細(xì)胞工程復(fù)習(xí)題

細(xì)胞工程復(fù)習(xí)資料(答案版）姓名：整理者：12生物技術(shù)江山2015年5月28日星期四第一章1.細(xì)胞工程：是指以生物細(xì)胞或組織為研究對(duì)象，按照人們的意愿進(jìn)行工程操作，從而改變生物性狀，以獲得生物產(chǎn)品，為人類生產(chǎn)和生活服務(wù)的科學(xué)。2.細(xì)胞工程主要研究的內(nèi)容？答：細(xì)胞工程研究?jī)?nèi)容可分七大類：器官組織和細(xì)胞培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)植物胚胎培養(yǎng)動(dòng)物胚胎培養(yǎng)動(dòng)物胚胎工程轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物胚胎干細(xì)胞染色體工程植物激素控制器官形成理論：第二章：1.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類答：指由人工合成的，能夠調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育的化學(xué)物質(zhì)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)類似于植物激素的結(jié)構(gòu)，它們?cè)谥参锷a(chǎn)中可以起到促進(jìn)扦插生根、調(diào)控開花時(shí)間、塑造理想株型的作用。（1）生長(zhǎng)素（分裂，生長(zhǎng)）（2）細(xì)胞分裂素（分裂，分化）（3）赤霉素（細(xì)胞生長(zhǎng)，發(fā)芽）2.Ms培養(yǎng)基的主要特點(diǎn)？答：無機(jī)鹽和離子濃度高，是較穩(wěn)定的平衡溶液3.鐵鹽母液的主要成分及配制過程；答：過程：分別溶解FeSO4﹒7H2O和NaEDTA,加熱并不斷攪拌，使之完全溶解，冷卻。將兩種溶液混合，調(diào)節(jié)pH至5.5，室溫冷卻后在冷藏。4.激素母液配制時(shí)應(yīng)注意的問題.答：成分：生長(zhǎng)素用少量的95%乙醇或1M的NaOH溶解細(xì)胞分裂素用1MHCl水浴加熱都應(yīng)保存在0-4攝氏度冰箱中，若母液出現(xiàn)沉淀或污染則不能繼續(xù)使用。配制好的母液分別貼上標(biāo)簽，注明名稱倍數(shù)日期以及配制1L培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)取得量。5.外植體表面滅菌過程：答：（1）選材，選擇無病斑、蟲害的植株作為母材。將植物去掉多余的部分后，置于自來水下流水沖洗幾分鐘只幾小時(shí)，沖洗時(shí)間視材料清潔程度而定。（2）乙醇消毒，將上述材料置于超凈工作臺(tái)上金星表面侵潤(rùn)消毒。一般先用70%乙醇侵泡10—30S，由于70%乙醇穿透力強(qiáng)，也很容易殺死植物細(xì)胞，所以侵潤(rùn)時(shí)間不可過長(zhǎng)。（3）消毒劑消毒處理表面消毒劑種類較多，次氯酸鈣飽和溶液5——20分鐘，效果很好次氯酸鈉0.3——0.5%5——20min效果很好氯化氫10——12%5——15min好氯化汞0.1——0.5%5——10min非常好消毒劑臨時(shí)配制，消毒后用無菌水沖洗3次或4次即可。6.Ms固體培養(yǎng)基配制過程：（1）、將配制好的MS培養(yǎng)基母液從冰箱中取出，按順序排列，并逐一檢查是否沉淀或變色，避免使用已失效的母液。（2）、取少量的蒸餾水（約為配制培養(yǎng)基量的2/3）加入燒杯中。注意：配500ml培養(yǎng)基用1000ml燒杯。（3）、按母液順序和規(guī)定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入燒杯中。每1000ml培養(yǎng)基，需要：MS大量元素母液20mlMS微量元素母液10mlMS鐵鹽母液10mlMS有機(jī)物母液5ml（4）、通過計(jì)算，用微量移液器取所需的各種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑母液。（5）、加入蔗糖（30g/L），溶解。（6）、定容：用容量瓶。第三章：1.人工種子：指植物離體培養(yǎng)中產(chǎn)生的胚狀體或不定芽包裹在含有養(yǎng)分和保護(hù)功能的人工胚乳和人工種皮中所形成的能發(fā)芽出苗的顆粒體。2.人工種子的類型。答：可將人工種子分為三大類裸露的或休眠的繁殖體如微鱗莖微塊莖等。它們?cè)诓患影坏那闆r下也具有較高的成株率。人工種皮包被的繁殖體一些體細(xì)胞胚、原球莖等不能過度干燥但只需要用人工種皮包被即可維持良好的發(fā)芽狀態(tài)如胡蘿卜體細(xì)胞胚。

水凝膠包埋再包被人工種皮的繁殖體大多數(shù)體細(xì)胞胚、不定芽、莖尖等均需要先包埋在半液態(tài)凝膠中再經(jīng)人工種皮包裹才能避免失水從而維持良好的發(fā)芽能力。人工種子的結(jié)構(gòu)包括人工種皮外層、人工胚乳、胚狀體或芽3.人工種子生產(chǎn)中需要解決的主要技術(shù)問題.答：目前的人工種子還遠(yuǎn)不能像天然種子那樣方便、實(shí)用和穩(wěn)定。主要障礙在于人工種子的質(zhì)量和成本：（1）優(yōu)良體細(xì)胞胚胎發(fā)生體系的建立和高質(zhì)量胚狀體的誘導(dǎo)；（2）人工種皮材料的篩選；（3）人工種子的包被技術(shù)；（4）人工種子干燥和貯藏方法的研究和改進(jìn)；（5）人工種子的制種和播種技術(shù)尚需進(jìn)一步研究；（6）制作成本的降低。第三章，第四章1.名詞解釋細(xì)胞全能性：指已經(jīng)分化的細(xì)胞仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。全能性細(xì)胞，能發(fā)育成完整成熟的個(gè)體的細(xì)胞。細(xì)胞脫分化：已分化的細(xì)胞在一定因素作用下恢復(fù)細(xì)胞分裂能力,失去原有分化狀態(tài)的過程叫做脫分化。細(xì)胞在分化：離體培養(yǎng)的植物細(xì)胞和組織可以有脫分化狀態(tài)重新進(jìn)行分化。愈傷組織：植物受傷后的傷口處或在植物組織培養(yǎng)中，外植體切口處不斷增殖產(chǎn)生的一團(tuán)不定形的薄壁組織。器官發(fā)生：愈傷組織形成不定根不定芽等器官的過程。體細(xì)胞胚：離體培養(yǎng)下沒有經(jīng)過受精過程但經(jīng)過了胚胎發(fā)育過程所形成的胚的類似物。植物離體繁殖：指利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其在短期內(nèi)獲得遺傳性一致的大量再生植株的方法。植物脫毒：利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)脫除植物細(xì)胞中侵染的病毒，生產(chǎn)健康的繁殖材料?；ㄋ幣囵B(yǎng)：用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將發(fā)育到一定階段的花藥剝離下來，接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，形成完整植株的過程。（組織培養(yǎng)）花粉培養(yǎng)：又稱小孢子培養(yǎng)，是指將花粉從花藥中游離出來，使其成為分散或游離態(tài)，發(fā)育成單倍體植株的過程。(屬于細(xì)胞培養(yǎng))花壁因子：指花藥離體培養(yǎng)時(shí)，誘導(dǎo)藥壁細(xì)胞釋放某些能夠促進(jìn)花粉胚或花粉愈傷組織形成的活性物質(zhì)。胚因子：在胚乳培養(yǎng)中，胚對(duì)胚乳培養(yǎng)有一定影響，即胚因子。離體授粉：是指將未授粉的胚珠或子房從母體上分離下來，進(jìn)行無菌培養(yǎng)，并以一定的方法授以無菌花粉，使之在試管內(nèi)實(shí)現(xiàn)受精的技術(shù)，又稱為離體受精或試管受精。2.植物細(xì)胞再分化形成植株的兩種方式？答：（1）器官發(fā)生：a器官直接發(fā)生外植體直接形成不定芽b器官間接發(fā)生現(xiàn)有島外織體形成愈傷組織，再從愈傷組織中形成不定芽。（2）體細(xì)胞胚發(fā)生a直接從外植體上產(chǎn)生體細(xì)胞胚b由愈傷組織產(chǎn)生體細(xì)胞胚c外植體→愈傷組織→懸浮細(xì)胞→體細(xì)胞胚d單倍體細(xì)胞產(chǎn)生3.體細(xì)胞胚與合子胚的區(qū)別。答：合子胚體細(xì)胞胚胚柄具有明顯胚柄沒有真的胚柄，只有類似胚柄的結(jié)構(gòu)子葉規(guī)范不規(guī)范，有時(shí)具有兩片以上的子葉體積大小休眠有無生殖方式有性無性4.體細(xì)胞胚發(fā)生與器官發(fā)生的區(qū)別？答：（1）體細(xì)胞胚具有極性（2）體細(xì)胞形成后，與母體的維管束系統(tǒng)聯(lián)系少，即生理隔離5.植物離體繁殖的類型？答：（1）腋生枝型是指在離體條件下利用外植體上已有的頂芽芽誘導(dǎo)其發(fā)育成枝并培養(yǎng)成苗的繁殖方式。（2）不定芽型是指利用外植體上形成的不定芽培養(yǎng)成苗的繁殖方式。(3)體細(xì)胞胚型是指通過離體外植體培養(yǎng)，誘導(dǎo)胚胎發(fā)生形成體細(xì)胞胚，在有體細(xì)胞胚發(fā)育成苗。（4）原球莖型是指由外植體培養(yǎng)形成原球莖，通過原球莖進(jìn)行增殖并培養(yǎng)成苗的方式。6.植物脫毒原理及假說。答：病毒在植物體內(nèi)的分布病毒在植物體內(nèi)的分布具有不均勻性，隨植株不同部位和年齡而異。老葉和成熟組織及器官中病毒含量較高根尖、莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)約0.1~1mm區(qū)域內(nèi)，幾乎不含病毒。（原因：分生組織細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)速度快，而病毒在植物體細(xì)胞內(nèi)繁殖速度相對(duì)較慢；另外，病毒是通過篩管組織或胞間聯(lián)絲傳播至其他組織細(xì)胞的，而莖尖分生組織無分化，沒有維管組織。）假說：（1）能量競(jìng)爭(zhēng)病毒核酸和植物細(xì)胞分裂時(shí)DNA合成均需要消耗大量的能量，而分生組織細(xì)胞本身很活躍，其DNA合成是自我提供能量自我復(fù)制，而病毒核酸的合成要靠植物提供能量來自我復(fù)制，因而就得不到足夠的能量，從而就抑制了病毒核酸的復(fù)制。(2)傳導(dǎo)抑制病毒在植物體內(nèi)的傳播主要是通過維管束實(shí)現(xiàn)的，但在分生組織中，維管組織還不健全，從而抑制了病毒向分生組織的傳導(dǎo)。(3)激素抑制在分生組織中，生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素水平均很高，因而阻滯了病毒的侵入或者抑制病毒的合成。(4)酶缺乏1969年，Stace-Smith提出，可能病毒的合成需要的酶系統(tǒng)在分生組織中缺乏或還沒建立，因而病毒無法在分生組織中復(fù)制。(5)抑制因子1976年，Martin-Tanguy等提出了抑制因子假說，認(rèn)為在分生組織中存在有某種抑制因子。7.脫毒苗的鑒定方法。答：（1）直接檢查法直接觀察待側(cè)植株生長(zhǎng)狀態(tài)是否異常，莖葉上有直接觀察待側(cè)植株生長(zhǎng)狀態(tài)是否異常，無特定病毒引起的可見癥狀，無特定病毒引起的可見癥狀，從而可判斷病毒是否存在。存在。（2）指示植物法將一些對(duì)病毒反映敏感，將一些對(duì)病毒反映敏感，癥狀特征顯著的植物作為指示植物，作為指示植物，用以檢驗(yàn)待測(cè)植物體內(nèi)特定病毒的存在。即指示植物法。存在。即指示植物法。特點(diǎn)：條件簡(jiǎn)單，操作方便，經(jīng)濟(jì)而有效，特點(diǎn)：條件簡(jiǎn)單，操作方便，經(jīng)濟(jì)而有效，只能測(cè)出病毒的相對(duì)感染力。能測(cè)出病毒的相對(duì)感染力。（3）抗血清鑒定法特異性高，測(cè)定速度快，特異性高，測(cè)定速度快，幾小時(shí)甚至幾分鐘就可以完成。植物病毒鑒定中最有用方法之一。以完成。植物病毒鑒定中最有用方法之一。原理刺激抗體產(chǎn)生蛋白質(zhì)抗原?？乖c抗體間能刺激抗體產(chǎn)生蛋白質(zhì)抗原。發(fā)生高度專一性的血清學(xué)反應(yīng)（免疫反應(yīng)）發(fā)生高度專一性的血清學(xué)反應(yīng)（免疫反應(yīng)）（4）分子生物學(xué)鑒定a、雙鏈RNA法雙鏈RNA法通過提取純純化待測(cè)植物RNA，通過提取純純化待測(cè)植物RNA，并對(duì)其進(jìn)行電泳分析，可確定dsRNA存在存在，泳分析，可確定dsRNA存在，從而判斷待檢植物是否帶病毒。否帶病毒。b、互補(bǔ)DNA（cDNA）檢測(cè)法互補(bǔ)DNA（DNA）也叫DNA分子雜交法也叫DNA分子雜交法(5)電鏡檢測(cè)法運(yùn)用電子顯微鏡可直接檢測(cè)待檢植物體內(nèi)有無病毒粒體存在，并根據(jù)所觀察病毒的形態(tài)等對(duì)病毒病毒粒體存在，種類進(jìn)行鑒定。是較為先進(jìn)的方法，種類進(jìn)行鑒定。是較為先進(jìn)的方法，但需一定的設(shè)備和技術(shù)。8.低溫預(yù)處理提高花藥培養(yǎng)的機(jī)理。答：（1）激發(fā)花粉母細(xì)胞產(chǎn)生兩個(gè)相等的核（2）保持高活力的生活力的花粉。9.單倍體的應(yīng)用。答：（1）縮短育種年限（2）獲得育種中間材料（3）突變體選育（4）體細(xì)胞融合（5）遺傳學(xué)研究（6）遺傳工程受體10.植物胚胎培養(yǎng)的意義？答：（1）客服雜種胚的育敗，獲得稀有雜種（2）獲得單倍體和多倍體植株（3）打破種子休眠，促進(jìn)胚萌發(fā)。（4）快速繁殖良種，縮短育種周期（5）克服種子生活力低下（6）研究胚胎的發(fā)育過程和控制機(jī)制（7）做轉(zhuǎn)基因材料11.幼胚培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)？答：（1）取材時(shí)間（2）幼胚剝離（3）接種培養(yǎng)12.離體授粉的方法？答：離體授粉分為離體柱頭授粉、離體子房授粉、離體胚珠授粉三種方式。進(jìn)行離體授粉時(shí)，從花粉萌發(fā)到受精形成種子以及種子萌發(fā)和幼苗形成的整個(gè)過程一般均是在試管內(nèi)完成。第5章：原生質(zhì)體：是指除去細(xì)胞壁后裸露的有生活力的原生質(zhì)團(tuán)。用機(jī)械方法或酶解法可去除細(xì)胞壁。2.原生質(zhì)體研究的意義：答：（1）器官再生（2）細(xì)胞分化（3）體細(xì)胞遺傳（4）細(xì)胞融合與DNA攝?。?）細(xì)胞克?。?）細(xì)胞生理(8)個(gè)體發(fā)育過程3.葉片適于原生質(zhì)體游離的優(yōu)點(diǎn)。答：（1）葉肉細(xì)胞排列疏松，酶的作用易達(dá)到細(xì)胞壁（2）分離的原生質(zhì)體較均勻（3）有葉綠體存在，為選擇雜種細(xì)胞提供天然標(biāo)記4.原生質(zhì)體的純化方法答：A.（1）沉降操作簡(jiǎn)單，丟失少，但純度低（2）漂浮法純度高丟失多產(chǎn)率低（3）梯度離心純度最高丟失多產(chǎn)量低B.洗滌5.原生質(zhì)體活力測(cè)定原理答：（1）目測(cè)法（2）熒光素二乙酸制染色法（FDA）原理（3）酚藏花紅染色法（4）熒光增白劑CFW染色法（5）伊凡蘭染色法第六章：1概念體細(xì)胞雜交：指將植物不同種屬，甚至科之間的原生質(zhì)體通過人工融合的方法誘導(dǎo)融合，然后離體培養(yǎng)，使其再生植株。原生質(zhì)體融合：指通過人為的方法，使遺傳性狀不同的兩個(gè)細(xì)胞的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，借以獲得兼有雙親遺傳性狀的雜種細(xì)胞的過程。同核體：是指在共同的細(xì)胞質(zhì)中，含有復(fù)數(shù)相同的基因型核狀態(tài)?；蚧蛐拖嗤募?xì)胞融合成的雜交細(xì)胞稱為同核體異核體：兩不同體細(xì)胞融合，形成同時(shí)含有兩個(gè)細(xì)胞核的細(xì)胞稱異核體。細(xì)胞質(zhì)雜交：體細(xì)胞雜交中，得到的雜種只含一個(gè)親本的核基因組而含有兩個(gè)親本的細(xì)胞質(zhì)基因。2.PEG融合原理答：（1）能與細(xì)胞水Pr碳水化合物形成氫鍵，形成分子橋。（2）增加類脂膜的流動(dòng)性3.雜種細(xì)胞的選擇方法答：（1）、互補(bǔ)選擇法：a生長(zhǎng)互補(bǔ)選擇法b營(yíng)養(yǎng)缺陷型互補(bǔ)選擇法c抗性互補(bǔ)選擇法d細(xì)胞代謝互補(bǔ)選擇法(2)機(jī)械選擇法：a利用融合親本的形態(tài)色澤上的差異篩選雜種細(xì)胞b利用熒光素標(biāo)記分離雜種細(xì)胞C應(yīng)用熒光激活細(xì)胞分選儀自動(dòng)分離雜種細(xì)胞（3）組織培養(yǎng)篩選法4.胞質(zhì)雜種產(chǎn)生的途徑答：（1）正常原生質(zhì)體與去核的原生質(zhì)體融合（2）正常的原生質(zhì)體與一個(gè)核失活的原生質(zhì)體融合（3）用原生質(zhì)體與呀原生質(zhì)體融合（4）在雜種細(xì)胞的增殖過程中，一個(gè)親本的染色體丟失第八章：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：用無菌操作的方法將動(dòng)物體內(nèi)的組織器官取出，模擬生物體內(nèi)生理?xiàng)l件在體外進(jìn)行培養(yǎng)，并觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育及衰老的生命現(xiàn)象的技術(shù)。接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。傳代培養(yǎng)：當(dāng)原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)和細(xì)胞不斷一則細(xì)胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制，此時(shí)就需要將細(xì)胞重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞分裂指數(shù)：指測(cè)定細(xì)胞群中1000個(gè)細(xì)胞中分裂分裂相數(shù)。細(xì)胞系：由原代培養(yǎng)經(jīng)初步純化，獲得的以一種細(xì)胞為主，能在體外生長(zhǎng)的不軍醫(yī)的細(xì)胞群體。細(xì)胞株：是指一個(gè)經(jīng)生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單個(gè)細(xì)胞增殖成細(xì)胞群。2.動(dòng)物細(xì)胞體外生長(zhǎng)的特點(diǎn)：答：體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞，按照其生長(zhǎng)方式可以分為：.貼壁生長(zhǎng)型細(xì)胞（貼壁型細(xì)胞）懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞（懸浮型細(xì)胞）生長(zhǎng)特點(diǎn)：（1）貼附大多數(shù)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞在體外均附著于一定的底物而生長(zhǎng)。當(dāng)培養(yǎng)細(xì)胞在未貼附于底物之前一般均似球體樣；當(dāng)與底物貼附后，細(xì)胞將逐漸伸展而形成一定的形態(tài)，呈成纖維細(xì)胞樣或上皮細(xì)胞樣等（2）接觸抑制體外培養(yǎng)中多數(shù)貼壁型細(xì)胞的生長(zhǎng)特性之一。當(dāng)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)滿底物時(shí)，一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞圍繞致無處可去而發(fā)生接觸時(shí)，細(xì)胞不再移動(dòng)，在接觸區(qū)域的細(xì)胞膜皺褶樣活動(dòng)將停止，此即接觸抑制。（3）密度抑制當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)、匯合形成單層時(shí)，細(xì)胞變得比較擁擠，扁平形成的程度減小，與培養(yǎng)液接觸的表面積減少；同時(shí)培養(yǎng)液中的一些營(yíng)養(yǎng)物將逐漸消耗掉，尤其是細(xì)胞周圍的部位，因此，這種形成的單層細(xì)胞，其分裂將停止，單層細(xì)胞的密度常與培養(yǎng)液中的血清濃度有關(guān)，這種貼壁細(xì)胞的體外生長(zhǎng)特性被稱為細(xì)胞生長(zhǎng)的密度抑制.形成密度抑制的單層細(xì)胞可在靜止?fàn)顟B(tài)維持存活一段時(shí)間，但不發(fā)生分裂增殖。3.常見的貼附性細(xì)胞有哪些。答：按照貼壁型細(xì)胞的體外培養(yǎng)時(shí)的形態(tài)，主要分為四大類：成纖維細(xì)胞型細(xì)胞：此型細(xì)胞外形與體內(nèi)成纖維細(xì)胞形狀相似，細(xì)胞大致呈梭形或不規(guī)則形。起源于中胚層的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)一般表現(xiàn)為這種形式。上皮型細(xì)胞：此型細(xì)胞形狀上類似上皮細(xì)胞，扁平狀，形態(tài)較為規(guī)則，細(xì)胞貼壁后呈三角形及不規(guī)則偏平的多角形，中央有扁圓形核，生長(zhǎng)時(shí)彼此緊密連接成單層細(xì)胞。起源于內(nèi)胚層與外胚層的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)都可能呈現(xiàn)上皮型。游走型細(xì)胞：此型細(xì)胞具有類似巨噬細(xì)胞樣的特征：在支持物上分散生長(zhǎng)，一般不連接成片、形成群落；細(xì)胞胞質(zhì)常伸出偽足和突起；在培養(yǎng)皿壁上生長(zhǎng)位置不固定，呈活躍的游走和變形運(yùn)動(dòng)，速度快且方向不規(guī)則；細(xì)胞內(nèi)易出現(xiàn)色暗的吞噬性顆粒。多形型細(xì)胞：此型細(xì)胞形態(tài)上不規(guī)則，一般分為胞體和胞突兩部分，其中胞突為細(xì)長(zhǎng)形，類似絲狀偽足；胞體雖然也略呈多角形，但沒有成纖維細(xì)胞那樣不規(guī)則.此類細(xì)胞不常見，只有某些神經(jīng)組織細(xì)胞等那以確定其穩(wěn)定形態(tài)的才歸入多形細(xì)胞。4.貼壁細(xì)胞如何傳代答：在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，繼續(xù)生長(zhǎng)的空間不足，培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成份也消耗較多，同時(shí)代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培養(yǎng)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增。用胰蛋白酶處理，把細(xì)胞分散，然后把分散的細(xì)胞分成幾個(gè)培養(yǎng)基中培養(yǎng).5.動(dòng)物細(xì)胞純化方法。答：（1）自然純化即利用某一種類細(xì)胞的增殖優(yōu)勢(shì)，在長(zhǎng)期傳代過程中靠自然淘汰法，不斷排擠其他生長(zhǎng)慢的細(xì)胞，最后留下生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)旺的細(xì)胞，達(dá)到細(xì)胞純化的目的。留下的細(xì)胞：成纖維細(xì)胞、突變細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞

缺點(diǎn)：a無法按需要和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇細(xì)胞b花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)(2)人工純化是利用人為手段造成對(duì)某一細(xì)胞生長(zhǎng)有利的環(huán)境條件,抑制其他細(xì)胞的生長(zhǎng)從而達(dá)到純化細(xì)胞的目的.主要有以下6種方法.細(xì)胞因子依賴純化法.酶消化法機(jī)械刮除法反復(fù)貼壁法單細(xì)胞克隆培養(yǎng)離心分離法（速度沉降分離法等密度梯度沉降分離法）6.為什么要對(duì)動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行保存。答：（1）避免污染（2）有限增值的細(xì)胞傳代次數(shù)有限（3）細(xì)胞系和細(xì)胞株在穿戴過程中，許多生物學(xué)性容易發(fā)生變化，如粘附性和染色體樹木等。第九章：?jiǎn)慰寺】贵w1.名詞解釋多克隆抗體：一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體多個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位激機(jī)體多個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的不同抗體。所獲得的免疫血清實(shí)際上是含有多種不同抗體。所獲得的免疫血清實(shí)際上是含有多種抗體的混合物，即多克隆抗體?？贵w的混合物，即多克隆抗體。單克隆抗體：由一個(gè)識(shí)別一種抗原表位胞克隆產(chǎn)生的同源抗體。高度均一、胞克隆產(chǎn)生的同源抗體。高度均一、特異性強(qiáng)、效價(jià)高、少或無交叉反應(yīng)性。雜交瘤技術(shù)：是指腫瘤細(xì)胞與體細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的現(xiàn)象。他可使兩個(gè)不同來源的細(xì)胞核在同一細(xì)胞中表達(dá)功能的技術(shù).2.單克隆抗體的特性。答：高度均一、特異性強(qiáng)、效價(jià)高、少或無交叉反應(yīng)性。3.雜交瘤細(xì)胞制備的整個(gè)過程答：（1）抗原的制備（2）免疫途徑（3）骨髓瘤細(xì)胞的制備（4）細(xì)胞融合（5）融合細(xì)胞的篩選（6）雜交瘤細(xì)胞及單抗的鑒定4.仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的機(jī)理。答：仙臺(tái)病毒為多形性顆粒，其表面具有凝血活性唾液酸苷酶火星的刺突，他們可與膜上的糖蛋白起作用，使細(xì)胞相互凝聚，再通過摸上蛋白分子的重新分布，使膜中脂類分子重排，從而打開質(zhì)膜，導(dǎo)致細(xì)胞融合。5.HAT選擇培養(yǎng)基的原理。答：細(xì)胞DNA合成有兩條途徑：主要合成途徑和補(bǔ)救合成途徑主要合成途徑即利用糖和氨基酸這些可從培養(yǎng)液中攝取的簡(jiǎn)單的含碳、含氮復(fù)合物來合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA。

這一過程需四氫葉酸參與供甲基及甲?；虼嗽撏緩娇杀蝗~酸拮抗物氨基喋呤阻斷。補(bǔ)救合成途徑細(xì)胞可通過次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK），將核苷酸前體合成核苷酸以供DNA合成的原料。凡能在HAT選擇培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的細(xì)胞，必須能利用外源性次黃嘌呤（H）和胸腺嘧啶（T）；HGPRTˉ或TKˉ細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基上不能存活；HGPRTˉ與TKˉ細(xì)胞融合或與正常細(xì)胞融合后的雜交細(xì)胞，可在HAT培養(yǎng)基上存活。第十章；胚胎工程1.名詞解釋胚胎工程：指對(duì)動(dòng)物早期胚胎或配子進(jìn)行工程技術(shù)操作獲得成體個(gè)體技術(shù)。精子獲能：哺乳動(dòng)物的精子在子宮或輸卵管內(nèi)存留一段時(shí)間，并經(jīng)發(fā)生一定的生理變化，才能獲得受精能力，將此現(xiàn)象稱為精子獲能。頂體反應(yīng)：獲能精子頭部的去能因子被除掉，引起精子頭部質(zhì)膜形態(tài)上的發(fā)生改變，同時(shí)丁體內(nèi)酶被激活，這一過程成為頂體反應(yīng)。體外受精：指獲能精子與成熟的卵子置于受精液中共同培養(yǎng)，使之完成受精的過程。發(fā)育阻滯：體外受精早期胚胎在體外發(fā)育中，往往會(huì)停止在某一個(gè)階段不再發(fā)育。胚胎移植：指對(duì)優(yōu)秀雌性動(dòng)物進(jìn)行超數(shù)排卵處理，在其發(fā)情期配種后一定時(shí)間內(nèi)從其生殖道取出早期胚胎，移植到同期發(fā)情的普通雌性動(dòng)物生殖道的相應(yīng)部位。胚胎分割：指采用顯微操作系統(tǒng)將哺乳動(dòng)物附植前的胚胎分成若干個(gè)具有發(fā)育潛力部分的生物技術(shù)，運(yùn)動(dòng)胚胎分割可獲得同卵雙生后代。性別控制：是指通過對(duì)動(dòng)物的正常生殖過程進(jìn)行人為干預(yù)，使成年雌性動(dòng)物產(chǎn)生人們所期望的性別后代的一門技術(shù)。2.精子體外獲能方法。答：血清白蛋白法高滲透法卵泡液孵育法鈣離子載體法肝素法3.顯微授精及其方法。答：是指借助顯微操作儀將精子注入卵母細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)受精的過程。精子卵胞質(zhì)注射b精子透明帶下注射4.胚胎移植的意義及技術(shù)過程。答：意義：（1）極大地增加了優(yōu)秀母畜的后代數(shù)挖掘了母畜的遺傳和繁殖潛力.跨地域引種方便。珍惜和瀕危動(dòng)物的保種和擴(kuò)繁滿足生物醫(yī)學(xué)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的特殊需要，提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。為其他理論作基礎(chǔ)過程：a供體和受體的選擇提供胚胎的個(gè)體叫供體，接受胚胎的叫受體。b供體的超數(shù)排卵在動(dòng)物發(fā)情周期的適當(dāng)時(shí)期，用促性腺激素進(jìn)行處理，誘發(fā)其卵巢上大量卵泡同時(shí)發(fā)育并排卵。c受體的同期發(fā)情處理進(jìn)行移植時(shí)，供體和受體的生理狀況要趨于一致，否則移植后的胚胎不能存活。d胚胎回收也稱采卵，就是把胚胎從供體的生殖道中沖洗出來。e胚胎檢查及質(zhì)量鑒定回收胚胎后，需從沖卵液中將胚胎檢出，進(jìn)行清洗，并進(jìn)行質(zhì)量鑒定。主要進(jìn)行形態(tài)學(xué)質(zhì)量鑒定。f胚胎移植方法有手術(shù)法和非手術(shù)法兩種，可根據(jù)受體動(dòng)物品種及移植目的的不選擇使用。5.超數(shù)排卵的基本原理。答：（1）垂體分泌的促性腺激素主要是FSH和LH，能保證卵泡發(fā)育成熟。（2）卵泡產(chǎn)生的雌激素（3）卵泡液的作用6.胚胎分割的方法答：a顯微針分割法b顯微刀分割法c酶軟化透明帶分割法d徒手分割法e酶消化透明帶分割法7.胚胎冷凍保存的原理。答：胚胎冷凍是指將胚胎和冷凍液裝入冷凍管中，經(jīng)過慢速（第2-3天的胚胎）和快速（第5-6天的囊胚）兩種降溫方式使胚胎能靜止下來并可在-196度的液氮中保存的一種方法。原理：胚胎水分含量高游離水易形成冰晶，胞內(nèi)冰晶可破壞Pr的硫氫鍵，發(fā)生不可逆的變化，導(dǎo)致cell死亡，因此其原理是防止生成大量冰晶對(duì)cell造成傷害。8X，Y的差別答：（1）X精子與卵子結(jié)合為雌性，Y為雄性（2）X精子DNA含量較y多（3）形態(tài)上Y精子具有具有長(zhǎng)臂Y染色體。9.X精子與Y精子的分離技術(shù)答：（1）物理分離法根據(jù)兩者在物理特性上的差異。a沉降法b離心沉降法c電泳法（2）Y染色體標(biāo)記法根據(jù)Y精子具有具有長(zhǎng)臂Y染色體的特性，利用鹽酸虧耐克寧熒光檢測(cè)技術(shù)來分離精子.（3）免疫分離精子法Y精子能表達(dá)H-Y，因而，利用H-Y抗體處理精液，能將其分離。（4）流式細(xì)胞分離法根據(jù)兩者中DNA含量的差異進(jìn)行精子性別鑒定。（5）化學(xué)藥品處理法：X、Y精子嗜酸堿性不同第十章：動(dòng)物克隆1.名詞解釋細(xì)胞核移植：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。血清饑餓法：通過降低培養(yǎng)液中的血清濃度，使培養(yǎng)細(xì)胞因缺乏血清生長(zhǎng)因子而不能分裂，一定時(shí)間后再加入血清，細(xì)胞就開始同步生長(zhǎng)分裂了。治療性克隆：常指出于治療目的而克隆人的胚胎，提取胚胎干細(xì)胞，并使干細(xì)胞定向發(fā)育，培育出健康的可以修復(fù)或替代壞死受損細(xì)胞、組織和器官，通過這些被培育出來的組織細(xì)胞或器官的移植而治療疾病。這種用于醫(yī)療目的而在實(shí)驗(yàn)室使用克隆技術(shù)制造胚胎的過程被稱為治療性克隆。2.動(dòng)物克隆技術(shù)路線答：動(dòng)物克隆技術(shù)的核心是核移植。核供體動(dòng)物的選擇與細(xì)胞核的獲得。核受體動(dòng)物的選擇與細(xì)胞核的移出。供體核的移入及原核的取出。胚泡的體外試管培養(yǎng)。代母的選擇與胚泡移入子宮?？寺?dòng)物的體內(nèi)發(fā)育與出生3.核移植技術(shù)的應(yīng)用答：（1）細(xì)胞治療細(xì)胞移植可以治療由于細(xì)胞功能缺陷所引起的各種疾病，如糖尿病;中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾?。ㄅ两鹕?，阿爾莫茨癥）;肝功能衰竭;甲狀腺疾病。

（2）異種器官移植（3）生產(chǎn)治療性蛋白

（4）保護(hù)瀕危物種（5）培育各種疾病動(dòng)物模型

（6）三核移植技術(shù)的應(yīng)用第十一章：干細(xì)胞名詞解釋干細(xì)胞：是一類具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞：ES細(xì)胞，胚胎干細(xì)胞是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞，它具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性。EG細(xì)胞：胚胎生殖干細(xì)胞從哺乳動(dòng)物胚胎生殖腺原生殖細(xì)胞培養(yǎng)成的多潛能干細(xì)胞。性質(zhì)類似于胚胎干細(xì)胞成體干細(xì)胞：是指存在于一種已經(jīng)分化組織中的未分化細(xì)胞，這種細(xì)胞能夠自我更新并且能夠特化形成組成該類型組織的細(xì)胞。2.干細(xì)胞的種類答：(1)胚胎干細(xì)胞胚胎干細(xì)胞是指來源于早期胚胎組織，具有高度自我更新和多向分化潛能的未分化細(xì)胞。胚胎性干細(xì)能向3個(gè)胚層的幾乎所有類型的細(xì)胞分化，因而也是一種全能干細(xì)胞。胚胎性干細(xì)胞包括3種類型：胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)、胚胎生殖干細(xì)胞(EG細(xì)胞)及畸胎瘤干細(xì)胞(EC細(xì)胞)（2）成體干細(xì)胞成體的許多組織和器官，如表皮和造血系統(tǒng)，具有修復(fù)和再生的能力，未分化的細(xì)胞在其中起著關(guān)鍵作用。這種存在于已分化組織中的未分化細(xì)胞便是成體干細(xì)胞。3.ES細(xì)胞的分離及鑒定方法答：分離方法a全胚胎培養(yǎng)法將桑椹胚或囊胚直接培養(yǎng)在飼養(yǎng)層上，讓其自然脫去透明帶，鐵壁，與滋養(yǎng)層一起增值。當(dāng)ICM增殖垂直向上生長(zhǎng)一定時(shí)間后，挑出ICM，并離散成小細(xì)胞團(tuán)塊，進(jìn)行繼代培養(yǎng)，克隆增殖。b免疫外科ICM培養(yǎng)法先用鏈霉素蛋白酶將胚胎的透明帶除去，裸胚在抗體中處理一段時(shí)間后，再在補(bǔ)體中作用一段時(shí)間，使滋養(yǎng)層細(xì)胞發(fā)生溶解，然后直接ICM進(jìn)行培養(yǎng)與擴(kuò)增的方法。c機(jī)械剝離ICM培養(yǎng)法就是采用機(jī)械方法除去胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞來分離培養(yǎng)d克隆法將成纖維細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因的成纖維細(xì)胞注入去核的哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞中，電融合或化學(xué)融合并激活，重組胚分裂至桑椹胚或囊胚，分離ES細(xì)胞與全培養(yǎng)法相同。鑒定：a形態(tài)學(xué)檢測(cè)體積小、核大、核質(zhì)比高，一個(gè)或多個(gè)突起的核仁，常染色質(zhì)，胞質(zhì)少、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。b堿性磷酸酶活性檢測(cè)染色后呈深藍(lán)紫色C端粒酶活性檢測(cè)dOct-4表達(dá)檢測(cè)多能性基因標(biāo)志。OCT抗血清和間接免疫熒光法檢測(cè)OCT基因表達(dá)產(chǎn)物e干細(xì)胞標(biāo)記物f體內(nèi)分化潛能檢測(cè)畸胎瘤g體外分化潛能檢測(cè)囊狀簡(jiǎn)單胚體或類胚體，常見多種類型細(xì)胞混雜在一起h嵌合體4.ES細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用答：（1）動(dòng)物克隆及人類治療性克隆.（2）在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中的應(yīng)用（3）.制備嵌合體動(dòng)物5.成體干細(xì)胞的主要類型答：（1）造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞是體內(nèi)各種血細(xì)胞的唯一來源，它主要存在于骨髓、外周血、臍帶血中。（2）神經(jīng)干細(xì)胞（3）肌肉干細(xì)胞可發(fā)育分化為成肌細(xì)胞，后者可互相融合成為多核