交叉配血知識課件

12023/1/9交叉配血知識講座1ppt課件.12023/1/8交叉配血1ppt課件.22023/1/9RBC表面有豐富唾液酸，在中性環(huán)境中帶負(fù)電荷，互相分離。可通過縮短細(xì)胞間距，以及在致敏細(xì)胞上的抗體之間搭橋使RBC凝集。凝集一般為二個(gè)步驟抗體吸附于RBC抗原上成為致敏狀態(tài)

致敏RBC凝集形成塊狀?????????????????????????2ppt課件.22023/1/8RBC表面有豐富唾液酸，在中性環(huán)境中帶負(fù)電32023/1/9標(biāo)本的采集及要求一血型二不規(guī)則抗體的篩選

三交叉配血四一二三四3ppt課件.32023/1/8標(biāo)本的采集及要求一血型二不規(guī)則抗體的篩選42023/1/9標(biāo)本的采集與要求4ppt課件.42023/1/8標(biāo)本的采集與要求4ppt課件.52023/1/91.標(biāo)本要新鮮:

前三個(gè)月內(nèi)輸血或妊娠:配血試驗(yàn)標(biāo)本抽取<48h,避免因回憶反應(yīng)產(chǎn)生的抗體漏檢。新近的輸血或妊娠：可引起意外抗體迅速出現(xiàn),如果對病人的輸血史或人身史不明,使用的標(biāo)本必須是輸血前48h內(nèi)抽取的。血量約為5ml。2.使用右旋糖酐、pvp等：治療前抽取標(biāo)本備用,防止RBC緡錢狀凝集的干擾標(biāo)本要具有代表性，能代表患者目前狀況5ppt課件.52023/1/81.標(biāo)本要新鮮:標(biāo)本要具有代表性，能代表62023/1/93.24小時(shí)內(nèi)輸了12u血后：

可輸注未經(jīng)交叉配血的ABO、RH同型的血液,因?yàn)樵冀徊媾溲玫难逡巡荒艽砘颊哐宓那闆r。4.防止血樣的稀釋和溶血的產(chǎn)生：溶血標(biāo)本一般不使用,因?yàn)檠逯杏坞x血紅蛋白可掩蓋在輸血前實(shí)驗(yàn)中抗體反映引起的溶血5.標(biāo)本標(biāo)識：唯一性標(biāo)識無誤、與輸血申請單一致6.使用血漿標(biāo)本：應(yīng)排除纖維蛋白原的干擾7.輸血后標(biāo)本保存：2-8℃,至少一周。6ppt課件.62023/1/83.24小時(shí)內(nèi)輸了12u血后：6ppt課件72023/1/9血型1.紅細(xì)胞懸液的配制2.離心力的標(biāo)準(zhǔn)3.離心后結(jié)果觀察4.鹽水試驗(yàn)5.正反定型結(jié)果不一致原因及處理7ppt課件.72023/1/8血型1.紅細(xì)胞懸液的配制7ppt課件.82023/1/91.紅細(xì)胞懸液的配制洗滌

洗滌目的:去除RBC表面物質(zhì)少量的血漿蛋白已溶解紅細(xì)胞的基質(zhì)（有競爭抗體的作用）抗凝劑（有抗補(bǔ)體的作用）至少要用大量生理鹽水洗一次濃度2%：一般用于抗體效價(jià)的測定5%：一般用于血型鑒定、配血試驗(yàn)、抗球蛋白試驗(yàn)等大多數(shù)血型血清學(xué)試驗(yàn)10%：一般用于測定抗體的親和力試驗(yàn)8ppt課件.82023/1/81.紅細(xì)胞懸液的配制8ppt課件.92023/1/92.離心力的標(biāo)準(zhǔn)

不同規(guī)格離心機(jī)，力矩不同，統(tǒng)一離心轉(zhuǎn)速，但沒有統(tǒng)一離心力。離心轉(zhuǎn)速換算公式：

RCF=1.118×10-5×(rpm)2×R(cm)3.離心后結(jié)果觀察注意事項(xiàng)將試管成30-45℃角拿在手上，細(xì)胞扣朝上，手腕輕輕用力，用液體去沖細(xì)胞扣。

切不可用力使勁搖試管，那樣凝集顆粒會被搖散，弱凝集則會誤判為陰性。-細(xì)胞成細(xì)沙狀沿試管壁流下+細(xì)胞成塊狀或成齒狀沿試管壁流下9ppt課件.92023/1/82.離心力的標(biāo)準(zhǔn)-細(xì)胞成細(xì)沙狀沿試102023/1/9常用的記錄符號及所示的凝集強(qiáng)度4+一個(gè)大的凝集塊,背景透明,無游離細(xì)胞3+數(shù)個(gè)大凝集塊,背景透明,無游離細(xì)胞2+許多小凝集塊,肉眼可見,大小均勻,背景基本透明,有游離細(xì)胞1+很小的凝集塊,肉眼可見,背景不透明,游離細(xì)胞較多,需要用顯微鏡觀察W+微小凝集塊,肉眼很難看清,背景混濁,要用顯微鏡觀察O無凝集,無溶血,全部是游離細(xì)胞,要用顯微鏡觀察PH部分溶血H完全溶血WF混合外觀10ppt課件.102023/1/8常用的記錄符號及所示的凝集強(qiáng)度4+一個(gè)大112023/1/9

4.鹽水試驗(yàn)多采用立即離心法正確的操作是：RBC懸液加到血清后立即離心并觀察結(jié)果反應(yīng)時(shí)間過長而延誤離心對ABO血型系統(tǒng)的抗體檢出影響室溫2分鐘后離心可能使3+～4+的凝集減弱為0+～

1+,并有溶血室溫5分鐘后離心原有凝集可能消失,并有溶血有的標(biāo)本延遲離心原有凝集會變?yōu)榧炔荒膊蝗苎?難以發(fā)現(xiàn)ABO血型的不配合。（多發(fā)生在O型人的血清抗體與A型、B型或AB型紅細(xì)胞反應(yīng)的試驗(yàn)中,發(fā)生率為2%-3%.發(fā)生機(jī)制是反應(yīng)強(qiáng)的抗A、抗B和抗原強(qiáng)度強(qiáng)的A、B抗原作用,補(bǔ)體C1在有Ca2+存在的條件下,固定到紅細(xì)胞膜上,妨礙了紅細(xì)胞的凝集,進(jìn)一步可能引起溶血）解決的方法：

A:血清與紅細(xì)胞混合后立即離心。

B:用血漿或滅活的血清做試驗(yàn)

C:用EDTA鹽水配制紅細(xì)胞懸液,

D:稀釋血清11ppt課件.112023/1/84.鹽水試驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間122023/1/9加樣時(shí)先加血清再加紅細(xì)胞，以避免漏加；抗體和抗原的比例一般為2：1。必須要做正反定型實(shí)驗(yàn)才能確定血型。正定型試驗(yàn)有條件可加做抗AB（檢測弱A、弱B）反定型一定要加做O細(xì)胞,（發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體）12ppt課件.122023/1/8加樣時(shí)先加血清再加紅細(xì)胞，以避免漏加；1132023/1/95.正反定型結(jié)果不一致原因：技術(shù)、受檢紅細(xì)胞或血清本身（1）技術(shù)和管理錯(cuò)誤器材不潔——

假陽試劑污染或不足——

假陽標(biāo)本和試劑搞錯(cuò)——

假陽、假陰離心過度或不足——

假陽

、假陰結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤——

假陽

、假陰漏加試劑——

假陰陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識別——假陰13ppt課件.132023/1/85.正反定型結(jié)果不一致13ppt課件.142023/1/9（2）標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗A血清效價(jià)不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。（3）紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。（4）血清異常華通膠或血清蛋白異常引起串錢狀形成，影響反定性結(jié)果（5）紅細(xì)胞致敏在含高蛋白介質(zhì)試劑中可發(fā)生凝集，產(chǎn)生假陽性（6）近期曾異型輸血，病人血液標(biāo)本成為不同型別的紅細(xì)胞混合物，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。（7）疾病因素導(dǎo)致抗原減弱某些白血病病人ABO血型抗原可受到抑制，檢出困難。（8）紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象

RBC因遺傳或獲得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。14ppt課件.142023/1/8（2）標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗152023/1/9（9）獲得性類B

由于G-桿菌作用，RBC可獲得“類B”活性（10）異常血漿蛋白病人血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例異常和高濃度的FIB等能導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象（11）近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療，影響抗體效價(jià)，造成反定型困難。（12）不規(guī)則抗體的產(chǎn)生受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，如自身抗I，與試劑A、B細(xì)胞上的相應(yīng)抗原起反應(yīng)。（13）低丙種球蛋白血癥可能會因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型時(shí)不見凝集或僅見弱凝集反應(yīng)。

（14）藥物等因素藥物、右旋糖酐等靜脈注射某些造影劑可引起紅細(xì)胞聚集而類似凝集。

（15）年齡因素如新生兒、老年人等。15ppt課件.152023/1/8（9）獲得性類B由于G-桿菌作162023/1/9

正反定型不一致的處理方法

首先要重做試驗(yàn)一次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察結(jié)果，可解決明顯的問題.

對一些疑難問題需進(jìn)一步檢查?？沙醪讲扇∫韵麓胧?)重新抽樣，糾正因污染或搞錯(cuò)標(biāo)本造成的不符。2)將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成5%鹽水細(xì)胞懸液，用抗A、抗B、抗A+B做實(shí)驗(yàn)，可得到其他有用信息。有條件加做抗H試驗(yàn)

3)對受檢者作直接抗人球蛋白試驗(yàn)，看RBC有沒有被致敏4)如疑為A抗原或B抗原減弱，可將受檢紅細(xì)胞與抗A或抗B血清作吸收放散試驗(yàn)。5)如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞成緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴混勻，往往可使緡錢現(xiàn)象消失。6)做反定型試驗(yàn)時(shí)需要加做O細(xì)胞。16ppt課件.162023/1/8正反定型不一致的處理方法16ppt課172023/1/9

疑難血型病例1.白血病血型變異2.血漿蛋白紊亂3.類B4.多/全凝集5.冷凝集6.ABO亞型17ppt課件.172023/1/8疑難血型病例17ppt課件.182023/1/9三、不規(guī)則抗體的篩選篩選目的篩選步驟不規(guī)則抗體篩選與交叉配血結(jié)果分析18ppt課件.182023/1/8三、不規(guī)則抗體的篩選篩選目的18ppt課192023/1/9定義：抗A、抗B以外的血型抗體，多為ＩｇＧ抗體。主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生。血型抗體是體內(nèi)免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的針對血型抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的一類免疫球蛋白類物質(zhì)。人類血清中有5種類型：G、M、A、D、E，其中IgM、G是最重要的2種抗體。

RBC血型抗體分為：完全抗體：能在鹽水中凝集相應(yīng)RBC，又稱鹽水抗體。主要是分子量較大的IgM不完全抗體：能結(jié)合RBC上抗原致敏RBC，但在鹽水中不能使之凝集。主要是分子量小的IgG，需用抗球蛋白???????19ppt課件.192023/1/8定義：抗A、抗B以外的血型抗體，多為Ｉｇ202023/1/91.篩選目的：發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體，以確保安全有效用血。最好獻(xiàn)血者血清也作不規(guī)則抗體的篩選，如有發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，鑒定此抗體，找出能與其相配合的血液，不可隨便用于輸血。

不規(guī)則抗體多為IgG抗體，鹽水介質(zhì)中不能凝集，只能致敏相應(yīng)抗原的RBC,必須通過特殊介質(zhì)(酶、抗人球蛋白、poly等)才能使致敏RBC出現(xiàn)凝集反應(yīng)，這些方法的選擇可按抗體的血清學(xué)行為和試驗(yàn)的具體條件來確定。臨床上通常所稱的“同型血”是指ABO血型系統(tǒng)和Rh血型系統(tǒng)相同,其它紅細(xì)胞血型系統(tǒng)未必相同。如果交叉配血不仔細(xì),或只用鹽水介質(zhì)配血,則可能檢查不出ABO血型系統(tǒng)之外的不規(guī)則抗體,而此抗體與相應(yīng)抗原發(fā)生免疫反應(yīng),可導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。

20ppt課件.202023/1/81.篩選目的：20ppt課件.212023/1/92.篩選細(xì)胞：通常是由2-3個(gè)單人份的O型紅細(xì)胞組成一套篩選細(xì)胞試劑，包括以下常見的抗原：Rh系統(tǒng)、MNSs系統(tǒng)、P系統(tǒng)、Lewis系統(tǒng)、Duffy系統(tǒng)等。3.抗體篩選試驗(yàn)局限性：不一定能檢出所有有臨床意義的不規(guī)則抗體。一些抗低頻率抗原的抗體則可能漏檢。21ppt課件.212023/1/82.篩選細(xì)胞：21ppt課件.222023/1/9不規(guī)則抗體篩選的操作步驟被檢血清+抗體篩選細(xì)胞→鹽水介質(zhì)或非鹽水介質(zhì)（凝聚胺、抗球蛋白、酶）病人血清病人血清病人血清病人血清篩選細(xì)胞I篩選II篩選III病人紅細(xì)胞血清+病人紅細(xì)胞血清

+篩選細(xì)胞IPolyGram100ulLIM600ul血清

+篩選細(xì)胞II血清

+篩選細(xì)胞IIIResuspending100ul非特異性凝集無凝集則重做特異性凝集低離子介質(zhì)中孵育，促進(jìn)抗體與RBC結(jié)合凝聚胺含多價(jià)陽離子，中和RBC表面負(fù)電荷，減少RBC間距離枸櫞酸鈉重懸液，為負(fù)電荷，中和凝聚胺正電荷，使正常RBC凝集解散1.2.3.4.對Kell系統(tǒng)抗體不理想，陰性結(jié)果需做抗球。中國人群幾乎100%為kk型，具有K抗原的幾乎為0，至今未發(fā)現(xiàn)Kell系統(tǒng)抗體22ppt課件.222023/1/8不規(guī)則抗體篩選的操作步驟被檢血清+抗232023/1/9④抗篩陽性，交叉配血相容自身抗-H抗-Lebh抗篩陽性，但獻(xiàn)血者紅細(xì)胞可能正好不含與相應(yīng)的抗原，因此配血可以相合。⑤抗篩陽性，交叉配血不相容同種異體抗體存在，自身對照成陰性同種異體抗體存在，自身對照成陽性冷反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽性溫反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽性“錢串狀”紅細(xì)胞形成引起非真實(shí)的陽性結(jié)果③抗篩陰性，酶試驗(yàn)、抗球蛋白交叉配血試驗(yàn)等不相容

獻(xiàn)血者紅細(xì)胞DAT試驗(yàn)為陽性受血者血清抗體活性很弱，則抗篩試驗(yàn)成陰性抗體與低頻率抗原反應(yīng)②抗篩陰性，鹽水直接離心交叉配血不相容獻(xiàn)血者紅細(xì)胞是ABO血型不相容存在在室溫反應(yīng)的同種異體抗體獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞是多凝集紅細(xì)胞4.抗篩和交叉配血結(jié)果分析23ppt課件.232023/1/8④抗篩陽性，交叉配血相容⑤抗篩陽性，242023/1/9

輸血前試驗(yàn)“三保險(xiǎn)”血型、抗篩、交叉配血相合%隨機(jī)64ABO99.4Rh99.8抗篩99.94交叉配血99.95自身輸血10024ppt課件.242023/1/8輸血前試驗(yàn)“三保險(xiǎn)”相合%隨機(jī)64AB252023/1/9

交叉配血試驗(yàn)也稱配合性試驗(yàn)，實(shí)際上是檢查不配合性，使病人，獻(xiàn)血者血液之間沒有相對應(yīng)的抗原、抗體成分（如：患者體內(nèi)有抗A抗體，獻(xiàn)血者RBC上就不能有A抗原）試驗(yàn)應(yīng)在37℃下進(jìn)行。

四、交叉配血25ppt課件.252023/1/8交叉配血試驗(yàn)也稱配合性試驗(yàn)，實(shí)際上是262023/1/9

鹽水法用于IgM抗體的檢出、鹽水配血試驗(yàn)、用鹽水抗體鑒定的血型抗原，如ABO、MN、P等血型系統(tǒng)的抗原。當(dāng)IgG抗A、抗B的濃度足夠大時(shí)，在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)聚凝胺Poly是帶高價(jià)陽離子的多聚物，溶解后能產(chǎn)生正電荷，中和RBC表面負(fù)電荷，縮短RBC間距，引起正常RBC可逆非特異性凝集、抗體致敏的紅細(xì)胞則凝集不可逆酶技術(shù)蛋白水解酶能消化破壞RBC表面唾液酸，減少RBC表面負(fù)電菏，縮短RBC間距，IgG抗體能與有相應(yīng)抗原的RBC產(chǎn)生凝集。適合：酶法能顯著增強(qiáng)Rh和Kidd系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)，不適合：蛋白酶破壞M、N、S、s、Fya、Fyb抗原AGT抗人球又稱Coombs試驗(yàn),是檢查IgG抗體的最有效方法。除可測定RBC上IgG抗體外,還可測定IgM、IgA,、補(bǔ)體C3、C4直接：測體內(nèi)致敏RBC用于檢查紅細(xì)胞是否已被不完全抗體所致敏,如新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng)、自身免疫性溶血性貧血.間接：測血清中不完全抗體常用于血型鑒定、抗體的檢出和鑒定、輸血前交叉配血試驗(yàn)等.26ppt課件.262023/1/8鹽水法用于IgM抗體的檢出、鹽水配血272023/1/9酶處理細(xì)胞的凝集試驗(yàn)方法一期酶法

也稱直接法，菠蘿酶和木瓜酶適用于一期法。操作時(shí)在已標(biāo)記好的試管中加入100ul的血清和50ul的紅細(xì)胞懸液，再加50ul的酶溶液，37℃孵育15分鐘，1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘，輕搖后觀察結(jié)果二期酶法

也稱間接法，木瓜酶和無花果酶適用于二期法。二期分兩步，第一步是酶處理紅細(xì)胞：在1份洗滌的壓積紅細(xì)胞中加兩份木瓜酶溶液，37℃孵育30分鐘，用大量的Ph7。4的PBS洗滌3次，用生理鹽水配成5%的懸液備用。第二步是在已標(biāo)記好的試管中加受檢血清100ul,再加50ul酶處理過的紅細(xì)胞懸液，37℃孵育15-30分鐘觀察結(jié)果，凝集和溶血皆屬于陽性反應(yīng)。27ppt課件.272023/1/8酶處理細(xì)胞的凝集試驗(yàn)方法一期也稱直接法，282023/1/9

交叉配血試驗(yàn)通常包括：主側(cè)（受者血清+供者RBC）：測對供者RBC反應(yīng)的抗體次側(cè)（受者RBC+供者血清）：測對受者RBC反應(yīng)的抗體自身對照（受者RBC+受者血清）：顯示自身抗體、DAT陽性、RBC緡錢狀假陽性的存在

除作鹽水介質(zhì)外，至少還要做聚凝胺法，有條件加做抗球、酶法等。在配血的任何步驟中均不產(chǎn)生溶血或凝集獻(xiàn)血者的血液才能給病人輸注主管次管自身＋－＋－＋＋＋＋＋＋＋－＋－－－＋－－－－28ppt課件.282023/1/8交叉配血試驗(yàn)通常包括：主管次管自身＋－292023/1/9

實(shí)際當(dāng)中難免有抗篩陰性，但交叉配血不合的情況，應(yīng)依據(jù)實(shí)際情況合理解釋：緡錢狀形成：血清在室溫和37℃中，使RBC假凝集。常見于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、霍奇金病、其他表現(xiàn)為血沉加快的病例。交叉配血不相容，顯示有未撿明的同種抗體存在室溫反應(yīng)中顯示有自身抗體AGT試驗(yàn)中顯示有自身抗體抗篩陰性，交叉配血陽性，提示可能有未檢明的抗體存在離心力不當(dāng)，造成假陰性水浴箱溫度不正確，造成錯(cuò)誤結(jié)果RBC不正確的洗滌和懸浮，使AGT試驗(yàn)假陰性血清中如含有溶血性抗體，則相應(yīng)RBC被溶解而不是凝集，交叉配血應(yīng)為陽性。此時(shí)應(yīng)滅活血清再做試驗(yàn)。29ppt課件.292023/1/8實(shí)際當(dāng)中難免有抗篩陰性，但交叉配血不302023/1/9幾種交叉配血方法的比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)鹽水法操作方便,費(fèi)用低廉只能檢出不相配合完全抗體,不能檢出不相配合的不完全抗體酶法增強(qiáng)Rh、Kidd系統(tǒng)破壞MNSs、Fy(a)、Fy(b)抗原,易失活,壽命短,反應(yīng)時(shí)間長聚凝胺法方便、應(yīng)用最廣Kell系統(tǒng)部分抗體如抗K、抗kp(a)、抗kp(b)檢測不出,需要抗球蛋白試驗(yàn).且肝素對其有影響,易引起假陰性.抗球蛋白法檢測不完全抗體最靈敏操作復(fù)雜、不利于急診檢查和血庫的大批量工作微柱凝膠法國際推薦方法，靈敏度高、重復(fù)性好、特異性好、檢測結(jié)果可較長時(shí)間保存費(fèi)用高30ppt課件.302023/1/8幾種交叉配血方法的比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)鹽水法312023/1/9謝謝！31ppt課件.312023/1/8謝謝！31ppt課件.322023/1/9疑難配血病例1.患冷凝集素綜合征,有自身冷凝集抗體,“O”,病人3+血清自身抗體4+.采用抗人球蛋白法配血可消除此現(xiàn)象,輸“O”洗滌紅細(xì)胞.2.輸血前:“A”,輸A型紅細(xì)胞4u,無明顯反應(yīng),僅見少許Hb尿,很快消失,但Hb從入院時(shí)12g降至4g,該院誤定血型而輸血前沒做交叉配血而造成本次事故.

因與抗A反應(yīng)管的細(xì)胞似有二群細(xì)胞,后做唾液酸血型物質(zhì)測定,確定其血型為“B”型,因之前輸入大量的“A”型血.本次不適合輸“B”型血,建議輸注“O”洗滌紅細(xì)胞.3.“O”,Rh(+),貧血查因,消化道出血,消化道腫瘤,直接抗人球蛋白試驗(yàn)2+,檢出自身抗體,經(jīng)吸收處理后標(biāo)本可與“O”紅細(xì)胞配血.4.重度貧血患者,直接抗人球蛋白試驗(yàn)1+,篩選試驗(yàn)鹽水法、抗人球蛋白試驗(yàn)均為陰性,交叉配血時(shí)可采用抗人球膽白法,可輸注O型洗滌紅細(xì)胞.-A-BACBC正定4+3+反定--32ppt課件.322023/1/8疑難配血病例1.患冷凝集素綜合征,有自此課件下載可自行編輯修改，供參考！感謝您的支持，我們努力做得更好！此課件下載可自行編輯修改，供參考！342023/1/9交叉配血知識講座34ppt課件.12023/1/8交叉配血1ppt課件.352023/1/9RBC表面有豐富唾液酸，在中性環(huán)境中帶負(fù)電荷，互相分離?？赏ㄟ^縮短細(xì)胞間距，以及在致敏細(xì)胞上的抗體之間搭橋使RBC凝集。凝集一般為二個(gè)步驟抗體吸附于RBC抗原上成為致敏狀態(tài)

致敏RBC凝集形成塊狀?????????????????????????35ppt課件.22023/1/8RBC表面有豐富唾液酸，在中性環(huán)境中帶負(fù)電362023/1/9標(biāo)本的采集及要求一血型二不規(guī)則抗體的篩選

三交叉配血四一二三四36ppt課件.32023/1/8標(biāo)本的采集及要求一血型二不規(guī)則抗體的篩選372023/1/9標(biāo)本的采集與要求37ppt課件.42023/1/8標(biāo)本的采集與要求4ppt課件.382023/1/91.標(biāo)本要新鮮:

前三個(gè)月內(nèi)輸血或妊娠:配血試驗(yàn)標(biāo)本抽取<48h,避免因回憶反應(yīng)產(chǎn)生的抗體漏檢。新近的輸血或妊娠：可引起意外抗體迅速出現(xiàn),如果對病人的輸血史或人身史不明,使用的標(biāo)本必須是輸血前48h內(nèi)抽取的。血量約為5ml。2.使用右旋糖酐、pvp等：治療前抽取標(biāo)本備用,防止RBC緡錢狀凝集的干擾標(biāo)本要具有代表性，能代表患者目前狀況38ppt課件.52023/1/81.標(biāo)本要新鮮:標(biāo)本要具有代表性，能代表392023/1/93.24小時(shí)內(nèi)輸了12u血后：

可輸注未經(jīng)交叉配血的ABO、RH同型的血液,因?yàn)樵冀徊媾溲玫难逡巡荒艽砘颊哐宓那闆r。4.防止血樣的稀釋和溶血的產(chǎn)生：溶血標(biāo)本一般不使用,因?yàn)檠逯杏坞x血紅蛋白可掩蓋在輸血前實(shí)驗(yàn)中抗體反映引起的溶血5.標(biāo)本標(biāo)識：唯一性標(biāo)識無誤、與輸血申請單一致6.使用血漿標(biāo)本：應(yīng)排除纖維蛋白原的干擾7.輸血后標(biāo)本保存：2-8℃,至少一周。39ppt課件.62023/1/83.24小時(shí)內(nèi)輸了12u血后：6ppt課件402023/1/9血型1.紅細(xì)胞懸液的配制2.離心力的標(biāo)準(zhǔn)3.離心后結(jié)果觀察4.鹽水試驗(yàn)5.正反定型結(jié)果不一致原因及處理40ppt課件.72023/1/8血型1.紅細(xì)胞懸液的配制7ppt課件.412023/1/91.紅細(xì)胞懸液的配制洗滌

洗滌目的:去除RBC表面物質(zhì)少量的血漿蛋白已溶解紅細(xì)胞的基質(zhì)（有競爭抗體的作用）抗凝劑（有抗補(bǔ)體的作用）至少要用大量生理鹽水洗一次濃度2%：一般用于抗體效價(jià)的測定5%：一般用于血型鑒定、配血試驗(yàn)、抗球蛋白試驗(yàn)等大多數(shù)血型血清學(xué)試驗(yàn)10%：一般用于測定抗體的親和力試驗(yàn)41ppt課件.82023/1/81.紅細(xì)胞懸液的配制8ppt課件.422023/1/92.離心力的標(biāo)準(zhǔn)

不同規(guī)格離心機(jī)，力矩不同，統(tǒng)一離心轉(zhuǎn)速，但沒有統(tǒng)一離心力。離心轉(zhuǎn)速換算公式：

RCF=1.118×10-5×(rpm)2×R(cm)3.離心后結(jié)果觀察注意事項(xiàng)將試管成30-45℃角拿在手上，細(xì)胞扣朝上，手腕輕輕用力，用液體去沖細(xì)胞扣。

切不可用力使勁搖試管，那樣凝集顆粒會被搖散，弱凝集則會誤判為陰性。-細(xì)胞成細(xì)沙狀沿試管壁流下+細(xì)胞成塊狀或成齒狀沿試管壁流下42ppt課件.92023/1/82.離心力的標(biāo)準(zhǔn)-細(xì)胞成細(xì)沙狀沿試432023/1/9常用的記錄符號及所示的凝集強(qiáng)度4+一個(gè)大的凝集塊,背景透明,無游離細(xì)胞3+數(shù)個(gè)大凝集塊,背景透明,無游離細(xì)胞2+許多小凝集塊,肉眼可見,大小均勻,背景基本透明,有游離細(xì)胞1+很小的凝集塊,肉眼可見,背景不透明,游離細(xì)胞較多,需要用顯微鏡觀察W+微小凝集塊,肉眼很難看清,背景混濁,要用顯微鏡觀察O無凝集,無溶血,全部是游離細(xì)胞,要用顯微鏡觀察PH部分溶血H完全溶血WF混合外觀43ppt課件.102023/1/8常用的記錄符號及所示的凝集強(qiáng)度4+一個(gè)大442023/1/9

4.鹽水試驗(yàn)多采用立即離心法正確的操作是：RBC懸液加到血清后立即離心并觀察結(jié)果反應(yīng)時(shí)間過長而延誤離心對ABO血型系統(tǒng)的抗體檢出影響室溫2分鐘后離心可能使3+～4+的凝集減弱為0+～

1+,并有溶血室溫5分鐘后離心原有凝集可能消失,并有溶血有的標(biāo)本延遲離心原有凝集會變?yōu)榧炔荒膊蝗苎?難以發(fā)現(xiàn)ABO血型的不配合。（多發(fā)生在O型人的血清抗體與A型、B型或AB型紅細(xì)胞反應(yīng)的試驗(yàn)中,發(fā)生率為2%-3%.發(fā)生機(jī)制是反應(yīng)強(qiáng)的抗A、抗B和抗原強(qiáng)度強(qiáng)的A、B抗原作用,補(bǔ)體C1在有Ca2+存在的條件下,固定到紅細(xì)胞膜上,妨礙了紅細(xì)胞的凝集,進(jìn)一步可能引起溶血）解決的方法：

A:血清與紅細(xì)胞混合后立即離心。

B:用血漿或滅活的血清做試驗(yàn)

C:用EDTA鹽水配制紅細(xì)胞懸液,

D:稀釋血清44ppt課件.112023/1/84.鹽水試驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間452023/1/9加樣時(shí)先加血清再加紅細(xì)胞，以避免漏加；抗體和抗原的比例一般為2：1。必須要做正反定型實(shí)驗(yàn)才能確定血型。正定型試驗(yàn)有條件可加做抗AB（檢測弱A、弱B）反定型一定要加做O細(xì)胞,（發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體）45ppt課件.122023/1/8加樣時(shí)先加血清再加紅細(xì)胞，以避免漏加；1462023/1/95.正反定型結(jié)果不一致原因：技術(shù)、受檢紅細(xì)胞或血清本身（1）技術(shù)和管理錯(cuò)誤器材不潔——

假陽試劑污染或不足——

假陽標(biāo)本和試劑搞錯(cuò)——

假陽、假陰離心過度或不足——

假陽

、假陰結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤——

假陽

、假陰漏加試劑——

假陰陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識別——假陰46ppt課件.132023/1/85.正反定型結(jié)果不一致13ppt課件.472023/1/9（2）標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗A血清效價(jià)不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。（3）紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。（4）血清異常華通膠或血清蛋白異常引起串錢狀形成，影響反定性結(jié)果（5）紅細(xì)胞致敏在含高蛋白介質(zhì)試劑中可發(fā)生凝集，產(chǎn)生假陽性（6）近期曾異型輸血，病人血液標(biāo)本成為不同型別的紅細(xì)胞混合物，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。（7）疾病因素導(dǎo)致抗原減弱某些白血病病人ABO血型抗原可受到抑制，檢出困難。（8）紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象

RBC因遺傳或獲得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。47ppt課件.142023/1/8（2）標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗482023/1/9（9）獲得性類B

由于G-桿菌作用，RBC可獲得“類B”活性（10）異常血漿蛋白病人血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例異常和高濃度的FIB等能導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象（11）近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療，影響抗體效價(jià)，造成反定型困難。（12）不規(guī)則抗體的產(chǎn)生受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，如自身抗I，與試劑A、B細(xì)胞上的相應(yīng)抗原起反應(yīng)。（13）低丙種球蛋白血癥可能會因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型時(shí)不見凝集或僅見弱凝集反應(yīng)。

（14）藥物等因素藥物、右旋糖酐等靜脈注射某些造影劑可引起紅細(xì)胞聚集而類似凝集。

（15）年齡因素如新生兒、老年人等。48ppt課件.152023/1/8（9）獲得性類B由于G-桿菌作492023/1/9

正反定型不一致的處理方法

首先要重做試驗(yàn)一次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察結(jié)果，可解決明顯的問題.

對一些疑難問題需進(jìn)一步檢查?？沙醪讲扇∫韵麓胧?)重新抽樣，糾正因污染或搞錯(cuò)標(biāo)本造成的不符。2)將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成5%鹽水細(xì)胞懸液，用抗A、抗B、抗A+B做實(shí)驗(yàn)，可得到其他有用信息。有條件加做抗H試驗(yàn)

3)對受檢者作直接抗人球蛋白試驗(yàn)，看RBC有沒有被致敏4)如疑為A抗原或B抗原減弱，可將受檢紅細(xì)胞與抗A或抗B血清作吸收放散試驗(yàn)。5)如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞成緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴混勻，往往可使緡錢現(xiàn)象消失。6)做反定型試驗(yàn)時(shí)需要加做O細(xì)胞。49ppt課件.162023/1/8正反定型不一致的處理方法16ppt課502023/1/9

疑難血型病例1.白血病血型變異2.血漿蛋白紊亂3.類B4.多/全凝集5.冷凝集6.ABO亞型50ppt課件.172023/1/8疑難血型病例17ppt課件.512023/1/9三、不規(guī)則抗體的篩選篩選目的篩選步驟不規(guī)則抗體篩選與交叉配血結(jié)果分析51ppt課件.182023/1/8三、不規(guī)則抗體的篩選篩選目的18ppt課522023/1/9定義：抗A、抗B以外的血型抗體，多為ＩｇＧ抗體。主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生。血型抗體是體內(nèi)免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的針對血型抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的一類免疫球蛋白類物質(zhì)。人類血清中有5種類型：G、M、A、D、E，其中IgM、G是最重要的2種抗體。

RBC血型抗體分為：完全抗體：能在鹽水中凝集相應(yīng)RBC，又稱鹽水抗體。主要是分子量較大的IgM不完全抗體：能結(jié)合RBC上抗原致敏RBC，但在鹽水中不能使之凝集。主要是分子量小的IgG，需用抗球蛋白???????52ppt課件.192023/1/8定義：抗A、抗B以外的血型抗體，多為Ｉｇ532023/1/91.篩選目的：發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體，以確保安全有效用血。最好獻(xiàn)血者血清也作不規(guī)則抗體的篩選，如有發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，鑒定此抗體，找出能與其相配合的血液，不可隨便用于輸血。

不規(guī)則抗體多為IgG抗體，鹽水介質(zhì)中不能凝集，只能致敏相應(yīng)抗原的RBC,必須通過特殊介質(zhì)(酶、抗人球蛋白、poly等)才能使致敏RBC出現(xiàn)凝集反應(yīng)，這些方法的選擇可按抗體的血清學(xué)行為和試驗(yàn)的具體條件來確定。臨床上通常所稱的“同型血”是指ABO血型系統(tǒng)和Rh血型系統(tǒng)相同,其它紅細(xì)胞血型系統(tǒng)未必相同。如果交叉配血不仔細(xì),或只用鹽水介質(zhì)配血,則可能檢查不出ABO血型系統(tǒng)之外的不規(guī)則抗體,而此抗體與相應(yīng)抗原發(fā)生免疫反應(yīng),可導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。

53ppt課件.202023/1/81.篩選目的：20ppt課件.542023/1/92.篩選細(xì)胞：通常是由2-3個(gè)單人份的O型紅細(xì)胞組成一套篩選細(xì)胞試劑，包括以下常見的抗原：Rh系統(tǒng)、MNSs系統(tǒng)、P系統(tǒng)、Lewis系統(tǒng)、Duffy系統(tǒng)等。3.抗體篩選試驗(yàn)局限性：不一定能檢出所有有臨床意義的不規(guī)則抗體。一些抗低頻率抗原的抗體則可能漏檢。54ppt課件.212023/1/82.篩選細(xì)胞：21ppt課件.552023/1/9不規(guī)則抗體篩選的操作步驟被檢血清+抗體篩選細(xì)胞→鹽水介質(zhì)或非鹽水介質(zhì)（凝聚胺、抗球蛋白、酶）病人血清病人血清病人血清病人血清篩選細(xì)胞I篩選II篩選III病人紅細(xì)胞血清+病人紅細(xì)胞血清

+篩選細(xì)胞IPolyGram100ulLIM600ul血清

+篩選細(xì)胞II血清

+篩選細(xì)胞IIIResuspending100ul非特異性凝集無凝集則重做特異性凝集低離子介質(zhì)中孵育，促進(jìn)抗體與RBC結(jié)合凝聚胺含多價(jià)陽離子，中和RBC表面負(fù)電荷，減少RBC間距離枸櫞酸鈉重懸液，為負(fù)電荷，中和凝聚胺正電荷，使正常RBC凝集解散1.2.3.4.對Kell系統(tǒng)抗體不理想，陰性結(jié)果需做抗球。中國人群幾乎100%為kk型，具有K抗原的幾乎為0，至今未發(fā)現(xiàn)Kell系統(tǒng)抗體55ppt課件.222023/1/8不規(guī)則抗體篩選的操作步驟被檢血清+抗562023/1/9④抗篩陽性，交叉配血相容自身抗-H抗-Lebh抗篩陽性，但獻(xiàn)血者紅細(xì)胞可能正好不含與相應(yīng)的抗原，因此配血可以相合。⑤抗篩陽性，交叉配血不相容同種異體抗體存在，自身對照成陰性同種異體抗體存在，自身對照成陽性冷反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽性溫反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽性“錢串狀”紅細(xì)胞形成引起非真實(shí)的陽性結(jié)果③抗篩陰性，酶試驗(yàn)、抗球蛋白交叉配血試驗(yàn)等不相容

獻(xiàn)血者紅細(xì)胞DAT試驗(yàn)為陽性受血者血清抗體活性很弱，則抗篩試驗(yàn)成陰性抗體與低頻率抗原反應(yīng)②抗篩陰性，鹽水直接離心交叉配血不相容獻(xiàn)血者紅細(xì)胞是ABO血型不相容存在在室溫反應(yīng)的同種異體抗體獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞是多凝集紅細(xì)胞4.抗篩和交叉配血結(jié)果分析56ppt課件.232023/1/8④抗篩陽性，交叉配血相容⑤抗篩陽性，572023/1/9

輸血前試驗(yàn)“三保險(xiǎn)”血型、抗篩、交叉配血相合%隨機(jī)64ABO99.4Rh99.8抗篩99.94交叉配血99.95自身輸血10057ppt課件.242023/1/8輸血前試驗(yàn)“三保險(xiǎn)”相合%隨機(jī)64AB582023/1/9

交叉配血試驗(yàn)也稱配合性試驗(yàn)，實(shí)際上是檢查不配合性，使病人，獻(xiàn)血者血液之間沒有相對應(yīng)的抗原、抗體成分（如：患者體內(nèi)有抗A抗體，獻(xiàn)血者RBC上就不能有A抗原）試驗(yàn)應(yīng)在37℃下進(jìn)行。

四、交叉配血58ppt課件.252023/1/8交叉配血試驗(yàn)也稱配合性試驗(yàn)，實(shí)際上是592023/1/9

鹽水法用于IgM抗體的檢出、鹽水配血試驗(yàn)、用鹽水抗體鑒定的血型抗原，如ABO、MN、P等血型系統(tǒng)的抗原。當(dāng)IgG抗A、抗B的濃度足夠大時(shí)，在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)聚凝胺Poly是帶高價(jià)陽離子的多聚物，溶解后能產(chǎn)生正電荷，中和RBC表面負(fù)電荷，縮短RBC間距，引起正常RBC可逆非特異性凝集、抗體致敏的紅細(xì)胞則凝集不可逆酶技術(shù)蛋白水解酶能消化破壞RBC表面唾液酸，減少RBC表面負(fù)電菏，縮短RBC間距，IgG抗體能與有相應(yīng)抗原的RBC產(chǎn)生凝集。適合：酶法能顯著增強(qiáng)Rh和Kidd系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)，不適合：蛋白酶破壞M、N、S、s、Fya、Fyb抗原AGT抗人球又稱Coombs試驗(yàn),是檢查IgG抗體的最有效方法。除可測定RBC上IgG抗體外,還可測定IgM、IgA,、補(bǔ)體C3、C4直接：測體內(nèi)致敏RBC用于檢查紅細(xì)胞是否已被不完全抗體所致敏,如新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng)、自身免疫性溶血性貧血.間接：測血清中不完全抗體常用于血型鑒定、抗體的檢出和鑒定、輸血前交叉配血試驗(yàn)等.59ppt課件.262023/1/8鹽水法用于IgM抗體的檢出、鹽水配血602023/1/9酶處理細(xì)胞的凝集試驗(yàn)方法一期酶法

也稱直接法，菠蘿酶和木瓜酶適用于一期法。操作時(shí)在已標(biāo)記好的試管中加入100ul的血清和50ul的紅細(xì)胞懸液，再加50ul的酶溶液，37℃孵育15分鐘，1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘，輕搖后觀察結(jié)果二期酶法

也稱間接法，木瓜酶和無花果酶適用于二期法。二期分兩步，第一步是酶處理紅細(xì)胞：在1份洗滌的壓積紅細(xì)胞中加兩份木瓜酶溶液，37℃孵育30分鐘，用大量的Ph7。4的PBS洗滌3次，用生理鹽水配成5%的懸液備用。第二步是在已標(biāo)記好的試管中加受檢血清100ul,再加50ul酶處理過的紅細(xì)胞懸液，37℃孵育15-30分鐘觀察結(jié)果，凝集和溶血皆屬于陽性反應(yīng)。60ppt課件.272023/1/8酶處理細(xì)胞的凝集試驗(yàn)方法一期也稱直接法，6