膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)-5課件

斜面培養(yǎng)物4支，營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物（菌液）4支，半固體瓊脂4支，營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板4個(gè)，糖發(fā)酵管1套，抗菌素紙片1套，眼科鑷子2把。器材準(zhǔn)備膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)流程(6次課12學(xué)時(shí)）①培養(yǎng)基的制備②細(xì)菌的分離培養(yǎng)③細(xì)菌的純培養(yǎng)④細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查⑤細(xì)菌的生化試驗(yàn)等⑥細(xì)菌的血清學(xué)試驗(yàn)、結(jié)果分析→實(shí)驗(yàn)論文撰寫醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

綜合性實(shí)驗(yàn)一膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)（五） 細(xì)菌的糖發(fā)酵試驗(yàn) 抗菌素敏感性試驗(yàn) 血漿凝固酶試驗(yàn) 半固體接種法甲→紫黑→①葡萄糖乙→紫黑→②乳糖丙→粉紅→③葡萄糖丁→粉紅→④乳糖37℃24小時(shí)細(xì)菌的糖發(fā)酵試驗(yàn)①用砂輪在糖發(fā)酵管液面上方2～3cm處切割，然后，向切口外側(cè)分離掰斷，管口燒灼滅菌。②接種針斜面取菌，伸入培養(yǎng)基內(nèi)，在管壁上，上下研磨接種。③退出接種針，燒灼滅菌。④管口朝向相同，放置在平皿內(nèi)。小組分工甲→紫黑菌苔Atropurpureus→①葡萄糖Glucose乙→紫黑菌苔Atropurpureus→②乳糖Lactose丙→粉紅菌苔Pink→③葡萄糖Glucose丁、戊→粉紅菌苔Pink→④乳糖Lactose甲乙4丙丁甲乙3丙丁甲乙2丙丁甲乙1丙丁甲乙5丙丁甲乙8丙丁甲乙7丙丁甲乙6丙丁甲乙10丙丁甲乙9丙丁講臺(tái)左右抗菌素敏感性試驗(yàn)

AntibioticSusceptibilityTestFlemingandPenicillin磺胺1907年發(fā)現(xiàn)，1935年臨床應(yīng)用。青霉素1928年發(fā)現(xiàn)，1941年臨床應(yīng)用。我國(guó)住院病人抗菌素使用率達(dá)70%，新生兒病房抗菌素使用率達(dá)100%。為了避免抗菌藥物使用的盲目性，防止因不合理用藥，導(dǎo)致耐藥性細(xì)菌的增多、菌群失調(diào)等問(wèn)題的發(fā)生，用藥前（時(shí)），做藥物敏感性試驗(yàn)?！l(wèi)生部發(fā)布，2012年8月1日起實(shí)施的《抗菌藥物臨床應(yīng)用管理辦法》，規(guī)定特殊使用級(jí)抗菌藥物不得在門診使用。半年之后，醫(yī)院抗菌素使用率普降一半。紙片擴(kuò)散法DiscAgarDiffusionMethod將含有定量抗菌素的紙片，平貼在已經(jīng)接種了試驗(yàn)細(xì)菌的平板上。紙片中的抗菌素吸收培養(yǎng)基的水分，溶解后不斷向周圍擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度。敏感細(xì)菌在紙片周圍的生長(zhǎng)受到抑制，而形成沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)的抑菌圈。依抑菌圈的大小、有無(wú)判斷敏感性。敏感（Sensitive）：試驗(yàn)細(xì)菌所引起的感染，可以用常用劑量的某種抗菌藥物治愈。耐藥（Resistant）：試驗(yàn)細(xì)菌引起的感染，不能用該種抗菌藥物治愈?！钤囼?yàn)菌用量以對(duì)照瓊脂平板表面生長(zhǎng)的菌落呈密集或半密集為宜。設(shè)計(jì)三點(diǎn)，呈等邊三角距離，點(diǎn)距離平板邊緣約15mm。作標(biāo)記：青、鏈、慶。鑷子火焰消毒，夾取相應(yīng)的藥物紙片，平貼在已設(shè)定的位置上，按壓，鑷子火焰消毒。37℃18～24小時(shí)培養(yǎng)，觀察結(jié)果。慶15mm青鏈①設(shè)三點(diǎn),呈等邊三角距離。②點(diǎn)距離平板邊緣約15mm。③作標(biāo)記：青、鏈、慶④鑷子尖嘴朝下，夾取相應(yīng)藥物紙片的邊緣，平貼在已設(shè)定的位置上，輕輕按壓紙片。半固體穿刺接種法

StabSemisolidMethod具有鞭毛能夠真正運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌，在半固體培基中,能沖破低濃度瓊脂的阻力，自接種部位向周圍移動(dòng)擴(kuò)散生長(zhǎng)，使培養(yǎng)基呈根須狀或云霧狀混濁狀態(tài)。無(wú)鞭毛不能運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌，只能沿著穿刺線生長(zhǎng)繁殖，穿刺線邊緣清晰，周圍培養(yǎng)基清澈透明。電鏡半固體生物安全警告本次實(shí)驗(yàn)（糖發(fā)酵試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)、血漿凝固酶試驗(yàn)和半固體接種）操作，可能產(chǎn)生幾百個(gè)微生物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑＞100um沉降很快,＜50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開(kāi),＜5um通過(guò)呼吸道直接到達(dá)肺泡。Pike博士對(duì)實(shí)驗(yàn)室感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引起的。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)坐著，在火焰周圍10～20厘米內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說(shuō)話、少走動(dòng)，以免感染病原菌。細(xì)菌的糖發(fā)酵試驗(yàn)P16甲→紫黑→①葡萄糖乙→紫黑→②乳糖丙→粉紅→③葡萄糖丁→粉紅→④乳糖細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)P20甲→金黃菌液→平板+青、鏈、慶紙片乙→白色菌液→平板+青、鏈、慶紙片丙→紫黑菌液→平板+青、鏈、慶紙片丁→粉紅菌液→平板+青、鏈、慶紙片血漿凝固酶試驗(yàn)P17兔血漿15ul+金黃色,白色半固體接種法P11甲→紫黑，乙→紫黑，丙→粉紅，丁→粉紅。思考題細(xì)菌生化反應(yīng)在感染性疾病診斷中有何重要意義?為什么要在發(fā)酵管液面上方大約2～3cm處切割？培養(yǎng)時(shí)，微量糖發(fā)酵管管口不能朝上，為什么？抗菌素敏感性實(shí)驗(yàn)有何實(shí)際意義?血漿凝固酶試驗(yàn)觀察完畢，應(yīng)將載玻片立即放入消毒缸內(nèi)，為什么?半固體穿刺接種時(shí)，為什么要強(qiáng)調(diào)“原路返回”?為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，你認(rèn)為上述試驗(yàn)應(yīng)還設(shè)立哪些對(duì)照?糖發(fā)酵管管底一側(cè)稍微墊高！微量發(fā)酵管管口朝下，37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)。①試管用毛刷，