實(shí)驗(yàn)一 大黃中游離蒽醌的提取分離及鑒定

實(shí)驗(yàn)一大黃中游離蒽醌的提取分離及鑒定大黃種類繁多，優(yōu)質(zhì)大黃是蓼科植物掌葉大黃（RheumPalmatum.L）、大黃R.officinaleBaill）及唐古特大黃（R.tanguticumMaxiimetRegll）的根莖及根。蒽醌類化合物在植物體內(nèi)主要以苷的形式存在，其中有大黃酸-葡萄糖苷；大黃素甲醚-葡萄糖苷；蘆薈大黃素-葡萄糖苷；大黃素-葡萄糖苷；大黃酸雙葡萄糖苷等。此外尚含鞣質(zhì)類成分如葡萄糖沒食子鞣質(zhì)，兒茶鞣質(zhì)、沒食子酸等。大黃中還含有屬于雙蒽酮的番瀉苷A及番瀉苷B。蒽苷內(nèi)服后有致瀉、清熱解毒作用，尤其是大黃酸葡萄糖苷有較強(qiáng)的致瀉作用。游離的羥基蒽醌如大黃酸、大黃素有明顯的抗菌活性。本品黃色針狀結(jié)晶（升華法），熔點(diǎn)321～322℃，330℃分解。幾乎不溶于水，溶于堿、乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚。UV本品黃色針狀結(jié)晶（升華法），熔點(diǎn)321～322℃，330℃分解。幾乎不溶于水，溶于堿、乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚。UVλMeOHMaxnm（ε）：229（36800），258（20100），435（11100），IRνeq\o(\s\up7(KBr),\s\do3(Max))cm-1：1701（羧基），1637（鰲合C＝O）。本品系橙黃色長結(jié)晶（丙酮），C15H10O本品系橙黃色長結(jié)晶（丙酮），C15H10O5，在有機(jī)溶媒的溶解度情況如下（25Cw／w）：四氯化碳0.01％；苯0.041％；三氯甲烷0.071％；乙醚0.14％，幾乎不溶于水，溶于乙醇及氫氧化鈉，碳酸鈉，氨水溶液中。13CNMR（DMSO-d6）：164.32（C-1），107.71（C-2），165.40（C-3），168.68（C-4），120.22（C-5），148.04（C-6），123.88（C-7），161.19（C-8），189.44（C-9），180.92（C-10），132.51（C-11），112.99（C-12），108.68（C-13），134.77（C-14），21.44（C-CH3）。磚紅色單斜狀結(jié)晶，溶點(diǎn)207～209℃。溶于苯、三氯甲烷、甲苯、乙醇、冰醋酸、不溶于乙醚和丙酮。UVλMeOH磚紅色單斜狀結(jié)晶，溶點(diǎn)207～209℃。溶于苯、三氯甲烷、甲苯、乙醇、冰醋酸、不溶于乙醚和丙酮。UVλMeOHmaxnm（logε）：266（4.45），255（4.22），267（4.25），288（4.22），440（4.02）IRνeq\o(\s\up5(KBr),\s\do2(max))cm-1：1625（C＝O，螯合），1668（C＝O，游離），1570（C＝O），3400（OH）。本品六方形或單斜形結(jié)晶（乙醇或苯），熔點(diǎn)196℃；升華，幾乎不溶于水，略溶于冷乙醇，易溶于沸乙醇，溶于苯、三氯甲烷、乙醚及丙酮等。IRveq\o(\s\up9(本品六方形或單斜形結(jié)晶（乙醇或苯），熔點(diǎn)196℃；升華，幾乎不溶于水，略溶于冷乙醇，易溶于沸乙醇，溶于苯、三氯甲烷、乙醚及丙酮等。IRveq\o(\s\up9(KBr),\s\do3(max))cm-l：1680，1630，1607；UVλMeoHmaxnm（logε）：224（4.73），257（4.48），277（4.18），287（4.18），429(4.14)；MSm／e（％）：254（100）。5．蘆薈大黃素（Aloeemodin）橙色針狀結(jié)晶（甲苯），熔點(diǎn)223～224℃橙色針狀結(jié)晶（甲苯），熔點(diǎn)223～224℃。易溶于熱乙醚。在乙醚及苯中呈黃色，氨水及硫酸中呈緋紅色。[目的要求]：1．掌握蒽醌及蒽醌衍生物的理化性質(zhì)及提取分離方法。2．掌握雙相酸水解的原理及操作。3．掌握液－液萃取的原理及操作。4．掌握制備薄層的原理及操作。5．掌握蒽醌類成分的各類檢識(shí)方法。[實(shí)驗(yàn)原理]（*此項(xiàng)內(nèi)容由學(xué)生自行預(yù)習(xí)、歸納并整理）[實(shí)驗(yàn)內(nèi)容]一、大黃中總游離蒽醌成分的提取分離1.雙相酸水解藥渣藥渣CHCl3提取液（總游離蒽醌）加20%H2SO4100ml，CHCl3250ml，回流2~4小時(shí)，濾過大黃粗粉50g2.pH梯度萃取法CHCl3提取液CHCl3提取液CHCl3：5%NaHCO3（1：0.3）萃取堿水層CHCl3層HCl酸化至pH2~3CHCl3：5%Na2CO3（1：0.65）萃取沉淀Ⅰ堿水層CHCl3層HCl酸化至pH2~3沉淀ⅡCHCl3：1%NaOH（1：1.2）萃取CHCl3層堿水層HCl酸化pH2~3沉淀Ⅲ取沉淀Ⅲ適量，加甲醇1ml使溶解，條狀點(diǎn)樣于硅膠G制備薄層板上，以石油醚－乙酸乙酯（8：2）為展開劑，展開，取出，晾干，定位，刮取色譜帶，用適量甲醇溶解，濾過，回收溶劑至干，依次得樣品Ⅲa、Ⅲb、Ⅲc。二、蒽醌類化合物的鑒定1．化學(xué)檢識(shí)（1）Brontrager’s反應(yīng)取樣品適量，加2％NaOH溶液數(shù)滴，觀察顏色變化。（2）醋酸鎂反應(yīng)取樣品適量，加乙醇數(shù)滴使溶解，滴加0.5％醋酸鎂乙醇溶液數(shù)滴，觀察顏色變化。（3）濃硫酸反應(yīng)取樣品適量，滴加濃硫酸，觀察顏色變化。2．薄層檢識(shí)吸附劑：硅膠G展開劑：石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（8：2）檢視：先在紫外光燈（365nm）下觀察，再用氨氣熏蒸后觀察。3．紫外光譜測(cè)定取樣品適量，加色譜甲醇使溶解，作為供試品溶液，測(cè)紫外吸收光譜圖。[實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng)]1．注意堿液濃度及萃取時(shí)的靜置時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。2．加HCl酸化時(shí)產(chǎn)生氣體，小心內(nèi)容物溢出。[思考題]1．PH梯度萃取法的原理是什么？適用哪些中藥化學(xué)成分的分離？2．根據(jù)大黃中所含五種羥基蒽醌的結(jié)構(gòu)，各游離蒽醌化合物的酸性及極性強(qiáng)弱應(yīng)如何排列？說明為什么它們可以分別被不同強(qiáng)度