臨床化學(xué)中的干擾實(shí)驗(yàn)核準(zhǔn)的指導(dǎo)原則

臨床化學(xué)中的干擾實(shí)驗(yàn)核準(zhǔn)的指導(dǎo)原則——第二版概覽本文件用于以下兩個(gè)目的：通過提供科學(xué)有效的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，指定待檢測(cè)的相關(guān)干擾物質(zhì)及濃度和闡明正確的數(shù)據(jù)分析與解讀，來協(xié)助制造商以及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法研發(fā)人員來確定檢測(cè)方法對(duì)干擾物質(zhì)的敏感程度。這樣可以評(píng)估出潛在的干擾危險(xiǎn)物，也可以向用戶提供有意義的干擾聲明；以及通過定義系統(tǒng)性研究策略，確定數(shù)據(jù)收集和分析要求以及促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室用戶和制造商之間更廣泛的合作，來協(xié)助臨床實(shí)驗(yàn)室研究由于干擾物質(zhì)存在而產(chǎn)生的異常結(jié)果。這樣，新的干擾物可以被鑒別、揭示并最終消除掉。本指導(dǎo)原則用于體外診斷醫(yī)療設(shè)備制造商以及臨床實(shí)驗(yàn)室。制造商以及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法研發(fā)人員有責(zé)任有責(zé)任確定由于干擾物質(zhì)引起的誤差而對(duì)其檢測(cè)方法的分析性能造成的影響以及對(duì)病人的潛在傷害。制造商被要求向使用其系統(tǒng)的用戶提供關(guān)于干擾敏感度的有關(guān)信息。備注：本文件中“制造商”系指研發(fā)用于臨床實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)方法的任何個(gè)人以及企業(yè)。臨床實(shí)驗(yàn)室有責(zé)任確保其檢測(cè)方法的特異性能夠滿足其客戶的需求。實(shí)驗(yàn)室同樣應(yīng)該研究異常結(jié)果，鑒別干擾物質(zhì)并向提供分析系統(tǒng)的制造商提供客觀的反饋。介紹2.1檢測(cè)方法任何檢測(cè)方法。不論是定性的還是定量的，都可能受到干擾。本文件廣泛適用于各個(gè)檢測(cè)方法以及分析儀器。有可能需要做出適當(dāng)修改，以適應(yīng)不同流程的特點(diǎn)。附錄A中討論了兩個(gè)具體的方法原則（分離技術(shù)以及免疫化學(xué)檢測(cè)方法）。2.1.1標(biāo)本類型使用本指導(dǎo)原則可以評(píng)估使用血清、血漿、全血、腦脊髓液、尿液以及其他大多數(shù)體液的檢測(cè)方法中的干擾。2.1.2干擾物質(zhì)潛在的干擾物質(zhì)可能來源于以下內(nèi)源性以及外源性途徑：病理情況下產(chǎn)生的代謝物，如糖尿病、多發(fā)性骨髓瘤、瘀膽型肝炎等等；治療過程中引入的物質(zhì)，如藥物、腸胃外營(yíng)養(yǎng)、血漿容量擴(kuò)張劑、抗凝劑等等；病人攝入的物質(zhì)，如酒精、藥物濫用、營(yíng)養(yǎng)添加物、各種食物與飲料等等；標(biāo)本準(zhǔn)備過程中添加的物質(zhì)，如抗凝劑、防腐劑、穩(wěn)定劑等等；標(biāo)本處理過程中無意引入的污染物，如手霜、含粉手套、血清分離管，收集管膠塞等等；標(biāo)本自身的基質(zhì)，如不同于理想新鮮標(biāo)本的理化性質(zhì)。2.2概念與科學(xué)原則2.2.1干擾對(duì)不精確度的影響不準(zhǔn)確度（總分析誤差）共由三部分組成：不精密度、方法特異性偏差以及標(biāo)本特異性偏差。檢測(cè)方法評(píng)價(jià)通常只評(píng)價(jià)前兩項(xiàng)。標(biāo)本特異性偏差（即干擾），通常被視為特定樣本的獨(dú)立問題，而非過程的可量化的特征。從評(píng)估的觀點(diǎn)來看，干擾敏感性可引起系統(tǒng)誤差與隨機(jī)誤差，兩者都可以作為不準(zhǔn)確性（總分析誤差）的組成部分進(jìn)行分析學(xué)上的量化。對(duì)于給定的病人群體，標(biāo)本中干擾物質(zhì)的平均濃度會(huì)引起系統(tǒng)性偏差，其會(huì)被涵蓋于偏差評(píng)估中。相對(duì)于均值的個(gè)體偏差，會(huì)在與另一更精確的檢測(cè)過程的比對(duì)中，構(gòu)成總隨機(jī)誤差的一部分。對(duì)于部分檢測(cè)而言，隨機(jī)干擾效應(yīng)，會(huì)超越不精密度，成為隨機(jī)誤差的主要來源。對(duì)于病人個(gè)體而言，干擾物質(zhì)引起的誤差取決于其在病人標(biāo)本中的濃度。干擾物濃度改變，偏差度隨之改變。偏差引起的結(jié)果變化，可能被錯(cuò)誤的解讀為病人體征的變化。2.2.2臨床相關(guān)性在臨床醫(yī)學(xué)中，干擾必須從臨床的角度評(píng)估。臨床相關(guān)性決定了一個(gè)分析效應(yīng)究竟是否應(yīng)該考慮為干擾。待測(cè)物的形式和濃度基準(zhǔn)必須被清晰的定義。矛盾的是，某些檢測(cè)過程可能反映出待測(cè)物的真實(shí)濃度，但卻并不一定是臨床相關(guān)值。比如火焰光度法和間接電勢(shì)測(cè)量法能正確測(cè)量出血漿中鈉的含量，不論脂濃度為多少。然而，如果脂濃度較高，這些方法可能會(huì)將電解質(zhì)平衡正常的病人，檢測(cè)為低鈉血癥。在這個(gè)例子中，直接電勢(shì)測(cè)量法可以準(zhǔn)確報(bào)告正常鈉水平，因?yàn)槠涫菍?duì)血漿水相中的鈉活性做出反應(yīng)，而鈉活性正是機(jī)體調(diào)節(jié)的。因此，從臨床的角度來看，對(duì)標(biāo)本中總鈉的過高估計(jì)是合適的。在嘗試解讀干擾試驗(yàn)結(jié)果之前定義臨床相關(guān)濃度是很重要的。2.2.3預(yù)分析效應(yīng)分析前待分析物的變化或者是濃度的改變，通常被定義為預(yù)分析效應(yīng)。盡管這種效應(yīng)可能會(huì)“干擾”實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的臨床用途，其并不能算分析干擾。除非明確說明，否則檢測(cè)過程應(yīng)該同時(shí)檢測(cè)標(biāo)本中所有的待分析物質(zhì)，不論其來源為何。常見的預(yù)分析效應(yīng)有：體內(nèi)（生理學(xué)）藥物效應(yīng)，受藥物影響的循環(huán)激素濃度；待分析物的化學(xué)變化，如水解、氧化、光解等等；待分析物的物理變化，如酶的變性；標(biāo)本的揮發(fā)或稀釋；以及附加待分析物的污染（比如來自靜脈注射的鹽，與凝血塊接觸時(shí)間延長(zhǎng)導(dǎo)致的葡萄糖損失或者溶血帶來的紅細(xì)胞內(nèi)成分。2.2.4相對(duì)干擾干擾的計(jì)算是相對(duì)于對(duì)照中的待分析物的測(cè)量而言的。在某些情況下，對(duì)照組中可能會(huì)含有一定量的內(nèi)源性干擾物質(zhì)（對(duì)照組中病人群體的物質(zhì)濃度的平均值）。常見的例子有膽紅素、血紅蛋白、蛋白質(zhì)和脂類。有些檢測(cè)方法會(huì)按照干擾物的平均濃度進(jìn)行抵消或修正，從而減小針對(duì)病人群體檢測(cè)的干擾效應(yīng)。典型的方法有樣本預(yù)處理、空白化、血清基質(zhì)校正以及數(shù)學(xué)校正。當(dāng)病人標(biāo)本中的干擾物濃度大于或者小于病人群體平均濃度時(shí)，誤差會(huì)被引入。比如，某個(gè)被蛋白質(zhì)干擾的藥物檢測(cè)方法，其偏差為0.05μmol/L每1.0g/dL蛋白質(zhì)。因?yàn)檠鍢?biāo)本中蛋白質(zhì)平均濃度為7.0g/dL，其相對(duì)于無蛋白對(duì)照組的平均偏差為0.35μmol/L。如果用上述方法之一將偏差消除，針對(duì)個(gè)體標(biāo)本的蛋白質(zhì)效應(yīng)將是相對(duì)于平均蛋白濃度7.0g/dL條件下的0.05μmol/L每1g/dL蛋白濃度升高/降低。含7.5g/dL蛋白的標(biāo)本的偏差將變?yōu)?0.025μmol/L，而非+0.4μmol/L。除非樣本里的蛋白含量剛好是7.0g/dL，否則每份病人標(biāo)本的藥物檢測(cè)結(jié)果將呈現(xiàn)較小的正/負(fù)偏差，其取決于真實(shí)的蛋白質(zhì)濃度。以下信息對(duì)例子進(jìn)行了擴(kuò)展。假設(shè)假定藥物的真實(shí)濃度是25.0μmol/L，檢測(cè)方法受蛋白影響的程度如上所述。注意在偏差校正過的系統(tǒng)中，蛋白質(zhì)引起的誤差范圍僅有+0.20μmol/L，而在偏差未校正過的系統(tǒng)中，蛋白質(zhì)引起誤差范圍為+0.15μmol/L到+0.55μmol/L。2.2.5干擾機(jī)制分析過程可能會(huì)被干擾物質(zhì)通過多個(gè)途徑干擾。化學(xué)干擾。干擾物可能通過與試劑競(jìng)爭(zhēng)或者阻礙指示劑的反應(yīng)來壓制反應(yīng)。其也可能通過絡(luò)合或者沉淀改變待分析物的形態(tài)。檢測(cè)干擾。干擾物可能有與分析物相似的，能夠被檢測(cè)或者測(cè)量到的性質(zhì)，如熒光、顏色、光散射、洗脫位點(diǎn)或電極響應(yīng)等。物理干擾。干擾物可能會(huì)改變標(biāo)本基質(zhì)的物理性質(zhì)，比如粘度、表面張力、濁度或離子強(qiáng)度，從而引起待分析物質(zhì)濃度明顯的變化。酶抑制。干擾物可能會(huì)通過分離激活金屬離子，與催化位點(diǎn)結(jié)合或者氧化必需的巰基等等來改變酶的活性（待分析物或者試劑）。在基于酶反應(yīng)等檢測(cè)方法中，干擾物也可能與酶競(jìng)爭(zhēng)某個(gè)關(guān)鍵基質(zhì)。比如腺苷酸激酶與肌酸激酶競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合ADP，因此在某些檢測(cè)中會(huì)被錯(cuò)誤的檢測(cè)為肌酸激酶。非特異性。干擾物可能會(huì)與待分析物有相同的反應(yīng)。盡管干擾物有著不同的非特異性機(jī)理，但其實(shí)踐效應(yīng)對(duì)于實(shí)驗(yàn)室是一樣的。一些常見的例子：堿性苦味酸肌酸酐檢測(cè)過程酮酸的干擾；重氮膽紅素檢測(cè)中硫酸吲哚酚的干擾。交叉反應(yīng)性。在免疫化學(xué)檢測(cè)過程中，與某個(gè)抗原結(jié)構(gòu)相似的干擾物可能會(huì)與抗體發(fā)生“交叉反應(yīng)”。這是非特異性的一種形式。比如，咖啡因在某些茶堿檢測(cè)過程中會(huì)被檢測(cè)到。交叉反應(yīng)性的程度被視為對(duì)于免疫化學(xué)檢測(cè)特異性的考核，但對(duì)于干擾敏感程度的考核并不是一個(gè)有用的指標(biāo)。水置換。非水性物質(zhì)（蛋白、脂類）通過置換水相等離子體，影響基于活性檢測(cè)的測(cè)量體系。如果打算檢測(cè)等離子水相中的待分析物濃度時(shí)，這些效應(yīng)可以不用考慮為干擾。3標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施。因?yàn)橥ǔ２豢赡苤滥姆N分離物或者標(biāo)本可能會(huì)有傳染性，所有的病人和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本都要被看做是傳染性的并依照“標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施”進(jìn)行處理。標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施是結(jié)合了《通用預(yù)防措施與人體物質(zhì)分離》的主要特征的指導(dǎo)措施。標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施涵蓋了所有傳染性物質(zhì)的傳播，因而比僅僅用于血液病原體傳播的通用預(yù)防措施更加廣泛。標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施與通用預(yù)防措施指導(dǎo)原則均可在美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心下載與索取。如需更具體的關(guān)于防止實(shí)驗(yàn)室設(shè)備與材料中所有傳染性物質(zhì)的傳播的預(yù)防措施以及關(guān)于暴露于傳染性疾病的風(fēng)險(xiǎn)管理的推薦方案，請(qǐng)參考CSLIM29文件最新版本——ProtectionofLaboratoryWorkersFromOccupationallyAcquiredInfections。4定義準(zhǔn)確度——測(cè)量結(jié)果和測(cè)量物的真實(shí)值的吻合度。備注：參考測(cè)量物的定義。α誤差/I型錯(cuò)誤——錯(cuò)誤拒絕空白假設(shè)（物質(zhì)不發(fā)生干擾）的可能性。備注：參考置信水平的定義。對(duì)立假設(shè)——在干擾試驗(yàn)中，在指定的冪下檢測(cè)，物質(zhì)引起的干擾大于指定限制的情況。備注：參考：冪和β誤差的定義。待分析物——作為可檢測(cè)物質(zhì)存在的組分。備注1：在物質(zhì)類型“24小時(shí)尿液中的蛋白質(zhì)量”中，蛋白質(zhì)是待分析物。在“血漿中葡萄糖含量”中，葡萄糖是待分析物。備注2：待分析物是對(duì)病人有意義的特定組分。分析特異性——檢測(cè)過程只檢出檢測(cè)物的能力。異常結(jié)果——參見差異結(jié)果的定義。β誤差/II型錯(cuò)誤——錯(cuò)誤拒絕對(duì)立假設(shè)（物質(zhì)發(fā)生干擾）的可能性。備注：參見冪的定義。偏差——檢測(cè)結(jié)果預(yù)期值與可接受的參考值之間的差異。備注：在本文件中，節(jié)7中“可接受的參考值”是指同一檢測(cè)方法中在沒有干擾存在的情況下獲得的結(jié)果。在節(jié)8中是指對(duì)比性檢測(cè)方法的結(jié)果。臨床顯著性——在評(píng)估檢測(cè)方法的背景下，誤差改變內(nèi)科醫(yī)生對(duì)于病人進(jìn)行診斷、治療或者管理的潛在可能性的重要性。對(duì)比性檢測(cè)方法——在評(píng)估檢測(cè)方法時(shí)，作為確定標(biāo)本中待分析物質(zhì)真實(shí)濃度的較精確的檢測(cè)方法。置信水平——與置信區(qū)間關(guān)聯(lián)的可能性的數(shù)值（1-α）。備注1：可能性通常以百分比表示：100（1-α）%；備注2：參見α誤差的定義。差異結(jié)果/異常結(jié)果/假結(jié)果——與從同一標(biāo)本采集到的另一結(jié)果，從另一檢測(cè)系統(tǒng)獲得的結(jié)果或者與確證的臨床診斷的臨床顯著度不一致的結(jié)果。藥物效應(yīng)——常用于描述藥物對(duì)于某物質(zhì)體內(nèi)濃度的生理學(xué)影響，與之對(duì)照的是在分析過程中的體外效應(yīng)內(nèi)源性干擾物——標(biāo)本中生理產(chǎn)生的，能夠?qū)α硪晃镔|(zhì)檢測(cè)過程產(chǎn)生影響的物質(zhì)（如膽紅素或血紅蛋白）。外源性干擾物——來源于體外的，能夠?qū)?biāo)本中另一待分析物檢測(cè)過程產(chǎn)生干擾的物質(zhì)（如藥物或其代謝物，標(biāo)本防腐劑或者標(biāo)本污染物）。析因?qū)嶒?yàn)——將所有可能的影響因素組合考察完全的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。這些組合由兩個(gè)或多個(gè)因素組成，每個(gè)因素考察兩個(gè)或多個(gè)水平。這樣反應(yīng)性（差異效應(yīng)）以及主要效應(yīng)都可以被評(píng)估出來。不精密度——特定條件下獲得的獨(dú)立的檢測(cè)結(jié)果的散布。備注：常表達(dá)為“標(biāo)準(zhǔn)差”或者“變異系數(shù)”。不準(zhǔn)確度——測(cè)量值與真實(shí)值之間的數(shù)值差異。備注1：參見準(zhǔn)確度的定義；備注2：參見總分析誤差的定義。干擾——在臨床化學(xué)中，由于另一組分的影響或者標(biāo)本的性質(zhì)導(dǎo)致的待分析物檢測(cè)濃度的臨床顯著差異的原因。備注：其可能由于檢測(cè)系統(tǒng)的非特異性、指示劑反應(yīng)的阻遏、待分析物的阻遏或者一些其它標(biāo)本依賴性偏差。干擾聲明——描述檢測(cè)方法中某物質(zhì)可能造成影響的說明。備注：常見于產(chǎn)品的“方法局限性”條目下。干擾標(biāo)準(zhǔn)——有改變內(nèi)科醫(yī)生對(duì)病人進(jìn)行診斷、治療或管理的潛在可能的，待分析物濃度與真實(shí)值之間的偏差的最大容許干擾度。干擾篩選——在分析系統(tǒng)的評(píng)估中，用于鑒別可能存在干擾的常見物質(zhì)的一系列加入高濃度干擾物的實(shí)驗(yàn)。干擾敏感度——檢測(cè)方法針對(duì)來自于其它組分或標(biāo)本性質(zhì)引起的干擾的誤差的敏感度。干擾基質(zhì)/干擾物——本術(shù)語(yǔ)按照VIM的模式定義為“影響物質(zhì)”，即不是檢測(cè)物的卻能影響檢測(cè)結(jié)果的物質(zhì)。基質(zhì)——物質(zhì)系統(tǒng)中，除待分析物外的所有組分?；|(zhì)效應(yīng)——標(biāo)本性質(zhì)對(duì)于特定檢測(cè)過程中檢測(cè)值的影響。備注：粘度、表面張力、濁度、離子強(qiáng)度以及pH是常見的基質(zhì)效應(yīng)產(chǎn)生因素。待測(cè)物——針對(duì)檢測(cè)的特定的量值。備注1：本定義涵蓋所有量值，常用的術(shù)語(yǔ)“待分析物”則指測(cè)量過程涉及到的具體的物質(zhì)（即，待測(cè)物描述了引發(fā)檢測(cè)結(jié)果的“物”【如，酶活性】，待分析物描述了對(duì)病人有意義的特定的組分）；備注2：參見待分析物的定義。方法特異性偏差——由于檢測(cè)方法的特征與特性引起的系統(tǒng)性誤差。非特異性——在檢測(cè)系統(tǒng)中，非目的待檢測(cè)物的物質(zhì)的反應(yīng)性。備注：非特異性常由抗體、酶、離子載體或者試劑結(jié)合、絡(luò)合或與非待檢測(cè)物質(zhì)的反應(yīng)引起的?？瞻准僭O(shè)——在干擾試驗(yàn)中，在特定的置信水平下檢測(cè)，物質(zhì)不會(huì)引起干擾的情況。單側(cè)檢驗(yàn)——當(dāng)對(duì)立假設(shè)指出干擾效應(yīng)的趨向時(shí)（正向干擾或負(fù)向干擾）用于顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)冪——不精密度——規(guī)定條件下的獲得的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)結(jié)果的接近度。備注：精密度往往不用數(shù)值表示，但常以不精密度來定量表達(dá)——一組檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差（SD）或變異系數(shù)（CV）。隨機(jī)樣本依賴性干擾——在病人標(biāo)本群中不同濃度干擾物引發(fā)的變化。備注：隨機(jī)干擾被量化為病人個(gè)體標(biāo)本的偏差的SD；備注2：其是回歸分析中Sy,x的組成部分，也是總隨機(jī)誤差的一個(gè)主要構(gòu)成因素。重復(fù)性——在相同實(shí)驗(yàn)條件下針對(duì)相同檢測(cè)物獲得的結(jié)果的接近度。備注：有時(shí)又被稱為分析內(nèi)精密度。樣本——從系統(tǒng)中分離出的一個(gè)或多個(gè)部分，以提供關(guān)于系統(tǒng)的信息。通常作為決定系統(tǒng)或者其產(chǎn)物的參考基礎(chǔ)。特異性——檢測(cè)方法在存在干擾環(huán)境或者影響物質(zhì)的前提下，正確識(shí)別或者測(cè)量待測(cè)物的能力。備注1：在質(zhì)量控制的背景中，當(dāng)特殊情況引起的變異真實(shí)存在的情況下，特殊質(zhì)控體系發(fā)現(xiàn)其存在的可能性；1-錯(cuò)誤報(bào)警可能性，即質(zhì)控體系數(shù)據(jù)點(diǎn)超出了容許范圍，但檢測(cè)系統(tǒng)未發(fā)現(xiàn)任何誤差的情況；備注2：在免疫學(xué)中，特異性是抗血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，定義了與特定抗原的反應(yīng)性。特異性的缺乏是由于交叉反應(yīng)的引入和/或干擾物質(zhì)的存在，因?yàn)榻徊娣磻?yīng)物質(zhì)會(huì)和待分析物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體識(shí)別位點(diǎn)。標(biāo)本（病人）——用于檢查、研究或者分析一個(gè)或多個(gè)量值或特征來確定整體特征的體液分離物或者組織。標(biāo)本基質(zhì)——待分析物存在的環(huán)境；備注：臨床基質(zhì)包括血清、血漿、尿液、腦脊液以及其他體液。標(biāo)本特異性偏差——由于標(biāo)本特征或性質(zhì)引起的測(cè)量值與真值之間的偏差，與檢測(cè)方法的特征形成對(duì)照（比如校準(zhǔn)、試劑不穩(wěn)定）；備注：其是由單個(gè)標(biāo)本表現(xiàn)出的影響效應(yīng)。假結(jié)果——參見異常結(jié)果的定義。統(tǒng)計(jì)顯著性——基于特定的冪與置信水平的，一個(gè)事件不是偶然發(fā)生的可能性的重要度。治療濃度——藥物能夠有效產(chǎn)生需要的臨床效果的濃度?？偡治稣`差——由特定組分構(gòu)成，并被量化為置信水平90%或95%下的置信區(qū)間。備注1：與“不準(zhǔn)確度”的概念相同；備注2：用于估計(jì)VIM定義的最大可能性誤差：測(cè)量值減去真值（或可接受的參考值）；備注3：由檢測(cè)與參考檢測(cè)方法的檢測(cè)濃度差異評(píng)估而來。例如：檢測(cè)和參考檢測(cè)方法的差異的97.2%落在了±4mmol/L；因此實(shí)現(xiàn)了95%的總分析誤差的目標(biāo)。備注3：參見不準(zhǔn)確度的定義。毒性濃度——藥物或者其他物質(zhì)對(duì)病人造成傷害的濃度。真實(shí)度——從數(shù)量較大的一系列測(cè)試結(jié)果中獲得的平均值與可接受參考值的吻合度。備注：真實(shí)度的考察通常表達(dá)為偏差。雙側(cè)檢驗(yàn)——當(dāng)對(duì)立假設(shè)不能指出干擾效應(yīng)的方向（正向干擾或負(fù)向干擾）時(shí)所使用的顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。I型錯(cuò)誤——對(duì)空白假設(shè)的錯(cuò)誤拒絕。備注：參見α誤差的定義。II型錯(cuò)誤——對(duì)對(duì)立假設(shè)的錯(cuò)誤拒絕。備注：參見β誤差的定義。驗(yàn)證——通過提供客觀證據(jù)，確認(rèn)到達(dá)了預(yù)期用途或應(yīng)用的要求。備注1：WHO定義驗(yàn)證的定義如下：提供流程、過程、系統(tǒng)、設(shè)備或方法達(dá)到了預(yù)期要求并滿足預(yù)期結(jié)果的行為或過程。備注2：驗(yàn)證的組成部分包括質(zhì)量控制、水平測(cè)試、雇員能力驗(yàn)證、設(shè)備校準(zhǔn)以及針對(duì)臨床發(fā)現(xiàn)的校正。檢定——通過提供客觀證據(jù)，確認(rèn)達(dá)到了特定的要求。備注：在檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)用于病人檢測(cè)前完成的，用于決定或確定檢測(cè)性能特征的一次過程。室內(nèi)精密度——參見重復(fù)性的定義。5干擾試驗(yàn)的決定標(biāo)準(zhǔn)在建立一項(xiàng)評(píng)估實(shí)驗(yàn)之前，必須先確定可接受性標(biāo)準(zhǔn)，以確?？陀^性。評(píng)估者必須決定什么程度的分析效應(yīng)會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的臨床使用造成干擾。因?yàn)獒槍?duì)干擾試驗(yàn)的恰當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)取決于怎樣程度的偏差會(huì)被考慮為臨床顯著的。在建立可接受性標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，必須區(qū)分臨床顯著性和統(tǒng)計(jì)顯著性。兩者在建立可用的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)都很重要。5.1臨床可接受性標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于干擾引起的誤差的可容許程度顯然取決于檢測(cè)結(jié)果的醫(yī)學(xué)用途。對(duì)于一些待分析物，準(zhǔn)確度要求（總可允許誤差）已有建議。所引文獻(xiàn)代表了一些例子。對(duì)于其他待分析物，準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)可以通過下述任何一種方法來建立?？赏ㄟ^將準(zhǔn)確度（總可容許誤差）分解為偏差、不精密度以及干擾部分，來建立可允許干擾的限制值?？偪稍试S干擾誤差的部分便是去除掉偏差和不精密度后，也包括待分析物的生理學(xué)變異部分（方差），殘余的誤差。5.1.1基于生理學(xué)變異的標(biāo)準(zhǔn)一種建立準(zhǔn)確度要求的方法是基于待分析物的生理學(xué)變異。原則上，誤差界限應(yīng)設(shè)為此種分析變異性相對(duì)于待分析物在個(gè)體和人群中的固有變異性的最小值（取決于待分析物的臨床應(yīng)用）。此方法對(duì)于生理學(xué)控制的待分析物效果較好。5.1.2來自于臨床經(jīng)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)臨床專家的共識(shí)經(jīng)常用于建立準(zhǔn)確度要求。從他們的臨床經(jīng)驗(yàn)中，從業(yè)者可參考多大程度的誤差會(huì)影響他們的診斷或者治療決定。合理的準(zhǔn)確度和干擾標(biāo)準(zhǔn)可以由相關(guān)臨床的典型例子中建立起來。5.1.3基于分析變異的標(biāo)準(zhǔn)干擾標(biāo)準(zhǔn)同樣可以源于檢測(cè)方法的總的長(zhǎng)期的不精密度。如果，病人樣本中干擾物水平很高，而相對(duì)于分析變異來說，其影響很低，則由于干擾物引起的總誤差的升高，不太會(huì)顯著影響臨床決定，該物質(zhì)不應(yīng)被視為干擾物。5.2統(tǒng)計(jì)顯著性與冪在作出一種物質(zhì)是否有干擾之前，評(píng)估者必須確保結(jié)果是分析學(xué)顯著的。需要有充分的重復(fù)實(shí)驗(yàn)，這樣檢測(cè)就是在充分的冪下進(jìn)行，來檢測(cè)臨床顯著干擾，以及在充分的置信水平下，來識(shí)別臨床非重要偏差的存在。本指導(dǎo)原則采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)手段稱為“假設(shè)檢測(cè)”。評(píng)估者預(yù)先確定病人檢測(cè)結(jié)果中多大的偏差會(huì)是臨床顯著的。此可允許偏差的量會(huì)被作為干擾界值，或者干擾尺度。之后檢測(cè)不含干擾的空白假設(shè)（偏差未超過界限）與含干擾的對(duì)照假設(shè)（偏差超過界限）。這些統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測(cè)基于預(yù)先設(shè)定的統(tǒng)計(jì)學(xué)冪和置信水平。參考7.1至決定基于冪和置信水平的樣本規(guī)模。5.3待分析物檢測(cè)濃度干擾要在待分析物的兩個(gè)醫(yī)學(xué)決定濃度下評(píng)估。若出于成本或其他實(shí)踐考慮，預(yù)實(shí)驗(yàn)只能限制在一個(gè)濃度下，要留意可能會(huì)遺漏在另一個(gè)待分析物濃度下的臨床顯著干擾。常見待分析物的推薦測(cè)試濃度列于附件B中。使用了可引用的出版的關(guān)鍵或決定值。缺乏醫(yī)學(xué)共識(shí)值時(shí)，待分析物的濃度有些是假定的，但干擾聲明是重要的目標(biāo)。在臨床應(yīng)用的指導(dǎo)下，絕大多數(shù)情況下，選擇了參考范圍的上限或者下線以及代謝濃度。5.4潛在干擾物質(zhì)對(duì)于復(fù)雜的檢測(cè)方法的特征，要從列出有潛在干擾可能的物質(zhì)的列表開始。常見的標(biāo)本不正常，如溶血、黃疸和高血脂。常見的處方藥與非處方藥。不正常的生化代謝物。在檢驗(yàn)所涉及的病人群體中，最常開處方的藥物。由于其化學(xué)或物理性質(zhì)，可能會(huì)對(duì)檢測(cè)造成干擾的藥物，包括代謝物。據(jù)報(bào)道會(huì)對(duì)相似檢測(cè)方法造成影響的物質(zhì)。參見Young等人與Trying和Roos的文字調(diào)查。標(biāo)本添加劑，如抗凝劑（肝素、EDTA、檸檬酸鹽、草酸鹽等等）以及防腐劑（NaF、碘乙酸、HCl等等）。在收集與處理過程中，可能會(huì)與標(biāo)本接觸的物質(zhì)，比如血清分離設(shè)備、標(biāo)本收集容器和相應(yīng)的膠塞、導(dǎo)管、導(dǎo)管沖洗液、皮膚消毒劑、手霜、去污劑、含粉手套等等。已知會(huì)影響特定檢測(cè)的膳食物質(zhì)（咖啡因、β胡蘿卜素、罌粟子等等）。列表可能會(huì)涵蓋廣泛。下列物質(zhì)可認(rèn)為遺漏重要干擾物的風(fēng)險(xiǎn)很小。確保當(dāng)潛在干擾物被排除時(shí)，其理論根據(jù)被記錄下來。與列表中的物質(zhì)有必需的特征組成和結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。然而，基于抗體、酶或者其他特異性結(jié)合蛋白的親和力，所有的結(jié)構(gòu)類似物都應(yīng)該檢測(cè)一遍?；谕瑯拥目茖W(xué)規(guī)律，已經(jīng)被展示過，不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成干擾的物質(zhì)?；趯?duì)化學(xué)性質(zhì)的專業(yè)知識(shí)，不太可能造成干擾的化合物?；跈z測(cè)的了解，處方劑量很小，不會(huì)引起干擾的藥物。由于清除或代謝過快，檢測(cè)時(shí)不會(huì)處于干擾濃度的藥物。5.5干擾試驗(yàn)濃度為確定在“最壞情況”下某物質(zhì)是否會(huì)干擾，綜合的干擾篩選需要在實(shí)驗(yàn)室可能考察到的病人標(biāo)本中觀察到的最大濃度條件下進(jìn)行。以下提供的指導(dǎo)用于協(xié)助選擇合適的檢測(cè)濃度。由于正向與負(fù)向干擾效應(yīng)可能由于不同的機(jī)制引起（比如血紅蛋白除在可見光譜中有強(qiáng)烈的吸收作用外，還有催化活性）每個(gè)物質(zhì)都需在兩個(gè)不同濃度下檢測(cè)，以避免在檢測(cè)濃度下相抵觸的效應(yīng)互相抵消的可能性。參見7.3節(jié)關(guān)于能夠同時(shí)檢測(cè)待分析物與干擾物多個(gè)濃度的備選實(shí)驗(yàn)流程。藥物與代謝物對(duì)于血清、血漿以及全血樣本，至少按照?qǐng)?bào)道的藥物治療劑量的最高值（急性峰值濃度）或者最高的預(yù)期值檢測(cè)三次以上。如果預(yù)期的血液中濃度未知，可假設(shè)治療劑量分散于5升血液中，然后按此濃度檢測(cè)至少三次。參見附件C中對(duì)于多數(shù)常見藥物的推薦測(cè)試濃度的列表。對(duì)于尿液，確定24小時(shí)內(nèi)排出的最大量，然后按每升尿液中含有此量來檢測(cè)至少三次。如果尿排泄量未知，則按照每升尿液中含最大治療劑量來檢測(cè)至少三次。內(nèi)源性物質(zhì)鑒別出在適用病人群體中預(yù)期的最高濃度，然后按此濃度檢測(cè)。參見附件D中檢測(cè)部分內(nèi)源性組分的推薦濃度的列表。抗凝劑與防腐劑對(duì)于血清、血漿以及全血，對(duì)推薦的添加濃度檢測(cè)至少五次，以模擬“缺量”（即未足量的血液收集管）。對(duì)于尿液，對(duì)推薦用于24小時(shí)收集的尿液量的防腐劑的量檢測(cè)五次。膳食物質(zhì)對(duì)于血清、血漿以及全血、對(duì)最大預(yù)期濃度檢測(cè)至少三次。對(duì)于尿液，對(duì)24小時(shí)內(nèi)每升尿液的排出量檢測(cè)至少五次。標(biāo)本收集與處理設(shè)備將設(shè)備與混合標(biāo)本接觸24小時(shí)以提取潛在干擾物質(zhì)。體積應(yīng)以實(shí)際應(yīng)用中的“最壞情況”為準(zhǔn)。謹(jǐn)防標(biāo)本揮發(fā)或者不穩(wěn)定待分析物的損失，并設(shè)置合適的對(duì)照標(biāo)本，其應(yīng)與檢測(cè)標(biāo)本一致，除了未與設(shè)備接觸之外，處理方法應(yīng)完全相同。6質(zhì)量保證與安全在實(shí)施干擾試驗(yàn)之前，核對(duì)以下內(nèi)容：設(shè)備按照制造商的說明經(jīng)過校準(zhǔn)和維護(hù)；分析系統(tǒng)受控且按照預(yù)期性能工作；所有操作人員經(jīng)過合格的培訓(xùn)；嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室安全流程操作。文件記錄按照上述要求執(zhí)行。6.1培訓(xùn)與熟練執(zhí)行評(píng)估的人員必須熟悉相關(guān)設(shè)備的操作，并接受了檢測(cè)方法的培訓(xùn)。設(shè)備必須正確的維護(hù)與修理，并按照制造商的說明進(jìn)行。6.2精密度檢驗(yàn)精密度須與制造商性能特征一致。需要進(jìn)行針對(duì)可重復(fù)性的評(píng)估，以確定節(jié)7中實(shí)驗(yàn)所需要的重復(fù)次數(shù)。如果可重復(fù)性未知，需要進(jìn)行最新版EP5中敘述的預(yù)實(shí)驗(yàn)。6.3真實(shí)性檢驗(yàn)檢測(cè)方法的偏差需經(jīng)過合適的回收實(shí)驗(yàn)或者方法比較來確定。盡管恒定的偏差不會(huì)影響干擾性研究，部分性偏差會(huì)導(dǎo)致在各種濃度下，干擾被低估或者高估。6.4串行評(píng)估檢測(cè)結(jié)果可能會(huì)被前一樣本的串行而影響。如果串行發(fā)生，則需要設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來區(qū)分串行效應(yīng)與干擾效應(yīng)。6.5質(zhì)量控制在檢測(cè)開始前，分析系統(tǒng)要處于可穩(wěn)定運(yùn)行狀態(tài)。在檢測(cè)期間，要通過質(zhì)量控制流程來監(jiān)控性能指標(biāo)。按照制造商的說明執(zhí)行并參考最新版C24文件。6.6安全與廢物處理對(duì)于關(guān)于安全、正確的處理以及丟棄實(shí)驗(yàn)室化學(xué)品的詳細(xì)信息，參考制造商的標(biāo)簽以及物質(zhì)安全數(shù)據(jù)手冊(cè)。此信息可從供應(yīng)商處獲得。7干擾特性評(píng)估本節(jié)提供了用于評(píng)價(jià)檢測(cè)方法對(duì)干擾物質(zhì)敏感度的實(shí)驗(yàn)流程。盡管實(shí)驗(yàn)室希望能夠?qū)⒋肆鞒套鳛閷?duì)新流程的徹底的合格評(píng)價(jià)，但其主要設(shè)計(jì)用于制造商評(píng)價(jià)其檢測(cè)。有兩種基本方法可用于評(píng)估檢測(cè)方法對(duì)干擾的敏感度。每種均有優(yōu)點(diǎn)以及固有限制，但其提供了互相補(bǔ)充的信息，應(yīng)該一同使用。這兩種方法是：評(píng)估加入目的標(biāo)本中的潛在干擾物質(zhì)的效應(yīng)（參見7.1至7.3節(jié)）；通過與高特異性對(duì)比檢測(cè)方法對(duì)比，來評(píng)估個(gè)體偏差、代表性病人樣本（參見8.2節(jié)）。7.1干擾篩查向混合樣本中加入潛在干擾物質(zhì)并評(píng)估與相同混合樣本的對(duì)照之間的偏差的方法稱為“配對(duì)差異檢測(cè)”。評(píng)估多種潛在干擾物質(zhì)的高濃度以模擬“最壞情況”的方法稱為“干擾篩查”。如果未觀察到臨床顯著效應(yīng)，則被該物質(zhì)引發(fā)的偏差可認(rèn)為不重要，不需做進(jìn)一步的檢測(cè)。顯示出臨床顯著效應(yīng)的物質(zhì)被考慮為干擾物，需要進(jìn)一步評(píng)估以確定干擾物濃度以及干擾程度之間的關(guān)系。沒有任何干擾試驗(yàn)策略能夠甄別出所有的干擾物。有些干擾物（比如藥物代謝物）可能在干擾篩查中未被檢出；有些物質(zhì)可能會(huì)被錯(cuò)誤的劃為干擾物（比如不代表天然形態(tài)的物質(zhì)的結(jié)構(gòu)）。干擾篩查提供了標(biāo)準(zhǔn)化的評(píng)估，補(bǔ)足了針對(duì)真實(shí)病人標(biāo)本的研究。干擾實(shí)驗(yàn)存在兩點(diǎn)局限：添加到混合血清中的化合物性質(zhì)可能與天然存在于體內(nèi)的化合物的性質(zhì)不同不同的干擾效應(yīng)可能會(huì)在檢測(cè)的干擾物以及待分析物濃度下相互抵償?；诖嗽颍t蛋白應(yīng)總是與不止一個(gè)濃度的膽紅素一起評(píng)估干擾。來自于可信的病人標(biāo)本的數(shù)據(jù)可用于和來自于“異常”標(biāo)本的數(shù)據(jù)結(jié)合，以幫助查明“真相”。附件B中給出了許多常見待分析物的推薦檢測(cè)濃度。指出了每種潛在干擾物質(zhì)都應(yīng)在兩個(gè)待分析物濃度下檢測(cè)。如果不可實(shí)現(xiàn)，附件B檢測(cè)的優(yōu)先濃度。仔細(xì)評(píng)估反應(yīng)的可能性，并在兩種待分析物濃度下檢測(cè)懷疑的物質(zhì)。7.1.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)待測(cè)標(biāo)本群與對(duì)照群都應(yīng)在同一次檢測(cè)中，采用合適的重復(fù)數(shù)目，用相同的方法檢測(cè)。需要足夠的重復(fù)數(shù)，來使錯(cuò)誤拒絕沒有干擾的空白假設(shè)的可能性（在統(tǒng)計(jì)學(xué)中，I型錯(cuò)誤）或者錯(cuò)誤拒絕有干擾的對(duì)立假設(shè)的可能性（II型錯(cuò)誤）降到最低。標(biāo)本需要被重復(fù)的數(shù)量取決于以下四個(gè)因素：待分析物檢測(cè)結(jié)果被認(rèn)為臨床顯著的最小差異的程度；空白假設(shè)檢測(cè)的置信水平；對(duì)立假設(shè)檢測(cè)的冪；檢測(cè)方法的可重復(fù)性。7.1.2實(shí)驗(yàn)物品用于干擾試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)溶液的準(zhǔn)備在附件G中提供?；鶞?zhǔn)標(biāo)本組按下列方法準(zhǔn)備基準(zhǔn)混合樣本：獲得來自健康的未服用藥物的個(gè)體的適當(dāng)類型（血清、尿液等等）的新鮮標(biāo)本?；旌蠘颖緫?yīng)該反映出可以吻合目的待分析物的標(biāo)本基質(zhì)。如果新鮮標(biāo)本無法獲取，謹(jǐn)慎使用冷凍或者凍干的標(biāo)本。經(jīng)處理的對(duì)照液體中可能含有防腐劑和穩(wěn)定劑，也包含不真實(shí)的待分析物組合，可能會(huì)得出與真實(shí)人血清不同的干擾效應(yīng)。評(píng)估者有責(zé)任驗(yàn)證測(cè)試物質(zhì)正確的模擬了新鮮臨床標(biāo)本?？紤]檢測(cè)方法的樣本需求量、需要檢測(cè)的物質(zhì)的數(shù)量以及重復(fù)數(shù)要求，來計(jì)算所需基準(zhǔn)混合樣本的體積。確定基準(zhǔn)混合樣本中待分析物的濃度，并使用合適的純品物質(zhì)來調(diào)節(jié)基準(zhǔn)混合樣本至待分析物的醫(yī)學(xué)決定濃度。避免一起引入其他物質(zhì)。參見附件B中推薦的待分析物檢測(cè)濃度。儲(chǔ)存液按照下面說明為每種潛在干擾物準(zhǔn)備儲(chǔ)存液：獲得潛在干擾物的合適的純品形態(tài)，或者最接近物質(zhì)循環(huán)形態(tài)的形態(tài)。如果需要藥品級(jí)的準(zhǔn)備，記住其可能會(huì)含有賦形劑、防腐劑、殺細(xì)菌劑、殺真菌劑、抗氧化劑、染色劑、調(diào)味劑、金屬氧化物、反離子和過濾物，任何一種都可能是觀察到的效應(yīng)的真實(shí)起因。選擇檢測(cè)物質(zhì)能夠充分溶解的溶劑。參見《化學(xué)與物理手冊(cè)》或者M(jìn)erck索引來獲得檢測(cè)物質(zhì)在這些溶劑中的溶解度。確定溶劑在評(píng)估中不會(huì)在檢測(cè)方法中引起干擾。下面按常用順序列出了可能的溶劑。試劑級(jí)純水（參見C3中的細(xì)節(jié)信息）稀釋的HCl或NaOH乙醇或甲醇二甲基亞砜（DMSO）其他有機(jī)溶劑盡可能小程度的稀釋樣本基質(zhì)，最好不高于5%，可通過制備至少20倍于預(yù)期檢測(cè)濃度的濃縮儲(chǔ)存液來實(shí)現(xiàn)。有機(jī)溶劑需要特殊考慮。易揮發(fā)溶劑要防止揮發(fā)。儲(chǔ)存液需要制備為最高工作濃度。許多有機(jī)溶劑在水中溶解度很低或可能通過影響試劑或者反應(yīng)本身來引入假象。因氯仿在水中的低溶解度，其在血清中至少要稀釋100倍。乙醇濃度高于1%到2%會(huì)使抗體變性。詳細(xì)記錄儲(chǔ)存液的準(zhǔn)備。備注：在某些情況下，干擾可能由于內(nèi)源性物質(zhì)（CO2、H+[pH]或者蛋白）濃度降低而升高。為評(píng)估這一效應(yīng)，基準(zhǔn)標(biāo)本組中潛在干擾物的濃度需要降低同時(shí)維持待分析物的濃度，以及對(duì)基質(zhì)的最小的擾動(dòng)。對(duì)照由基準(zhǔn)標(biāo)本組制備，要考慮任何的稀釋或者物質(zhì)添加。使用的方法應(yīng)取決于待分析物和干擾物的天然屬性并且必須被評(píng)估者驗(yàn)證。對(duì)照標(biāo)本組制備對(duì)照混合樣本應(yīng)與檢測(cè)混合樣本在各方面都相同，除了用相同體積的溶劑代替制備檢測(cè)混合樣本時(shí)使用的檢測(cè)干擾物。如果檢測(cè)物質(zhì)出現(xiàn)在對(duì)照混合血清中，使用合適的分析檢測(cè)方法來確定其濃度。如果與基準(zhǔn)標(biāo)本組對(duì)照，對(duì)照混合樣本中出現(xiàn)了非預(yù)期的明顯的待分析物濃度，則考慮溶劑作為潛在的干擾物。7.1.3重復(fù)要求滿足所需置信以及冪的重復(fù)數(shù)要求取決于檢測(cè)的統(tǒng)計(jì)學(xué)假設(shè)。雙側(cè)檢驗(yàn)用于對(duì)立假設(shè)不能指出干擾的方向（正向或者負(fù)向）時(shí)，比如肌酸酐濃度為1.0mg/dL時(shí)±0.2mg/dL的偏差。單側(cè)檢驗(yàn)用于對(duì)立假設(shè)包含干擾方向（正向或者負(fù)向）時(shí)，比如肌酸酐濃度為1.0mg/dL時(shí)α-酮丁酸引起+0.2mg/dL的偏差。雙側(cè)檢驗(yàn)對(duì)于雙側(cè)檢驗(yàn)，可合理的假設(shè)檢測(cè)誤差的正常分布，對(duì)所需重復(fù)數(shù)的較好的估計(jì)可用下列公式計(jì)算：（1）其中：z1-α/2是對(duì)雙側(cè)檢驗(yàn)的響應(yīng)置信水平100（1-α）的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的百分比；z1-β是響應(yīng)冪100（1-β）的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的百分比；s是檢測(cè)方法的可重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差dmax是待分析物檢測(cè)濃度下的最大允許干擾度。單側(cè)檢驗(yàn)對(duì)于單側(cè)檢驗(yàn)，將公式中的替換z1-α/2為z1-α。其中：z1-α是對(duì)單側(cè)檢驗(yàn)的響應(yīng)置信水平100（1-α）的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的百分比z值方便起見，對(duì)于常用的置信水平和冪水平的z值如下所示表1常用置信水平和冪的百分?jǐn)?shù)比如，評(píng)估者需要檢測(cè)±1.5mg/dL作為可接受的干擾程度，置于95%置信水平（α=0.05）以及95%冪（β=0.05）下的效應(yīng)。要求雙側(cè)檢驗(yàn)?？芍貜?fù)性為1.0mg/dL。計(jì)算需要的重復(fù)數(shù)，將值代入公式。（2）因重復(fù)數(shù)必須是整數(shù)，數(shù)目需要留整，本例中為12。這是每個(gè)標(biāo)本所需的重復(fù)數(shù)目。重復(fù)數(shù)目在95%置信和冪下檢測(cè)各種干擾效應(yīng)所需的重復(fù)數(shù)目列于下面。方便起見，干擾標(biāo)準(zhǔn)表達(dá)為表2中的可重復(fù)性（分析內(nèi)）標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù)（dmax/s）。表2在95%置信和冪下檢測(cè)干擾效應(yīng)所需的重復(fù)數(shù)目重復(fù)的效應(yīng)一個(gè)例子總結(jié)出了合適的重復(fù)數(shù)目的重要性。內(nèi)科醫(yī)生將血清中肌酸酐的微小改變解讀為潛在的腎臟排斥的指征。有時(shí)小如0.2mg/dL的改變都可能引起關(guān)注。然而實(shí)驗(yàn)室人員了解多種生化代謝物和藥物都會(huì)干擾堿性苦味酸肌酸酐檢測(cè)。在一種情況下，一個(gè)近期腎臟受體者顯示出了從1.0到1.2mg/dL的可重復(fù)的變化。內(nèi)科醫(yī)生想知道是否是頭孢類抗生素引起的。在1mg/dL的肌酸酐濃度下，可重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差為0.075mg/dL。實(shí)驗(yàn)室設(shè)定0.1mg/dL為顯著干擾。在合適的重復(fù)數(shù)目下，不精密度的影響可以減少，0.1mg/dL的可能的干擾就可以測(cè)出。首先，將不精密度表達(dá)為可重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù)（dmax/s）：0.1mg/dL/0.075mg/dL=1.33然后，取整為1.3，使用節(jié)中的表2來確定所需的重復(fù)數(shù)目。表中顯示在95%置信與冪下檢測(cè)此程度的效應(yīng)要求對(duì)照與檢測(cè)各做16個(gè)重復(fù)。如果可接受的干擾更大，比如0.2mg/dL（dmax/s=2.7），則想要在同等置信水平下的重復(fù)數(shù)會(huì)更少。表中顯示此情況只需對(duì)照和檢測(cè)各重復(fù)4個(gè)，而非16個(gè)。7.1.4實(shí)驗(yàn)流程配對(duì)差異檢測(cè)的步驟如下：確定合適的待分析物濃度建立“臨床顯著”差異的標(biāo)準(zhǔn)（dmax）。確定每個(gè)混合樣本所需的重復(fù)數(shù)目（n）。參見確定n的值。準(zhǔn)備臨床標(biāo)本的基準(zhǔn)標(biāo)本組（參見節(jié)）。準(zhǔn)備待檢測(cè)物質(zhì)的20x儲(chǔ)存液（參見節(jié)）。備注：如果還有另一濃度，根據(jù)步驟6和8調(diào)整。抽取目的體積的1/20的儲(chǔ)存液至容量瓶中。此為“檢測(cè)”標(biāo)本組。例子：將0.5mL的20x儲(chǔ)存液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中。用基準(zhǔn)標(biāo)本組定容。混勻。抽取目的體積的1/20的溶劑至另一容量瓶中。此為“對(duì)照”標(biāo)本組。用基準(zhǔn)標(biāo)本組定容?；靹?。準(zhǔn)備n份檢測(cè)標(biāo)本和n份對(duì)照標(biāo)本。根據(jù)步驟3確定n的值。按照交替順序檢測(cè)檢測(cè)標(biāo)本（T)和對(duì)照標(biāo)本（C)（比如，C1T1C2T2C3T3...CnTn）。備注：如果系統(tǒng)被樣本串行影響，增加額外的樣本來保護(hù)對(duì)照標(biāo)本免受來自檢測(cè)標(biāo)本的串行，比如C1T1CxCxC2T2CxCxC3T3...CxCxCnTn，額外的對(duì)照標(biāo)本（Cx）的結(jié)果舍棄。記錄數(shù)據(jù)分析結(jié)果。附件E提供了記錄表。7.1.5數(shù)據(jù)分析計(jì)算觀察到的干擾效應(yīng)的“點(diǎn)估計(jì)值”，dobs，作為檢測(cè)標(biāo)本均值和對(duì)照標(biāo)本均值的差。（3）計(jì)算cut-off值，dc，通過使用下列公式來確定接受哪組假設(shè)，n為公式（1）或者節(jié)中表2確定的真實(shí)標(biāo)本量。Cut-off值，dc，對(duì)雙側(cè)檢驗(yàn)可使用下式計(jì)算：（4）其中dnull是空白假設(shè)的值，通常=0。對(duì)于單側(cè)檢驗(yàn)，用1-α代替1-α/2。干擾的95%置信區(qū)間可以根據(jù)下列公式計(jì)算。95%置信區(qū)間=（5）n個(gè)檢測(cè)標(biāo)本和n個(gè)對(duì)照標(biāo)本的平均差距的標(biāo)準(zhǔn)差是合理假設(shè)待分析物濃度檢測(cè)的不精密度對(duì)檢測(cè)標(biāo)本和對(duì)照標(biāo)本是一樣的，其中：s是檢測(cè)方法可重復(fù)性的標(biāo)準(zhǔn)差，n是每個(gè)標(biāo)本的重復(fù)數(shù)目，t0.972,n-1來自于學(xué)生t表作為t-分布n-1自由度下的97.5的百分?jǐn)?shù)。（對(duì)于n>30，用2.0替代t0.972,n-1作為合理的估計(jì)。）7.1.6結(jié)果解讀若點(diǎn)估計(jì)值dobs小于等于cut-off值dc，推斷物質(zhì)引起的偏差小于dmax；否則，接受對(duì)立假設(shè)，認(rèn)為該物質(zhì)干擾。當(dāng)解讀干擾試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，考慮下列警告：由于樣本誤差，真實(shí)的干擾可能與觀察到的“點(diǎn)估計(jì)值”有差異。然而，如果空白假設(shè)真實(shí)，接受的置信為100（1-α）%；如果對(duì)立假設(shè)真實(shí)，接受的置信為100（1-β）%。相應(yīng)的，拒絕的置信為100α%和100β%。檢測(cè)樣本的人為屬性可能會(huì)引入假象。真實(shí)的干擾物質(zhì)可能不是藥品本身，而是代謝物。檢測(cè)標(biāo)本的基質(zhì)可能不能代表典型的待檢測(cè)物的病理學(xué)標(biāo)本，可能引入基質(zhì)效應(yīng)。添加的物質(zhì)可能與病理學(xué)標(biāo)本中的干擾物不同，比如由于蛋白結(jié)合、金屬螯合、沉淀或者待分析物異構(gòu)體。任意的選擇檢測(cè)濃度可能無法顯示出干擾效應(yīng)可能只與其他化合物協(xié)同表達(dá)干擾可能存在于其他的待測(cè)物和干擾物濃度下，而非檢測(cè)的特定濃度。7.2干擾效應(yīng)鑒定如果按照7.1節(jié)中的測(cè)試發(fā)現(xiàn)了在一個(gè)或者多個(gè)待檢測(cè)物濃度下干擾效應(yīng)的存在，則準(zhǔn)備一個(gè)劑量響應(yīng)系列實(shí)驗(yàn)來確定干擾物濃度的干擾程度。干擾物濃度的劑量響應(yīng)系列實(shí)驗(yàn)可由最高干擾物濃度標(biāo)本組與對(duì)照標(biāo)本組的梯度混合制備。7.2.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)劑量響應(yīng)實(shí)驗(yàn)可確定干擾物濃度和干擾程度之間的關(guān)系，可用于消除檢測(cè)范圍內(nèi)的干擾物濃度的影響。一系列檢測(cè)標(biāo)本，系統(tǒng)性的僅在干擾物濃度上存在差異，由兩種標(biāo)本組的定量混合制備。一種是檢測(cè)的最高濃度，一種是檢測(cè)的最低濃度。所有標(biāo)本要一起檢測(cè)，采用隨機(jī)順序，置于可重復(fù)性條件下。有必要避免分析間變異，比如進(jìn)行了校準(zhǔn)或者試劑批號(hào)變化等，可能混淆結(jié)果的解讀。檢測(cè)多個(gè)干擾物濃度的好處是相同統(tǒng)計(jì)置信條件下檢測(cè)干擾程度的每個(gè)濃度只需較少的重復(fù)數(shù)目。這是由于從所有標(biāo)本中獲得的可重復(fù)性信息匯總在了一起來確定置信區(qū)間?？傮w上將每個(gè)檢測(cè)濃度采用三個(gè)重復(fù)即充分。對(duì)于想要計(jì)算每個(gè)濃度下所需重復(fù)數(shù)目以保證95%置信和冪的人，方程列于附件F中。7.2.2檢測(cè)用品基準(zhǔn)標(biāo)本組按照節(jié)中所列方法準(zhǔn)備基準(zhǔn)標(biāo)本組。儲(chǔ)存液按照節(jié)中所列方法準(zhǔn)備潛在干擾物儲(chǔ)存液。高值標(biāo)本組準(zhǔn)備含有5.5節(jié)中所規(guī)定的潛在干擾物的高值標(biāo)本組。按照所述，用基準(zhǔn)標(biāo)本組稀釋儲(chǔ)存液來獲得目標(biāo)值。備注：如果低濃度的內(nèi)源物質(zhì)引起干擾，參見節(jié)中的備注。低值標(biāo)本組準(zhǔn)備含有臨床標(biāo)本群平均干擾物濃度的低值標(biāo)本組。多數(shù)情況下，其可以忽略（如治療性藥物）或者較低（如血紅蛋白或者膽紅素），低值標(biāo)本組可按照節(jié)中所述“對(duì)照標(biāo)本組”的方法制備。檢測(cè)標(biāo)本組準(zhǔn)備一系列的含有干擾物中值濃度的檢測(cè)標(biāo)本組。本流程可用于提供不同標(biāo)本組中干擾物濃度的更高的相關(guān)準(zhǔn)確度和精密度，如Vaks的文獻(xiàn)報(bào)道所述。按下列步驟所述，有高值與低值標(biāo)本組的梯度混合而來。五個(gè)濃度已足夠確定線性劑量響應(yīng)關(guān)系了?；旌系润w積的低值與高值標(biāo)本組來制備兩個(gè)極端的中值濃度標(biāo)本組?；旌系润w積的低值與中值標(biāo)本組來制備兩個(gè)極端的1/4濃度標(biāo)本組?；旌系润w積的中值與高值標(biāo)本組來制備兩個(gè)極端的3/4濃度標(biāo)本組。準(zhǔn)備規(guī)劃圖1指出了假設(shè)干擾物的準(zhǔn)備計(jì)劃，病人標(biāo)本中的正常平均濃度為5mg/dL，而在病理性血清中可能會(huì)達(dá)到20mg/dL。因此高值標(biāo)本組需要設(shè)定為40mg/dL，低值標(biāo)本組的濃度應(yīng)在5mg/dL下檢測(cè)。圖1五水平系列檢測(cè)的準(zhǔn)備規(guī)劃7.2.3實(shí)驗(yàn)流程用于劑量響應(yīng)干擾實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)步驟如下：確定要檢測(cè)的最高與最低濃度。確定“臨床顯著”的差異。如果“配對(duì)差異”實(shí)驗(yàn)已經(jīng)完成，則此值已經(jīng)被確定（參見節(jié)）確定每個(gè)濃度檢測(cè)所需的重復(fù)數(shù)n（參見附件F）。制備高值與低值標(biāo)本組。轉(zhuǎn)移等體積的高值與低值標(biāo)本組至適當(dāng)?shù)娜萜髦?，制備中值?biāo)本組?；靹颉＾D(zhuǎn)移等體積的低值與中值標(biāo)本組至適當(dāng)?shù)娜萜髦?，制?5%標(biāo)本組?；靹?。轉(zhuǎn)移等體積的中值與高值標(biāo)本組至適當(dāng)?shù)娜萜髦?，制?5%標(biāo)本組?；靹?。準(zhǔn)備n份混合血清，n由步驟3確定。在同一分析內(nèi)檢測(cè)五個(gè)標(biāo)本組系列。第一組重復(fù)應(yīng)采用升序檢測(cè)，第二組用降序，第三組用升序，等等，以平均系統(tǒng)漂移效應(yīng)。另一個(gè)減小漂移效應(yīng)的方法是按照隨機(jī)順序檢測(cè)所有標(biāo)本和重復(fù)。計(jì)算低值標(biāo)本組的平均濃度，并從所有其他結(jié)果中減去。將凈結(jié)果列表用于數(shù)據(jù)分析。如果實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)有檢測(cè)干擾物的檢測(cè)方法，其對(duì)驗(yàn)證檢測(cè)到的濃度有一定幫助。7.2.4數(shù)據(jù)分析對(duì)結(jié)果繪圖，觀測(cè)到的效應(yīng)作為y軸，干擾物濃度作為x軸，檢查劑量響應(yīng)關(guān)系的形狀。線性效應(yīng)如果數(shù)據(jù)隨機(jī)分布在直線兩側(cè)，采用線性最小二乘回歸分析。由個(gè)體觀測(cè)值（非平均值）確定斜率、截距和剩余誤差。在圖標(biāo)上繪制回歸線，確定其擬合了數(shù)據(jù)且響應(yīng)是線性的。表3中總結(jié)了一個(gè)常見的干擾物濃度呈現(xiàn)線性干擾的例子。表3線性關(guān)系的五水平劑量響應(yīng)系列檢測(cè)結(jié)果總結(jié)數(shù)據(jù)繪圖并計(jì)算線性回歸公式，如圖2所示。圖2表3描述的劑量響應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的繪圖95%置信段可以圍繞劑量響應(yīng)線計(jì)算出來，根據(jù)其可以確定任何干擾物濃度下的95%置信區(qū)間。使用圖2數(shù)據(jù)的圖表總結(jié)如下。圖3顯示9回歸線5%置信段的圖示。注意置信區(qū)間的大小作為干擾濃度的功能而改變，結(jié)果的最大置信處于干擾物濃度范圍的中間部分。統(tǒng)計(jì)計(jì)算器和電腦程序可用于計(jì)算回歸分析和置信區(qū)間。對(duì)于計(jì)算回歸線兩側(cè)置信區(qū)間的方法，參見如Draper等標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)學(xué)教科書。非線性效應(yīng)干擾可能不是與干擾物濃度呈現(xiàn)線性關(guān)系。如果繪圖數(shù)據(jù)呈現(xiàn)曲線，對(duì)于給定干擾物濃度的恰當(dāng)?shù)墓烙?jì)常常通過圖表確定。表4中數(shù)據(jù)可用于總結(jié)此方法。表4呈現(xiàn)非線性關(guān)系的五水平劑量響應(yīng)系列實(shí)驗(yàn)結(jié)果的總結(jié)。當(dāng)數(shù)據(jù)繪圖后，如圖4所示，任何干擾濃度下的干擾度可以通過圖表來估計(jì)。也可通過使用二次多項(xiàng)式模型的非線性回歸分析來計(jì)算。圖4表4中劑量響應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的繪圖為確定25mmol/L處的預(yù)期干擾，繪制一條通過數(shù)據(jù)的最好的擬合線然后從y軸讀出上對(duì)應(yīng)25mmol/L干擾濃度的干擾度。在本例中，干擾可估計(jì)為20mmol/L。置信區(qū)間可使用合適的非線性回歸分析程序來計(jì)算，此程序包含在大部分統(tǒng)計(jì)分析套裝中。7.2.5結(jié)果解讀如果關(guān)系是線性的，則回歸斜率代表每單位干擾物引起的偏差。Y軸截距代表內(nèi)源干擾物濃度的校正。任何干擾物濃度下的干擾度可由回歸公式計(jì)算，或者由圖表獲得，不論關(guān)系是線性的或是非線性的?；仡檲D2中的數(shù)據(jù)作為例子，由于斜率為正，實(shí)驗(yàn)顯示物質(zhì)引起正向干擾。當(dāng)干擾物為25mmol/L時(shí)，其干擾程度是多大？從回歸方程，我們確定7.3評(píng)估待分析物與干擾物組合兩個(gè)（或多個(gè)）潛在干擾物可以在一個(gè)實(shí)驗(yàn)中更有效的檢測(cè)，檢測(cè)物質(zhì)濃度和待分析物濃度發(fā)生系統(tǒng)性變化。個(gè)體組成效應(yīng)通過析因?qū)嶒?yàn)來消除。優(yōu)點(diǎn)是提高了效率和信息。一次檢測(cè)所需的實(shí)驗(yàn)減少了，干擾物之間的反應(yīng)，也包括待分析物，可以被評(píng)估。潛在的缺點(diǎn)是樣本準(zhǔn)備更加復(fù)雜，增加了人為誤差的可能性。析因?qū)嶒?yàn)應(yīng)用于干擾檢測(cè)已經(jīng)被Kroll等人所報(bào)道。更多關(guān)于多因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的細(xì)節(jié)，請(qǐng)參見Box，Hunter和Hunter。8使用病人標(biāo)本評(píng)估干擾7.1節(jié)中描述的干擾篩查有明顯的限制。不論多么全面，未預(yù)期到的干擾可能會(huì)在病人標(biāo)本中遇到。為減小這種情況發(fā)生的可能性，來自相關(guān)病人群體的標(biāo)本應(yīng)被用來評(píng)估固有的標(biāo)本與標(biāo)本間的變異。與個(gè)體標(biāo)本關(guān)聯(lián)的可重復(fù)的“異常值”結(jié)果給予了未知干擾物質(zhì)的指向。由可重復(fù)的標(biāo)本相關(guān)偏差引起的高度的“分散”也可指示干擾物質(zhì)的存在。病人標(biāo)本結(jié)果也可以用于證明單株樣本池檢測(cè)指出的干擾。如果已知含有疑問物質(zhì)的標(biāo)本中未發(fā)現(xiàn)偏差，需要進(jìn)一步的調(diào)查以解決矛盾的觀測(cè)。8.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)基于分析兩組病人標(biāo)本（即，檢測(cè)組和對(duì)照組）使用1）被評(píng)估的檢測(cè)方法和2）參考檢測(cè)方法或者其他合格的對(duì)比檢測(cè)方法。對(duì)應(yīng)對(duì)照組的來自病人亞組的偏差結(jié)果指出了干擾。備注：本節(jié)未提供細(xì)節(jié)的統(tǒng)計(jì)流程。8.2對(duì)比檢測(cè)方法已知對(duì)干擾敏感度低的檢測(cè)方法用來在對(duì)比研究中建立“真值”。理想狀態(tài)中，參考檢測(cè)方法應(yīng)該用于此目的。如果沒有可用的參考流程，可以采用其他合格的對(duì)比檢測(cè)方法（參見EP9）。如果對(duì)比檢測(cè)方法缺乏足夠的特異性，得出確定結(jié)論的能力就要被折中。下列情況可能會(huì)出現(xiàn)：特定病人標(biāo)本中觀測(cè)到的偏差可能由于任何一個(gè)檢測(cè)引起的。兩個(gè)檢測(cè)方法間沒有偏差可能由于1）對(duì)相同干擾物的相似的敏感性，或者2）兩者都沒有被干擾物影響。兩種檢測(cè)方法間的關(guān)系（系統(tǒng)偏差）可由對(duì)照樣本的分析來確定。8.3病人群體8.3.1檢測(cè)標(biāo)本檢測(cè)標(biāo)本選擇于目的病人群體。已知其含有一種或者多種潛在干擾物質(zhì)（比如治療性藥品），其來自于確診處于特定情況或患有特定疾病。比如病人標(biāo)本可能基于以下標(biāo)準(zhǔn)來選擇：相關(guān)疾病（如來自心臟、肺或者腎部異常病人的標(biāo)本）相關(guān)藥劑（如來自已知服用目的藥物的病人的標(biāo)本）尿毒癥患者（如預(yù)透析），其血液中可能含有高濃度的內(nèi)源代謝物或者藥物其他可確定的組成部分（如不正常的膽紅素、血紅蛋白、蛋白質(zhì)和脂類濃度）8.3.2對(duì)照標(biāo)本對(duì)照標(biāo)本必須橫跨相同的待測(cè)物濃度范圍。選擇其依據(jù)是因?yàn)橐阎洳缓懈蓴_物質(zhì)或者他們含有與疾病相關(guān)的物質(zhì)。對(duì)照的選擇：來自于沒有服用目的藥物的病人潛在干擾物濃度正常的病人經(jīng)過相同或者相似的診斷待分析物分布類似于檢測(cè)標(biāo)本每次檢測(cè)必須包含對(duì)照組標(biāo)本。所需測(cè)試與對(duì)照標(biāo)本的數(shù)量取決于以下三個(gè)因素：兩種檢測(cè)方法的精密度；要檢測(cè)的干擾效應(yīng)的程度；所需置信水平。如果效應(yīng)很明顯而且兩種檢測(cè)方法都有很好的精密度，每組10至20個(gè)樣本即充分。如果需要更多的樣本來量化所需置信水平的效應(yīng)（即，偏差過小以至于被不精密度掩蓋了），則效應(yīng)不太可能具有臨床顯著性。請(qǐng)參考EP9和EP14的統(tǒng)計(jì)學(xué)流程來確定所需的樣本數(shù)目。選擇檢測(cè)和對(duì)照樣本。選擇合適的參考或合格的對(duì)比檢測(cè)方法。在盡可能短的時(shí)間間隔里，通常兩小時(shí)以內(nèi)，用兩種檢測(cè)方法檢測(cè)標(biāo)本的兩份重復(fù)。時(shí)間間隔要合理（取決于待分析物和流程穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)），理論依據(jù)需要記錄。注意以下事項(xiàng)：如果待分析物或者潛在干擾物不穩(wěn)定，如果基質(zhì)不穩(wěn)定（全血），或者如果樣本量很?。ㄓ捎跇颖緭]發(fā)），時(shí)間就尤為重要。這些情況下需特別留意。將檢測(cè)分散至幾天內(nèi)，來減少日間不精密度。改變每天兩次檢測(cè)的前后順序；改變（或者隨機(jī)）每次檢測(cè)的對(duì)照和檢測(cè)標(biāo)本。如果檢測(cè)方法可能產(chǎn)生串行，小心設(shè)定樣本的順序。留意任何的系統(tǒng)性差異都可能錯(cuò)誤指出干擾。如果觀察到了偏差，檢測(cè)樣本中藥物或者其他潛在干擾物的濃度，來建立偏差和干擾濃度的關(guān)系。8.5數(shù)據(jù)分析如果干擾存在，繪圖數(shù)據(jù)往往能從視覺上指出。對(duì)比選擇的病人標(biāo)本數(shù)據(jù)和對(duì)照組數(shù)據(jù)，并檢查是否存在系統(tǒng)性偏差。如果存在，則評(píng)估選擇的病人標(biāo)本的結(jié)果和對(duì)照結(jié)果的均值的差異并與干擾標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比。由此，決定干擾是否被排除掉或者需要進(jìn)一步的調(diào)查。下面的方法和例子提供了額外的指導(dǎo)，但是確定引起干擾的原因則超出了本指導(dǎo)原則的范圍。8.5.1繪制偏差對(duì)對(duì)比檢測(cè)值的關(guān)系圖當(dāng)繪制偏差對(duì)對(duì)比檢測(cè)值的關(guān)系圖時(shí)，遵循下列步驟：將結(jié)果列表進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。平均每個(gè)標(biāo)本的兩個(gè)重復(fù)的值。對(duì)于每個(gè)標(biāo)本，計(jì)算并記錄平均偏差（檢測(cè)方法結(jié)果減去對(duì)照檢測(cè)結(jié)果）。對(duì)每個(gè)點(diǎn)繪圖，偏差作為縱軸，對(duì)比檢測(cè)方法的檢測(cè)濃度作為水平軸。使用不同的符號(hào)代表檢測(cè)和對(duì)照標(biāo)本。使用線性回歸分析（對(duì)比檢測(cè)方法=x）統(tǒng)計(jì)每組數(shù)據(jù)來確定Sy,x?？捎糜谟?jì)算95%置信區(qū)間（參見下例）。8.5.2評(píng)估偏差確定可能的干擾圖5演示了這類實(shí)驗(yàn)典型的結(jié)果。圖5（A-D）基于病人標(biāo)本的不同干擾試驗(yàn)的四種可能結(jié)果（變量在文中討論）8.5.3相對(duì)于對(duì)照組的正向偏差在圖5（A）中，檢測(cè)組數(shù)據(jù)（+）顯示出了偏差且變異比對(duì)照組數(shù)據(jù)（·）大，顯示出相對(duì)于對(duì)比檢測(cè)方法來說更收縮的分散塊以及可以忽略的偏差。本例中，結(jié)果提示了檢測(cè)標(biāo)本中某些組分引起了干擾，但并不能下結(jié)論，因?yàn)橹眯艆^(qū)間互相重疊（繪制于數(shù)據(jù)點(diǎn)的右側(cè)，按平均偏差±2Sy,x）這些結(jié)果可能由于偶然造成。需要更進(jìn)一步的調(diào)查。相對(duì)于對(duì)照組沒有偏差——成比例的偏差在圖5（B）中，檢測(cè)組和對(duì)照組顯示出了正向比例偏差。置信區(qū)間基本重疊。不能得出干擾引起的差異。相對(duì)于對(duì)比檢測(cè)方法的負(fù)向干擾在圖5（C）中，數(shù)據(jù)顯示出清晰的負(fù)向干擾。置信區(qū)間分離的很開。對(duì)照組顯示出了正向偏差。注意如果試驗(yàn)中沒有包含對(duì)照組來校正與潛在干擾無關(guān)的系統(tǒng)偏差的話，效應(yīng)比預(yù)期的要顯著增大。檢測(cè)組偏差的上限與對(duì)照組的平均偏差的差異可以與干擾標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比來評(píng)估是否可能會(huì)有臨床顯著的干擾。下列情況可能發(fā)生：如果對(duì)照組與檢測(cè)組的平均差既有臨床顯著性又有統(tǒng)計(jì)顯著性，可以下結(jié)論認(rèn)為檢測(cè)到了臨床顯著干擾。如果上述差異是統(tǒng)計(jì)顯著但不是臨床顯著，則沒有檢測(cè)到臨床顯著差異。如果差異是臨床顯著但不是統(tǒng)計(jì)顯著，則需要更大的樣本規(guī)模。相對(duì)于對(duì)照組沒有偏差在圖5（D）中，相對(duì)于對(duì)照組，檢測(cè)組的平均偏差呈現(xiàn)輕度負(fù)向。然而，此程度的干擾需要考慮相對(duì)于對(duì)照組的較大程度的變異。置信區(qū)間顯示結(jié)果沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。8.5.4繪制偏差對(duì)潛在干擾物的關(guān)系圖如果疑似干擾物的濃度可以測(cè)量出來，則確定其濃度是否能與觀測(cè)到的偏差關(guān)聯(lián)起來。圖6偏差與疑似干擾物濃度的關(guān)系圖以偏差（檢測(cè)結(jié)果減去對(duì)比檢測(cè)結(jié)果）作為縱軸，潛在干擾物濃度作為橫軸。圖6總結(jié)了能與潛在干擾物濃度呈現(xiàn)良好關(guān)聯(lián)的觀測(cè)到的效應(yīng)。構(gòu)建與解讀“偏差關(guān)系圖”的方法在EP9中可見。檢查偏差對(duì)疑似干擾物濃度關(guān)系圖。如果關(guān)系呈線性，分散點(diǎn)貫穿整個(gè)范圍，則可以同時(shí)分析所有數(shù)據(jù)。干擾效應(yīng)與干擾物濃度的關(guān)系可以由節(jié)中描述的線性回歸分析確定。另一種可選方法，如果關(guān)系不是線性：將數(shù)據(jù)分為小濃度范圍的多個(gè)子集，然后計(jì)算各個(gè)子集數(shù)據(jù)的平均偏差（干擾）和平均濃度。由此可指出由于檢測(cè)物質(zhì)引發(fā)的干擾的程度。8.6結(jié)果解讀使用病人標(biāo)本的局限主要是缺乏檢測(cè)變數(shù)的對(duì)照，以及需要高特異性對(duì)比檢測(cè)方法來進(jìn)行對(duì)結(jié)果的權(quán)威解讀。注意：本實(shí)驗(yàn)僅指出偏差對(duì)應(yīng)特定物質(zhì)的關(guān)聯(lián)；其并不證明引發(fā)效應(yīng)的關(guān)系。真實(shí)的干擾物可能是恰巧與疑似干擾物同時(shí)存在的物質(zhì)。比如，由于疾病產(chǎn)生的生化代謝物引起的干擾可能會(huì)被錯(cuò)誤的歸結(jié)為用于治療疾病的藥物。如果標(biāo)本不是新鮮的，不穩(wěn)定的組成物（如乙酰醋酸鹽，CO2）可能會(huì)損失。住院病人通常會(huì)接受多種藥物（或多種藥物療養(yǎng)）可能會(huì)提高內(nèi)源代謝物的濃度。預(yù)期的按疾病和用藥將病人分組可能會(huì)很難實(shí)現(xiàn)。在病人樣本中干擾可能沒有出現(xiàn)。對(duì)比檢測(cè)方法可能對(duì)干擾的特征不夠充足。也可能會(huì)被相同的干擾物影響。無論如何，本方法在提供可能被遺漏的干擾物質(zhì)的線索上被證明是寶貴的，其也可能是唯一能檢測(cè)藥物代謝物引起的未預(yù)期的干擾的方法。參見附件A中關(guān)于使用分離技術(shù)或者免疫化學(xué)檢測(cè)方法的檢測(cè)的特殊考慮。9建立、證明與驗(yàn)證干擾聲明這些指導(dǎo)原則可被制造商用來探明和證明特異性并建立干擾聲明，也可被臨床實(shí)驗(yàn)室用來證明制造商的聲明并驗(yàn)證其檢測(cè)方法的特異性滿足臨床需求。一個(gè)良好的檢測(cè)方法允許臨床實(shí)驗(yàn)室影響制造商的數(shù)據(jù)來滿足其自身的證明與驗(yàn)證要求。本節(jié)描述了干擾評(píng)估驗(yàn)證所需要的要求。證明與驗(yàn)證是在臨床實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)學(xué)設(shè)備和軟件工業(yè)中有些許使用上的差異的相似的概念。本指導(dǎo)原則使用ISO9001、ISO15189和HS1定義的術(shù)語(yǔ)。兩個(gè)術(shù)語(yǔ)都指提供必須要求已被滿足的客觀證據(jù)。證明表示使用者（或者監(jiān)管機(jī)構(gòu)）的要求已經(jīng)被滿足（如對(duì)于病人結(jié)果的準(zhǔn)確度要求），而驗(yàn)證表示特定的標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)被滿足（如干擾標(biāo)準(zhǔn)或者干擾聲明）。9.1建立干擾聲明干擾是檢測(cè)方法應(yīng)用于預(yù)期用途的局限性。對(duì)于商品檢測(cè)方法，已知干擾的物質(zhì)應(yīng)在使用說明中注明。檢測(cè)中證明不產(chǎn)生干擾的物質(zhì)也應(yīng)注明，這樣實(shí)驗(yàn)室就可以驗(yàn)證檢測(cè)對(duì)于服務(wù)的病人群體適用度。臨床實(shí)驗(yàn)室要求來自于制造商的以下信息：聲明中涵蓋的待分析物與干擾物濃度；參與潛在干擾性評(píng)估的物質(zhì)的名稱；已知產(chǎn)生干擾的物質(zhì)的化學(xué)名和/或通用名；用于定義臨床顯著干擾的標(biāo)準(zhǔn)；某物質(zhì)產(chǎn)生干擾的臨界濃度；95%置信下在特定待分析物濃度下觀測(cè)到的干擾度；評(píng)估步驟（如果EP7沒有被引用，描述方法并闡明用來確定干擾的冪和置信水平）。三種可接受的方法可用于陳述干擾聲明。干擾聲明可指出當(dāng)干擾物質(zhì)高于某一濃度時(shí)，其引起的偏差超過干擾標(biāo)準(zhǔn)（冪=95%）干擾聲明可指出當(dāng)干擾物質(zhì)低于某一濃度時(shí)，觀測(cè)不到干擾（置信水平=95%）干擾聲明可以只指出已被報(bào)道會(huì)對(duì)檢測(cè)方法造成干擾的物質(zhì)。當(dāng)定量信息無法獲得時(shí)此方法較合適。比如，已出版的報(bào)道提供了證據(jù)證明服用了特定藥物的病人的結(jié)果不符合真值。如果誤差程度是臨床顯著的，制造商應(yīng)該1）進(jìn)一步調(diào)查以明確和注明干擾；或者2）注明該物質(zhì)已被報(bào)道會(huì)產(chǎn)生干擾并引用文獻(xiàn)參考或其他數(shù)據(jù)來源。檢測(cè)并證明不會(huì)產(chǎn)生干擾的物質(zhì)應(yīng)被總結(jié)并提供給用戶。可以以“特異性”聲明的形式提供（參見節(jié)）。用于干擾聲明和特異性聲明的模板提供如下。其他方法也可接受，但實(shí)驗(yàn)室鼓勵(lì)采用解讀的一致性。9.1.1干擾聲明例1干擾物濃度系列測(cè)試結(jié)果：AST檢測(cè)方法根據(jù)EP7進(jìn)行了干擾評(píng)估。以下常見物質(zhì)，當(dāng)添加至血清中，在列出的濃度下產(chǎn)生干擾。超出10%的偏差被視為顯著干擾。注意：不要試圖基于這些數(shù)據(jù)對(duì)待分析物結(jié)果進(jìn)行校正。待分析物與干擾物濃度之間的關(guān)系未確定。例2膽紅素檢測(cè)方法——兩水平干擾篩查：膽紅素檢測(cè)方法按照EP7進(jìn)行了干擾評(píng)估。當(dāng)添加至血清中，以下常見物質(zhì)在所列的待分析物濃度和干擾物濃度下產(chǎn)生干擾。超過0.2mg/dL的偏差被視為干擾。注意：不要試圖基于這些數(shù)據(jù)對(duì)待分析物結(jié)果進(jìn)行校正。待分析物與干擾物濃度之間的關(guān)系未確定。9.1.2特異性聲明下列物質(zhì)，根據(jù)CLSI步驟，當(dāng)檢測(cè)AST活性為25U/L和200U/L的血清時(shí)，未發(fā)現(xiàn)在所列濃度下產(chǎn)生干擾。小于10%的偏差不被認(rèn)為是顯著干擾。制造商應(yīng)要求應(yīng)該報(bào)告觀測(cè)到的偏差，響應(yīng)95%置信限制的偏差，實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)差和樣本規(guī)模。9.2驗(yàn)證分析特異性驗(yàn)證表示客觀指出特定的標(biāo)準(zhǔn)已被滿足?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)應(yīng)基于醫(yī)學(xué)要求來建立（參見節(jié)5）。制造商必須驗(yàn)證其檢測(cè)方法的特異性符合來自于其中間客戶——臨床實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)。臨床實(shí)驗(yàn)室必須驗(yàn)證其檢測(cè)的性能，包括特異性，符合制造商的聲明，或其需要證明檢測(cè)方法符合來自于其中間客戶——內(nèi)科醫(yī)生的準(zhǔn)確度要求。顯然，這些行為都是緊密相連的。制造商的要求必須滿足醫(yī)學(xué)需求。然而，實(shí)驗(yàn)室可能會(huì)強(qiáng)加更多嚴(yán)厲的性能要求，因?yàn)殄e(cuò)誤結(jié)果可能會(huì)導(dǎo)致不必要的疑難排除并損害內(nèi)科醫(yī)生對(duì)實(shí)驗(yàn)室的信心?？赡苄枰㈩~外的標(biāo)準(zhǔn)來為錯(cuò)誤結(jié)果，或者“離群點(diǎn)”，在預(yù)定病人群體中出現(xiàn)的可允許頻率。因?yàn)闈撛诘奈搭A(yù)計(jì)到的干擾，準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)通常建立為如99%或95%個(gè)體結(jié)果必須落在特定的可允許誤差限制內(nèi)。該標(biāo)準(zhǔn)必須被檢測(cè)方法的醫(yī)學(xué)要求證明。9.2.1制造商檢測(cè)方法特異性的驗(yàn)證表示制造商有客觀證據(jù)證明符合了預(yù)先建立的干擾標(biāo)準(zhǔn)。干擾試驗(yàn)需要在新檢測(cè)構(gòu)建的早期開始，這樣試驗(yàn)變化可以早于試驗(yàn)轉(zhuǎn)化之前被補(bǔ)足。對(duì)制造商的驗(yàn)證行為的CLSI步驟的必要元素列于下。當(dāng)所有的元素都包括時(shí)，制造商可以聲明與EP7的一致性：系統(tǒng)性確認(rèn)了參與評(píng)估的潛在干擾物（參見5.4節(jié)）；建立了基于用戶要求的干擾標(biāo)準(zhǔn)（參見5.1節(jié)）；實(shí)施了綜合性的干擾物篩查（參見7.1節(jié)）；確定了引起干擾的濃度（參見7.2節(jié)）；產(chǎn)品標(biāo)簽/使用說明中描述了實(shí)驗(yàn)室要求的干擾與特異性信息（參見9.1節(jié)）。9.2.2臨床實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證檢測(cè)方法的特異性表示實(shí)驗(yàn)室有客觀證據(jù)證明符合了其對(duì)干擾的標(biāo)準(zhǔn)。在此種目的下，如果應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室服務(wù)的病人群體中，制造商的標(biāo)準(zhǔn)和數(shù)據(jù)可被實(shí)驗(yàn)室接受。如果實(shí)驗(yàn)室不能依賴制造商的驗(yàn)證數(shù)據(jù)或其他干擾信息來源，實(shí)驗(yàn)室必須建立自己的標(biāo)準(zhǔn)并實(shí)施對(duì)多數(shù)可能干擾源的自行評(píng)估。節(jié)9.2.1列出了為達(dá)到和本指導(dǎo)原則一致性的評(píng)估步驟。實(shí)驗(yàn)室也可能需要驗(yàn)證滿足了特定的干擾聲明。此話題包含在9.4節(jié)中。9.3證明分析特異性證明表示客觀指出符合了客戶要求。證明的程度應(yīng)與由干擾物質(zhì)引起的錯(cuò)誤結(jié)果的風(fēng)險(xiǎn)一致。9.3.1制造商證明表示提供客觀證據(jù)證明方法的特異性，包括標(biāo)簽聲明中的任何局限性，符合其中間客戶（如臨床實(shí)驗(yàn)室）的功能要求?？蛻粜枰饕c準(zhǔn)確度的醫(yī)學(xué)要求相關(guān)。本指導(dǎo)原則對(duì)于制造商證明的必須元素包含相關(guān)病人群體評(píng)估。節(jié)7描述了怎樣確認(rèn)天然病人標(biāo)本中觀測(cè)到的效應(yīng)和怎樣評(píng)估相關(guān)病人群體中非預(yù)期的干擾物質(zhì)。這些在內(nèi)部或外部性能試驗(yàn)中的證明行為一般都和EP9中的方法比較實(shí)驗(yàn)相關(guān)聯(lián)。9.3.2臨床實(shí)驗(yàn)室證明表示提供客觀證據(jù)證明方法的特異性，包括標(biāo)簽聲明中的任何局限性，符合其中間