臨床生化干擾實驗批準(zhǔn)指南-課件

臨床生化干擾實驗批準(zhǔn)指南臨床生化干擾實驗批準(zhǔn)指南1作用

對廠商來說,通過EP7程序能夠篩選潛在干擾物質(zhì),量化干擾效應(yīng),證實病人樣本中的干擾,確認(rèn)分析方法對干擾物質(zhì)的敏感性,評估潛在的風(fēng)險,并將有意義的干擾聲明提供給用戶。關(guān)于臨床實驗室來說,通過EP7的調(diào)查策略,規(guī)定數(shù)據(jù)收集和分析要求,確認(rèn)干擾聲明,研究明確的干擾物質(zhì)帶來的結(jié)果差異,確保分析方法符合臨床要求。作用對廠商來說,通過EP7程序能夠篩選潛2主要內(nèi)容干擾相關(guān)概念與理論適用范圍干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)干擾分析前的質(zhì)量保證干擾測定用病人標(biāo)本評價干擾建立、確認(rèn)和驗證干擾聲明調(diào)查分析與臨床不一致的病人結(jié)果主要內(nèi)容干擾相關(guān)概念與理論3術(shù)語分析物(Analyte):實驗室測試的物質(zhì)或者成分干擾物(Interferent):樣本中不同于分析物并能引起測量偏倚的成分干擾:在臨床生化中,由于另一成分影響或樣本的特性,待測一定濃度的被分析物出現(xiàn)有臨床意義的偏倚干擾標(biāo)準(zhǔn):干擾物所允許的最大結(jié)果偏倚干擾敏感度:某一分析方法對來自其他成分或者樣本特性的干擾引起誤差的敏感性

術(shù)語分析物(Analyte):實驗室測試的物質(zhì)或者成分4術(shù)語干擾聲明:一種物質(zhì)影響分析方法結(jié)果效應(yīng)的陳述干擾篩選:分析系統(tǒng)評價中,利用高濃度樣品進(jìn)行一系列能鑒別有估計發(fā)生干擾的物質(zhì)差異結(jié)果//異常結(jié)果//假性結(jié)果(Discrepantresult//Anomalousresults//Spuriousresults):一種與臨床不一致的結(jié)果,或同一標(biāo)本的另一個不同結(jié)果,或與其他方法不同結(jié)果,或與已確定的臨床診斷不相符的結(jié)果術(shù)語干擾聲明:一種物質(zhì)影響分析方法結(jié)果效應(yīng)的陳述5

術(shù)語內(nèi)源性干擾:樣本中的一些生理物質(zhì)(例如膽紅素、血紅蛋白),可對另一些物質(zhì)分析時引起干擾。外源性干擾:一種源自體外的物質(zhì)(例如,藥物或其代謝物,防腐劑,污染物),可對樣本中另一物質(zhì)的分析引起干擾。術(shù)語內(nèi)源性干擾6術(shù)語驗證(validation):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù),證實能夠滿足某期望用途的特定要求。(users’requirementshavebeenmet(e、g、,accuracyrequirementsforpatients’results)確認(rèn)(verification):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù),確認(rèn)滿足了特定的要求。(specifiedcriteriahavebeenmet(e、g、,interferencecriteriaorinterferenceclaims)術(shù)語驗證(validation):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù)7適用范圍1、適用大部分析方法和儀器,特別方法估計需要必要的調(diào)整,如分離技術(shù)和免疫學(xué)分析方法在附錄A中被討論。2、血清、血漿、全血、腦脊液、尿和其它大多數(shù)體液等標(biāo)本類型都可用本指南評估適用范圍1、適用大部分析方法和儀器83、適用以下干擾物質(zhì):

病理情況下的代謝物,如膽紅素、脂肪、蛋白質(zhì)、血紅蛋白等;病人治療期間引入的物質(zhì),如藥物、腸外營養(yǎng)、血漿代用品、抗凝劑等;病人吸收的物質(zhì),如藥品濫用、營養(yǎng)補充等;標(biāo)本準(zhǔn)備引入的物質(zhì),如抗凝劑、防腐劑等;標(biāo)本處理過程中引入的污染物,如手霜、滑石粉、促凝劑等;標(biāo)本自身的基質(zhì)效應(yīng),其理化性質(zhì)跟理想的新鮮標(biāo)本不同。適用范圍3、適用以下干擾物質(zhì):適用范圍91、干擾對不準(zhǔn)確度的影響

不準(zhǔn)確度(總分析誤差)包括不周密度、方法特異性偏倚和樣本特異性偏倚(干擾),對干擾物質(zhì)的敏感性能夠引起系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差?；靖拍罨靖拍?02、分析前效應(yīng)

分析前分析物或者它的濃度的改變通常稱為“分析前效應(yīng)”,這些作用估計會影響實驗結(jié)果的臨床應(yīng)用,但不能視作“分析干擾”。這些作用:體內(nèi)藥物作用,如使用藥物后因生理響應(yīng)使激素濃度變化標(biāo)本處理,由于蒸發(fā)、溶血或者血清長時間不分離使電解質(zhì)、蛋白、水含量改變標(biāo)本收集,如在靜脈滴注時(內(nèi)含分析物)取樣

基本概念2、分析前效應(yīng)基本概念113、絕對干擾與相對干擾

干擾作用可看成是絕對的或相對的絕對干擾:一般病人標(biāo)本中含有某物質(zhì),一旦它的存在即會引起干擾。相對干擾:一般病人標(biāo)本中含有某物質(zhì),其含量相關(guān)于混合樣品中的平均濃度,不同病人樣品中含有該物質(zhì)的濃度變化引起干擾作用的變化,相對干擾作用在臨床實驗中更有意義。基本概念3、絕對干擾與相對干擾基本概念12基本概念

相對干擾一些方法能夠校正干擾物的平均濃度做補償,以使病人標(biāo)本中的干擾效應(yīng)減小到最低,有代表性的方法包括樣品前處理、設(shè)置空白對比、標(biāo)準(zhǔn)血清校準(zhǔn)和數(shù)學(xué)校正,當(dāng)干擾物的濃度大于或者小于病人樣本中的平均濃度時將引起誤差?；靖拍?/p>

相對干擾13基本概念4、干擾機(jī)制由于某干擾物的存在以多種方式影響分析過程,主要機(jī)制:物理作用干擾物具有的物理性質(zhì),使它與分析物一樣被檢測出來,如顏色、光散射(光吸收)、洗脫位置、電極響應(yīng)等。干擾物估計會改變標(biāo)本的物理特性,如表面張力、黏度、濁度、離子強度等,干擾檢測結(jié)果?；靖拍?、干擾機(jī)制14基本概念干擾機(jī)制化學(xué)作用

干擾物估計會影響酶活力,例如,阻止金屬激活劑結(jié)合到活性中心上去,氧化必須的巰基等。干擾物也可破壞或阻止反應(yīng),例如,破壞試劑或抑止指示反應(yīng)。干擾物也可改變分析物的形式,例如,形成復(fù)合物或沉淀?；靖拍罡蓴_機(jī)制15基本概念4、干擾機(jī)制非特異性干擾物估計和分析物以同樣的方式參與反應(yīng),例如,苦味酸肌酐方法中酮酸干擾,重氮膽紅素方法重吲哚酚硫酸鹽的干擾。在免疫化學(xué)方法中干擾物和抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。例如,茶堿方法中咖啡因的干擾?；靖拍?、干擾機(jī)制16基本概念4、干擾機(jī)制水取代作用非水物質(zhì)(蛋白質(zhì)、脂質(zhì)),由于取代了血漿中部分水體積,影響了一些分析物的測定。這些作用考慮或不考慮為干擾作用,取決于要求的結(jié)果是以總體積的濃度表示,依然以血漿水的濃度來表示?；靖拍?、干擾機(jī)制17干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)

為保證客觀性,可接受標(biāo)準(zhǔn)必須在評價實驗操作之前就確定。建立可接受標(biāo)準(zhǔn)時,必須考慮臨床意義和統(tǒng)計學(xué)意義兩者之間的差別。干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)為保證客觀性,可接受標(biāo)準(zhǔn)必須在評價實驗操181、臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)基于生理變異源于臨床經(jīng)驗基于被分析物變異干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)

1、臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)192、統(tǒng)計學(xué)意義在確定一個物質(zhì)是否存在干擾前,首先確定所得到的結(jié)果是否有統(tǒng)計學(xué)意義。3、分析物檢測濃度干擾應(yīng)該在兩種醫(yī)學(xué)決定濃度被評估,假如在一種濃度上進(jìn)行測試,要注意有估計漏過在其他分析物濃度水平上有臨床意義的干擾。干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)2、統(tǒng)計學(xué)意義干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)20干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)4、干擾物檢測濃度決定一種物質(zhì)在“最壞情況”的條件下是否會產(chǎn)生干擾,干擾篩選應(yīng)該在實驗室期望觀察到的最高濃度水平的病人樣本中進(jìn)行。5、潛在的干擾物質(zhì)干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)4、干擾物檢測濃度21干擾分析前的質(zhì)量保證在進(jìn)行一個干擾實驗之前,必須進(jìn)行:培訓(xùn)和熟悉周密度確認(rèn)--EP5《臨床生化設(shè)備性能的周密度評價》準(zhǔn)確度確認(rèn)--EP9《利用病人樣本進(jìn)行方法學(xué)比較和偏倚評估》攜帶污染評價質(zhì)量控制--C24《內(nèi)部質(zhì)量控制實驗:原理和定義》標(biāo)準(zhǔn)化防范—M29《實驗室工作人員幸免職業(yè)感染》安全性和廢物處置--參照廠商的標(biāo)簽和材料安全數(shù)據(jù)表(MSDS)干擾分析前的質(zhì)量保證在進(jìn)行一個干擾實驗之前,必須進(jìn)行:22干擾測定(Determinationofinterferencecharacteristics)第一種方法:評價潛在的干擾物添加到樣本后的干擾效應(yīng)(干擾篩選)第二種方法:評價個別有代表性的病人結(jié)果與高特異性的比較方法的結(jié)果偏倚(用病人標(biāo)本評價干擾)干擾測定(Determinationofinterfer23干擾篩選

將陽性干擾物加入測定樣品中,與不加的對比組比較有無偏移,稱為“配對差異”實驗。一般最有效的方法是在較高濃度下對系列估計的干擾物作初步篩選,假如臨床顯著意義,則該物質(zhì)不是干擾物,無須進(jìn)一步實驗。反之,具有臨床顯著意義的,應(yīng)進(jìn)一步評價以確定干擾物濃度與干擾程度間的關(guān)系,這類實驗稱為“劑量效應(yīng)”(dose－response)實驗干擾篩選將陽性干擾物加入測定24實驗設(shè)計1、測試組和對比組在同一個分析批內(nèi)完成;2、計算重復(fù)測量次數(shù):有臨床意義的最小差異值;假設(shè)檢驗水準(zhǔn);重復(fù)性(批內(nèi)周密度)。實驗設(shè)計1、測試組和對比組在同一個分析批內(nèi)完成;25實驗材料

1基礎(chǔ)標(biāo)本(Basepool)

從幾個健康的、沒有進(jìn)行藥物治療的個體獲得適當(dāng)類型(血清、尿等)的新鮮樣本,基礎(chǔ)樣本應(yīng)能反映樣本基質(zhì),能反映分析物的特點。合適的冰凍或凍干樣本,確認(rèn)測試材料是否與臨床樣本相似計算所需樣本量測定基礎(chǔ)標(biāo)本中分析物的濃度并用合適的純物質(zhì)調(diào)整測試管的分析物濃度到醫(yī)學(xué)決定濃度,應(yīng)幸免加入分析物時引入其他物質(zhì),推薦的分析物測試濃度見附錄B。實驗材料

1基礎(chǔ)標(biāo)本(Basepool)26實驗材料2、貯存液獲得合適而純的潛在干擾物,或者該物質(zhì)最接近體內(nèi)循環(huán)狀態(tài)的形式選擇一種能夠充分溶解分析物的溶劑盡估計小地稀釋樣本基質(zhì),最好小于5%。假如溶解度允許,通常配制成濃縮的20倍的貯存溶液有機(jī)溶劑需要特別的對待,氯仿至少要求1:100的稀釋倍數(shù),乙醇濃度大于1～2％時能夠使抗體變性。實驗材料2、貯存液273、對比樣本用制備貯存液相同體積的溶劑替代測試干擾物,其他要求與測試樣本相同。假如對比樣本中存在測試物質(zhì)(比如膽紅素),使用合適的分析方法確定它的濃度。假如對比樣本中被分析物濃度與基礎(chǔ)樣本中明顯的不相符,考慮溶劑為潛在的干擾物。實驗材料3、對比樣本實驗材料28重測次數(shù)要求重測次數(shù)取決于統(tǒng)計學(xué)假設(shè)水準(zhǔn)當(dāng)有效假設(shè)檢驗不能確定干擾的方向(正的或負(fù)的)時使用雙側(cè)檢驗,當(dāng)有效假設(shè)檢驗包括干擾的方向(正的或負(fù)的)時使用單側(cè)檢驗重測次數(shù)要求重測次數(shù)取決于統(tǒng)計學(xué)假設(shè)水準(zhǔn)29重測次數(shù)要求雙側(cè)檢驗:Z1-/2:100(1－?)%的置信水平,z1－?

:100(1－?)％檢驗效能,s是重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差。dmax是分析物在測試濃度范圍內(nèi)的最大允許干擾。單側(cè)檢驗:

用Z1-代替Z1-/2重測次數(shù)要求雙側(cè)檢驗:30

z百分位值:重測次數(shù)要求z百分位值:重測次數(shù)要求31

z百分位值:舉例:檢測可接受干擾程度為1、5mg/dL的干擾效應(yīng),95％(＝0、05)檢驗水準(zhǔn)時,重復(fù)性(批內(nèi)周密度)為1、0mg/dL,計算重復(fù)次數(shù):重測次數(shù)要求z百分位值:重測次數(shù)要求32批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):

95％(＝0、05)檢驗水準(zhǔn)時檢測不同的干擾效應(yīng)所需的重測次數(shù)如下:

重測次數(shù)要求批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):重測次數(shù)要求33批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):舉例在1mg/dL肌酐濃度水平,批內(nèi)重復(fù)測定的標(biāo)準(zhǔn)差為0、075mg/dL,實驗室認(rèn)為0、1mg/dL是一個有意義的干擾。需要測定多少次,估計干擾能被檢測到？首先,把不精確度表述為批內(nèi)重復(fù)測定的標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù):

0、1mg/dL/0、075mg/dL=1、33。將1、33向前舍入一位為1、3,上表決定重復(fù)測定次數(shù),得出在95％(＝0、05)檢驗水準(zhǔn)時,每個對比和測試樣品需要重復(fù)測定16次。重測次數(shù)要求批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):重測次數(shù)要求34實驗程序

“配對差異”實驗:

1)合適的分析物濃度;2)建立有臨床意義差別的標(biāo)準(zhǔn)(dmax);3)確定每個樣品所需的重復(fù)測量次數(shù);4)準(zhǔn)備臨床基礎(chǔ)標(biāo)本;5)準(zhǔn)備20倍的濃縮貯存液(潛在干擾物),假如使用另外一種濃度)確定,依照步驟6和8稀釋(推薦濃度見附表C);實驗程序

“配對差異”實驗:356)用吸管吸取1/20容器體積的濃縮貯存液到容量瓶中,稱為測試樣品,7)用基礎(chǔ)液補足到刻度體積,充分混勻;8)用吸管吸取1/20容器體積的制備貯存液的溶劑到第二個容量瓶,稱為對比樣品。9)基礎(chǔ)液補足體積,充分混勻;10)準(zhǔn)備能夠被n整除的測試樣本和對比樣本,重復(fù)測定次數(shù)n由第三步確定;實驗程序

6)用吸管吸取1/20容器體積的濃縮貯存液到容量瓶中,3611)按交互的順序分析測試(T)和對比(C)樣本;假如檢測系統(tǒng)受攜帶污染影響,增加額外的樣本使對比樣本免受來自測試樣本攜帶污染的影響。增加的額外對比樣品Cx結(jié)果應(yīng)舍棄。12)記錄結(jié)果,進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實驗程序

11)按交互的順序分析測試(T)和對比(C)樣本;實驗程序

37數(shù)據(jù)分析、1

計算觀察到的干擾效應(yīng)的“點估計”,即dobs,是測試樣本均值和對比樣本均值之間的差值。2計算cut-off值ｄc(雙側(cè)檢驗)ｄnull是無效假設(shè)規(guī)定的值,通常＝0,關(guān)于單側(cè)檢驗,用Z1－取代Z1－/2

。數(shù)據(jù)分析、1計算觀察到的干擾效應(yīng)的“點估計”,即do383、計算95％置信區(qū)間的干擾效應(yīng)95％置信區(qū)間＝數(shù)據(jù)分析s是測量方法重復(fù)性的批內(nèi)周密度,n是每個樣本的重復(fù)測量次數(shù),t0、975n-1為t檢驗數(shù)值表中97、5%和n-1的自由度時的值(n>30,2、0是t0、975n-1的合理近似值)。3、計算95％置信區(qū)間的干擾效應(yīng)數(shù)據(jù)分析s是測量方法重復(fù)39結(jié)果解釋

假如點估計dobs值小于或等于cut-off值dc,能夠得出某種物質(zhì)引起的偏倚小于dmax;否則,接受有效假設(shè),說明由該物質(zhì)引起干擾的假設(shè)成立。結(jié)果解釋假如點估計dobs值小于或等于40當(dāng)解釋干擾測試結(jié)果時考慮以下情況:由于吸樣錯誤,真實的干擾估計不同于觀察到的“點估計”。假如無效假設(shè)成立,置信限100(1－)％接受它;假如有效假設(shè)檢驗成立,置信限100(1－?)％接受它。相反置信限分別為100

％和100?

％。假如被檢物為非人血清成分檢測,估計會引入人造物品的誤差測試濃度的隨意選擇估計不顯示干擾結(jié)果解釋當(dāng)解釋干擾測試結(jié)果時考慮以下情況:結(jié)果解釋41當(dāng)一種或多種分析物的濃度出現(xiàn)干擾效應(yīng),則可通過劑量效應(yīng)曲線確定不同干擾物濃度干擾程度,干擾物不同濃度可通過最高值干擾物濃度樣本和對比樣本混合制備。一般情況下,做劑量效應(yīng)曲線時每個測試濃度水平重復(fù)測量三次足夠。如計算每個濃度所需的重復(fù)測量次數(shù),也可用附錄中公式計算?！皠┝啃?yīng)”實驗當(dāng)一種或多種分析物的濃度出現(xiàn)干擾效應(yīng),則可通過劑量效應(yīng)曲線確42測試材料1、基礎(chǔ)標(biāo)本2、貯存液3、高濃度樣本---用基礎(chǔ)標(biāo)本稀釋貯存液,制備成所需的濃度。4、低濃度樣本準(zhǔn)備一組低的含平均濃度的干擾物的臨床樣本,在大多數(shù)情況下,治療藥物,或血紅蛋白、膽紅素能夠忽略不計,低濃度樣本的制備可參照對比樣本的制備方法測試材料1、基礎(chǔ)標(biāo)本43測試材料5、測試樣本---制備一系列不同濃度的干擾測試樣本,通常五個濃度足夠確定一個線性的劑量效應(yīng)關(guān)系。測試材料5、測試樣本---制備一系列不同濃度的干擾測試樣本44劑量效應(yīng)實驗程序

1)測定待測的最高和最低標(biāo)本濃度水平;2)確定被認(rèn)為“有臨床意義”差別,假如曾做過“配對差異”實驗,這一步差不多完成;3)確定在每個濃度重測次數(shù)n(見附錄E),通常3次;4)準(zhǔn)備高中低系列濃度樣本;劑量效應(yīng)實驗程序

1)測定待測的最高和最低標(biāo)本濃度水平;45劑量效應(yīng)實驗程序

5)依照第三步n值的大小準(zhǔn)備每份標(biāo)本量;6)在同一分析批之內(nèi)檢測5個樣本的濃度,第一組依照升序測定各樣本,第二組按降序測定,第3組依照升序等等,平均系統(tǒng)漂移影響;或按隨機(jī)順序檢測所有樣本,達(dá)到最小化漂移效應(yīng);7)計算低濃度樣本的平均值,其他各組結(jié)果中減去該低濃度樣本的平均值,然后把最終凈結(jié)果填入表格中進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。劑量效應(yīng)實驗程序

5)依照第三步n值的大小準(zhǔn)備每份標(biāo)本量46數(shù)據(jù)分析將結(jié)果點在圖上,y軸為干擾結(jié)果,x軸上為干擾物濃度,觀察劑量效應(yīng)關(guān)系曲線的形狀:線性效應(yīng)非線性效應(yīng)數(shù)據(jù)分析將結(jié)果點在圖上,y軸為干擾結(jié)果,x軸上為干擾物濃度,47線性效應(yīng)

數(shù)據(jù)隨機(jī)分布,大約成一條直線,用最小二乘法進(jìn)行回歸分析,在圖上劃出回歸直線,確定適合所有數(shù)據(jù)點,其效應(yīng)曲線是線性。線性效應(yīng)數(shù)據(jù)隨機(jī)分布,大約成一條直線,用最小二乘法進(jìn)行回歸48與干擾物濃度相關(guān)線性干擾舉例:線性效應(yīng)

五個濃度水平的劑量效應(yīng)線性關(guān)系結(jié)果與干擾物濃度相關(guān)線性干擾舉例:線性效應(yīng)五個濃度水平的劑量效49線性效應(yīng)

劑量效應(yīng)回歸分析線性效應(yīng)劑量效應(yīng)回歸分析50線性效應(yīng)

線形回歸的95%可信區(qū)間范圍從干擾物濃度與置信區(qū)間改變大小的函數(shù)能夠看出,在95%置信區(qū)間內(nèi)結(jié)果最可信的是中間干擾物濃度范圍

線性效應(yīng)線形回歸的95%可信區(qū)間范圍從干擾物濃度與置信區(qū)間51非線性效應(yīng)干擾物濃度的干擾估計不是一個線性函數(shù),假如繪圖的數(shù)據(jù)顯示是彎曲的,那么對一個給定的干擾物濃度的干擾程度的適當(dāng)估計能夠用圖解形式表示。非線性效應(yīng)干擾物濃度的干擾估計不是一個線性函數(shù),假如繪圖的數(shù)52舉例:非線性效應(yīng)五個系列濃度劑量響應(yīng)非線性結(jié)果舉例:非線性效應(yīng)五個系列濃度劑量響應(yīng)非線性結(jié)果53非線性效應(yīng)非線性劑量效應(yīng)回歸分析

任何濃度水平的干擾物的干擾程度能夠從圖表中被估計,也能夠用非線性回歸方程計算。非線性效應(yīng)非線性劑量效應(yīng)回歸分析54

回歸線斜率代表每單位干擾物的偏倚,y軸上的截距表示內(nèi)源性干擾濃度的校正,通過回歸方程或者圖表,任何干擾物濃度水平的干擾程度都可被估計。假如斜率是正的,實驗顯示該物質(zhì)引起一個正的干擾。結(jié)果解釋結(jié)果解釋55分析物和干擾物聯(lián)合評價在單一的實驗中,干擾物濃度和分析物濃度在檢測過程中有組織設(shè)置,兩個或更多潛在干擾物能被更有效同時檢測,單一成分的干擾效應(yīng)可通過單因素分析方法評估,多因素實驗設(shè)計描述,參見Box和Hunter文獻(xiàn)。優(yōu)點:提高效率和提供更多的信息,干擾物質(zhì)之間及干擾物與分析物之間的相互作用都能被評價。不足之處是樣本準(zhǔn)備更加復(fù)雜,增加了人為誤差發(fā)生的估計性。分析物和干擾物聯(lián)合評價在單一的實驗中,干擾物濃度和分析物濃度56干擾篩選的局限性在臨床標(biāo)本中的真實干擾物估計不是原來的藥物,而是代謝產(chǎn)物。實驗標(biāo)本基體并不代表典型的有問題的臨床標(biāo)本。加入的物質(zhì)與臨床標(biāo)本中的干擾物不相同,例如,蛋白結(jié)合、沉淀,或不均一性(異質(zhì)性)。實驗水平估計選擇得太高或太低以至不真實。干擾篩選的局限性在臨床標(biāo)本中的真實干擾物估計不是原來的藥物,57干擾測定第二種方法:

用病人樣本評價干擾第一種方法不論考慮多么全面,在病人的血清標(biāo)本中估計遇到意想不到的干擾。為了最大程度的減少這種情況的發(fā)生,應(yīng)該分析來自病人的真實標(biāo)本以評價內(nèi)在的不同血清標(biāo)本間的變異性。假如某個標(biāo)本中出現(xiàn)一個可重復(fù)的“離群值”,則說明該標(biāo)本中有未知的干擾物質(zhì)存在。干擾測定第二種方法:

用病58實驗設(shè)計

被評價的方法和參考方法(或者其他被認(rèn)定合格的比較方法)同時測定兩組病人樣本(測試組和對比組),假如測試組與對比組結(jié)果出現(xiàn)有意義的偏倚,存在干擾。參考方法或比較方法對干擾物有低敏感性。實驗設(shè)計

被評價的方法和參考方法(或者其他被認(rèn)定合格的比較方59測試標(biāo)本選擇原則:疾病(例如,來自心臟病、肝病或腎病病人的標(biāo)本);藥物(例如,使用過某種想了解的藥物的病人標(biāo)本);其他不正常組分(例如,具有不正常膽紅素、脂質(zhì)、血紅蛋白或蛋白的標(biāo)本)。

測試標(biāo)本選擇原則:60對比標(biāo)本

選擇原則:沒有使用目標(biāo)藥物;潛在干擾物質(zhì)在正常濃度范圍內(nèi);相同或者相似診斷;分析物分布狀態(tài)與測試標(biāo)本相似;對比樣本必須包括在每一分析批內(nèi)。對比標(biāo)本

選擇原則:61實驗程序1、計算測試標(biāo)本和對比標(biāo)本數(shù),取決于:兩種方法周密度;干擾效應(yīng)的大小;規(guī)定的假設(shè)檢驗水準(zhǔn)。2、挑選測試組和對比組標(biāo)本;3、選擇合適的參考方法或者效果較好的比較方法;實驗程序1、計算測試標(biāo)本和對比標(biāo)本數(shù),取決于:624、在盡估計短的時間內(nèi)(通常在兩個小時內(nèi)),用兩種方法重復(fù)測定每個樣本。5、假如觀察到偏倚存在,測定樣本中藥物或者其他潛在的干擾物質(zhì)的濃度,假如估計的話,確定偏倚和干擾物濃度兩者之間的關(guān)系。實驗程序4、在盡估計短的時間內(nèi)(通常在兩個小時內(nèi)),用兩種方法重復(fù)63數(shù)據(jù)分析

計算測試組和對比組平均值之間的差值,并與干擾標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較,然后確定干擾能否被排除或者需要進(jìn)一步的研究。數(shù)據(jù)分析計算測試組和對比組平均值之間的差值,并與干擾標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)641、與比較方法結(jié)果作偏倚圖計算重復(fù)測定結(jié)果的均值;計算每個樣本平均偏倚(測試方法結(jié)果減去比較方法結(jié)果);作圖:偏倚在垂直軸上,比較方法濃度在水平軸,測試和對比樣本用不同的記號標(biāo)識;通過線性回歸分析計算每一組的Sy,x統(tǒng)計量(比較方法＝x),它可用于計算95％置信區(qū)間。數(shù)據(jù)分析

1、與比較方法結(jié)果作偏倚圖數(shù)據(jù)分析652、估計干擾的偏倚評估:數(shù)據(jù)分析(A)相關(guān)于對比組的正偏倚

(B)相關(guān)于對比組沒有偏倚－成比例的方法偏倚

(C)相關(guān)于對比組的負(fù)的偏倚

(D)相關(guān)于對比組沒有偏倚

2、估計干擾的偏倚評估:數(shù)據(jù)分析(A)相關(guān)于對比組的正偏663、以潛在干擾物繪制偏倚曲線假如病人標(biāo)本中可疑干擾物的濃度已知,能夠判斷它是否與獲得的偏倚相關(guān)。數(shù)據(jù)分析

一種與潛在干擾物濃度相關(guān)特別好的干擾效應(yīng)3、以潛在干擾物繪制偏倚曲線數(shù)據(jù)分析一種與潛在干擾物濃度相67用病人樣本評價干擾---局限性(1)對實驗變異缺乏控制對比(2)本方法并不能確定原因與作用的關(guān)系,它只能說明偏倚與估計干擾物某水平的相對關(guān)系(3)假如標(biāo)本不新鮮,將會失去某些易變組分(例如,乙酰乙酸、CO2等)用病人樣本評價干擾---局限性(1)對實驗變異缺乏控制對比68用病人樣本評價干擾—局限性4)病人通常用多種藥物,因此,難于證實何種藥物的干擾作用5)按疾病和用藥對病人分類,不是不估計,至少對許多實驗而言是特別困難的6)實驗是一種機(jī)遇,成功取決于在檢測的病人人群的標(biāo)本中是否有此干擾存在用病人樣本評價干擾—局限性4)病人通常用多種藥物,因此,難于697)特別少有公認(rèn)的參考方法。有的參考方法難以在常規(guī)實驗室中使用。另外,參考方法估計也同樣的被干擾。

不管如何,第二種方法對證實干擾物是有用的,這也是唯一的方法可檢出藥物代謝物干擾作用,它也可肯定在真實標(biāo)本中有干擾的方法。用病人樣本評價干擾---局限性7)特別少有公認(rèn)的參考方法。有的參考方法難以在常規(guī)實驗室70建立、確認(rèn)和驗證干擾聲明EP7-A可被廠商用于驗證和確認(rèn)特異性,建立干擾聲明,臨床實驗室也可用它檢驗廠商的聲明以及確認(rèn)方法的特異性是否滿足醫(yī)學(xué)要求。建立、確認(rèn)和驗證干擾聲明EP7-A可被廠商用于驗證和確認(rèn)特異71干擾聲明

關(guān)于商業(yè)方法來說,已知的干擾物質(zhì)應(yīng)在使用明書中闡述,實驗證明沒有干擾的物質(zhì)也應(yīng)該闡述,以便實驗室能夠驗證某種方法對它所服務(wù)的病人群體的習(xí)慣性干擾聲明關(guān)于商業(yè)方法來說,已知的干擾物質(zhì)應(yīng)在使用72干擾聲明---舉例11、干擾物系列濃度的結(jié)果依照EP7文件,對AST方法進(jìn)行干擾評價。當(dāng)下列這些物質(zhì)添加到血清中時,在顯示的濃度水平處產(chǎn)生干擾,偏倚超過10％考慮為干擾。測試物質(zhì)AST25U/L的干擾濃度AST200U/L的干擾濃度注釋血紅蛋白250mg/dL325mg/dL溶血N-乙酰半胱氨酸150mg/ml300mg/ml靜脈注射治療劑量為180mg/ml干擾聲明---舉例11、干擾物系列濃度的結(jié)果測試物質(zhì)AST73干擾聲明---舉例22、膽紅素方法－兩個水平的干擾篩選依照EP7文件,對膽紅素測量方法進(jìn)行干擾評價,當(dāng)血清中分析物和干擾物濃度達(dá)到表中所顯示濃度時,以下物質(zhì)產(chǎn)生干擾,偏倚超過0、2mg/dL考慮為干擾。

干擾物干擾濃度分析物(mg/dl)偏倚(mg/dl)注釋血紅蛋白300g/dl300g/dl1、216、5-0、4+0、5肉眼可見溶血N-乙酰半胱氨酸90mg/dl90mg/dl1、216、5<0、2-0、6靜脈注射治療劑量對氨基水揚酸50mg/dl50mg/dl1、216、5<0、2+0、3中毒劑量干擾聲明---舉例22、膽紅素方法－兩個水平的干擾篩選干擾物74確認(rèn)干擾聲明干擾和特異性聲明可用實驗方法確認(rèn),合適的方法依賴于聲明類型。聲明類型:(1)最大干擾聲明(干擾小于一個規(guī)定的最大值)(2)實測干擾聲明(1mg/dL鎂存在時,正常血清標(biāo)本組鈣離子濃度比對比組高0、14mg/dL)(3)非定量干擾聲明(據(jù)報道甲氨蝶呤對該方法可產(chǎn)生干擾)(4)特異性聲明(水楊酸鹽對該方法不產(chǎn)生干擾)確認(rèn)干擾聲明干擾和特異性聲明可用實驗方法確認(rèn),合適的方法依賴75調(diào)查與臨床不一致的病人結(jié)果

每個實驗室間或會遇到與臨床不一致的結(jié)果,該結(jié)果估計被臨床醫(yī)生認(rèn)為與診斷不相符或者與往常結(jié)果不一致,或者在實驗室內(nèi)兩種方法檢測的結(jié)果有差異。假如實驗室對一個特定病人的結(jié)果的差異可被重復(fù),且該方法符合標(biāo)準(zhǔn),那么出現(xiàn)的差異估計由干擾引起。調(diào)查與臨床不一致的病人結(jié)果每個實驗室間或76調(diào)查程序(1)確認(rèn)系統(tǒng)性能(2)評價樣本質(zhì)量(3)證實最初的結(jié)果(3)確定潛在的干擾物質(zhì)(4)測定估計的干擾物(5)評價干擾效應(yīng)(6)報告廠家調(diào)查程序(1)確認(rèn)系統(tǒng)性能77感謝您的聆聽！感謝您的聆聽！78臨床生化干擾實驗批準(zhǔn)指南臨床生化干擾實驗批準(zhǔn)指南79作用

對廠商來說,通過EP7程序能夠篩選潛在干擾物質(zhì),量化干擾效應(yīng),證實病人樣本中的干擾,確認(rèn)分析方法對干擾物質(zhì)的敏感性,評估潛在的風(fēng)險,并將有意義的干擾聲明提供給用戶。關(guān)于臨床實驗室來說,通過EP7的調(diào)查策略,規(guī)定數(shù)據(jù)收集和分析要求,確認(rèn)干擾聲明,研究明確的干擾物質(zhì)帶來的結(jié)果差異,確保分析方法符合臨床要求。作用對廠商來說,通過EP7程序能夠篩選潛80主要內(nèi)容干擾相關(guān)概念與理論適用范圍干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)干擾分析前的質(zhì)量保證干擾測定用病人標(biāo)本評價干擾建立、確認(rèn)和驗證干擾聲明調(diào)查分析與臨床不一致的病人結(jié)果主要內(nèi)容干擾相關(guān)概念與理論81術(shù)語分析物(Analyte):實驗室測試的物質(zhì)或者成分干擾物(Interferent):樣本中不同于分析物并能引起測量偏倚的成分干擾:在臨床生化中,由于另一成分影響或樣本的特性,待測一定濃度的被分析物出現(xiàn)有臨床意義的偏倚干擾標(biāo)準(zhǔn):干擾物所允許的最大結(jié)果偏倚干擾敏感度:某一分析方法對來自其他成分或者樣本特性的干擾引起誤差的敏感性

術(shù)語分析物(Analyte):實驗室測試的物質(zhì)或者成分82術(shù)語干擾聲明:一種物質(zhì)影響分析方法結(jié)果效應(yīng)的陳述干擾篩選:分析系統(tǒng)評價中,利用高濃度樣品進(jìn)行一系列能鑒別有估計發(fā)生干擾的物質(zhì)差異結(jié)果//異常結(jié)果//假性結(jié)果(Discrepantresult//Anomalousresults//Spuriousresults):一種與臨床不一致的結(jié)果,或同一標(biāo)本的另一個不同結(jié)果,或與其他方法不同結(jié)果,或與已確定的臨床診斷不相符的結(jié)果術(shù)語干擾聲明:一種物質(zhì)影響分析方法結(jié)果效應(yīng)的陳述83

術(shù)語內(nèi)源性干擾:樣本中的一些生理物質(zhì)(例如膽紅素、血紅蛋白),可對另一些物質(zhì)分析時引起干擾。外源性干擾:一種源自體外的物質(zhì)(例如,藥物或其代謝物,防腐劑,污染物),可對樣本中另一物質(zhì)的分析引起干擾。術(shù)語內(nèi)源性干擾84術(shù)語驗證(validation):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù),證實能夠滿足某期望用途的特定要求。(users’requirementshavebeenmet(e、g、,accuracyrequirementsforpatients’results)確認(rèn)(verification):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù),確認(rèn)滿足了特定的要求。(specifiedcriteriahavebeenmet(e、g、,interferencecriteriaorinterferenceclaims)術(shù)語驗證(validation):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù)85適用范圍1、適用大部分析方法和儀器,特別方法估計需要必要的調(diào)整,如分離技術(shù)和免疫學(xué)分析方法在附錄A中被討論。2、血清、血漿、全血、腦脊液、尿和其它大多數(shù)體液等標(biāo)本類型都可用本指南評估適用范圍1、適用大部分析方法和儀器863、適用以下干擾物質(zhì):

病理情況下的代謝物,如膽紅素、脂肪、蛋白質(zhì)、血紅蛋白等;病人治療期間引入的物質(zhì),如藥物、腸外營養(yǎng)、血漿代用品、抗凝劑等;病人吸收的物質(zhì),如藥品濫用、營養(yǎng)補充等;標(biāo)本準(zhǔn)備引入的物質(zhì),如抗凝劑、防腐劑等;標(biāo)本處理過程中引入的污染物,如手霜、滑石粉、促凝劑等;標(biāo)本自身的基質(zhì)效應(yīng),其理化性質(zhì)跟理想的新鮮標(biāo)本不同。適用范圍3、適用以下干擾物質(zhì):適用范圍871、干擾對不準(zhǔn)確度的影響

不準(zhǔn)確度(總分析誤差)包括不周密度、方法特異性偏倚和樣本特異性偏倚(干擾),對干擾物質(zhì)的敏感性能夠引起系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差?；靖拍罨靖拍?82、分析前效應(yīng)

分析前分析物或者它的濃度的改變通常稱為“分析前效應(yīng)”,這些作用估計會影響實驗結(jié)果的臨床應(yīng)用,但不能視作“分析干擾”。這些作用:體內(nèi)藥物作用,如使用藥物后因生理響應(yīng)使激素濃度變化標(biāo)本處理,由于蒸發(fā)、溶血或者血清長時間不分離使電解質(zhì)、蛋白、水含量改變標(biāo)本收集,如在靜脈滴注時(內(nèi)含分析物)取樣

基本概念2、分析前效應(yīng)基本概念893、絕對干擾與相對干擾

干擾作用可看成是絕對的或相對的絕對干擾:一般病人標(biāo)本中含有某物質(zhì),一旦它的存在即會引起干擾。相對干擾:一般病人標(biāo)本中含有某物質(zhì),其含量相關(guān)于混合樣品中的平均濃度,不同病人樣品中含有該物質(zhì)的濃度變化引起干擾作用的變化,相對干擾作用在臨床實驗中更有意義。基本概念3、絕對干擾與相對干擾基本概念90基本概念

相對干擾一些方法能夠校正干擾物的平均濃度做補償,以使病人標(biāo)本中的干擾效應(yīng)減小到最低,有代表性的方法包括樣品前處理、設(shè)置空白對比、標(biāo)準(zhǔn)血清校準(zhǔn)和數(shù)學(xué)校正,當(dāng)干擾物的濃度大于或者小于病人樣本中的平均濃度時將引起誤差?；靖拍?/p>

相對干擾91基本概念4、干擾機(jī)制由于某干擾物的存在以多種方式影響分析過程,主要機(jī)制:物理作用干擾物具有的物理性質(zhì),使它與分析物一樣被檢測出來,如顏色、光散射(光吸收)、洗脫位置、電極響應(yīng)等。干擾物估計會改變標(biāo)本的物理特性,如表面張力、黏度、濁度、離子強度等,干擾檢測結(jié)果?；靖拍?、干擾機(jī)制92基本概念干擾機(jī)制化學(xué)作用

干擾物估計會影響酶活力,例如,阻止金屬激活劑結(jié)合到活性中心上去,氧化必須的巰基等。干擾物也可破壞或阻止反應(yīng),例如,破壞試劑或抑止指示反應(yīng)。干擾物也可改變分析物的形式,例如,形成復(fù)合物或沉淀?；靖拍罡蓴_機(jī)制93基本概念4、干擾機(jī)制非特異性干擾物估計和分析物以同樣的方式參與反應(yīng),例如,苦味酸肌酐方法中酮酸干擾,重氮膽紅素方法重吲哚酚硫酸鹽的干擾。在免疫化學(xué)方法中干擾物和抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。例如,茶堿方法中咖啡因的干擾?；靖拍?、干擾機(jī)制94基本概念4、干擾機(jī)制水取代作用非水物質(zhì)(蛋白質(zhì)、脂質(zhì)),由于取代了血漿中部分水體積,影響了一些分析物的測定。這些作用考慮或不考慮為干擾作用,取決于要求的結(jié)果是以總體積的濃度表示,依然以血漿水的濃度來表示?；靖拍?、干擾機(jī)制95干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)

為保證客觀性,可接受標(biāo)準(zhǔn)必須在評價實驗操作之前就確定。建立可接受標(biāo)準(zhǔn)時,必須考慮臨床意義和統(tǒng)計學(xué)意義兩者之間的差別。干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)為保證客觀性,可接受標(biāo)準(zhǔn)必須在評價實驗操961、臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)基于生理變異源于臨床經(jīng)驗基于被分析物變異干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)

1、臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)972、統(tǒng)計學(xué)意義在確定一個物質(zhì)是否存在干擾前,首先確定所得到的結(jié)果是否有統(tǒng)計學(xué)意義。3、分析物檢測濃度干擾應(yīng)該在兩種醫(yī)學(xué)決定濃度被評估,假如在一種濃度上進(jìn)行測試,要注意有估計漏過在其他分析物濃度水平上有臨床意義的干擾。干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)2、統(tǒng)計學(xué)意義干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)98干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)4、干擾物檢測濃度決定一種物質(zhì)在“最壞情況”的條件下是否會產(chǎn)生干擾,干擾篩選應(yīng)該在實驗室期望觀察到的最高濃度水平的病人樣本中進(jìn)行。5、潛在的干擾物質(zhì)干擾實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)4、干擾物檢測濃度99干擾分析前的質(zhì)量保證在進(jìn)行一個干擾實驗之前,必須進(jìn)行:培訓(xùn)和熟悉周密度確認(rèn)--EP5《臨床生化設(shè)備性能的周密度評價》準(zhǔn)確度確認(rèn)--EP9《利用病人樣本進(jìn)行方法學(xué)比較和偏倚評估》攜帶污染評價質(zhì)量控制--C24《內(nèi)部質(zhì)量控制實驗:原理和定義》標(biāo)準(zhǔn)化防范—M29《實驗室工作人員幸免職業(yè)感染》安全性和廢物處置--參照廠商的標(biāo)簽和材料安全數(shù)據(jù)表(MSDS)干擾分析前的質(zhì)量保證在進(jìn)行一個干擾實驗之前,必須進(jìn)行:100干擾測定(Determinationofinterferencecharacteristics)第一種方法:評價潛在的干擾物添加到樣本后的干擾效應(yīng)(干擾篩選)第二種方法:評價個別有代表性的病人結(jié)果與高特異性的比較方法的結(jié)果偏倚(用病人標(biāo)本評價干擾)干擾測定(Determinationofinterfer101干擾篩選

將陽性干擾物加入測定樣品中,與不加的對比組比較有無偏移,稱為“配對差異”實驗。一般最有效的方法是在較高濃度下對系列估計的干擾物作初步篩選,假如臨床顯著意義,則該物質(zhì)不是干擾物,無須進(jìn)一步實驗。反之,具有臨床顯著意義的,應(yīng)進(jìn)一步評價以確定干擾物濃度與干擾程度間的關(guān)系,這類實驗稱為“劑量效應(yīng)”(dose－response)實驗干擾篩選將陽性干擾物加入測定102實驗設(shè)計1、測試組和對比組在同一個分析批內(nèi)完成;2、計算重復(fù)測量次數(shù):有臨床意義的最小差異值;假設(shè)檢驗水準(zhǔn);重復(fù)性(批內(nèi)周密度)。實驗設(shè)計1、測試組和對比組在同一個分析批內(nèi)完成;103實驗材料

1基礎(chǔ)標(biāo)本(Basepool)

從幾個健康的、沒有進(jìn)行藥物治療的個體獲得適當(dāng)類型(血清、尿等)的新鮮樣本,基礎(chǔ)樣本應(yīng)能反映樣本基質(zhì),能反映分析物的特點。合適的冰凍或凍干樣本,確認(rèn)測試材料是否與臨床樣本相似計算所需樣本量測定基礎(chǔ)標(biāo)本中分析物的濃度并用合適的純物質(zhì)調(diào)整測試管的分析物濃度到醫(yī)學(xué)決定濃度,應(yīng)幸免加入分析物時引入其他物質(zhì),推薦的分析物測試濃度見附錄B。實驗材料

1基礎(chǔ)標(biāo)本(Basepool)104實驗材料2、貯存液獲得合適而純的潛在干擾物,或者該物質(zhì)最接近體內(nèi)循環(huán)狀態(tài)的形式選擇一種能夠充分溶解分析物的溶劑盡估計小地稀釋樣本基質(zhì),最好小于5%。假如溶解度允許,通常配制成濃縮的20倍的貯存溶液有機(jī)溶劑需要特別的對待,氯仿至少要求1:100的稀釋倍數(shù),乙醇濃度大于1～2％時能夠使抗體變性。實驗材料2、貯存液1053、對比樣本用制備貯存液相同體積的溶劑替代測試干擾物,其他要求與測試樣本相同。假如對比樣本中存在測試物質(zhì)(比如膽紅素),使用合適的分析方法確定它的濃度。假如對比樣本中被分析物濃度與基礎(chǔ)樣本中明顯的不相符,考慮溶劑為潛在的干擾物。實驗材料3、對比樣本實驗材料106重測次數(shù)要求重測次數(shù)取決于統(tǒng)計學(xué)假設(shè)水準(zhǔn)當(dāng)有效假設(shè)檢驗不能確定干擾的方向(正的或負(fù)的)時使用雙側(cè)檢驗,當(dāng)有效假設(shè)檢驗包括干擾的方向(正的或負(fù)的)時使用單側(cè)檢驗重測次數(shù)要求重測次數(shù)取決于統(tǒng)計學(xué)假設(shè)水準(zhǔn)107重測次數(shù)要求雙側(cè)檢驗:Z1-/2:100(1－?)%的置信水平,z1－?

:100(1－?)％檢驗效能,s是重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差。dmax是分析物在測試濃度范圍內(nèi)的最大允許干擾。單側(cè)檢驗:

用Z1-代替Z1-/2重測次數(shù)要求雙側(cè)檢驗:108

z百分位值:重測次數(shù)要求z百分位值:重測次數(shù)要求109

z百分位值:舉例:檢測可接受干擾程度為1、5mg/dL的干擾效應(yīng),95％(＝0、05)檢驗水準(zhǔn)時,重復(fù)性(批內(nèi)周密度)為1、0mg/dL,計算重復(fù)次數(shù):重測次數(shù)要求z百分位值:重測次數(shù)要求110批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):

95％(＝0、05)檢驗水準(zhǔn)時檢測不同的干擾效應(yīng)所需的重測次數(shù)如下:

重測次數(shù)要求批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):重測次數(shù)要求111批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):舉例在1mg/dL肌酐濃度水平,批內(nèi)重復(fù)測定的標(biāo)準(zhǔn)差為0、075mg/dL,實驗室認(rèn)為0、1mg/dL是一個有意義的干擾。需要測定多少次,估計干擾能被檢測到？首先,把不精確度表述為批內(nèi)重復(fù)測定的標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù):

0、1mg/dL/0、075mg/dL=1、33。將1、33向前舍入一位為1、3,上表決定重復(fù)測定次數(shù),得出在95％(＝0、05)檢驗水準(zhǔn)時,每個對比和測試樣品需要重復(fù)測定16次。重測次數(shù)要求批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):重測次數(shù)要求112實驗程序

“配對差異”實驗:

1)合適的分析物濃度;2)建立有臨床意義差別的標(biāo)準(zhǔn)(dmax);3)確定每個樣品所需的重復(fù)測量次數(shù);4)準(zhǔn)備臨床基礎(chǔ)標(biāo)本;5)準(zhǔn)備20倍的濃縮貯存液(潛在干擾物),假如使用另外一種濃度)確定,依照步驟6和8稀釋(推薦濃度見附表C);實驗程序

“配對差異”實驗:1136)用吸管吸取1/20容器體積的濃縮貯存液到容量瓶中,稱為測試樣品,7)用基礎(chǔ)液補足到刻度體積,充分混勻;8)用吸管吸取1/20容器體積的制備貯存液的溶劑到第二個容量瓶,稱為對比樣品。9)基礎(chǔ)液補足體積,充分混勻;10)準(zhǔn)備能夠被n整除的測試樣本和對比樣本,重復(fù)測定次數(shù)n由第三步確定;實驗程序

6)用吸管吸取1/20容器體積的濃縮貯存液到容量瓶中,11411)按交互的順序分析測試(T)和對比(C)樣本;假如檢測系統(tǒng)受攜帶污染影響,增加額外的樣本使對比樣本免受來自測試樣本攜帶污染的影響。增加的額外對比樣品Cx結(jié)果應(yīng)舍棄。12)記錄結(jié)果,進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實驗程序

11)按交互的順序分析測試(T)和對比(C)樣本;實驗程序

115數(shù)據(jù)分析、1

計算觀察到的干擾效應(yīng)的“點估計”,即dobs,是測試樣本均值和對比樣本均值之間的差值。2計算cut-off值ｄc(雙側(cè)檢驗)ｄnull是無效假設(shè)規(guī)定的值,通常＝0,關(guān)于單側(cè)檢驗,用Z1－取代Z1－/2

。數(shù)據(jù)分析、1計算觀察到的干擾效應(yīng)的“點估計”,即do1163、計算95％置信區(qū)間的干擾效應(yīng)95％置信區(qū)間＝數(shù)據(jù)分析s是測量方法重復(fù)性的批內(nèi)周密度,n是每個樣本的重復(fù)測量次數(shù),t0、975n-1為t檢驗數(shù)值表中97、5%和n-1的自由度時的值(n>30,2、0是t0、975n-1的合理近似值)。3、計算95％置信區(qū)間的干擾效應(yīng)數(shù)據(jù)分析s是測量方法重復(fù)117結(jié)果解釋

假如點估計dobs值小于或等于cut-off值dc,能夠得出某種物質(zhì)引起的偏倚小于dmax;否則,接受有效假設(shè),說明由該物質(zhì)引起干擾的假設(shè)成立。結(jié)果解釋假如點估計dobs值小于或等于118當(dāng)解釋干擾測試結(jié)果時考慮以下情況:由于吸樣錯誤,真實的干擾估計不同于觀察到的“點估計”。假如無效假設(shè)成立,置信限100(1－)％接受它;假如有效假設(shè)檢驗成立,置信限100(1－?)％接受它。相反置信限分別為100

％和100?

％。假如被檢物為非人血清成分檢測,估計會引入人造物品的誤差測試濃度的隨意選擇估計不顯示干擾結(jié)果解釋當(dāng)解釋干擾測試結(jié)果時考慮以下情況:結(jié)果解釋119當(dāng)一種或多種分析物的濃度出現(xiàn)干擾效應(yīng),則可通過劑量效應(yīng)曲線確定不同干擾物濃度干擾程度,干擾物不同濃度可通過最高值干擾物濃度樣本和對比樣本混合制備。一般情況下,做劑量效應(yīng)曲線時每個測試濃度水平重復(fù)測量三次足夠。如計算每個濃度所需的重復(fù)測量次數(shù),也可用附錄中公式計算?！皠┝啃?yīng)”實驗當(dāng)一種或多種分析物的濃度出現(xiàn)干擾效應(yīng),則可通過劑量效應(yīng)曲線確120測試材料1、基礎(chǔ)標(biāo)本2、貯存液3、高濃度樣本---用基礎(chǔ)標(biāo)本稀釋貯存液,制備成所需的濃度。4、低濃度樣本準(zhǔn)備一組低的含平均濃度的干擾物的臨床樣本,在大多數(shù)情況下,治療藥物,或血紅蛋白、膽紅素能夠忽略不計,低濃度樣本的制備可參照對比樣本的制備方法測試材料1、基礎(chǔ)標(biāo)本121測試材料5、測試樣本---制備一系列不同濃度的干擾測試樣本,通常五個濃度足夠確定一個線性的劑量效應(yīng)關(guān)系。測試材料5、測試樣本---制備一系列不同濃度的干擾測試樣本122劑量效應(yīng)實驗程序

1)測定待測的最高和最低標(biāo)本濃度水平;2)確定被認(rèn)為“有臨床意義”差別,假如曾做過“配對差異”實驗,這一步差不多完成;3)確定在每個濃度重測次數(shù)n(見附錄E),通常3次;4)準(zhǔn)備高中低系列濃度樣本;劑量效應(yīng)實驗程序

1)測定待測的最高和最低標(biāo)本濃度水平;123劑量效應(yīng)實驗程序

5)依照第三步n值的大小準(zhǔn)備每份標(biāo)本量;6)在同一分析批之內(nèi)檢測5個樣本的濃度,第一組依照升序測定各樣本,第二組按降序測定,第3組依照升序等等,平均系統(tǒng)漂移影響;或按隨機(jī)順序檢測所有樣本,達(dá)到最小化漂移效應(yīng);7)計算低濃度樣本的平均值,其他各組結(jié)果中減去該低濃度樣本的平均值,然后把最終凈結(jié)果填入表格中進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。劑量效應(yīng)實驗程序

5)依照第三步n值的大小準(zhǔn)備每份標(biāo)本量124數(shù)據(jù)分析將結(jié)果點在圖上,y軸為干擾結(jié)果,x軸上為干擾物濃度,觀察劑量效應(yīng)關(guān)系曲線的形狀:線性效應(yīng)非線性效應(yīng)數(shù)據(jù)分析將結(jié)果點在圖上,y軸為干擾結(jié)果,x軸上為干擾物濃度,125線性效應(yīng)

數(shù)據(jù)隨機(jī)分布,大約成一條直線,用最小二乘法進(jìn)行回歸分析,在圖上劃出回歸直線,確定適合所有數(shù)據(jù)點,其效應(yīng)曲線是線性。線性效應(yīng)數(shù)據(jù)隨機(jī)分布,大約成一條直線,用最小二乘法進(jìn)行回歸126與干擾物濃度相關(guān)線性干擾舉例:線性效應(yīng)

五個濃度水平的劑量效應(yīng)線性關(guān)系結(jié)果與干擾物濃度相關(guān)線性干擾舉例:線性效應(yīng)五個濃度水平的劑量效127線性效應(yīng)

劑量效應(yīng)回歸分析線性效應(yīng)劑量效應(yīng)回歸分析128線性效應(yīng)

線形回歸的95%可信區(qū)間范圍從干擾物濃度與置信區(qū)間改變大小的函數(shù)能夠看出,在95%置信區(qū)間內(nèi)結(jié)果最可信的是中間干擾物濃度范圍

線性效應(yīng)線形回歸的95%可信區(qū)間范圍從干擾物濃度與置信區(qū)間129非線性效應(yīng)干擾物濃度的干擾估計不是一個線性函數(shù),假如繪圖的數(shù)據(jù)顯示是彎曲的,那么對一個給定的干擾物濃度的干擾程度的適當(dāng)估計能夠用圖解形式表示。非線性效應(yīng)干擾物濃度的干擾估計不是一個線性函數(shù),假如繪圖的數(shù)130舉例:非線性效應(yīng)五個系列濃度劑量響應(yīng)非線性結(jié)果舉例:非線性效應(yīng)五個系列濃度劑量響應(yīng)非線性結(jié)果131非線性效應(yīng)非線性劑量效應(yīng)回歸分析

任何濃度水平的干擾物的干擾程度能夠從圖表中被估計,也能夠用非線性回歸方程計算。非線性效應(yīng)非線性劑量效應(yīng)回歸分析132

回歸線斜率代表每單位干擾物的偏倚,y軸上的截距表示內(nèi)源性干擾濃度的校正,通過回歸方程或者圖表,任何干擾物濃度水平的干擾程度都可被估計。假如斜率是正的,實驗顯示該物質(zhì)引起一個正的干擾。結(jié)果解釋結(jié)果解釋133分析物和干擾物聯(lián)合評價在單一的實驗中,干擾物濃度和分析物濃度在檢測過程中有組織設(shè)置,兩個或更多潛在干擾物能被更有效同時檢測,單一成分的干擾效應(yīng)可通過單因素分析方法評估,多因素實驗設(shè)計描述,參見Box和Hunter文獻(xiàn)。優(yōu)點:提高效率和提供更多的信息,干擾物質(zhì)之間及干擾物與分析物之間的相互作用都能被評價。不足之處是樣本準(zhǔn)備更加復(fù)雜,增加了人為誤差發(fā)生的估計性。分析物和干擾物聯(lián)合評價在單一的實驗中,干擾物濃度和分析物濃度134干擾篩選的局限性在臨床標(biāo)本中的真實干擾物估計不是原來的藥物,而是代謝產(chǎn)物。實驗標(biāo)本基體并不代表典型的有問題的臨床標(biāo)本。加入的物質(zhì)與臨床標(biāo)本中的干擾物不相同,例如,蛋白結(jié)合、沉淀,或不均一性(異質(zhì)性)。實驗水平估計選擇得太高或太低以至不真實。干擾篩選的局限性在臨床標(biāo)本中的真實干擾物估計不是原來的藥物,135干擾測定第二種方法:

用病人樣本評價干擾第一種方法不論考慮多么全面,在病人的血清標(biāo)本中估計遇到意想不到的干擾。為了最大程度的減少這種情況的發(fā)生,應(yīng)該分析來自病人的真實標(biāo)本以評價內(nèi)在的不同血清標(biāo)本間的變異性。假如某個標(biāo)本中出現(xiàn)一個可重復(fù)的“離群值”,則說明該標(biāo)本中有未知的干擾物質(zhì)存在。干擾測定第二種方法:

用病136實驗設(shè)計

被評價的方法和參考方法(或者其他被認(rèn)定合格的比較方法)同時測定兩組病人樣本(測試組和對比組),假如測試組與對比組結(jié)果出現(xiàn)有意義的偏倚,存在干擾。參考方法或比較方法對干擾物有低敏感性。實驗設(shè)計

被評價的方法和參考方法(或者其他被認(rèn)定合格的比較方137測試標(biāo)本選擇原則:疾病(例如,來自心臟病、肝病或腎病病人的標(biāo)本);藥物(例如,使用過某種想了解的藥物的病人標(biāo)本);其他不正常組分(例如,具有不正常膽紅素、脂質(zhì)、血紅蛋白或蛋白的標(biāo)本)。

測試標(biāo)本選擇原則:138對比標(biāo)本

選擇原則:沒有使用目標(biāo)藥物;潛在干擾物質(zhì)在正常濃度范圍內(nèi);相同或者相似診斷;分析物分布狀態(tài)與測試標(biāo)本相似;對比樣本必須包括在每一分析批內(nèi)。對比標(biāo)本

選擇原則:139實驗程序1、計算測試標(biāo)本和對比標(biāo)本數(shù),取決于:兩種方法周密度;干擾效應(yīng)的大小;規(guī)定的假設(shè)檢驗水準(zhǔn)。2、挑選測試組和對比組標(biāo)本;3、選擇合適的參考方法或者效果較好的比較方法;實驗程序1、計算測試標(biāo)本和對比標(biāo)本數(shù),取決于:1404、在盡估計短的時間內(nèi)(通常在兩個小時內(nèi)),用兩種方法重復(fù)測定每個樣本。5、假如觀察到偏倚存在,測定樣本中藥物或者其他潛在的干擾物質(zhì)的濃度,假如估計的話,確定偏倚和干擾物濃度兩者之間的關(guān)系。實驗程序4、在盡