FLASH快速制備色譜分離提純方法

FLASH快速制備色譜分離提純方法分離提純的方法蒸餾重結(jié)晶萃取柱層析（爬板傳統(tǒng)的玻璃柱過柱儀器過柱）在這些常用的分離方法中，柱層析是最常用的，而今天我們所要講的就是儀器過柱又稱flash快速制備色譜--flash1978年等化學(xué)家提出了快速制備色譜這一概念，與傳統(tǒng)的柱色譜相比該技術(shù)在“一閃間”就可以完成分離純化，這就是flash一說的由來?？焖僦苽渖V的原理此圖為flash儀器的一個簡單構(gòu)造圖flash與傳統(tǒng)柱層析的比較省時省力省溶劑紫外檢測易判斷目標(biāo)產(chǎn)物減少點板次數(shù)flash的應(yīng)用與操作flash正相應(yīng)用flash反相應(yīng)用flash儀器操作flash正相應(yīng)用一TLC爬板選擇極性和溶解性都較合適的展開劑，并使目標(biāo)產(chǎn)物的Rf值保證在左右為最好左圖為某個組份點在某個Rf值出需要多少個cv（柱體積）的溶劑才能洗脫下來一般情況下我們在實際的flash應(yīng)用中應(yīng)用的柱體積都會多于這個數(shù)據(jù)，以保證產(chǎn)物的純度flash正相應(yīng)用二溶劑的選擇為了確保產(chǎn)物既要在TLC板上Rf處于也要保證各組份分離度，因此我們在溶劑的選擇上也需要嘗試不同的配搭。右表為我們在正相柱層析中常用溶劑的極性表展開劑的極性可以根據(jù)極性強度和溶劑所占體積百分比計算得出eg:正己烷：乙酸乙酯（1：1）正己烷：二氯甲烷（3：7）flash正相應(yīng)用三flash柱的選擇和上樣量的關(guān)系公司現(xiàn)在常用的flash正相柱為奧秘科技公司生產(chǎn)的柱子，其裝柱的填料為普通硅膠目數(shù)為200~300目，規(guī)格有4g、12g、20g、40g、80g、120g等.根據(jù)樣品的質(zhì)量可選擇相對應(yīng)的，一般柱子最大載樣量為該柱子硅膠量的1/20,即20g的柱子一般最多為1克的粗品，在實際的應(yīng)用中還應(yīng)根據(jù)各組份的分離程度和溶解性等來判斷具體的上樣量.flash正相應(yīng)用四上樣方法的選擇濕法和干法濕法上樣：一般樣品的溶解性較好時可以采用濕法上樣，濕法上樣具有方便損失少的特點。但必須注意濕法上樣的溶劑必須是淋洗劑中極性較小的溶劑或摻入百分比較少的極性溶劑，否則組份將很容易被洗脫下來。且溶劑量不宜超過柱體積的10%干法上樣：絕大多數(shù)的樣品我們都采用干法上樣，干法上樣所要注意的是，硅膠量和規(guī)格的選擇。硅膠量控制在是樣品的1~2倍，硅膠規(guī)格選擇上盡量和柱子的目數(shù)一樣的200~300的硅膠，切記當(dāng)樣品比較難以拌勻拌干時請選擇100~200目硅膠，主要是因為當(dāng)你拌樣硅膠越多時整個柱子的壓力就會上去，以免出現(xiàn)儀器過壓現(xiàn)象！flash反相應(yīng)用一反相的原理反相填料是在硅膠基質(zhì)上鍵合的諸如C4,C8,C18脂肪鏈的非極性填料。非極性或疏水性化合物被強烈保留，而極性樣品被弱保留，更快的通過柱床?！胺聪唷庇脕砻枋銎渖V過程與正相色譜正好相反。flash反相應(yīng)用二反相色譜的流動相常用的流動相為水和乙腈或水和甲醇，偶爾我們也會采用水和四氫呋喃。在水相中我們一般都會滴加些弱酸弱堿，把整個體系調(diào)至偏酸偏堿，以保證組份能起峰。常用的弱酸弱堿是甲酸、三氟乙酸，氨水，碳酸氫銨等，所加的百分比一般與液質(zhì)體系相同。

flash反相應(yīng)用三反相柱的選擇公司現(xiàn)在用的反相柱大多是自己裝填的（進口填料加國產(chǎn)這柱套），現(xiàn)成的成柱也有，為國產(chǎn)柱，效果上比自填柱稍差，但其有價格優(yōu)勢！這些都可以在在公司采購平臺上可以詢價訂購。

一般我們經(jīng)常用的反相柱規(guī)格為40g,其上樣量一般在200mg左右。flash反相應(yīng)用四反相樣品的上樣反相上樣我們一般都采用液體上樣，一般用水，甲醇，四氫呋喃，乙腈，DMF,DMSO等溶劑來溶解樣品。選取能使樣品溶解狀態(tài)最好的溶劑溶解！最好是100mg樣品能溶解在1ml溶劑中為佳！樣品中的重金屬和催化劑以及一些與水不互溶的正相溶劑都要處理掉，才能上反相柱子。flash反相應(yīng)用五梯度編輯反相的梯度設(shè)置與正相不同，我們無法通過點板也確定，只能靠液質(zhì)上的保留時間來設(shè)置來設(shè)置梯度。液質(zhì)一般采用的一個線性梯度5%至95%（流動相是水和乙腈），根據(jù)目標(biāo)峰的保留時間推算出該峰起來時的乙腈含量，由于液質(zhì)使用的柱子粒徑一般為，而反相柱所用的填料粒徑是40~60um，粒徑越小保留性越好，所以在反相柱上它的出峰濃度會比液質(zhì)上小。flash儀器操作公司現(xiàn)有2種型號的flash儀器ISCOCOMPANIONBIOTAGESPI2種儀器的原理是一樣的，各有其優(yōu)缺點.主要的區(qū)別在與軟件操作上的不一樣！ISCOCOMPANION的操作儀器開機之后會進入這樣一個工作界面ISCOCOMPANION的操作編輯具體詳細(xì)的方法應(yīng)點擊editmethod進入編輯菜單，界面如下ISCOCOMPANION的操作此界面就是具體方法編輯菜單ISCOCOMPANION的操作旋鈕水平說明上管路是通的旋鈕垂直說明上管路是關(guān)閉的ISCOCOMPANION的操作查看結(jié)果，提取方法（點open）；保存方法；導(dǎo)出結(jié)果在File選項里選擇ISCOCOMPANION的操作點擊open后可根據(jù)樣品的名字以及日期，打開你所需的結(jié)果。ISCOCOMPANION的操作這是一個樣品過完之后的結(jié)果圖，不同顏色代表不同峰下試管組