電熱壓力蒸汽滅菌器LDZX-40BI型（上海申安醫(yī)療器械廠）；電熱恒溫水浴鍋；索氏提取器；其它實驗室常用儀器、設(shè)備及器皿。樣品來源鮮生姜，采購于寧夏固原市味園超市。培養(yǎng)基由實驗室自行制作玉米面瓊脂培養(yǎng)基［6］，滅菌備用。實驗菌種從皮膚黏膜分離得到白色念珠菌。2方法生姜粗提物的制備優(yōu)質(zhì)生姜洗去泥沙，去皮，用小刀切成綠豆般大小后，稱取40g,常溫下加入600ml無水乙醇，用索氏提取法［7］抽提3h,抽濾，減壓濃縮濾液成黃色油狀物即生姜粗提物。生姜紙片制作［8］用無菌打孔器將濾紙打成直徑為6mm勺圓形濾紙片，裝入潔凈培養(yǎng)皿中，干熱滅菌后，用原生姜粗提物0.5ml浸透后備用。作者簡介：韓金榮（1978—），女，講師，碩士，研究方向：中醫(yī)臨床與教學，聯(lián)系電話:136********菌懸液的制備將白色念珠菌接種于滅菌好的玉米面培養(yǎng)基上，經(jīng)傳代三次后參照藥典［9］,量取1mL0.9說理鹽水，接種環(huán)灼燒后挑取菌種放入1mL0.9%生理鹽水中，充分搖勻振蕩備用。抑菌效力的測定用無菌棉簽蘸取白色念珠菌菌液均勻涂于玉米面瓊脂平板上，待表面干后，用無菌鑷子將已備的原生姜粗提物濾紙紙片貼于瓊脂平板上，試驗平行8次，文中所列數(shù)據(jù)為平均值，室溫下經(jīng)8天培養(yǎng)，精確測量抑菌環(huán)直徑大小，并用無菌水濾紙片作空白對照，確定抑菌效果。以上操作均在生物安全柜內(nèi)進行。抑菌圈法測最小抑菌濃度（MIC）[1]將生姜粗提物按梯度稀釋成5個不同濃度，即100、10—1、10—2、10—3、10—4,然后同樣采用抑菌圈法，直到?jīng)]有明顯的抑菌圈為止。表中所列數(shù)據(jù)為8次平行試驗的結(jié)果。3結(jié)果原生姜粗提物抑菌效力的結(jié)果原生姜粗提物于空白對照相比對白色念珠菌具有明顯的抑制作用，抑菌圈的直徑為16nm。最小抑菌濃度以下實驗結(jié)果表明生姜粗提物對白色念珠菌具有較強的抑菌效果，最小抑菌濃度（MIC）為10—3，見表1。表1生姜提取液各濃度的抑菌效果生姜粗提物濃度10010-110-210-310-4抑菌環(huán)直徑（mm）1613.610.18.46.0小圓濾紙片的直徑為6mm所以在抑菌圈直徑為6mm寸抑菌作用實際上為0[4.討論以上實驗結(jié)果表明生姜粗提物對白色念珠菌具有較強的抑菌效果，最小抑菌濃度（MIC）為10—3。白色念珠菌是人體皮膚、粘膜的正常寄生菌，也是臨床重要的條件致病性真菌，對常用抗生素不敏感，特效藥少，僅有灰黃霉素、制霉菌素、兩性霉素B、克霉唾、酮康口伊曲康等[10],但人們習慣用制霉菌素。近年來，由于激素、免疫抑制劑及廣譜抗生素的廣泛應(yīng)用、器官移植、各種導管介入性治療的深入開展，以及艾滋病人的不斷增加，原發(fā)性、繼發(fā)性免疫功能低下人群擴大，各種條件致病性真菌感染呈上升趨勢，嚴重影響患者的健康，已引起醫(yī)學界的廣泛重視[11]。女性感染白色念珠菌常會引起陰道炎造成不孕、影響生活質(zhì)量等，常規(guī)治療為局部用藥和全身用藥，但常常出現(xiàn)復發(fā)，療程較長。生姜，辛、微溫，歸肺、脾經(jīng)。具有發(fā)汗解表、溫中止嘔、溫肺止咳的功效。生姜中含有少量的揮發(fā)性油分、脂肪油、辛辣素、樹脂、蛋白、維生素、戊聚糖、淀粉和礦物元素[12]。經(jīng)寧夏固原農(nóng)校2012級護理(1)、(2)班共38名回族同學調(diào)查，在各自的母親、姐姐和阿姨等親戚女性中，治療陰道炎時洗液為婦炎潔或高錳酸鉀溶液，治療效果不理想。中國為生姜重要的種植國家之一，而且栽培地域很廣，四川、廣西、廣東、貴州、云南、山東、陜西、浙江等省區(qū)產(chǎn)量較大，生姜粗提物容易得到且綠色環(huán)保，對人體的毒副作用小，這樣就可以為白色念珠菌陰道炎提供治療的依據(jù)。參考文獻劉文群,李曼等.大蒜抑菌效果研究及與生姜的比較[J]果蔬深加工,2006,22(3):71-72.王本祥.現(xiàn)代中藥藥理與臨床[M].天津：天津科技翻譯出版公司,2004:473.LeeSH,KhooC,HalsteadCW,etal.Liquidchromatographicdeterminationof6-,8-,10-gingerol,and6-shogaolinginger(Zingiberofficinale)astherawherbanddriedaqueousextract[J].JAOACInt,2007,90(5):1219.LeeSH,CekanovaM,BaekSJ.Multiplemechanismsareinvolvedin6-gingerol-inducedcellgrowtharrestandapoptosisinhumancolorectalcancercells[J].MolCarcinog,2007,47(3):197.趙淑華.生姜粗提物對X射線致小鼠紅細胞損傷的保護作用[J].環(huán)境與健康雜志,2006,23(2):140.畢無邪,陳敏生.微生物學免疫學寄生蟲學實驗技術(shù)[M].白求恩醫(yī)科大學,1979,55-56.陳燕,倪元穎等.生姜粗提物精油與油樹脂的研究進展[J],食品科學,2000,21(8):7.[8]盧芳國，范虹.醫(yī)學免疫學與病原生物學實驗教程[M科學出版社,2007,83-85.國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].2005年版,二部,附錄89-90.肖純凌,趙富璽.病原生物學和免疫學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社