抗體醫(yī)學(xué)知識(shí)課件

第一節(jié)抗體的結(jié)構(gòu)與功能一、抗體概念與分布1.抗體（Antibody，Ab）是機(jī)體B細(xì)胞在抗原刺激下產(chǎn)生的免疫球蛋白。2.免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）指具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白。區(qū)別：

Ab都是Ig，Ig不一定是Ab。第一節(jié)抗體的結(jié)構(gòu)與功能一、抗體概念與分布13.抗體分布1體液抗體2親細(xì)胞抗體(體液,尤其是血清中)(細(xì)胞表面)3.抗體分布12(體液,尤其是血清中)(細(xì)胞表面)2二、抗體的基本結(jié)構(gòu)結(jié)合抗原之前結(jié)合抗原之后TY結(jié)合抗原之前結(jié)合抗原之后TY3二、抗體的基本結(jié)構(gòu)二、抗體的基本結(jié)構(gòu)4V區(qū)內(nèi)氨基酸殘基組成和排列順序極易變化區(qū)為高變區(qū)（CDR區(qū)）。3個(gè)高變區(qū)即可組成抗原結(jié)合區(qū)。高變區(qū)V區(qū)內(nèi)氨基酸殘基組成和排列順序極易變化區(qū)為高變區(qū)高變區(qū)5抗體醫(yī)學(xué)知識(shí)課件6三、抗體的功能區(qū)Ig多肽鏈折疊后由二硫鍵連接成的球狀結(jié)構(gòu)為其功能區(qū)。VH-VL功能區(qū)---結(jié)合抗原；CH1-CL功能區(qū)---遺傳標(biāo)志區(qū)CH2功能區(qū)---結(jié)合補(bǔ)體；CH3功能區(qū)---結(jié)合某些細(xì)胞三、抗體的功能區(qū)Ig多肽鏈折疊后由二硫鍵連接成的球狀結(jié)構(gòu)為其7第二節(jié)抗體的分類及其生物學(xué)功能抗體的類抗體的亞類抗體的型抗體的亞型

korl一、抗體的類別重鏈抗原性與分子量鉸鏈區(qū)組成和二硫鍵數(shù)目輕鏈抗原性氫鏈個(gè)別氨基酸第二節(jié)抗體的分類及其生物學(xué)功能抗體的類抗體的亞類抗體的型抗8抗體的類γ鏈α鏈μ鏈δ鏈ε鏈抗體的類γ鏈α鏈μ鏈δ鏈ε鏈9抗體的亞類抗體的亞類10二、各類抗體的特性與功能1.IgG（1）單體，血清中含量最高，半衰期最長(zhǎng)；（2）是抗感染主要抗體，發(fā)揮抗細(xì)菌、抗毒素、抗病毒

作用。（3）唯一能通過胎盤的抗體，在新生兒抗感染中起作用。二、各類抗體的特性與功能1.IgG11

J鏈膜型IgM,單體，存在B細(xì)胞表面，構(gòu)成BCR。

B細(xì)胞膜BCR分泌型IgM(巨球蛋白),

五聚體，分子量最大，存在于血流中。免疫應(yīng)答中最先出現(xiàn)的抗體，早期抗感染及早期診斷指標(biāo)。2.IgMJ鏈膜型IgM,單體，存在B細(xì)胞表面，構(gòu)成BCR。123.IgA血清型IgA---單體，分布于血清，主要起免疫調(diào)節(jié)作用

分泌型IgA(SIgA）---二聚體，分布于外分泌液中，可經(jīng)初乳傳給胎兒。

唾液

眼淚、乳汁

鼻黏膜分泌液

支氣管分泌液

生殖道分泌物

前列腺液

小腸黏膜分泌液

SIgA是抗黏膜感染的重要抗體3.IgA唾液SIgA是抗黏膜感染的重要抗體134.IgE（1）單體，最晚產(chǎn)生，主要存在于肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面，又稱為親細(xì)胞抗體。（2）介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)和抗寄生蟲感染。4.IgE145.IgD（1）血清IgD---單體,血清中含量極低，功能不清。（2）膜型IgD（mIgD）---單體,表達(dá)于成熟B細(xì)胞表面，與

B細(xì)胞成熟有關(guān)。

5.IgD15第三節(jié)抗體的基因及表達(dá)Ig基因庫(kù)V基因D基因J基因C基因基因定位染色體H鏈基因庫(kù)（IGH）96（65）279（6）11（9）14κ鏈基因庫(kù)(IGK)90（60）0512λ鏈基因庫(kù)(IGL)60（30）077（4）22一、人Ig基因庫(kù)及基因結(jié)構(gòu)第三節(jié)抗體的基因及表達(dá)Ig基因庫(kù)V基因D基因J基因C基因基16抗體基因結(jié)構(gòu)V基因片段D基因片段可變區(qū)高變區(qū)C基因片段J基因片段連接區(qū)恒定區(qū)抗體基因V基因片段D基因片段可變區(qū)高變區(qū)C基因片段J基因片段17二、抗體的基因重排與表達(dá)二、抗體的基因重排與表達(dá)18三、抗體多樣性（104）的機(jī)理（1）抗體基因庫(kù)存儲(chǔ)大量基因片段；（2）V-J和V-D-J重排時(shí)，基因片段進(jìn)行隨機(jī)組合；（3）VDJ連接過程中的核苷酸可能發(fā)生突變、缺失或插入；（4）L鏈H鏈之間隨機(jī)配對(duì)組合；（5）抗原刺激后，B細(xì)胞中高頻基因突變。三、抗體多樣性（104）的機(jī)理19第四節(jié)人工制備抗體根據(jù)制備原理不同分：1多克隆抗體2單克隆抗體PolyclonalantibodyPcAbMonoclonalantibodyMcAb第四節(jié)人工制備抗體根據(jù)制備原理不同分：12Polyclon20一、PcAb概念抗原免疫動(dòng)物后，由多個(gè)不同Ｂ細(xì)胞克隆產(chǎn)生的針對(duì)多個(gè)不同表位的異質(zhì)性抗體。B1B2B3B4

Ag2341Ab1Ab2Ab3Ab4一、PcAb概念B1B2B3B4Ag2341Ab1Ab21二、PcAb的制備---采用免疫動(dòng)物法免疫原制備

免疫動(dòng)物（3次）

測(cè)定抗體水平

動(dòng)物采血分離血清

-20℃凍存12341231234B細(xì)胞二、PcAb的制備---采用免疫動(dòng)物法免疫原制備1234122免疫原制備即將抗原與佐劑進(jìn)行充分研磨乳化。免疫佐劑是增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原免疫應(yīng)答的物質(zhì)。常用的有氫氧化鋁、蜂膠、弗氏佐劑等。免疫原制備即將抗原與佐劑進(jìn)行充分研磨乳化。免疫佐劑是增強(qiáng)機(jī)23Rabbit/2kgBALB/Cmouse/20gRat/200gGuineapigSheep、Goat、Horse免疫動(dòng)物的選擇Rabbit/2kg免疫動(dòng)物的選擇241.免疫劑量：100-200ug/只2.免疫間隔時(shí)間:第一次和第二次間隔10-20d，三次及以后間隔7-10d3.免疫途徑:皮內(nèi)、皮下、肌肉、腹腔、腋窩淋巴結(jié)免疫程序1.免疫劑量：100-200ug/只免疫程序25三、McAb概念由單個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的針對(duì)單一抗原表位的同質(zhì)性抗體。三、McAb概念26四、單克隆抗體與多克隆抗體特性比較

PcAb

McAb

特異性專一性

免疫動(dòng)物獲得淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)獲得產(chǎn)量有限產(chǎn)量無限用于一般免疫診斷鑒別診斷、制備生物導(dǎo)彈治療及免疫治療腫瘤、抗原結(jié)構(gòu)分析

四、單克隆抗體與多克隆抗體特性比較27五、McAb的制備1975年Kohler和Milstein創(chuàng)立了淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)用于生產(chǎn)McAb。原理:是B細(xì)胞是短壽細(xì)胞，在體外不能無限制增殖；骨髓瘤細(xì)胞可在體外無限增殖，但不能產(chǎn)生Ab。將免疫后具有分泌抗體能力的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成B細(xì)胞雜交瘤，B細(xì)胞雜交瘤經(jīng)克隆后成為單細(xì)胞克隆，則該克隆既可無限生長(zhǎng)又可分泌McAb。五、McAb的制備1975年Kohler和Milstein創(chuàng)28抗體醫(yī)學(xué)知識(shí)課件29

免疫BALB/C小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞（缺乏TK，HGPRT）

收集免疫后B淋巴細(xì)胞收集骨髓瘤細(xì)胞

PEG細(xì)胞融合

HAT選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞篩選分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞

單克隆化培養(yǎng)（有限稀釋法）

獲得穩(wěn)定分泌McAb的雜交瘤細(xì)胞株

McAb的生產(chǎn)（雜交瘤培養(yǎng)上清或誘生腹水）

McAb

純化及鑒定單克隆抗體的制備程序用已知抗原檢測(cè)免疫BALB/C小鼠培養(yǎng)30抗體醫(yī)學(xué)知識(shí)課件31液體石蠟液體石蠟32HAT培養(yǎng)基的選擇原理HAT選擇培養(yǎng)基中含有次黃嘌呤H、氨甲喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。HAT培養(yǎng)基的選擇原理HAT選擇培養(yǎng)基中含有次黃嘌呤H、氨甲33

1.名詞解釋：?jiǎn)慰寺】贵w，超變區(qū)

2.畫出抗體的基本結(jié)構(gòu)、功能區(qū)和消化片段，并寫出各功能區(qū)的作用。

3.Ig的類是如何劃分的?各類Ig有何功能?4.抗體的多樣性是如何形成的？思考題1.名詞解釋：?jiǎn)慰寺】贵w，超變區(qū)思考題34第一節(jié)抗體的結(jié)構(gòu)與功能一、抗體概念與分布1.抗體（Antibody，Ab）是機(jī)體B細(xì)胞在抗原刺激下產(chǎn)生的免疫球蛋白。2.免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）指具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白。區(qū)別：

Ab都是Ig，Ig不一定是Ab。第一節(jié)抗體的結(jié)構(gòu)與功能一、抗體概念與分布353.抗體分布1體液抗體2親細(xì)胞抗體(體液,尤其是血清中)(細(xì)胞表面)3.抗體分布12(體液,尤其是血清中)(細(xì)胞表面)36二、抗體的基本結(jié)構(gòu)結(jié)合抗原之前結(jié)合抗原之后TY結(jié)合抗原之前結(jié)合抗原之后TY37二、抗體的基本結(jié)構(gòu)二、抗體的基本結(jié)構(gòu)38V區(qū)內(nèi)氨基酸殘基組成和排列順序極易變化區(qū)為高變區(qū)（CDR區(qū)）。3個(gè)高變區(qū)即可組成抗原結(jié)合區(qū)。高變區(qū)V區(qū)內(nèi)氨基酸殘基組成和排列順序極易變化區(qū)為高變區(qū)高變區(qū)39抗體醫(yī)學(xué)知識(shí)課件40三、抗體的功能區(qū)Ig多肽鏈折疊后由二硫鍵連接成的球狀結(jié)構(gòu)為其功能區(qū)。VH-VL功能區(qū)---結(jié)合抗原；CH1-CL功能區(qū)---遺傳標(biāo)志區(qū)CH2功能區(qū)---結(jié)合補(bǔ)體；CH3功能區(qū)---結(jié)合某些細(xì)胞三、抗體的功能區(qū)Ig多肽鏈折疊后由二硫鍵連接成的球狀結(jié)構(gòu)為其41第二節(jié)抗體的分類及其生物學(xué)功能抗體的類抗體的亞類抗體的型抗體的亞型

korl一、抗體的類別重鏈抗原性與分子量鉸鏈區(qū)組成和二硫鍵數(shù)目輕鏈抗原性氫鏈個(gè)別氨基酸第二節(jié)抗體的分類及其生物學(xué)功能抗體的類抗體的亞類抗體的型抗42抗體的類γ鏈α鏈μ鏈δ鏈ε鏈抗體的類γ鏈α鏈μ鏈δ鏈ε鏈43抗體的亞類抗體的亞類44二、各類抗體的特性與功能1.IgG（1）單體，血清中含量最高，半衰期最長(zhǎng)；（2）是抗感染主要抗體，發(fā)揮抗細(xì)菌、抗毒素、抗病毒

作用。（3）唯一能通過胎盤的抗體，在新生兒抗感染中起作用。二、各類抗體的特性與功能1.IgG45

J鏈膜型IgM,單體，存在B細(xì)胞表面，構(gòu)成BCR。

B細(xì)胞膜BCR分泌型IgM(巨球蛋白),

五聚體，分子量最大，存在于血流中。免疫應(yīng)答中最先出現(xiàn)的抗體，早期抗感染及早期診斷指標(biāo)。2.IgMJ鏈膜型IgM,單體，存在B細(xì)胞表面，構(gòu)成BCR。463.IgA血清型IgA---單體，分布于血清，主要起免疫調(diào)節(jié)作用

分泌型IgA(SIgA）---二聚體，分布于外分泌液中，可經(jīng)初乳傳給胎兒。

唾液

眼淚、乳汁

鼻黏膜分泌液

支氣管分泌液

生殖道分泌物

前列腺液

小腸黏膜分泌液

SIgA是抗黏膜感染的重要抗體3.IgA唾液SIgA是抗黏膜感染的重要抗體474.IgE（1）單體，最晚產(chǎn)生，主要存在于肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面，又稱為親細(xì)胞抗體。（2）介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)和抗寄生蟲感染。4.IgE485.IgD（1）血清IgD---單體,血清中含量極低，功能不清。（2）膜型IgD（mIgD）---單體,表達(dá)于成熟B細(xì)胞表面，與

B細(xì)胞成熟有關(guān)。

5.IgD49第三節(jié)抗體的基因及表達(dá)Ig基因庫(kù)V基因D基因J基因C基因基因定位染色體H鏈基因庫(kù)（IGH）96（65）279（6）11（9）14κ鏈基因庫(kù)(IGK)90（60）0512λ鏈基因庫(kù)(IGL)60（30）077（4）22一、人Ig基因庫(kù)及基因結(jié)構(gòu)第三節(jié)抗體的基因及表達(dá)Ig基因庫(kù)V基因D基因J基因C基因基50抗體基因結(jié)構(gòu)V基因片段D基因片段可變區(qū)高變區(qū)C基因片段J基因片段連接區(qū)恒定區(qū)抗體基因V基因片段D基因片段可變區(qū)高變區(qū)C基因片段J基因片段51二、抗體的基因重排與表達(dá)二、抗體的基因重排與表達(dá)52三、抗體多樣性（104）的機(jī)理（1）抗體基因庫(kù)存儲(chǔ)大量基因片段；（2）V-J和V-D-J重排時(shí)，基因片段進(jìn)行隨機(jī)組合；（3）VDJ連接過程中的核苷酸可能發(fā)生突變、缺失或插入；（4）L鏈H鏈之間隨機(jī)配對(duì)組合；（5）抗原刺激后，B細(xì)胞中高頻基因突變。三、抗體多樣性（104）的機(jī)理53第四節(jié)人工制備抗體根據(jù)制備原理不同分：1多克隆抗體2單克隆抗體PolyclonalantibodyPcAbMonoclonalantibodyMcAb第四節(jié)人工制備抗體根據(jù)制備原理不同分：12Polyclon54一、PcAb概念抗原免疫動(dòng)物后，由多個(gè)不同Ｂ細(xì)胞克隆產(chǎn)生的針對(duì)多個(gè)不同表位的異質(zhì)性抗體。B1B2B3B4

Ag2341Ab1Ab2Ab3Ab4一、PcAb概念B1B2B3B4Ag2341Ab1Ab55二、PcAb的制備---采用免疫動(dòng)物法免疫原制備

免疫動(dòng)物（3次）

測(cè)定抗體水平

動(dòng)物采血分離血清

-20℃凍存12341231234B細(xì)胞二、PcAb的制備---采用免疫動(dòng)物法免疫原制備1234156免疫原制備即將抗原與佐劑進(jìn)行充分研磨乳化。免疫佐劑是增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原免疫應(yīng)答的物質(zhì)。常用的有氫氧化鋁、蜂膠、弗氏佐劑等。免疫原制備即將抗原與佐劑進(jìn)行充分研磨乳化。免疫佐劑是增強(qiáng)機(jī)57Rabbit/2kgBALB/Cmouse/20gRat/200gGuineapigSheep、Goat、Horse免疫動(dòng)物的選擇Rabbit/2kg免疫動(dòng)物的選擇581.免疫劑量：100-200ug/只2.免疫間隔時(shí)間:第一次和第二次間隔10-20d，三次及以后間隔7-10d3.免疫途徑:皮內(nèi)、皮下、肌肉、腹腔、腋窩淋巴結(jié)免疫程序1.免疫劑量：100-200ug/只免疫程序59三、McAb概念由單個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的針對(duì)單一抗原表位的同質(zhì)性抗體。三、McAb概念60四、單克隆抗體與多克隆抗體特性比較

PcAb

McAb

特異性專一性

免疫動(dòng)物獲得淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)獲得產(chǎn)量有限產(chǎn)量無限用于一般免疫診斷鑒別診斷、制備生物導(dǎo)彈治療及免疫治療腫瘤、抗原結(jié)構(gòu)分析

四、單克隆抗體與多克隆抗體特性比較61五、McAb的制備1975年Kohler和Milstein創(chuàng)立了淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)用于生產(chǎn)McAb。原理:是B細(xì)胞是短壽細(xì)胞，在體外不能無限制增殖；骨髓瘤細(xì)胞可在體外無限增殖，但不能產(chǎn)生Ab。將免疫后具有分泌抗體能力的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成B細(xì)胞雜交瘤，B細(xì)胞雜交瘤經(jīng)克隆后成為單細(xì)胞克隆，則該克隆既可無限生長(zhǎng)又可分泌McAb。五、McAb的制備1975年Kohler和Milstein創(chuàng)62抗體醫(yī)學(xué)知識(shí)課件63

免疫BALB/C小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞（缺乏TK，HGPRT）

收集免疫后B淋巴細(xì)胞收集骨髓瘤細(xì)胞