抗酒石酸酸性磷酸酶檢測試劑盒(PNP比色法)

北京雷根生物技術有限公司簡介：

抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)檢測試劑盒(PNP比色法)酸酸性磷酸酶(acidphosphatase，ACP)分布極廣泛，遍布各種組織，主要存在于細胞(Tartrate-resistntacidTRAP絕大多數來源于破骨細胞，因此可以通過測量血液中的TRAPTRAP一種糖基化的含金屬蛋白酶，在破骨細胞(osteoclast)和破軟骨細胞(chondroclast)中高表達，在活化的巨噬細胞和神經元中也有表達。Leagene抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)檢測試劑盒(PNP比色法)(TartrateResistntAcidPhosphataseColorimetricAssayKit)檢測原理是利用Para-nitrophenyl下生成。在堿性條件下呈黃色，產物黃色越深，說明酸性磷酸酶活性越高，反之則酶活性越低，通過分光光度計測定吸光度，據此通過比色分析就可以計算出酸性磷酸酶活性水平。在適量的酒石酸存在的情況下進行酸性磷酸酶的活性檢測，檢測得到的酸性磷酸酶的活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。該試劑盒可用于檢測細胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。編號TE0045編號TE0045Storage名稱試劑(A):ACPAssaybuffer試劑(B):pNPP試劑(C):TartrateSolution60T50ml24℃-20℃避光4℃試劑(D):p-nitrophenol(10mM)0.2ml-20℃避光試劑(E):StoppingSolution80mlRT使用說明書1份自備材料：1、比色杯2、水浴鍋或恒溫箱3、分光光度計北京雷根生物技術有限公司操作步驟(僅供參考)：1、配制檢測工作液：①配制顯色工作液：取出1支pNPP，恢復至室溫后溶解于ACPAssaybuffer，混勻，冰上預冷備用。新配制的顯色工作液應及時用完。②配制標準品工作液：取出 p-nitrophenol(10mM)恢復至室溫后，取溶解于μlACPAssaybuffer，使?jié)舛冗_到一定程度。2、準備樣品：①尿液通常也可以直接用于測定，凍存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的檢測。②PBS或生理鹽水進行適當勻漿，一般細胞數量在106以上，組織應在100mg酸酸性磷酸酶的檢測。③植物樣品：取適量的植物組織加入少量生理鹽水或PBS布或濾紙過濾，離心，留取上清液并測量體積，凍存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的檢測。④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的抗酒石酸酸性磷酸酶，可以使用ACPAssaybuffePBS3、加樣：按照下表設置空白對照、標準品、待測樣品，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。標準品的用量分別為0.03、0.06、0.12、0.18、0.24、0.3ml，待測樣品直接加0.3ml。如果樣品中的酸性磷酸酯酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測最好能設置平行管。空白對照管標準品管待測樣品管ACPAssaybuffer0.3ml(0.3-x)ml(0.3-y)ml顯色工作液0.3ml0.3ml0.3mlTartrateSolution30μl30μl30μl待測樣品——yml標準品工作液—xml—4、輕輕混勻，孵育。5、每孔加入StoppingSolution終止反應。6畢。計算：酸性磷酸酶活性單位的定義：pH4.837℃條件下，每分鐘水解 para-nitrophenyl北京雷根生物技術有限公司phosphate顯色底物產生1微摩爾p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定義為一個酶活力單位。根據酶活性定義，計算出樣品中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性。注意事項：1、待測樣品中不能含有磷酸酶抑制劑，同時需避免反復凍融。2、建議每次測定時都做標準曲線，以使標準更準確，另外標準品需避免反復凍融。3、如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應考慮根據比色杯的最小檢測體積，盡量采用小體積的比色杯。4、所測樣本的值高于標準曲線的上限，應用ACPAssaybuffer稀釋樣品后重新測定。5、一支顯色工作液配制后需當日使用完畢，因此請注意適當多準備一些樣品一起檢測。6、p-nitrophenol溶液對人體有害，反應終止液有腐蝕性，請小心操作。7、如果希望進行酶活性的絕對定量，進行酶反應時應精確計時，此時推薦采用孵育30min或更長時間，以減小操作過程中的時間誤差。8、待測樣品中抗酒石酸酸性磷酸酶活性較低時，可適當延長孵育時間至30min。9、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。有效期：12個月有效。編號CC0007CS0001DC0032DF0135編號CC0007CS0001DC0032DF0135PS0013TE0002名稱磷酸緩