任務(wù)4外標(biāo)法定量

任務(wù)4外標(biāo)法定量

液相色譜分析法模塊之完成葉酸片中葉酸含量的測(cè)定能進(jìn)行定性定量分析能力目標(biāo)常用的方法是化學(xué)分析法、液相色譜法（內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法）葉酸是人體必須的一種物質(zhì)，它能促進(jìn)胎兒腦神經(jīng)的發(fā)育，也能防止人體貧血，你能設(shè)計(jì)一可行的分析方案，檢測(cè)某藥廠(chǎng)的葉酸片中的葉酸的含量嗎？課程引入本項(xiàng)目采用外標(biāo)法測(cè)定葉酸片中葉酸的含量葉酸片是藥物制劑，除了主成分外，還含有大量的淀粉、糊精等輔料，因此樣品處理非常重要。樣品的預(yù)處理技術(shù)樣品預(yù)處理的目的是消除基質(zhì)干擾，保護(hù)儀器，提高方法的準(zhǔn)確度、精密度、選擇性和靈敏度。預(yù)處理的過(guò)程一般包括：提取經(jīng)典的方法有均質(zhì)提取法、振蕩提取法、索氏提取法等。凈化比較傳統(tǒng)的凈化手段有液液萃取和固相萃取等，目前比較先進(jìn)、實(shí)用的處理技術(shù)凝膠滲透色譜、基質(zhì)固相分散技術(shù)、分子印記技術(shù)等也得到了比較廣泛的應(yīng)用。濃縮常見(jiàn)減壓蒸餾和氣流吹蒸兩種方式樣品的預(yù)處理技術(shù)(續(xù)）衍生化所謂衍生化，就是將用通常檢測(cè)方法不能直接檢測(cè)或檢測(cè)靈敏度比較低的物質(zhì)與某種試劑（即衍生化試劑）反應(yīng)，使之生成易于檢測(cè)的化合物。按衍生化的方法可以分為柱前衍生化和柱后衍生化。按生成衍生物的類(lèi)型又可分為紫外-可見(jiàn)光衍生化、熒光衍生化、拉曼衍生化和電化學(xué)衍化。衍生化技術(shù)不僅使高效液相色譜分析體系復(fù)雜化，而且需要消耗時(shí)間，增加分析成本，有的衍生化反應(yīng)還需要控制嚴(yán)格的反應(yīng)條件。因此，只有在找不到方便而靈敏的檢測(cè)方法，或?yàn)榱颂岣叻蛛x和檢測(cè)的選擇性時(shí)才考慮用衍生化技術(shù)。

測(cè)定過(guò)程演示1配制流動(dòng)相：磷酸二氫鈉緩沖液：取磷酸二氫鈉6.80g，加水880mL，振搖使溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH＝6.30±0.05把磷酸二氫鈉緩沖液和甲醇以80∶20的比例混合，用0.45μm有機(jī)相濾膜減壓過(guò)濾，脫氣。色譜分離條件：色譜柱：C18色譜柱（5μm,4.6mmi.d.×250mm）波長(zhǎng)：254nm流速：1.0mL·min-1。。測(cè)定過(guò)程演示2標(biāo)樣及試樣配制葉酸標(biāo)準(zhǔn)品：精密稱(chēng)取0.01g葉酸對(duì)照品，置50mL容量瓶中，加30ml0.5%的氨水溶解，再用純水定容至刻度。葉酸試樣（5mg/片）：取葉酸片40片，精確稱(chēng)量，研磨至均勻，精確稱(chēng)取二片重量的葉酸粉未于50ml的容量瓶中，加入30ml0.5%氨水，在熱水浴中振搖20分鐘，冷卻后用純水定容至刻度，搖勻，過(guò)濾。打開(kāi)檢測(cè)器、高壓泵的電源開(kāi)關(guān)，按上述分離條件設(shè)置參數(shù)；打開(kāi)排放閥，“purge”1-2分鐘，關(guān)閉“purge”，使儀器在設(shè)定的條件下平衡。打開(kāi)工作站，設(shè)置分析方法。等基線(xiàn)平衡后，用微量注射器量取定量環(huán)體積的3-5倍的葉酸標(biāo)樣，在上述分析條件下進(jìn)樣。在相同的條件下，對(duì)葉酸樣品進(jìn)行測(cè)定，記錄標(biāo)樣與樣品的色譜峰面積和保留時(shí)間。記錄下樣品名對(duì)應(yīng)的文件名，同時(shí)打印出經(jīng)優(yōu)化的色譜圖和分析結(jié)果測(cè)定過(guò)程演示3葉酸的定性問(wèn)題：一般可采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行保留時(shí)間的對(duì)照來(lái)定性。在標(biāo)樣和試樣溶液的配制過(guò)程中，稱(chēng)量需采用減量法。本項(xiàng)目中葉酸的定量采用外標(biāo)法。色譜柱的個(gè)體差異很大，即使是同一廠(chǎng)家的同種型號(hào)的色譜柱，性能也會(huì)有差異。因此，色譜條件（主要是指流動(dòng)相的配比）應(yīng)根據(jù)所用色譜柱的實(shí)際情況作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。本項(xiàng)目的測(cè)定需使用電爐，操作時(shí)要注意用電安全；同時(shí)配制氨水溶液應(yīng)在通風(fēng)柜中進(jìn)行。學(xué)生實(shí)訓(xùn)要求每位學(xué)生獨(dú)立完成，獨(dú)立處理數(shù)據(jù)，合理安排時(shí)間。外標(biāo)法定量外標(biāo)法的特點(diǎn)：操作、計(jì)算簡(jiǎn)單，是一種常用的定量方法。它無(wú)需各組分都被檢出、洗脫。但需要標(biāo)樣，標(biāo)樣及未知樣品的測(cè)定條件要一致，進(jìn)樣體積要準(zhǔn)確。外標(biāo)法實(shí)例用液相色譜法測(cè)定葉酸片（5mg/片）中葉酸含量。稱(chēng)取對(duì)照品5mg，加30ml0.5%氨水溶解，用水定容至50mL，20uL進(jìn)樣得葉酸峰面積為92800；另取已研成粉末的葉酸片劑91.5mg，同法測(cè)定得葉酸峰面積為91750，求葉酸片劑的百分含量。（已知平均片重為92.2mg）解：分析中的污染一般檢測(cè)的環(huán)境、容器、試劑都是影響測(cè)定結(jié)果的因素。容器實(shí)驗(yàn)室常用的器皿有玻璃類(lèi)、瓷類(lèi)、石英類(lèi)、塑料類(lèi)等，在進(jìn)行分析時(shí)，應(yīng)按照待測(cè)樣品的要求來(lái)選則器皿，不管使用哪種器皿，容器的洗條清潔都是很重要的，也是取得好的檢測(cè)結(jié)果的基本保證。試劑在液相色譜分析中，所選用的試劑必須是色譜純、優(yōu)級(jí)純或分析純，如果用含量有雜質(zhì)的試劑，則會(huì)出現(xiàn)雜峰而影響測(cè)定結(jié)果。環(huán)境污染儀器室的有害氣體、氣溶液、灰塵等等都能造成污染，影響檢測(cè)結(jié)果，這種污染很難校正。因此，儀器室與其他實(shí)驗(yàn)室應(yīng)隔離，保持清潔，儀器室內(nèi)應(yīng)安裝空調(diào)，注意防潮、防腐、防震、空氣相對(duì)濕度應(yīng)小于70%為宜儀器維護(hù)儀器的性能影響到分析的結(jié)果，因此，我們要及時(shí)維護(hù)儀器。貯液器流動(dòng)相在使用前都應(yīng)用0.45μm的濾膜過(guò)濾，以保持貯液器的清潔；要定期清洗貯液器，以防滋長(zhǎng)微生物。高壓輸液泵所用流動(dòng)相或溶劑均過(guò)濾和脫氣；開(kāi)泵時(shí)應(yīng)放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液；不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中進(jìn)樣器進(jìn)樣前應(yīng)使樣品混合均勻，無(wú)可溶解的污染物，以免堵塞六通閥；液相進(jìn)樣針應(yīng)為平頭針；每次工作結(jié)束后應(yīng)沖洗整個(gè)系統(tǒng)；以防止緩沖鹽和其它殘留物留在進(jìn)樣系統(tǒng)中，。色譜柱①在進(jìn)樣閥后加流路過(guò)濾器（0.5μm燒結(jié)不銹鋼片），擋住來(lái)源于樣品和進(jìn)樣閥墊圈的微粒。②在流路過(guò)濾器和分析柱之間加上“保護(hù)柱”，收集阻塞柱進(jìn)口的來(lái)自樣品的降低柱效能的化學(xué)“垃圾”。③色譜柱應(yīng)在要求的pH值范圍和柱溫范圍下使用，應(yīng)使用不損壞柱的流動(dòng)相。④進(jìn)樣前應(yīng)將樣品進(jìn)行必要的凈化，以免進(jìn)樣后對(duì)色譜柱造成損傷。⑤每次工作結(jié)束后，如果流動(dòng)相是水和有