第5章-表達(dá)載體課件

西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程1一、大腸桿菌表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)原核表達(dá)載體：適用于在原核細(xì)胞中表達(dá)外源基因的載體。均是質(zhì)粒載體，首先必然滿足克隆載體的基本要求，然后增加表達(dá)元件。1、表達(dá)元件(expressionelements)：

1）啟動(dòng)子(promoter)：三類，即lac啟動(dòng)子、trp啟動(dòng)子和它們的雜合啟動(dòng)子tac或trc，都受IPTG誘導(dǎo)。T7噬菌體啟動(dòng)子λ噬菌體的PL啟動(dòng)子。第一節(jié)大腸桿菌表達(dá)載體西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程1一、大腸桿菌表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)1西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程22）終止子：依賴于ρ因子或不依賴于ρ因子（遇莖環(huán)結(jié)構(gòu)而終止）。3）核糖體結(jié)合位點(diǎn)(ribosomebindingside,RBS)：Shine-Dalgarno(SD)序列，ATG與RBS之間的距離很重要，一般3-11bp。2、表達(dá)形式完整單一蛋白：?jiǎn)我换虻木幋a區(qū)表達(dá)。融合蛋白(fusionprotein)：多個(gè)基因的編碼區(qū)的串聯(lián)體，但構(gòu)成一個(gè)整體的單一ORF，如果融合標(biāo)簽蛋白有利于蛋白的定向、純化，如果融合多個(gè)目標(biāo)蛋白，則類似于直接表達(dá)了一個(gè)多酶復(fù)合體一樣，可減少載體構(gòu)建難度，而且可以偶連兩個(gè)或多個(gè)相關(guān)基因的表達(dá)。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程22）終止子：依賴于ρ因子或2西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程33、表達(dá)的控制誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)：IPTG防滲漏表達(dá)系統(tǒng)：lacIqPL啟動(dòng)子受cⅠ的調(diào)控，低溫(30℃)下阻抑轉(zhuǎn)錄，高溫(40-45℃)下解除抑制。二、利用T7噬菌體啟動(dòng)子的表達(dá)載體pET系列，表達(dá)能力強(qiáng)，可控性好，只受T7噬菌體RNA聚合酶識(shí)別，不受大腸桿菌RNA聚合酶識(shí)別，可用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程33、表達(dá)的控制3西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程4非融合型表達(dá)載體

主要元件：強(qiáng)啟動(dòng)子、SD、起始密碼子ATG、萬(wàn)能終止密碼子。PSDForeignDNA非融合型表達(dá)載體非融合基因西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程4非融合型表達(dá)載體PSDF4西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程5非融合型表達(dá)載體----pPL-LamdaPL啟動(dòng)子---溫度誘導(dǎo)插入位點(diǎn)--HpaI西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程5非融合型表達(dá)載體----p5西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程6三、表達(dá)融合蛋白的表達(dá)載體1、GST(glutahioneS-transferase,谷胱苷肽S-轉(zhuǎn)移酶)表達(dá)載體：如Amershamm公司的pGEX系列，其GST來(lái)自于血吸早蟲(chóng)，融合蛋白下保持酶學(xué)活性，對(duì)谷胱苷肽有很強(qiáng)的結(jié)合能力，融合蛋白純化出來(lái)后用凝血蛋白酶切割可得到純的目的蛋白。2、組氨酸標(biāo)簽表達(dá)載體：如Novagen公司的pET系列，可在目標(biāo)蛋白的N-端或C-端加上6個(gè)組氨酸的標(biāo)簽和Xa因子酶工位點(diǎn)，能與鎳等二價(jià)金屬離子結(jié)合，純化目的蛋白，用Xa因子處理可得到純的目的蛋白。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程6三、表達(dá)融合蛋白的表達(dá)載體6西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程73、內(nèi)含肽表達(dá)載體：如NEB公司的Impact-Twin系統(tǒng)，將目的蛋白放在兩個(gè)可自裂解的內(nèi)含肽(intein)中間，在得到融合蛋白以后不通過(guò)蛋白酶消解、只需要調(diào)節(jié)pH值等條件就將標(biāo)簽蛋白切除。4、分泌表達(dá)載體：產(chǎn)物可跨膜分泌至胞周間隙，可避免受細(xì)胞內(nèi)蛋白酶的降解，或使其正確折疊，或去除N-端甲硫氨酸，以維護(hù)活性。信號(hào)肽(signalpeptide)有堿性磷酸酶信號(hào)肽、蛋白質(zhì)A信號(hào)肽（如Amersham公司的pEZZ18系統(tǒng)）。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程73、內(nèi)含肽表達(dá)載體：如NE7西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程8

融合型表達(dá)載體PSDForeignDNA融合型表達(dá)載體融合基因西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程8融合型表達(dá)載體PS8西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程9技術(shù)關(guān)鍵：克隆基因可插入標(biāo)簽肽序列的3’或5’端，但必須維持正確的ORF。選擇合適酶切位點(diǎn)加人工合成的DNA接頭構(gòu)建位相載體西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程9技術(shù)關(guān)鍵：克隆基因可插入標(biāo)9西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程10----ATG----AACCTGGAATTCCTAGGT-------TAC-----TTGGACCTTAAGGATCCA---EcoRIBamHIAATCGGAAGAATTCAGACCTAGGTTTAGCCTTCTTAAGTCTGGCTCCA載體部分序列DNA序列西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程10----ATG----10西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程11位相載體----含有3種讀碼框的系列載體西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程11位相載體----含有3種11西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程12優(yōu)點(diǎn)：表達(dá)效率高產(chǎn)物穩(wěn)定

易鑒定：融合蛋白分子量大，電泳可鑒定易純化：利用融合原核多肽的特性西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程12優(yōu)點(diǎn)：12西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程13Ptac：IPTG誘導(dǎo)GST融合蛋白—直接純化產(chǎn)物，切割方便：

pGEX-1T—凝血酶

pGEX-2T---凝血酶

pGEX-3T---X因子位相載體融合型載體----pGEX系列西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程13Ptac：IPTG誘導(dǎo)融13西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程14分泌型融合表達(dá)載體----pEZZ18西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程14分泌型融合表達(dá)載體---14西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程15分泌型表達(dá)載體----pINIII-ompA1西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程15分泌型表達(dá)載體----p15西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程16四、表達(dá)產(chǎn)物的純化1、包涵體(inclusionbody)的純化：許多情況下表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)形成不溶的顆粒狀包涵體，可通過(guò)機(jī)械法、凍融法、超聲波處理等破碎細(xì)胞，離心收集包涵體，洗滌去除雜蛋白，用鹽酸胍、尿素和SDS溶解包涵體，再通過(guò)一定的法使蛋白質(zhì)折疊。有的經(jīng)上法得到后仍然有活性，有的蛋白一旦形成包涵體后就沒(méi)有活性了，但可作為抗原。2、可溶性蛋白的純化：表達(dá)的蛋白可以細(xì)胞內(nèi)呈可溶狀態(tài)，也有少量進(jìn)入細(xì)胞周質(zhì)區(qū)。將細(xì)胞裂解物的上清部分用于純化目標(biāo)蛋白，甚至可直接作為粗酶液進(jìn)行生化反應(yīng)。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程16四、表達(dá)產(chǎn)物的純化16西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程17穿梭載體(shuttlevector)：能夠在兩類不同的宿主中復(fù)制、增殖和選擇的載體，主要是質(zhì)粒，它們至少有兩套復(fù)制單元和兩套選擇標(biāo)記，相當(dāng)于兩個(gè)載體的聯(lián)合。只要涉及大腸桿菌以外的細(xì)胞，絕大多數(shù)載體都裝有大腸桿菌質(zhì)粒載體的基本元件，都可看作穿梭載體。第二節(jié)穿梭載體西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程17穿梭載體(shuttle17西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程18一、大腸桿菌/革蘭氏陽(yáng)性菌穿梭載體：如向枯草芽孢桿菌的穿梭。二、大腸桿菌/酵母菌穿梭載體：主要用于遺傳學(xué)和真核表達(dá)研究，尤其是當(dāng)?shù)鞍仔枰M(jìn)行真核修飾時(shí)，如磷酸化、糖基化等。三、其它穿梭載體：如動(dòng)物病毒載體、植物轉(zhuǎn)化的Ti質(zhì)粒、昆蟲(chóng)桿狀病毒等，更為復(fù)雜一些。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程18一、大腸桿菌/革蘭氏陽(yáng)性18西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程19西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程1919西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程20整合載體(integrationvector)：用于將某個(gè)基因或某些基因插入到宿主的染色體中去工作，按整合方式可分為定點(diǎn)整合和隨機(jī)整合兩類，按作用可分為目的基因的插入/敲除或隨機(jī)突變體庫(kù)的構(gòu)建。一、基因插入/基因敲除同源重組整合載體最為常用，不僅含有大腸桿菌克隆載體的骨架，還有一段便于同源重組的重組DNA片段。第三節(jié)整合載體西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程20整合載體(integra20西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程21二、隨機(jī)插入突變載體用于功能基因組研究中基因突變材料的創(chuàng)造。隨機(jī)突變體庫(kù)是指標(biāo)記基因在載體的攜帶下通過(guò)DNA重組事件隨機(jī)插入到基因組中而形成的眾多基因突變體的集合。1、微生物插入突變體庫(kù)：如pEG922，需要借助轉(zhuǎn)座子。2、構(gòu)建植物突變體庫(kù)所用的載體：根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)介導(dǎo)的T-DNA插入或植物轉(zhuǎn)座子(transposon)標(biāo)簽是植物基因功能研究中常用的產(chǎn)生突變體的方法西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程21二、隨機(jī)插入突變載體21西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程221）T-DNA插入突變體：植物轉(zhuǎn)基因過(guò)程中T-DNA區(qū)段如果插入到一個(gè)功能基因中，會(huì)導(dǎo)致該基因插入失活而產(chǎn)生性狀變化，形成突變體。還可以在T-DNA區(qū)段構(gòu)建基因激活標(biāo)簽、基因陷阱(genetrap)、啟動(dòng)子陷阱(promotertrap)或增強(qiáng)子陷阱(enhancertrap)，用于直接克隆靶基因編碼區(qū)、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等。對(duì)于突變基因，只需要采用反向PCR或錨定PCR擴(kuò)增或通過(guò)篩選文庫(kù)，就可以直接克隆得到其序列。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程221）T-DNA插入突變體22西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程232）植物Ac-Ds轉(zhuǎn)座子雙因子插入突變：玉米Ac(activator)因子是一個(gè)轉(zhuǎn)座子，含有完整的轉(zhuǎn)座酶，Ds(dissociation)是Ac缺失轉(zhuǎn)座酶基因的缺失體，但具兩端的反向重復(fù)序列。分別構(gòu)建含Ac和Ds的質(zhì)粒載體載體并分別轉(zhuǎn)化植物，轉(zhuǎn)基因植株雜交(Ac×Ds)后代中會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)座事件而產(chǎn)生突變體。利用Ac-Ds序列作探針或引物克隆目標(biāo)基因。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程232）植物Ac-Ds轉(zhuǎn)座子23精品課件！精品課件！24精品課件！精品課件！25西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程263）構(gòu)建動(dòng)物隨機(jī)突變體庫(kù)常用載體：用基因陷阱?；蛳葳宓幕驹硎峭ㄟ^(guò)攜帶有報(bào)告基因的載體隨機(jī)整合到動(dòng)物或其它生物染色體，干擾內(nèi)源基因的功能，并標(biāo)記被插入的基因，然后克隆之，方法同前面的植物的方法一樣。動(dòng)物的轉(zhuǎn)化方法與植物不同，一般采用電轉(zhuǎn)化、反轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染等。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程263）構(gòu)建動(dòng)物隨機(jī)突變體庫(kù)26西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程27一、大腸桿菌表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)原核表達(dá)載體：適用于在原核細(xì)胞中表達(dá)外源基因的載體。均是質(zhì)粒載體，首先必然滿足克隆載體的基本要求，然后增加表達(dá)元件。1、表達(dá)元件(expressionelements)：

1）啟動(dòng)子(promoter)：三類，即lac啟動(dòng)子、trp啟動(dòng)子和它們的雜合啟動(dòng)子tac或trc，都受IPTG誘導(dǎo)。T7噬菌體啟動(dòng)子λ噬菌體的PL啟動(dòng)子。第一節(jié)大腸桿菌表達(dá)載體西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程1一、大腸桿菌表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)27西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程282）終止子：依賴于ρ因子或不依賴于ρ因子（遇莖環(huán)結(jié)構(gòu)而終止）。3）核糖體結(jié)合位點(diǎn)(ribosomebindingside,RBS)：Shine-Dalgarno(SD)序列，ATG與RBS之間的距離很重要，一般3-11bp。2、表達(dá)形式完整單一蛋白：?jiǎn)我换虻木幋a區(qū)表達(dá)。融合蛋白(fusionprotein)：多個(gè)基因的編碼區(qū)的串聯(lián)體，但構(gòu)成一個(gè)整體的單一ORF，如果融合標(biāo)簽蛋白有利于蛋白的定向、純化，如果融合多個(gè)目標(biāo)蛋白，則類似于直接表達(dá)了一個(gè)多酶復(fù)合體一樣，可減少載體構(gòu)建難度，而且可以偶連兩個(gè)或多個(gè)相關(guān)基因的表達(dá)。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程22）終止子：依賴于ρ因子或28西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程293、表達(dá)的控制誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)：IPTG防滲漏表達(dá)系統(tǒng)：lacIqPL啟動(dòng)子受cⅠ的調(diào)控，低溫(30℃)下阻抑轉(zhuǎn)錄，高溫(40-45℃)下解除抑制。二、利用T7噬菌體啟動(dòng)子的表達(dá)載體pET系列，表達(dá)能力強(qiáng)，可控性好，只受T7噬菌體RNA聚合酶識(shí)別，不受大腸桿菌RNA聚合酶識(shí)別，可用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程33、表達(dá)的控制29西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程30非融合型表達(dá)載體

主要元件：強(qiáng)啟動(dòng)子、SD、起始密碼子ATG、萬(wàn)能終止密碼子。PSDForeignDNA非融合型表達(dá)載體非融合基因西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程4非融合型表達(dá)載體PSDF30西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程31非融合型表達(dá)載體----pPL-LamdaPL啟動(dòng)子---溫度誘導(dǎo)插入位點(diǎn)--HpaI西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程5非融合型表達(dá)載體----p31西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程32三、表達(dá)融合蛋白的表達(dá)載體1、GST(glutahioneS-transferase,谷胱苷肽S-轉(zhuǎn)移酶)表達(dá)載體：如Amershamm公司的pGEX系列，其GST來(lái)自于血吸早蟲(chóng)，融合蛋白下保持酶學(xué)活性，對(duì)谷胱苷肽有很強(qiáng)的結(jié)合能力，融合蛋白純化出來(lái)后用凝血蛋白酶切割可得到純的目的蛋白。2、組氨酸標(biāo)簽表達(dá)載體：如Novagen公司的pET系列，可在目標(biāo)蛋白的N-端或C-端加上6個(gè)組氨酸的標(biāo)簽和Xa因子酶工位點(diǎn)，能與鎳等二價(jià)金屬離子結(jié)合，純化目的蛋白，用Xa因子處理可得到純的目的蛋白。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程6三、表達(dá)融合蛋白的表達(dá)載體32西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程333、內(nèi)含肽表達(dá)載體：如NEB公司的Impact-Twin系統(tǒng)，將目的蛋白放在兩個(gè)可自裂解的內(nèi)含肽(intein)中間，在得到融合蛋白以后不通過(guò)蛋白酶消解、只需要調(diào)節(jié)pH值等條件就將標(biāo)簽蛋白切除。4、分泌表達(dá)載體：產(chǎn)物可跨膜分泌至胞周間隙，可避免受細(xì)胞內(nèi)蛋白酶的降解，或使其正確折疊，或去除N-端甲硫氨酸，以維護(hù)活性。信號(hào)肽(signalpeptide)有堿性磷酸酶信號(hào)肽、蛋白質(zhì)A信號(hào)肽（如Amersham公司的pEZZ18系統(tǒng)）。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程73、內(nèi)含肽表達(dá)載體：如NE33西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程34

融合型表達(dá)載體PSDForeignDNA融合型表達(dá)載體融合基因西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程8融合型表達(dá)載體PS34西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程35技術(shù)關(guān)鍵：克隆基因可插入標(biāo)簽肽序列的3’或5’端，但必須維持正確的ORF。選擇合適酶切位點(diǎn)加人工合成的DNA接頭構(gòu)建位相載體西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程9技術(shù)關(guān)鍵：克隆基因可插入標(biāo)35西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程36----ATG----AACCTGGAATTCCTAGGT-------TAC-----TTGGACCTTAAGGATCCA---EcoRIBamHIAATCGGAAGAATTCAGACCTAGGTTTAGCCTTCTTAAGTCTGGCTCCA載體部分序列DNA序列西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程10----ATG----36西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程37位相載體----含有3種讀碼框的系列載體西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程11位相載體----含有3種37西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程38優(yōu)點(diǎn)：表達(dá)效率高產(chǎn)物穩(wěn)定

易鑒定：融合蛋白分子量大，電泳可鑒定易純化：利用融合原核多肽的特性西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程12優(yōu)點(diǎn)：38西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程39Ptac：IPTG誘導(dǎo)GST融合蛋白—直接純化產(chǎn)物，切割方便：

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pGEX-3T---X因子位相載體融合型載體----pGEX系列西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程13Ptac：IPTG誘導(dǎo)融39西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程40分泌型融合表達(dá)載體----pEZZ18西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程14分泌型融合表達(dá)載體---40西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程41分泌型表達(dá)載體----pINIII-ompA1西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程15分泌型表達(dá)載體----p41西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程42四、表達(dá)產(chǎn)物的純化1、包涵體(inclusionbody)的純化：許多情況下表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)形成不溶的顆粒狀包涵體，可通過(guò)機(jī)械法、凍融法、超聲波處理等破碎細(xì)胞，離心收集包涵體，洗滌去除雜蛋白，用鹽酸胍、尿素和SDS溶解包涵體，再通過(guò)一定的法使蛋白質(zhì)折疊。有的經(jīng)上法得到后仍然有活性，有的蛋白一旦形成包涵體后就沒(méi)有活性了，但可作為抗原。2、可溶性蛋白的純化：表達(dá)的蛋白可以細(xì)胞內(nèi)呈可溶狀態(tài)，也有少量進(jìn)入細(xì)胞周質(zhì)區(qū)。將細(xì)胞裂解物的上清部分用于純化目標(biāo)蛋白，甚至可直接作為粗酶液進(jìn)行生化反應(yīng)。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程16四、表達(dá)產(chǎn)物的純化42西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程43穿梭載體(shuttlevector)：能夠在兩類不同的宿主中復(fù)制、增殖和選擇的載體，主要是質(zhì)粒，它們至少有兩套復(fù)制單元和兩套選擇標(biāo)記，相當(dāng)于兩個(gè)載體的聯(lián)合。只要涉及大腸桿菌以外的細(xì)胞，絕大多數(shù)載體都裝有大腸桿菌質(zhì)粒載體的基本元件，都可看作穿梭載體。第二節(jié)穿梭載體西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程17穿梭載體(shuttle43西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程44一、大腸桿菌/革蘭氏陽(yáng)性菌穿梭載體：如向枯草芽孢桿菌的穿梭。二、大腸桿菌/酵母菌穿梭載體：主要用于遺傳學(xué)和真核表達(dá)研究，尤其是當(dāng)?shù)鞍仔枰M(jìn)行真核修飾時(shí)，如磷酸化、糖基化等。三、其它穿梭載體：如動(dòng)物病毒載體、植物轉(zhuǎn)化的Ti質(zhì)粒、昆蟲(chóng)桿狀病毒等，更為復(fù)雜一些。西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程18一、大腸桿菌/革蘭氏陽(yáng)性44西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程45西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程1945西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程46整合載體(integrationvector)：用于將某個(gè)基因或某些基因插入到宿主的染色體中去工作，按整合方式可分為定點(diǎn)整合和隨機(jī)整合兩類，按作用可分為目的基因的插入/敲除或隨機(jī)突變體庫(kù)的構(gòu)建。一、基因插入/基因敲除同源重組整合載體最為常用，不僅含有大腸桿菌克隆載體的骨架，還有一段便于同源重組的重組DNA片段。第三節(jié)整合載體西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程20整合載體(integra46西南大學(xué)生物技術(shù)專業(yè)基因工程47二、隨機(jī)插入突變載體用于功能基因組研究中基因突變材料的創(chuàng)造。隨機(jī)突變體庫(kù)是指標(biāo)記基因在載體的攜帶下通過(guò)DNA重組事件隨機(jī)插入到基因組中而形成的眾多基因突變體的