甾體激素類藥物含量測定

情境十：甾體激素類藥物的分析任務(wù)四：甾體激素類藥物含量測定知識點：甾體激素類藥物的分析課程：藥品檢驗技術(shù)一、甾體激素類藥物含量測定及方法（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多內(nèi)標法）特點用樣量少，靈敏度高，分離效果好，測定速度快例：黃體酮的含量測定：ODS柱；甲醇-水（65：35）；254nm內(nèi)標：己烯雌酚（甾體激素類藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其他甾體雜質(zhì)，對利用結(jié)構(gòu)特征設(shè)計的比色法有干擾）Compan對照液供試液己烯雌酚黃體酮（二）UV法△４-3-酮240nm(±)腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯環(huán)280nm（±）雌激素醋酸地塞米松（三）比色法弱、非分光光度活性藥物強分光光度活性藥物化學(xué)反應(yīng)

腎上腺皮質(zhì)激素類C17-α－醇酮基強還原性1.原理[還原]（四）氮唑比色法

腎上腺皮質(zhì)激素類OH-[還原]2,3,5-TriphenyltatrazoliumchlorideTTC(RedtatrazolineRT)甲潛(Formazan)深紅色λmax480~490nmBluetetrazolineBTBT-單甲潛BT-雙甲潛藍色

λmax525nm制備對照液制備供試液加入四氮唑鹽有色產(chǎn)物484nmAX×

CXAR標示量（%）=AXAR×V×標示量×100%2、方法：以醋酸地塞米松為例氫化可的松軟膏的含量測定精密量取對照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置干燥具塞試管中，各精密加無水乙醇9ml與氯化三苯四氮唑試液1ml，搖勻，各再精密加氫氧化四甲基銨試液1ml，搖勻，在25℃的暗處放置40min～45min，在485nm的波長處分別測定吸收度，計算，即得影響因素基團溶劑與水分堿空氣中氧與光線溫度與時間（1）基團對反應(yīng)速度的影響C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯C16無論何種取代基ν↓（2）溶劑、水分的影響含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→幾無反應(yīng)—無水乙醇(無醛)（3）O2與光線的影響（4）堿的種類及加入順序反應(yīng)應(yīng)在強堿性（pH13.75）條件下進行以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳（5）溫度與時間t℃↑→ν↑→甲瓚分解↑→%↓(二)異煙肼法INH△4-3-酮影響因素（1）反應(yīng)速度C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反應(yīng)專屬性強（2）溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽→甲醇、乙醇無水（3）水分、O2與光線的影響含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時→O2與光線無影響(4)酸、異煙肼的量鹽酸:異煙肼=2:1酸度↑→異煙肼鹽↓酸度↓→A↓樣品:異煙肼=1:8→ν↑

(5)溫度t℃↑→ν↑Kober反應(yīng)比色法第二步反應(yīng)515465450500