2014動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

專題2細(xì)胞工程2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)2.2動(dòng)物細(xì)胞工程教學(xué)目標(biāo):簡述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件及應(yīng)用。簡述通過動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的過程和應(yīng)用前景。1重點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程及條件。用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的過程。難點(diǎn)用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的過程。重點(diǎn)難點(diǎn)2植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？

那么動(dòng)物細(xì)胞常用的技術(shù)手段呢？回憶暢想植物組織培養(yǎng),

植物體細(xì)胞雜交問題探討

3主要技術(shù)植物細(xì)胞工程技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合胚胎移植單克隆抗體技術(shù)核移植基礎(chǔ)4

資料：燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對(duì)于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請(qǐng)同學(xué)們想一想如何來治療該病人？取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),獲得足量的細(xì)胞后再移植。5一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程結(jié)合圖2-16，閱讀P44最后一段至P46第一段結(jié)束。1、找出關(guān)鍵詞并理解它們的含義。2、敘述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程。細(xì)胞貼壁細(xì)胞的接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞懸液3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？不能。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果：使細(xì)胞數(shù)目增多。6通常取動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官因?yàn)槠浞只潭鹊?、增殖能力?qiáng)，更容易培養(yǎng)。說明細(xì)胞與細(xì)胞間的主要物質(zhì)是蛋白質(zhì)1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)的材料有要求嗎？3.用胰蛋白酶處理，組織就會(huì)分散成單個(gè)細(xì)胞，說明了什么？2.為什么在培養(yǎng)前要將組織分散成單個(gè)細(xì)胞？成塊的組織不利于培養(yǎng)，分散了做成細(xì)胞懸浮液利于培養(yǎng)。4.胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白外，長時(shí)間的作用也會(huì)消化細(xì)胞膜蛋白，因此必須控制好胰蛋白酶的處理時(shí)間。5.人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？保存10代以內(nèi)的細(xì)胞。因?yàn)?0－50代部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細(xì)胞方向發(fā)展。7動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液（分解彈性纖維）原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎過程：細(xì)胞株細(xì)胞系動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變8（二）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念（P44）就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖。原理：細(xì)胞增殖想一想：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理是什么？9（三）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？1、無菌、無毒的環(huán)境對(duì)培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理；在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素;定期更換培養(yǎng)液；2、營養(yǎng)葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、促生長因子、微量元素等動(dòng)物血清、血漿3、溫度和pH溫度36.5±0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境O2和CO2（95%空氣和5%CO2）O2是細(xì)胞代謝所必需的。CO2維持培養(yǎng)液的pH。10（四）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用1、生產(chǎn)生物制品

病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等；3、用于檢測有毒物質(zhì)及毒性；2、動(dòng)物基因工程離不開動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)；4、培養(yǎng)正?；蚋鞣N病變的細(xì)胞，用于生理、病理、藥理等方面的研究。閱讀P46-4711獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物細(xì)胞的全能性細(xì)胞數(shù)目增多一般為植物體培養(yǎng)結(jié)果快速繁殖、培育脫毒作物等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清促生長因子蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較12二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物克隆就是無性繁殖，具體地說，是指一個(gè)共同的祖先，通過無性繁殖的方法產(chǎn)生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子、細(xì)胞或個(gè)體。a.分子水平上：b.細(xì)胞水平上：c.個(gè)體水平上：1.什么是克隆？一般指DNA克隆。指一個(gè)單一的細(xì)胞分裂所形成的細(xì)胞群體。指基因型完全相同的兩個(gè)或一個(gè)群體。132、克隆動(dòng)物能否用類似植物組織培養(yǎng)的方法獲得？為什么？目前不能。因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞的全能性隨著分化程度的提高逐漸受到限制。目前，用動(dòng)物體細(xì)胞克隆的動(dòng)物，實(shí)際上是通過核移植來實(shí)現(xiàn)的。

14動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)1.回憶克隆羊“多莉”的培育過程卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠融合后的卵細(xì)胞15（MⅡ卵母細(xì)胞）減數(shù)第二次分裂中期2.結(jié)合P48圖2-21，敘述克隆高產(chǎn)奶牛的培育過程。將供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞核移植胚胎移植供體細(xì)胞培養(yǎng)16供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（MⅡ中期：供質(zhì)）去核無核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基本相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵細(xì)胞作受體細(xì)胞的原因是:它是最大的細(xì)胞,易操作,它發(fā)育可直接表達(dá)性狀。物質(zhì)交換的效率？核移植過程171、對(duì)比多莉羊和課本高產(chǎn)奶牛的克隆過程，找出操作過程的不同點(diǎn)？2、討論分析上述哪一種措施更科學(xué)？并說明理由？MⅡ卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中含有的物質(zhì)更易支持胚胎的全程發(fā)育，用它作受體更容易成功。將供體細(xì)胞注入受體細(xì)胞，使克隆動(dòng)物更像供體動(dòng)物，操作也方便。思考與討論：（1）多莉克隆過程中受體細(xì)胞是去核卵細(xì)胞，高產(chǎn)奶牛克隆過程中受體細(xì)胞是去核卵母細(xì)胞。（2）多莉克隆過程是將供體細(xì)胞核注入受體細(xì)胞，而高產(chǎn)奶牛的克隆過程是將供體細(xì)胞注入受體細(xì)胞。18１、在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？為使核移植動(dòng)物的核遺傳物質(zhì)全部來自有利用價(jià)值的動(dòng)物提供的細(xì)胞。２、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？10代以內(nèi)的細(xì)胞一般保持正常二倍體的核型，未發(fā)生突變。討論：3、體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？克隆動(dòng)物絕大部分DNA來自供體細(xì)胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來自受體卵母細(xì)胞。不是19動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成為一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。（克隆動(dòng)物）動(dòng)物核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植20（三）體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景閱讀P49-