藥質(zhì)量控制和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂之漫談

新藥質(zhì)量控制研究

和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂之漫談中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所GeneralR&DProcess

TargetIdentifi-cationAssayDevelopmentLeadIdentifi-cationLeadOptimi-zationPhaseIIPhaseIIIFilingLaunchPhaseIDevelop-mentPre-dev.Med.ChemistryDMPKAnalyticsDevelopmentStrategyCoveredtopicsBiology/PharmacologyInvolveddisciplinesDescriptionofdeliverablesandprojectreviewprocessforallmajordecisionpointsinR&D?RolesandresponsibilitiesofstakeholdersinR&DProjectReviewProcess?Deliverablesforprojectteamandkeyquestions/criteriatobeevaluatedbydecisioncommittees?Involveddisciplines:allmajorR&DdisciplinesfromTargetIdentificationthroughStart-of-DevelopmentDescriptionofactivities/workpackagesandprojectmilestonestooptimizecycletimes?ActivitiesinDrugSubstanceandDrugProductdevelopment?DevelopmentprocessfromPredevelopmentthroughproductlaunch?Involveddisciplines:mainlyChem./PharmaceuticalDevelopment,ProcessingandManufacturingPharmaceuticalDevelopmentChemicalDevelopmentChem.andPharm.Processing/Manuf.ToxicologyDDSTargetIdentifi-cationAssayDevelopmentLeadIdentifi-cationLeadOptimi-zationPhaseIIPhaseIIIFilingLaunchPhaseIDevelop-mentPre-dev.Med.ChemistryDMPKAnalyticsDevelopmentStrategyCoveredtopicsCoveredtopicsBiology/PharmacologyBiology/PharmacologyInvolveddisciplinesInvolveddisciplinesDescriptionofdeliverablesandprojectreviewprocessforallmajordecisionpointsinR&D?RolesandresponsibilitiesofstakeholdersinR&DProjectReviewProcess?Deliverablesforprojectteamandkeyquestions/criteriatobeevaluatedbydecisioncommittees?Involveddisciplines:allmajorR&DdisciplinesfromTargetIdentificationthroughStart-of-DevelopmentDescriptionofactivities/workpackagesandprojectmilestonestooptimizecycletimes?ActivitiesinDrugSubstanceandDrugProductdevelopment?DevelopmentprocessfromPredevelopmentthroughproductlaunch?Involveddisciplines:mainlyChem./PharmaceuticalDevelopment,ProcessingandManufacturingPharmaceuticalDevelopmentChemicalDevelopmentChemicalDevelopmentChem.andPharm.Processing/Manuf.Chem.andPharm.Processing/Manuf.ToxicologyDDSTheRolesofStructureAnalysisGroupindrugdevelopmentPhaseIIILaunchPostlaunchDrugDiscovery

PC&PhIPD

PhIISupportToxicologyandotheractivitiesCofAforTox.LotpotentialimpuritiesSupportpreformulationSupportIND&CTAAFullCofApreliminaryreferencestandardINDProofofStructureSyntheticimpuritiesPotentialdegradationproductReleasetestingSupportformulationSupportNDAQualifyPrimaryReferenceStandardNDAproofofStructureForcedDegradationstudyImpuritiesandDegradationproductReleasetestingLeachablesClinicalsuppliestestingInvestigationofOOSSupportMarketingComplaintsCounterfeit

ProblemSolvinginAllPhases!!!新藥安全、有效、可控新藥分類化學(xué)藥品中藥、天然藥物生物制品化學(xué)藥品1、未在國(guó)內(nèi)外上市銷售的藥品：

（1）通過(guò)合成或者半合成的方法制得的原料藥及其制劑；

（2）天然物質(zhì)中提取或者通過(guò)發(fā)酵提取的新的有效單體及其制劑；

（3）用拆分或者合成等方法制得的已知藥物中的光學(xué)異構(gòu)體及其制劑；

（4）由已上市銷售的多組份藥物制備為較少組份的藥物；（5）新的復(fù)方制劑。2、改變給藥途徑且尚未在國(guó)內(nèi)外上市銷售的制劑。3、已在國(guó)外上市銷售但尚未在國(guó)內(nèi)上市銷售的藥品：

（1）已在國(guó)外上市銷售的原料藥及其制劑；

（2）已在國(guó)外上市銷售的復(fù)方制劑；

（3）改變給藥途徑并已在國(guó)外上市銷售的制劑。4、改變已上市銷售鹽類藥物的酸根、堿基（或者金屬元素），但不改變其藥理作用的原料藥及其制劑。5、改變國(guó)內(nèi)已上市銷售藥品的劑型，但不改變給藥途徑的制劑。6、已有國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的原料藥或者制劑。中藥、天然藥物

1、未在國(guó)內(nèi)上市銷售的從中藥、天然藥物中提取的有效成份及其制劑。

2、未在國(guó)內(nèi)上市銷售的來(lái)源于植物、動(dòng)物、礦物等藥用物質(zhì)制成的制劑。

3、中藥材的代用品。

4、未在國(guó)內(nèi)上市銷售的中藥材新的藥用部位制成的制劑。

5、未在國(guó)內(nèi)上市銷售的從中藥、天然藥物中提取的有效部位制成的制劑。

6、未在國(guó)內(nèi)上市銷售的由中藥、天然藥物制成的復(fù)方制劑。

7、未在國(guó)內(nèi)上市銷售的由中藥、天然藥物制成的注射劑。

8、改變國(guó)內(nèi)已上市銷售藥品給藥途徑的制劑。

9、改變國(guó)內(nèi)已上市銷售藥品劑型的制劑。

10、改變國(guó)內(nèi)已上市銷售藥品工藝的制劑。

11、已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的中成藥和天然藥物制劑。

生物制品1、未在國(guó)內(nèi)外上市銷售的生物制品。2、單克隆抗體。3、基因治療、體細(xì)胞治療及其制品。4、變態(tài)反應(yīng)原制品。5、由人的、動(dòng)物的組織或者體液提取的，或者通過(guò)發(fā)酵制備的具有生物活性的多組份制品。6、由已上市銷售生物制品組成新的復(fù)方制品。7、已在國(guó)外上市銷售但尚未在國(guó)內(nèi)上市銷售的生物制品。8、含未經(jīng)批準(zhǔn)菌種制備的微生態(tài)制品。9、與已上市銷售制品結(jié)構(gòu)不完全相同且國(guó)內(nèi)外均未上市銷售的制品（包括氨基酸位點(diǎn)突變、缺失，因表達(dá)系統(tǒng)不同而產(chǎn)生、消除或者改變翻譯后修飾，對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行化學(xué)修飾等）。10、與已上市銷售制品制備方法不同的制品（例如采用不同表達(dá)體系、宿主細(xì)胞等）。11、首次采用DNA重組技術(shù)制備的制品（例如以重組技術(shù)替代合成技術(shù)、生物組織提取或者發(fā)酵技術(shù)等）。12、國(guó)內(nèi)外尚未上市銷售的由非注射途徑改為注射途徑給藥，或者由局部用藥改為全身給藥的制品。13、改變已上市銷售制品的劑型但不改變給藥途徑的生物制品。14、改變給藥途徑的生物制品（不包括上述12項(xiàng)）。15、已有國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的生物制品?；瘜W(xué)藥品申報(bào)資料項(xiàng)目（一）綜述資料

1、藥品名稱。

2、證明性文件。

3、立題目的與依據(jù)。

4、對(duì)主要研究結(jié)果的總結(jié)及評(píng)價(jià)。

5、藥品說(shuō)明書(shū)樣稿、起草說(shuō)明及最新參考文獻(xiàn)。

6、包裝、標(biāo)簽設(shè)計(jì)樣稿。

（二）藥學(xué)研究資料7、藥學(xué)研究資料綜述。

8、原料藥生產(chǎn)工藝的研究資料及文獻(xiàn)資料；制劑處方及工藝的研究資料及文獻(xiàn)資料。

9、確證化學(xué)結(jié)構(gòu)或者組份的試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。

10、質(zhì)量研究工作的試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。

11、藥品標(biāo)準(zhǔn)草案及起草說(shuō)明，并提供標(biāo)準(zhǔn)品或者對(duì)照品。

12、樣品的檢驗(yàn)報(bào)告書(shū)。

13、輔料的來(lái)源及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

14、藥物穩(wěn)定性研究的試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。

15、直接接觸藥品的包裝材料和容器的選擇依據(jù)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

（三）藥理理毒理研究究資料16、藥理理毒理研究究資料綜述述。

17、主要藥藥效學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)資料及文文獻(xiàn)資料。。

18、、一般藥理理研究的試試驗(yàn)資料及及文獻(xiàn)資料料。

19、急性毒毒性試驗(yàn)資資料及文獻(xiàn)獻(xiàn)資料。20、長(zhǎng)長(zhǎng)期毒性試試驗(yàn)資料及及文獻(xiàn)資料料。

21、過(guò)敏性性（局部、、全身和光光敏毒性））、溶血性性和局部（（血管、皮皮膚、粘粘膜、肌肉肉等）刺激激性等主要要與局部、、全身給藥藥相關(guān)的特特殊安全性性試驗(yàn)研究究和文獻(xiàn)資資料。22、復(fù)方方制劑中多多種成份藥藥效、毒性性、藥代動(dòng)動(dòng)力學(xué)相互互影響的試試驗(yàn)資料及及文獻(xiàn)資料料。

23、致突變變?cè)囼?yàn)資料料及文獻(xiàn)資資料。24、生殖殖毒性試驗(yàn)驗(yàn)資料及文文獻(xiàn)資料。。

25、、致癌試驗(yàn)驗(yàn)資料及文文獻(xiàn)資料。。

26、、依賴性試試驗(yàn)資料及及文獻(xiàn)資料料。

27、動(dòng)物藥藥代動(dòng)力學(xué)學(xué)試驗(yàn)資料料及文獻(xiàn)資資料。（四）臨床床研究資料料28、國(guó)內(nèi)內(nèi)外相關(guān)的的臨床研究究資料綜述述。

29、臨床研研究計(jì)劃及及研究方案案。

30、臨床研研究者手冊(cè)冊(cè)。

31、知情同同意書(shū)樣稿稿、倫理委委員會(huì)批準(zhǔn)準(zhǔn)件。32、臨床床研究報(bào)告告。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研研究的意義義和要求制定藥品質(zhì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的的意義達(dá)到安全、、有效、可可控的目的的對(duì)藥品質(zhì)量量標(biāo)準(zhǔn)方法法學(xué)的要求求藥物分析、、分析化學(xué)學(xué)的各種方方法但應(yīng)成熟、、可靠、可可操作性強(qiáng)強(qiáng)ICHQualityGuidelinesNDA/MAAcomponentsQuality(CMC)SafetyEfficacyICHQualityGuidelinesQ1:Stability(3)Q2:Analyticalmethod(2)Q3:Impurities(3)Q4 Pharmacopoeiamonographs(nonepublished)Q5 Biotechnology(4)Q6 Specifications(2)Q7 GoodmanufacturingPractice(1)新藥研究的的主要技術(shù)術(shù)要求和指指導(dǎo)原則ICH人用藥品注注冊(cè)技術(shù)要要求國(guó)際協(xié)協(xié)調(diào)會(huì)InternationalConferenceonHarmonisationofTechnicalRequirementsforRegistrationofPharmaceuticalsforHumanUse在1990年由美國(guó)國(guó)、日本、、歐盟三方方政府的藥藥品監(jiān)督管管理部門(mén)和和制藥企業(yè)業(yè)聯(lián)合發(fā)起起成立的。。新藥研究指指導(dǎo)原則（（我國(guó)）主要內(nèi)容性狀及理化化性質(zhì)鑒別檢查含量測(cè)定穩(wěn)定性研究究性狀及理化化性質(zhì)溶解度熔點(diǎn)油水分配系系數(shù)紫外吸收光光譜和吸收收系數(shù)旋光度溶解度硫酸胍丁胺胺在水中極易溶解解，在冰醋酸、甲醇、乙醇、丙酮、二甲甲亞砜、N,N-二甲基甲酰酰胺、氯仿仿中幾乎不不溶，在0.1mol/L鹽鹽酸溶液、、0.1mol/L氫氧化鈉鈉溶液中極極易溶解。這是由于胍胍丁胺以硫硫酸鹽的形形式存在，，且分子含含有易于質(zhì)質(zhì)子化的氨氨基和胍基基，具有極極強(qiáng)的親水水性，這一一性質(zhì)與硫硫酸胍丁胺胺油水分配配系數(shù)的研研究結(jié)論是是一致的。。熔點(diǎn)點(diǎn)毛細(xì)細(xì)管管法法按照照中中國(guó)國(guó)藥藥典典(2000年年版版二二部部)的的方方法法測(cè)測(cè)量量其其熔熔點(diǎn)點(diǎn)。。實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)中中隨隨溫溫度度升升高高，，硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺的的顏顏色色開(kāi)開(kāi)始始呈呈棕棕黃黃，，然然后后逐逐漸漸變變棕棕褐褐色色，，固固相相消消失失不不明明顯顯，，無(wú)無(wú)法法獲獲得得本本品品的的準(zhǔn)準(zhǔn)確確熔熔點(diǎn)點(diǎn)。。差示示掃掃描描量量熱熱法法（（DSC））熔點(diǎn)點(diǎn)DSC曲曲線線記記錄錄了了維維持持樣樣品品和和參參比比物物溫溫度度相相同同所所需需的的能能量量差差隨隨溫溫度度的的變變化化。。DSC曲曲線線有有助助于于熔熔點(diǎn)點(diǎn)的的確確定定，，同同時(shí)時(shí)從從DSC曲曲線線上上的的吸吸熱熱或或放放熱熱峰峰的的位位置置、、形形狀狀、、數(shù)數(shù)目目可可以以估估計(jì)計(jì)樣樣品品的的純純度度，，而而峰峰面面積積與與反反應(yīng)應(yīng)熱熱焓焓有有關(guān)關(guān)，，可可用用來(lái)來(lái)測(cè)測(cè)定定反反應(yīng)應(yīng)熱熱、、比比熱熱容容等等熱熱化化學(xué)學(xué)參參數(shù)數(shù)。。DSC測(cè)測(cè)定定熔熔點(diǎn)點(diǎn)油水水分分配配系系數(shù)數(shù)采用用正正辛辛醇醇-水體體系系，，研研究究了了不不同同濃濃度度硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺在在兩兩相相中中的的分分配配情情況況，，研研究究表表明明硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺幾幾乎乎全全部部存存在在于于水水相相中中，，這這是是由由于于硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺具具有有極極強(qiáng)強(qiáng)的的親親水水性性；；由由于于其其游游離離堿堿不不能能穩(wěn)穩(wěn)定定存存在在，，故故無(wú)無(wú)法法求求取取其其游游離離堿堿的的油油水水分分配配系系數(shù)數(shù)。。紫外外吸吸收收光光譜譜紫外外最最大大吸吸收收波波長(zhǎng)長(zhǎng)和和吸吸收收系系數(shù)數(shù)儀器型號(hào)測(cè)定室溫(℃)λ(max)nmE原液稀釋一倍水溶劑25±1℃218±2島津UV-250219520.8528.9島津UV-260218520.7530.6島津UV-160A219520.6531.3島津UV-160A218520.4532.8惠普HP-8453218520.0529.7Ex=525.6SD=5.45RSD=1.04%紫外外吸吸收收度度比比值值測(cè)測(cè)定定儀器型號(hào)比值325nm/218nm

325nm/234nm島津UV-2501.3501.778島津UV-2601.3531.790島津UV-160A1.3531.790島津UV-1501.3491.790惠普HP-84531.3521.790平均值1.3511.788RSD(%)0.130.30鑒別別化學(xué)學(xué)鑒鑒別別法法HPLC方方法法紅外外光光譜譜法法紫外外光光譜譜法法化學(xué)學(xué)鑒鑒別別取本本品品約約10mg，，加加甲甲醇醇1mL，，滴滴加加三三氯氯化化鐵鐵試試液液二二滴滴，，搖搖勻勻后后，，呈呈綠綠色色溶溶液液。。即即本本品品中中的的酚酚羥羥基基與與三三氯氯化化鐵鐵形形成成綠綠色色絡(luò)絡(luò)合合物物。。HPLC方法a.硫酸胍丁胺（（購(gòu)自Sigma）b.硫酸胍丁胺精精制品紅外光譜法（（紫外光譜法法類似）檢查無(wú)機(jī)雜質(zhì)檢查查a.干燥失重b.灼燒殘?jiān)點(diǎn).重金屬d.砷鹽酸度溶液顏色與澄澄清度熱原等等有機(jī)雜質(zhì)檢查查a.有機(jī)溶溶劑殘留量b.有關(guān)物質(zhì)高效液相色譜譜法薄層色譜法ICHGuidanceonImpuritiesinDrugSubstanceImpuritiesinDrugSubstance(ICH)Q3A(R)ClassificationofimpuritiesOrganicImpurities(Processanddrugrelated)StartingmaterialBy-productsIntermediateDegradationProductsReagents,ligands,andcatalystsInorganicImpuritiesReagents,ligands,andcatalystsHeavymetalsorotherresidualmetalsInorganicsaltsOthermaterials(eg.Filteraids,charcoal)Solvents:Organicorinorganicliquidsusedasvehiclesforthepreparationofsolutionsorsuspensionsinthesynthesis無(wú)機(jī)雜質(zhì)檢查查批號(hào)干燥失重?zé)胱茪堅(jiān)亟饘偕辂}酸度0401120.21%0.015%10ppm<2ppm4.240401130.06%0.028%10ppm<2ppm4.970401150.13%0.080%1020ppm<2ppm4.90按藥典常規(guī)方方法進(jìn)行有機(jī)溶劑殘留留量的檢查分類(riskbasedassessment)1類:避免免使用的溶劑劑(shouldnotbeused)2類:限制制使用的溶劑劑(0.1mg/day,or10ppm)3類:低低毒性溶劑(50mg/dayor0.5%)殘留溶劑限量量（ppm））1類：苯（2）、四氯化碳碳（4）、1,2-二氯乙烷（（5）、1,1-二氯乙烷（（8）、1,1,1-三氯乙乙烷（1500）2類：甲苯（（890）、乙腈（410）、氯仿（60）、二氯甲烷烷（600）、正己烷（（290）、甲醇（3000）、吡啶（200）等等3類：醋酸、、丙酮、乙醇醇、乙醚、乙乙酸乙酯、甲甲酸、苯甲醚醚、丁醇、醋醋酸丁醇、四四氫呋喃、正正庚烷、丙醇醇、甲乙酮、、戊烷（5000）無(wú)足夠毒性數(shù)數(shù)據(jù)的溶劑：：異辛烷、石石油醚、三氯氯乙酸、三氟氟乙酸、2,2-二甲丙丙烷等有機(jī)溶劑殘留留量檢查儀器及主要色色譜條件美國(guó)HP5890型型氣相色譜儀儀色譜柱：DB-624，，30m×0.32mm×1.8μm載氣：N2進(jìn)樣方式：250C（柱前壓50kPa分流進(jìn)樣））柱溫：50C，20C/min至230C。檢測(cè)器：FID250C硫酸胍丁胺在在合成和提取取過(guò)程中曾用用甲醇、乙醇醇，因此我們們對(duì)樣品中甲甲醇、乙醇兩兩種溶劑的殘殘留量采用氣氣相色譜法進(jìn)進(jìn)行檢查。分離圖及最低低檢出限量圖圖最低檢出限量量圖（甲醇0.1‰，乙醇0.1‰）分離圖方法分析特性性甲醇乙醇線性范圍19.6~491μg/ml20.2~505μg/ml線性方程Y=-0.00309+0.0102xr=0.9964Y=-0.278+0.0155xr=0.9968精密度(RSD)(n=5)49.1μg/ml,4.54%50.5μg/ml,4.39%98.2μg/ml,3.88%101μg/ml,4.38%344μg/ml,4.17%354μg/ml,4.02%準(zhǔn)確度(回收率%)49.1μg/ml,82.0%50.5μg/ml,114%98.2μg/ml,112%101μg/ml,117%344μg/ml,107%354μg/ml,104%定量限最小檢出限量<5.0μg/ml<5.0μg/ml<0.1‰0.1‰限量圖和樣品品檢查圖限量圖甲醇0.3%,乙醇0.5%樣品檢查圖有關(guān)物質(zhì)檢查查HPLC方法法GC方法TLC方法LC-MS/MS、GC-MS、NMRICHGuidanceonImpuritiesinDrugSubstanceReportingandcontrolofImpuritiesinDrugSubstance(ICH)Q3A(R)OrganicImpuritiesMaximumDailyDoseReportingThresholdIdentificationThresholdQualificationthreshold≤2g/day0.05%0.1%or1mg/day0.15%or1mg/day≥2g/day0.03%0.05%0.05%InorganicImpuritiesNormallydetectedandquantifiedusingpharmacopoeialorotherappropriateproceduresSolventsRefertoICHQ3CICHGuidanceonImpuritiesinDrugProductICHQ3B(R)ImpuritiesinDrugProductClassificationofImpuritiesintheDrugProductDrugSubstanceRelated(ProcessImpurity,degradationProduct)ExcipientRelatedImpuritiesResidualSolventsImpuritiesderivedfrompackaging/contentclosurecomponentsICHGuidanceonImpuritiesinDrugProductICHQ3B(R)ReportingandcontrolofImpuritiesinDrugProductReportingThreshold:MaximumDailyDoseThreshold≤1g0.1%>1g0.05%IdentificationThresholdMaximumDailyDoseThreshold<1mg1%or5ugTDI1-10mg0.5%or20ugTDI>10mg-2g0.2%or2mgTDI>2g0.1%QualificationThresholdMaximumDailyDoseThreshold10mg––1g0.2%IPAC-RSProposedExtractablesReportingThresholdsExtractableLevelinComponent(g/g)AssignmentCategory>100g/gStructureConfirmed20––100g/gConfident<20g/gTentativeStructureconfirmed:IdentificationcategoriesA,B(orC),andD(orE)arepositive.Confident:sufficientdatatoprecludeallbutthemostcloselyrelatedstructures.Tentative:dataisconsistentwithaclassofmoleculeonly有關(guān)物物質(zhì)對(duì)原料料藥進(jìn)進(jìn)行有有關(guān)物物質(zhì)檢檢查，，主要要應(yīng)考考慮反反應(yīng)過(guò)過(guò)程中中涉及及的中間體體、付付產(chǎn)物物、降降解物物等。采用HPLC和和TLC進(jìn)進(jìn)行本本品原原料藥藥中有有關(guān)物物質(zhì)的的檢查查。胍丁胺胺是我我所合合成的的類新藥藥，具具有增增強(qiáng)阿阿片類類藥物物鎮(zhèn)痛痛作用用、抑抑制阿阿片類類藥物物所致致耐受受和身身體依依賴等等藥效效。為為了對(duì)對(duì)該藥藥物進(jìn)進(jìn)行有有效地地質(zhì)量量控制制，研研究建建立符符合新新藥報(bào)報(bào)批要要求的的雜質(zhì)質(zhì)檢查查和含含量測(cè)測(cè)定方方法存存在以以下技技術(shù)難難題：：胍丁胺胺的紫紫外吸吸收在在200nm以下，，無(wú)法法采用用常規(guī)規(guī)的高高效液液相色色譜-紫外檢檢測(cè)的的方法法對(duì)該該藥進(jìn)進(jìn)行有有效地地質(zhì)量量控制制胍丁胺胺及其其共存存雜質(zhì)質(zhì)結(jié)構(gòu)構(gòu)相似似，研研究建建立兩種不同的的雜質(zhì)質(zhì)分離離及檢檢查方方法具具有相相當(dāng)?shù)牡碾y度度胍丁胺胺及其其共存存雜質(zhì)質(zhì)胍丁胺胺丁二胍胍丁二胺胺甲基異異硫脲脲OPA柱前衍衍生化化高效效液相相色譜譜法-紫外檢檢測(cè)衍生化化的反反應(yīng)原原理OPA柱前衍衍生色色譜分分離圖圖1.丁二胺胺衍生生物；；2.硫酸胍胍丁胺胺衍生生物衍生物物的穩(wěn)穩(wěn)定性性考察察OPA衍生生化方方法的的不足足之處處通過(guò)研研究表表明衍衍生物物的穩(wěn)穩(wěn)定性性不好好，這這一特特點(diǎn)要要求操操作必必須盡盡量平平行以以獲得得好的的重現(xiàn)現(xiàn)性。。胍丁胺胺及其其共存存物中中僅胍胍丁胺胺、丁丁二胺胺可以以與OPA衍生生試劑劑發(fā)生生衍生生化反反應(yīng)，，丁二二胍和和甲基基異硫硫脲均均未能能檢出出，這這是由由于其其結(jié)構(gòu)構(gòu)中沒(méi)沒(méi)有可可以發(fā)發(fā)生衍衍生化化反應(yīng)應(yīng)的基基團(tuán)。。該方法法對(duì)原原料丁丁二胺胺的相相對(duì)檢檢出限限為1%，，尚不不能滿滿足一一類新新藥質(zhì)質(zhì)量標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)的的要求求。衍生化化的步步驟較較為煩煩瑣。。離子對(duì)對(duì)高效效液相色譜譜法–示差折折光檢檢測(cè)硫酸胍胍丁胺胺及其其共存存物（（丁二二胍、、丁二二胺、、甲基基異硫硫脲））在酸酸性條條件下下均顯顯示正正電荷荷，若若在流流動(dòng)相相中添添加離離子對(duì)對(duì)試劑劑樟腦腦磺酸酸鈉，，與上上述化化合物物通過(guò)過(guò)靜電電作用用生成成離子子對(duì)，，采用用通用用型檢檢測(cè)器器———示差差折光光檢測(cè)測(cè)器進(jìn)進(jìn)行檢檢測(cè)，，可以以對(duì)胍胍丁胺胺及其其共存存物均均產(chǎn)生生響應(yīng)應(yīng)，從從而克克服衍衍生化化方法法存在在的缺缺陷。。色譜條條件的的選擇擇對(duì)離子子對(duì)試試劑濃濃度、、溫度度、pH、甲甲醇比比例、、三乙乙胺濃濃度、、等因因素進(jìn)進(jìn)行逐逐步優(yōu)優(yōu)化，，研究究表明明：離子對(duì)對(duì)試劑劑的濃濃度研究表表明不不含離離子對(duì)對(duì)試劑劑的流流動(dòng)相相對(duì)硫硫酸胍胍丁胺胺及其其共存存雜質(zhì)質(zhì)的保保留很很弱，，出峰峰很早早，無(wú)無(wú)法實(shí)實(shí)現(xiàn)四四種物物質(zhì)良良好的的色譜譜分離離。離離子對(duì)對(duì)試劑劑濃度度較低低時(shí)，，色譜譜峰前前伸；；濃度度過(guò)高高，色色譜峰峰拖尾尾。另另外，，離子子對(duì)試試劑的的適宜宜濃度度與硫硫酸胍胍丁胺胺的上上樣量量有關(guān)關(guān)，為為保持持色譜譜峰的的對(duì)稱稱性，，增大大硫酸酸胍丁丁胺的的上樣樣量，，應(yīng)適適當(dāng)提提高離離子對(duì)對(duì)試劑劑的濃濃度。。色譜條件的的選擇溫度柱溫和示差差檢測(cè)器溫溫度升高，，柱壓降低低，tR減小，色譜譜峰面積略略有增大，，其對(duì)稱性性明顯提高高。pH根據(jù)離子對(duì)對(duì)生成的原原理，流動(dòng)動(dòng)相必須在在酸性條件件下才能與與胍丁胺及及其共存物物生成離子子對(duì)。在較較高的pH條件下，，tR較小，色譜譜峰擁擠，，分離效果果差，考慮慮到色譜柱柱自身的酸酸度適用范范圍，我們們選擇pH為3.0。甲醇比例和和三乙胺濃濃度通過(guò)改變有有機(jī)相甲醇醇的比例調(diào)調(diào)節(jié)tR，同時(shí)通過(guò)過(guò)改變?nèi)乙野返谋壤粩喔纳粕品逍?。色譜條件的的選擇胍丁胺及其其共存物的的色譜分離離圖1甲基基異硫脲脲；2丁丁二胺胺；3胍胍丁胺胺；4丁丁二胍胍色譜分離離機(jī)理tR=4.010min

tR=5.462mintR=6.265mintR=8.002min方法學(xué)考考察線性方程Y=-59.39+2374X,r=0.9999精密度RSD（n=5）0.50mg/ml,2.49%1.0mg/ml,0.379%5.0mg/ml,0.867%準(zhǔn)確度回收率（n=5）0.50mg/ml,100.3%1.0mg/ml,101.8%5.0mg/ml,95.20%檢出限0.062g重現(xiàn)性高效液相相色譜ThermoSeparationProductSpectrasystemP2000示差折光光檢測(cè)器器：Waters410DifferentialRefractomer其它條件件同限量圖及及樣品檢檢查圖丁二胺0.5%,丁二胍胍0.5%樣品檢查查圖薄層色譜譜法展開(kāi)劑的的選擇對(duì)展開(kāi)劑劑的種類類和配比比進(jìn)行優(yōu)優(yōu)化選擇擇，通過(guò)過(guò)實(shí)驗(yàn)確確定最終終的展開(kāi)開(kāi)劑條件件為：甲甲醇:正正己烷:冰醋酸酸:氨水水=10:1.0:0.2:1.0。在此條條件下，，硫酸胍胍丁胺及及其共存存雜質(zhì)獲獲得良好好分離，，且具有有較高的的顯色靈靈敏度。。薄層板的的選擇實(shí)驗(yàn)選擇擇國(guó)產(chǎn)青青島海洋洋高效硅硅膠板、、MerckDC-硅膠G60板（5721）、MerckHPTLC-硅膠G60板（5641），從分分離度、、靈敏度度等方面面進(jìn)行對(duì)比考察察，研究表表明MerckDC-硅膠G60板的檢出出靈敏度度高于國(guó)國(guó)產(chǎn)硅膠膠板一倍倍以上，，本底干干擾少。薄層色譜譜法顯色方法法的選擇擇實(shí)驗(yàn)對(duì)比比研究了了1-萘酚酚+NaOH+NaCl+雙雙乙酰、、碘蒸汽熏熏、碘化化鉍鉀等等三種顯顯色方法法，研究究表明碘碘熏顯色色具有更更高的靈靈敏度，，干燥的的環(huán)境以以及烘過(guò)過(guò)的薄層層板對(duì)顯顯色有利利。薄層色譜譜法薄層色譜譜分離圖圖MERCK硅膠板青島海洋洋硅膠板板兩種薄層層板靈敏敏度比較較靈敏度Merck硅膠板青島海洋硅膠板HPLC檢出限(g)檢出限量（%）檢出限(g)檢出限量（%）檢出限(g)檢出限量（%）胍丁胺0.25—0.50—0.062—丁二胺0.0750.40%0.150.50%0.0320.50%甲基異硫脲0.400.40%1.81.0%0.240.50%丁二胍0.0750.24%0.150.50%0.100.50%四批樣品品的純度度檢查圖圖薄層板的的左側(cè)為為0.5%的限量圖圖樣品純度度檢查影響因素素樣品檢檢查圖有關(guān)物質(zhì)質(zhì)發(fā)現(xiàn)本品品溶液在在光線照照射下，，會(huì)呈現(xiàn)現(xiàn)三個(gè)色色譜峰，，為研究究確證其其是否為為光互變變異構(gòu)體體，試驗(yàn)驗(yàn)采用HPLC、LC-MS、UV等技術(shù)術(shù)手段進(jìn)進(jìn)行研究究。手性異構(gòu)構(gòu)體（手性柱柱分離、、高效毛毛細(xì)管電電泳）光互變異異構(gòu)體光照條件件下，本本品溶液液的HPLC圖圖（不同同時(shí)間連連續(xù)進(jìn)樣樣）固體光照照或加熱熱10天天光互變異異構(gòu)體自然光避光精制品的的研制精制品（（或標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品、對(duì)對(duì)照品））如何說(shuō)明明精制品品的純度度、含量量HPLC、TLC、DSC、、TA含量測(cè)定定（容量量分析、、重量分分析等））化學(xué)藥一一般樣品品純度要要求大于于99.0%精制品純純度大于于99.5%穩(wěn)定