細胞觀察-顯微鏡課件

細胞觀察倒置顯微鏡觀察：活細胞觀察普通光學顯微鏡觀察：化學染色標本如HE染色，免疫組化染色標本等掃描電鏡觀察：細胞表面形貌透射電鏡觀察：細胞內部超微結構細胞觀察倒置顯微鏡觀察：活細胞觀察1倒置相差顯微鏡觀察原理活細胞無色透明，當光波通過它時，顏色和亮度變化不大。相差顯微鏡是利用細胞內結構密度的不同而對光產生折射率有差異的原理，使肉眼不能分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿疵靼挡睿?。倒置相差顯微鏡觀察原理2細胞觀察-顯微鏡課件3倒置相差顯微鏡觀察調節(jié)光軸倒置相差顯微鏡觀察調節(jié)光軸4倒置相差顯微鏡觀察合軸調節(jié)倒置相差顯微鏡觀察合軸調節(jié)5倒置相差顯微鏡觀察(暗反差)倒置相差顯微鏡觀察(暗反差)6倒置相差顯微鏡觀察(明反差)倒置相差顯微鏡觀察(明反差)7活細胞熒光染色觀察活細胞丫啶橙染色呈綠色凋亡細胞與溴化乙錠共染呈橙色活細胞熒光染色觀察8掃描電鏡觀察掃描電鏡觀察9透射電鏡觀察透射電鏡觀察10血球計數(shù)板法制備細胞懸液：細胞密度＞104/ml,細胞過多時需適當稀釋,單個細胞率>95%。加樣：混懸細胞，取少許細胞懸液，從計數(shù)池一側加入，不要溢出或出現(xiàn)氣泡。計數(shù)：10倍物鏡下計數(shù)四角大方格內的細胞，壓線者只計左邊線和上邊線。計算：細胞數(shù)/ml=（4四大格細胞總數(shù)／4）×104×稀釋倍數(shù)血球計數(shù)板法制備細胞懸液：細胞密度＞104/ml,細胞過多11細胞觀察-顯微鏡課件12細胞密度調整稀釋公式：C1·V1＝C2·V2稀釋前細胞密度C1，溶液體積V1稀釋后細胞密度C2，溶液體積V2細胞密度調整稀釋公式：C1·V1＝C2·V213細胞活力測定－臺盼藍染色法制備單個細胞懸液：105～106／ml0.4%臺盼藍染色1min(9滴細胞懸液＋1滴0.4%臺盼藍)，3min內計數(shù)用血細胞計數(shù)板鏡下分別計數(shù)活細胞（染料拒染）和死細胞（呈淡藍色）計算細胞活力：活細胞率（％）＝［活細胞數(shù)／（活細胞數(shù)＋死細胞數(shù)）］×100細胞活力測定－臺盼藍染色法制備單個細胞懸液：105～106／14細胞觀察-顯微鏡課件15細胞生長曲線測定－計數(shù)法細胞生長曲線測定－計數(shù)法16細胞ＨＥ染色細胞標本制備懸浮生長細胞：涂片法貼壁生長細胞：鋪片法（細胞生長在蓋玻片上）細胞固定取出細胞片，PBS浸洗，95％酒精固定15min（４℃下可保存１周）細胞ＨＥ染色細胞標本制備17細胞ＨＥ染色PBS洗１次蘇木精染5～10min自來水漂洗稀鹽酸酒精分色約3秒淡氨水使胞核藍化數(shù)秒自來水漂洗伊紅染5～10min過70％、80％、90％酒精，各1min過95%酒精2次，各1min；100％酒精2次，各1min過二甲苯3次，各1min，中性樹脂封片細胞ＨＥ染色PBS洗１次18細胞HE染色觀察細胞HE染色觀察19細胞計數(shù)實習8人一組，提供2塊計數(shù)板提供的細胞懸液密度為106／ml,4倍稀釋計數(shù)(3份培養(yǎng)液＋1份細胞懸液)按10倍稀釋方法，制備3種密度的細胞懸液，即105、104、103／ml，稀釋方法：9份培養(yǎng)液＋1份細胞懸液，根據(jù)提供的移液器（50、100、200）調整稀釋蓋玻片與計數(shù)板成垂直方向放置細胞計數(shù)實習8人一組，提供2塊計數(shù)板20細胞HE染色實習8人一套染色缸細胞片在酒精缸,取出細胞片,用PBS浸洗后再染色染色完成后,省略樹膠封片。如果想觀察染色結果，可將有細胞的一面貼在載玻片上。細胞HE染色實習8人一套染色缸21細胞觀察倒置顯微鏡觀察：活細胞觀察普通光學顯微鏡觀察：化學染色標本如HE染色，免疫組化染色標本等掃描電鏡觀察：細胞表面形貌透射電鏡觀察：細胞內部超微結構細胞觀察倒置顯微鏡觀察：活細胞觀察22倒置相差顯微鏡觀察原理活細胞無色透明，當光波通過它時，顏色和亮度變化不大。相差顯微鏡是利用細胞內結構密度的不同而對光產生折射率有差異的原理，使肉眼不能分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿疵靼挡睿?。倒置相差顯微鏡觀察原理23細胞觀察-顯微鏡課件24倒置相差顯微鏡觀察調節(jié)光軸倒置相差顯微鏡觀察調節(jié)光軸25倒置相差顯微鏡觀察合軸調節(jié)倒置相差顯微鏡觀察合軸調節(jié)26倒置相差顯微鏡觀察(暗反差)倒置相差顯微鏡觀察(暗反差)27倒置相差顯微鏡觀察(明反差)倒置相差顯微鏡觀察(明反差)28活細胞熒光染色觀察活細胞丫啶橙染色呈綠色凋亡細胞與溴化乙錠共染呈橙色活細胞熒光染色觀察29掃描電鏡觀察掃描電鏡觀察30透射電鏡觀察透射電鏡觀察31血球計數(shù)板法制備細胞懸液：細胞密度＞104/ml,細胞過多時需適當稀釋,單個細胞率>95%。加樣：混懸細胞，取少許細胞懸液，從計數(shù)池一側加入，不要溢出或出現(xiàn)氣泡。計數(shù)：10倍物鏡下計數(shù)四角大方格內的細胞，壓線者只計左邊線和上邊線。計算：細胞數(shù)/ml=（4四大格細胞總數(shù)／4）×104×稀釋倍數(shù)血球計數(shù)板法制備細胞懸液：細胞密度＞104/ml,細胞過多32細胞觀察-顯微鏡課件33細胞密度調整稀釋公式：C1·V1＝C2·V2稀釋前細胞密度C1，溶液體積V1稀釋后細胞密度C2，溶液體積V2細胞密度調整稀釋公式：C1·V1＝C2·V234細胞活力測定－臺盼藍染色法制備單個細胞懸液：105～106／ml0.4%臺盼藍染色1min(9滴細胞懸液＋1滴0.4%臺盼藍)，3min內計數(shù)用血細胞計數(shù)板鏡下分別計數(shù)活細胞（染料拒染）和死細胞（呈淡藍色）計算細胞活力：活細胞率（％）＝［活細胞數(shù)／（活細胞數(shù)＋死細胞數(shù)）］×100細胞活力測定－臺盼藍染色法制備單個細胞懸液：105～106／35細胞觀察-顯微鏡課件36細胞生長曲線測定－計數(shù)法細胞生長曲線測定－計數(shù)法37細胞ＨＥ染色細胞標本制備懸浮生長細胞：涂片法貼壁生長細胞：鋪片法（細胞生長在蓋玻片上）細胞固定取出細胞片，PBS浸洗，95％酒精固定15min（４℃下可保存１周）細胞ＨＥ染色細胞標本制備38細胞ＨＥ染色PBS洗１次蘇木精染5～10min自來水漂洗稀鹽酸酒精分色約3秒淡氨水使胞核藍化數(shù)秒自來水漂洗伊紅染5～10min過70％、80％、90％酒精，各1min過95%酒精2次，各1min；100％酒精2次，各1min過二甲苯3次，各1min，中性樹脂封片細胞ＨＥ染色PBS洗１次39細胞HE染色觀察細胞HE染色觀察40細胞計數(shù)實習8人一組，提供2塊計數(shù)板提供的細胞懸液密度為106／ml,4倍稀釋計數(shù)(3份培養(yǎng)液＋1份細胞懸液)按10倍稀釋方法，制備3種密度的細胞懸液，即105、104、103／ml，稀釋方法：9份培養(yǎng)液＋1份細胞懸液，根據(jù)提供的移液器（50