流式細(xì)胞儀的構(gòu)造工作原理及數(shù)據(jù)分析課件

流式細(xì)胞儀的構(gòu)造、工作原理及數(shù)據(jù)分析東北師范大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心巴雪青流式細(xì)胞儀的構(gòu)造、工作原理及數(shù)據(jù)分析1流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometery,FCM）是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來(lái)的一種可以快速、準(zhǔn)確、客觀，可同時(shí)檢測(cè)單個(gè)微粒（通常是細(xì)胞）的多項(xiàng)特性，并加以定量的技術(shù)，并且可以對(duì)特定群體加以分選。流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometery,FCM）是202研究對(duì)象為生物顆粒，如各種細(xì)胞、微生物及人工合成微球等研究的微粒特性包括多種物理及生物學(xué)特征，并加以定量。研究對(duì)象為生物顆粒，如各種細(xì)胞、微生物及人工合成微球等3流式細(xì)胞儀是一種集激光技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、電子計(jì)算機(jī)以及細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)為一體的新型高科技儀器。流式細(xì)胞儀是一種集激光技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、電子4流式細(xì)胞儀的特點(diǎn)單個(gè)細(xì)胞或微粒分析同時(shí)多參數(shù)分析速度快：10000個(gè)細(xì)胞(微粒)/秒統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：提供細(xì)胞群體的均值和分布情況分選感興趣的細(xì)胞或微粒流式細(xì)胞儀的特點(diǎn)單個(gè)細(xì)胞或微粒分析5其結(jié)構(gòu)一般分為5部分：流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)；激光光源及光束形成系統(tǒng)；光學(xué)系統(tǒng)；信號(hào)檢測(cè)、存儲(chǔ)、顯示分析系統(tǒng)；細(xì)胞分選系統(tǒng)。其結(jié)構(gòu)一般分為5部分：流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)；激光光源及光束形6（一）流動(dòng)室與液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)（一）流動(dòng)室與液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)7

流動(dòng)室是儀器核心部件，被測(cè)樣品在此與激光相交。流動(dòng)室由石英玻璃鋼制成，并在石英玻璃中央開(kāi)一個(gè)孔徑為430μm×180μm的長(zhǎng)方形孔，供細(xì)胞單個(gè)流過(guò)，檢測(cè)區(qū)在該孔的中心，這種流動(dòng)室的光學(xué)特性良好，流速較慢，因而細(xì)胞受照時(shí)間長(zhǎng)，可收集的細(xì)胞信號(hào)光通量大，配上廣角收集透鏡，可獲得很高的檢測(cè)靈敏度和測(cè)量精度。流動(dòng)室是儀器核心部件，被測(cè)樣品在此與激光相交。流8流動(dòng)室內(nèi)充滿了鞘液，鞘液的作用是將樣品流環(huán)包，鞘液流是一種穩(wěn)定的液體流動(dòng)，鞘液以勻速運(yùn)動(dòng)流過(guò)流動(dòng)室，在整個(gè)系統(tǒng)運(yùn)行中流速是不變的，樣品流在鞘液的環(huán)包下形成流體力學(xué)聚焦，使樣品流不會(huì)脫離液流的軸線方向，并且保證每個(gè)細(xì)胞通過(guò)激光照射區(qū)的時(shí)間相等，從而得到準(zhǔn)確的細(xì)胞熒光信息。流動(dòng)室內(nèi)充滿了鞘液，鞘液的作用是將樣品流環(huán)包，鞘液流9流式細(xì)胞儀的流動(dòng)室和液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)流式細(xì)胞儀的流動(dòng)室和液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)10流式細(xì)胞儀的構(gòu)造工作原理及數(shù)據(jù)分析11(二)激光光源與光束形成系統(tǒng)(二)激光光源與光束形成系統(tǒng)12目前臺(tái)式機(jī)FCM，大多采用氬離子氣體激光器。激光(laser)是—種相干光源，它能提供單波長(zhǎng)、高強(qiáng)度及穩(wěn)定性高的光照，是細(xì)胞微弱熒光快速分析的理想光源。由于細(xì)胞快速流動(dòng)，每個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)光照區(qū)的時(shí)間僅為1μs左右，每個(gè)細(xì)胞所攜帶熒光物質(zhì)被激發(fā)出的熒光信號(hào)強(qiáng)弱，與被照射的時(shí)間和激發(fā)光的強(qiáng)度有關(guān)，因此細(xì)胞需要足夠的光照強(qiáng)度。

目前臺(tái)式機(jī)FCM，大多采用氬離子氣體激光器。激光(laser13激光光束在達(dá)到流動(dòng)室前，先經(jīng)過(guò)透鏡將其聚焦，形成幾何尺寸約為22μm×66μm，即短軸稍大于細(xì)胞直徑的光斑。這種橢圓形光斑激光能量分布屬正態(tài)分布，為保證樣品中細(xì)胞受到的光照強(qiáng)度一致，須將樣本流與激光束正交，且相交于激光能量分布峰值處。激光光束在達(dá)到流動(dòng)室前，先經(jīng)過(guò)透鏡將其聚焦，形成幾何尺寸約為14流式細(xì)胞儀的構(gòu)造工作原理及數(shù)據(jù)分析15(三)光學(xué)系統(tǒng)(三)光學(xué)系統(tǒng)16流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)

流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)17FCM的光學(xué)系統(tǒng)是由若干組透鏡、濾光片、小孔組成，主要光學(xué)原件是濾光片，主要分成3類：長(zhǎng)通濾片(long-passfilter，LP)、短通濾片(short-passfiltr，SP)及帶通濾片(band-passfilter，BP)。它們分別將不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)送到不同的電子探測(cè)器FCM的光學(xué)系統(tǒng)是由若干組透鏡、濾光片、小孔組成，18流式細(xì)胞儀的構(gòu)造工作原理及數(shù)據(jù)分析19流式細(xì)胞儀的構(gòu)造工作原理及數(shù)據(jù)分析20(四)信號(hào)檢測(cè)與分析系統(tǒng)(四)信號(hào)檢測(cè)與分析系統(tǒng)211．散射光信號(hào)：散射光分為前向角散射(forwardscatter，F(xiàn)SC)和側(cè)向角散射(sidescatter,SSC)，散射光不依賴任何細(xì)胞樣品的制備技術(shù)(如染色)，因此被稱為細(xì)胞的物理參數(shù)或稱固有參數(shù)。以上兩種信號(hào)都是來(lái)自激光的原光束，其波長(zhǎng)與激光的波長(zhǎng)相同。1．散射光信號(hào)：散射光分為前向角散射(forwardsca22前向角散射光（FSC,ForwardScatter） 細(xì)胞相對(duì)大小及其表面積側(cè)向角散射（SSC,SideScatter） 細(xì)胞粒度及細(xì)胞內(nèi)相對(duì)復(fù)雜性前向角散射光（FSC,ForwardScatter）23(1)前向角散射：前向角散射與被測(cè)細(xì)胞的大小有關(guān)，確切地說(shuō)，它與細(xì)胞直徑的平方值密切相關(guān)。通常在FCM應(yīng)用中，選取FSC作閾值，來(lái)排除樣品中的各種碎片及鞘液中的小顆粒，以避免對(duì)被測(cè)細(xì)胞的干擾。(1)前向角散射：前向角散射與被測(cè)細(xì)胞的大小有關(guān)，確切地說(shuō)，24(2)側(cè)向角散射：側(cè)向角散射是指與激光束正交90°方向的散射光信號(hào)，側(cè)向散射光對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，可提供有關(guān)細(xì)胞內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。(2)側(cè)向角散射：側(cè)向角散射是指與激光束正交90°方向的散射252．熒光信號(hào)

激光的作用原理

2．熒光信號(hào)激光的作用原理26(1)熒光信號(hào)的線性測(cè)量與對(duì)數(shù)測(cè)量

當(dāng)攜帶熒光素的細(xì)胞與激光正交時(shí)，受激發(fā)發(fā)出熒光，經(jīng)過(guò)濾光片分離不同波長(zhǎng)的光信號(hào)分別到達(dá)不同的光電倍增管(PMT)，PMT將光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)。電信號(hào)輸入到放大器放大，放大器分兩類：線性放大和對(duì)數(shù)放大。

(1)熒光信號(hào)的線性測(cè)量與對(duì)數(shù)測(cè)量當(dāng)攜帶熒光素的細(xì)胞與激光27細(xì)胞DNA含量、RNA含量、總蛋白質(zhì)含量等的測(cè)量一般選用線性放大測(cè)量。在細(xì)胞膜表面抗原等的檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞膜表面抗原的分布有時(shí)要相差幾十倍，甚至幾萬(wàn)倍。如用線性放大器，將無(wú)法在一張圖上清晰地將細(xì)胞陽(yáng)性群、陰性群同時(shí)顯示出來(lái)通常使用對(duì)數(shù)放大器，如果原來(lái)輸出是1，當(dāng)輸入增大到原來(lái)的10倍時(shí)，輸出為2；當(dāng)輸入增大到原來(lái)的100倍時(shí)，輸出為3等。

細(xì)胞DNA含量、RNA含量、總蛋白質(zhì)含量等的測(cè)量一般選用線性28(2)熒光信號(hào)的面積和寬度

所謂熒光信號(hào)的面積是采用對(duì)熒光光通量進(jìn)行積分測(cè)量，一般對(duì)DNA含量測(cè)量時(shí)，均采用面積(FL2－A)來(lái)計(jì)算。這是因?yàn)闊晒饷}沖的面積比熒光脈沖的高度更能準(zhǔn)確反映DNA的含量。熒光信號(hào)的寬度(如FL2－W)常用來(lái)區(qū)分雙聯(lián)體細(xì)胞(2)熒光信號(hào)的面積和寬度所謂熒光信號(hào)的面積是采用對(duì)熒光光29(3)光譜重疊的校正

使用熒光補(bǔ)償電路合理設(shè)置熒光信號(hào)的補(bǔ)償值。(3)光譜重疊的校正使用熒光補(bǔ)償電路30(五)FCM測(cè)量數(shù)據(jù)的的存儲(chǔ)、顯示和分析(五)FCM測(cè)量數(shù)據(jù)的的存儲(chǔ)、顯示和分析31流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)存儲(chǔ):LISTMODE數(shù)據(jù)顯示: 直方圖(Histogram) 二維點(diǎn)圖(DotPlot) 等高線圖(ContourPlot) 密度圖(Density) 三維圖（3DPlot）等流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)分析32單參數(shù)直方圖每一個(gè)細(xì)胞單參數(shù)的測(cè)量數(shù)據(jù)可整理成分布統(tǒng)計(jì)，以分布直方圖(distributionhistogram)來(lái)顯示。在圖中，橫坐標(biāo)表示熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度的值，其單位是道數(shù)，橫坐標(biāo)可以是線性的，也可以是對(duì)數(shù)的，縱坐標(biāo)一般是細(xì)胞數(shù)單參數(shù)直方圖每一個(gè)細(xì)胞單參數(shù)的測(cè)量數(shù)據(jù)可整理成分布統(tǒng)計(jì)，以33DNA含量直方圖和抗原表達(dá)直方圖

DNA含量直方圖和抗原表達(dá)直方圖34雙參數(shù)數(shù)據(jù)的顯示雙參數(shù)數(shù)據(jù)的顯示是用于表達(dá)來(lái)自同一細(xì)胞兩個(gè)參數(shù)與細(xì)胞數(shù)量的關(guān)系，常用的表達(dá)方法有二維點(diǎn)圖(dotplot)、等高線圖(contourplot)、二維密度圖(densityplot)。在二維圖中，x坐標(biāo)為某細(xì)胞一個(gè)參數(shù)的數(shù)值，而Y坐標(biāo)為該細(xì)胞另一參數(shù)的數(shù)值。從雙參數(shù)圖形中可以將各細(xì)胞亞群區(qū)分開(kāi)，同時(shí)可獲得細(xì)胞相關(guān)的重要信息。

雙參數(shù)數(shù)據(jù)的顯示雙參數(shù)數(shù)據(jù)的顯示是用于表達(dá)來(lái)自同一細(xì)胞兩個(gè)35外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖

（紅細(xì)胞溶解后）外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖

（紅細(xì)胞溶解后）36雙色熒光標(biāo)記細(xì)胞散點(diǎn)圖雙色熒光標(biāo)記細(xì)胞散點(diǎn)圖37等高圖和密度圖分析等高圖和密度圖分析38數(shù)據(jù)分析三維圖分析數(shù)據(jù)分析三維圖分析39流式細(xì)胞儀的科研應(yīng)用樹(shù)突細(xì)胞研究干細(xì)胞研究癌癥病人的多藥耐藥性細(xì)胞動(dòng)力學(xué)功能研究環(huán)境微生物分析流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究流式細(xì)胞儀的科研應(yīng)用樹(shù)突細(xì)胞研究40DNA細(xì)胞周期分析細(xì)胞周期G2MG0G1s02004006008001000G0G1sG2MDNA分析DNA含量細(xì)胞數(shù)量2N4N

DNA細(xì)胞周期分析細(xì)胞周期G2MG0G1s020040041腦栓塞病人血小板活化檢測(cè)ACD61-SSC設(shè)分析門B陰性對(duì)照C治療前PAC-I27.74%CD62P15.86%D溶栓后PAC-I9.13%CD62P4.12%

腦栓塞病人血小板活化檢測(cè)ACD61-SSC設(shè)分析門42細(xì)胞凋亡——Caspases-3細(xì)胞凋亡——Caspases-343謝謝謝謝44演講完畢，謝謝觀看！演講完畢，謝謝觀看！45流式細(xì)胞儀的構(gòu)造、工作原理及數(shù)據(jù)分析東北師范大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心巴雪青流式細(xì)胞儀的構(gòu)造、工作原理及數(shù)據(jù)分析46流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometery,FCM）是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來(lái)的一種可以快速、準(zhǔn)確、客觀，可同時(shí)檢測(cè)單個(gè)微粒（通常是細(xì)胞）的多項(xiàng)特性，并加以定量的技術(shù)，并且可以對(duì)特定群體加以分選。流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometery,FCM）是2047研究對(duì)象為生物顆粒，如各種細(xì)胞、微生物及人工合成微球等研究的微粒特性包括多種物理及生物學(xué)特征，并加以定量。研究對(duì)象為生物顆粒，如各種細(xì)胞、微生物及人工合成微球等48流式細(xì)胞儀是一種集激光技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、電子計(jì)算機(jī)以及細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)為一體的新型高科技儀器。流式細(xì)胞儀是一種集激光技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、電子49流式細(xì)胞儀的特點(diǎn)單個(gè)細(xì)胞或微粒分析同時(shí)多參數(shù)分析速度快：10000個(gè)細(xì)胞(微粒)/秒統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：提供細(xì)胞群體的均值和分布情況分選感興趣的細(xì)胞或微粒流式細(xì)胞儀的特點(diǎn)單個(gè)細(xì)胞或微粒分析50其結(jié)構(gòu)一般分為5部分：流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)；激光光源及光束形成系統(tǒng)；光學(xué)系統(tǒng)；信號(hào)檢測(cè)、存儲(chǔ)、顯示分析系統(tǒng)；細(xì)胞分選系統(tǒng)。其結(jié)構(gòu)一般分為5部分：流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)；激光光源及光束形51（一）流動(dòng)室與液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)（一）流動(dòng)室與液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)52

流動(dòng)室是儀器核心部件，被測(cè)樣品在此與激光相交。流動(dòng)室由石英玻璃鋼制成，并在石英玻璃中央開(kāi)一個(gè)孔徑為430μm×180μm的長(zhǎng)方形孔，供細(xì)胞單個(gè)流過(guò)，檢測(cè)區(qū)在該孔的中心，這種流動(dòng)室的光學(xué)特性良好，流速較慢，因而細(xì)胞受照時(shí)間長(zhǎng)，可收集的細(xì)胞信號(hào)光通量大，配上廣角收集透鏡，可獲得很高的檢測(cè)靈敏度和測(cè)量精度。流動(dòng)室是儀器核心部件，被測(cè)樣品在此與激光相交。流53流動(dòng)室內(nèi)充滿了鞘液，鞘液的作用是將樣品流環(huán)包，鞘液流是一種穩(wěn)定的液體流動(dòng)，鞘液以勻速運(yùn)動(dòng)流過(guò)流動(dòng)室，在整個(gè)系統(tǒng)運(yùn)行中流速是不變的，樣品流在鞘液的環(huán)包下形成流體力學(xué)聚焦，使樣品流不會(huì)脫離液流的軸線方向，并且保證每個(gè)細(xì)胞通過(guò)激光照射區(qū)的時(shí)間相等，從而得到準(zhǔn)確的細(xì)胞熒光信息。流動(dòng)室內(nèi)充滿了鞘液，鞘液的作用是將樣品流環(huán)包，鞘液流54流式細(xì)胞儀的流動(dòng)室和液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)流式細(xì)胞儀的流動(dòng)室和液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)55流式細(xì)胞儀的構(gòu)造工作原理及數(shù)據(jù)分析56(二)激光光源與光束形成系統(tǒng)(二)激光光源與光束形成系統(tǒng)57目前臺(tái)式機(jī)FCM，大多采用氬離子氣體激光器。激光(laser)是—種相干光源，它能提供單波長(zhǎng)、高強(qiáng)度及穩(wěn)定性高的光照，是細(xì)胞微弱熒光快速分析的理想光源。由于細(xì)胞快速流動(dòng)，每個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)光照區(qū)的時(shí)間僅為1μs左右，每個(gè)細(xì)胞所攜帶熒光物質(zhì)被激發(fā)出的熒光信號(hào)強(qiáng)弱，與被照射的時(shí)間和激發(fā)光的強(qiáng)度有關(guān)，因此細(xì)胞需要足夠的光照強(qiáng)度。

目前臺(tái)式機(jī)FCM，大多采用氬離子氣體激光器。激光(laser58激光光束在達(dá)到流動(dòng)室前，先經(jīng)過(guò)透鏡將其聚焦，形成幾何尺寸約為22μm×66μm，即短軸稍大于細(xì)胞直徑的光斑。這種橢圓形光斑激光能量分布屬正態(tài)分布，為保證樣品中細(xì)胞受到的光照強(qiáng)度一致，須將樣本流與激光束正交，且相交于激光能量分布峰值處。激光光束在達(dá)到流動(dòng)室前，先經(jīng)過(guò)透鏡將其聚焦，形成幾何尺寸約為59流式細(xì)胞儀的構(gòu)造工作原理及數(shù)據(jù)分析60(三)光學(xué)系統(tǒng)(三)光學(xué)系統(tǒng)61流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)

流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)62FCM的光學(xué)系統(tǒng)是由若干組透鏡、濾光片、小孔組成，主要光學(xué)原件是濾光片，主要分成3類：長(zhǎng)通濾片(long-passfilter，LP)、短通濾片(short-passfiltr，SP)及帶通濾片(band-passfilter，BP)。它們分別將不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)送到不同的電子探測(cè)器FCM的光學(xué)系統(tǒng)是由若干組透鏡、濾光片、小孔組成，63流式細(xì)胞儀的構(gòu)造工作原理及數(shù)據(jù)分析64流式細(xì)胞儀的構(gòu)造工作原理及數(shù)據(jù)分析65(四)信號(hào)檢測(cè)與分析系統(tǒng)(四)信號(hào)檢測(cè)與分析系統(tǒng)661．散射光信號(hào)：散射光分為前向角散射(forwardscatter，F(xiàn)SC)和側(cè)向角散射(sidescatter,SSC)，散射光不依賴任何細(xì)胞樣品的制備技術(shù)(如染色)，因此被稱為細(xì)胞的物理參數(shù)或稱固有參數(shù)。以上兩種信號(hào)都是來(lái)自激光的原光束，其波長(zhǎng)與激光的波長(zhǎng)相同。1．散射光信號(hào)：散射光分為前向角散射(forwardsca67前向角散射光（FSC,ForwardScatter） 細(xì)胞相對(duì)大小及其表面積側(cè)向角散射（SSC,SideScatter） 細(xì)胞粒度及細(xì)胞內(nèi)相對(duì)復(fù)雜性前向角散射光（FSC,ForwardScatter）68(1)前向角散射：前向角散射與被測(cè)細(xì)胞的大小有關(guān)，確切地說(shuō)，它與細(xì)胞直徑的平方值密切相關(guān)。通常在FCM應(yīng)用中，選取FSC作閾值，來(lái)排除樣品中的各種碎片及鞘液中的小顆粒，以避免對(duì)被測(cè)細(xì)胞的干擾。(1)前向角散射：前向角散射與被測(cè)細(xì)胞的大小有關(guān)，確切地說(shuō)，69(2)側(cè)向角散射：側(cè)向角散射是指與激光束正交90°方向的散射光信號(hào)，側(cè)向散射光對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，可提供有關(guān)細(xì)胞內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。(2)側(cè)向角散射：側(cè)向角散射是指與激光束正交90°方向的散射702．熒光信號(hào)

激光的作用原理

2．熒光信號(hào)激光的作用原理71(1)熒光信號(hào)的線性測(cè)量與對(duì)數(shù)測(cè)量

當(dāng)攜帶熒光素的細(xì)胞與激光正交時(shí)，受激發(fā)發(fā)出熒光，經(jīng)過(guò)濾光片分離不同波長(zhǎng)的光信號(hào)分別到達(dá)不同的光電倍增管(PMT)，PMT將光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)。電信號(hào)輸入到放大器放大，放大器分兩類：線性放大和對(duì)數(shù)放大。

(1)熒光信號(hào)的線性測(cè)量與對(duì)數(shù)測(cè)量當(dāng)攜帶熒光素的細(xì)胞與激光72細(xì)胞DNA含量、RNA含量、總蛋白質(zhì)含量等的測(cè)量一般選用線性放大測(cè)量。在細(xì)胞膜表面抗原等的檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞膜表面抗原的分布有時(shí)要相差幾十倍，甚至幾萬(wàn)倍。如用線性放大器，將無(wú)法在一張圖上清晰地將細(xì)胞陽(yáng)性群、陰性群同時(shí)顯示出來(lái)通常使用對(duì)數(shù)放大器，如果原來(lái)輸出是1，當(dāng)輸入增大到原來(lái)的10倍時(shí)，輸出為2；當(dāng)輸入增大到原來(lái)的100倍時(shí)，輸出為3等。

細(xì)胞DNA含量、RNA含量、總蛋白質(zhì)含量等的測(cè)量一般選用線性73(2)熒光信號(hào)的面積和寬度

所謂熒光信號(hào)的面積是采用對(duì)熒光光通量進(jìn)行積分測(cè)量，一般對(duì)DNA含量測(cè)量時(shí)，均采用面積(FL2－A)來(lái)計(jì)算。這是因?yàn)闊晒饷}沖的面積比熒光脈沖的高度更能準(zhǔn)確反映DNA的含量。熒光信號(hào)的寬度(如FL2－W)常用來(lái)區(qū)分雙聯(lián)體細(xì)胞(2)熒光信號(hào)的面積和寬度所謂熒光信號(hào)的面積是采用對(duì)熒光光74(3)光譜重疊的校正

使用熒光補(bǔ)償電路合理設(shè)置熒光信號(hào)的補(bǔ)償值。(3)光譜重疊的校正使用熒光補(bǔ)償電路75(五)FCM測(cè)量數(shù)據(jù)的的存儲(chǔ)、顯示和分析(五)FCM測(cè)量數(shù)據(jù)的的存儲(chǔ)、顯示和分析76流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)存儲(chǔ):LISTMODE數(shù)據(jù)顯示: 直方圖(Histogram) 二維點(diǎn)圖(DotPlot) 等高線圖(ContourPlot) 密度圖(Density) 三維圖（3DPlot）等流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)分析77單參數(shù)直方圖每一個(gè)細(xì)胞單參數(shù)的測(cè)量數(shù)據(jù)可整理成分布統(tǒng)計(jì)，以分布直方圖(distributionhistogram)來(lái)顯示。在圖中，橫坐標(biāo)表示熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度的值，其單位是道數(shù)，橫坐標(biāo)可以是線性的，也可以是對(duì)數(shù)的，縱坐標(biāo)一般是細(xì)胞數(shù)單參數(shù)直方圖每一個(gè)細(xì)胞單參數(shù)的測(cè)量數(shù)據(jù)可整理成分布統(tǒng)計(jì)，以78