SE技術(shù)在畜禽產(chǎn)品殘留的應(yīng)用

報(bào)告人：?jiǎn)渭芐PE技術(shù)在畜禽產(chǎn)品殘留分析中的應(yīng)用1/18/20231

食品與農(nóng)產(chǎn)品：殘留分析要求

高選擇性—降低或消除基質(zhì)干擾高靈敏度—痕量物質(zhì)可靠的結(jié)果：定量準(zhǔn)確度和化合物確認(rèn)—重現(xiàn)性，穩(wěn)定性和動(dòng)態(tài)范圍—樣品基質(zhì)中低濃度目標(biāo)物質(zhì)的準(zhǔn)確定量—按照法規(guī)要求進(jìn)行確認(rèn)方法穩(wěn)定性—復(fù)雜樣品基質(zhì)，減少樣品凈化操作1/18/20232殘留分析:樣品前處理的重要性

是影響實(shí)驗(yàn)成敗的決定性步驟

—占樣品分析時(shí)間的比例最大(70-80%)–樣品預(yù)處理所用時(shí)間遠(yuǎn)多于色譜分離的時(shí)間

—占分析消耗總成本的比重最大

–消耗大量的溶劑及其它化學(xué)品

—對(duì)分析結(jié)果的重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性影響最大的環(huán)節(jié)—影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果好壞的最重要因素(回收率,%RSD）1/18/20233樣品前處理的通用方法

高速離心取上清液過濾、超濾選擇性沉淀衍生反應(yīng)液-液萃取

固相提取(SolidPhaseExtract,SPE)1/18/20234為什么要用SPE?

樣品濃縮–提高靈敏度

樣品凈化–提高靈敏度–延長(zhǎng)系統(tǒng)不間斷開機(jī)時(shí)間–延長(zhǎng)色譜柱壽命

比液－液萃取更快,節(jié)省溶劑可自動(dòng)化批量處理重現(xiàn)性好1/18/20235不斷革新的SPE技術(shù)

1977–率先推出業(yè)界第一個(gè)硅膠基質(zhì)固相提取技術(shù)的商品化產(chǎn)品：Sep-Pak

1996–推出第一個(gè)水－浸潤(rùn)性聚合物基質(zhì)SPE吸附劑(Oasis?HLB)–快速通用性反相SPE方法學(xué)1997–用于Oasis?HLB的先進(jìn)的新型方法學(xué)，可以獲得更干凈的本底(2D優(yōu)化方法學(xué))1999–推出混合機(jī)理吸附劑(Oasis?MCX和MAX)，從而可以對(duì)堿性和酸性化合物進(jìn)行高選擇性和高靈敏度的提取–Oasis?96孔提取板設(shè)計(jì)獲得R&D100大獎(jiǎng)1/18/20236不斷革新的SPE技術(shù)2002–Waters最新革新SPE技術(shù)首次使得洗脫體積低至25μL無需揮發(fā)與重現(xiàn)配制，洗脫后直接進(jìn)樣即可是小體積樣品的理想提取工具靈敏度可以提高25x

2004–推出用于保留強(qiáng)堿(如季銨鹽)和強(qiáng)酸(如磺酸鹽)的WCX和WAX吸附劑1/18/20237SPE小柱的種類

根據(jù)吸附劑的劃分

–正相

Silica/Alumina(A,B,N)/Florisil/NH2/CN–反相

C18/tC18/C8/tC2/Porapak/RDX/NH2/CN–離子交換

SCX、MCX、PCX、WCX、MAX1/18/20238傳統(tǒng)(C18)SPE吸附劑的問題對(duì)極性化合物—保留不足

–藥物（農(nóng)藥）及代謝產(chǎn)物難以同時(shí)提取對(duì)堿性化合物回收不足—強(qiáng)硅羥基相互作用

–堿性樣品回收率低小柱跑干—不吸附

–操作過程需仔細(xì)控制回收率低，重現(xiàn)性差是其主問題。1/18/20239理想的樣品處理方法除去干擾物在很寬的極性范圍內(nèi)，對(duì)酸性、堿性及中性化合物均有可重現(xiàn)的高回收率很容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，對(duì)大量樣品進(jìn)行高通量處理容易使用并且耐受性好快速并且最終的成本低1/18/202310PEP(Polymerenhancedpolymer)：：極性性提高了了的共聚聚物具有反相相SPE的最佳佳性質(zhì)pH：0-14，810m2/g親水性單單體：親親水”—使填料料具有水水可浸潤(rùn)潤(rùn)性質(zhì)—允許溶溶劑跑干干而不會(huì)會(huì)損失回回收率和和重現(xiàn)性性“親脂”—提供對(duì)對(duì)分析物物的反相相保留能能力1/4/202311C18與PEP小柱柱相比：—溶劑跑干對(duì)回回收率的影響響(普魯卡因胺、、醋氨酚酚、雷尼替替丁、心心得安、、多慮平)1/4/202312C18與PEP小柱柱相比：—溶劑跑干對(duì)回回收率的影響響1/4/202313PEP可取取代C18的優(yōu)勢(shì)–吸附容量量更大是C18的3到10倍，常用規(guī)規(guī)格1mL/30mg（C18：100mg）–操作更簡(jiǎn)簡(jiǎn)便小柱干涸不不影響回收收率–方法更通通用適合性質(zhì)各各異的各種種物質(zhì)的提提取1/4/202314PEP可取取代C18的優(yōu)勢(shì)–開發(fā)方法更更容易聚合物基質(zhì)質(zhì)，無硅醇醇基影響–對(duì)極性物物質(zhì)的提取取回收率更更高藥物(農(nóng)藥)及代謝產(chǎn)物物同時(shí)提高高1/4/202315樣品前處理理：適適于HPLC分析的的通用SPE方法—此通用方方法適于多多種樣品基基質(zhì)的絕大大多數(shù)被測(cè)測(cè)物?！?dāng)分析堿堿性化合物物時(shí)，不要要使用高有有機(jī)含量的的水溶液進(jìn)進(jìn)行清洗，，因?yàn)镻EP吸附劑劑中不含硅硅醇基?！紫仁褂糜猛ㄓ梅椒ǚㄌ崛?。若若需進(jìn)一步步降低干擾擾，可使用用優(yōu)化方法法1/4/202316樣品前處理理：適適于HPLC分析的的通用SPE方法1/4/202317pH與化化合合物物反反相相保保留留1/4/202318血清清中中的的四四環(huán)環(huán)素素1/4/202319血清清中中四四環(huán)環(huán)素素的的提提取取結(jié)結(jié)果果比比較較SPE化化合合物物%回回收收率率%RSDPEP二二甲甲胺胺四四環(huán)環(huán)素素94.81.4四環(huán)環(huán)素素1040.55C18二甲甲胺胺四四環(huán)環(huán)素素52.82.82四環(huán)環(huán)素素68.42.446次次實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)結(jié)結(jié)果果：：加加標(biāo)標(biāo)水水平平：：2.5μg/mL1/4/202320四環(huán)環(huán)素素類類殘殘留留分分析析（日本本政政府府食食品品安安全全公公告告））2003年年８８月月宣宣布布有有關(guān)關(guān)來來自自中中國(guó)國(guó)的的蝦蝦中中的的四四環(huán)環(huán)素素類類藥藥物物監(jiān)監(jiān)測(cè)測(cè)（（TetracyclineintheshrimpfromChina））–如如果果為為養(yǎng)養(yǎng)殖殖蝦蝦，，政政府府要要求求必必須須監(jiān)監(jiān)測(cè)測(cè)四四環(huán)環(huán)素素類類藥藥物物殘殘留留(mandatory)–如如果果為為非非養(yǎng)養(yǎng)殖殖蝦蝦，，政政府府推推薦薦監(jiān)監(jiān)測(cè)測(cè)殘殘留留(voluntary)–需需HPLC、熒熒光光檢檢測(cè)測(cè)器器法規(guī)規(guī)更更新新：：蔬蔬菜菜和和蜂蜂蜜蜜加加工工的的食食品品必必須須監(jiān)監(jiān)測(cè)測(cè)殘殘留留–法法規(guī)規(guī)以以前前不不要要求求檢檢測(cè)測(cè)農(nóng)農(nóng)藥藥殘殘留留，，但但因因在在加加工工食食品品和和蜂蜂蜜蜜中中發(fā)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)了了許許多多農(nóng)農(nóng)藥藥，，故故現(xiàn)現(xiàn)在在要要求求檢檢測(cè)測(cè)1/4/202321食用用肉肉中中的的四四環(huán)環(huán)素素1/4/202322牛奶中的四環(huán)環(huán)素1/4/202323四環(huán)素—食品品分析的結(jié)果果化合物牛牛肉豬豬肉牛牛奶奶牛牛奶0.5μg/g0.5μg/g25μg/L50μg/L4土霉素96.2(5.7)103(5.0)70.7(3.5)67.7(5.8)四環(huán)素素91.4(5.5)99.8(6.1)73.7(7.3)68.5(5.1)金金霉素80.6(6.8)83.4(6.1)76.7(2.9)67.3(1.8）結(jié)果以%回回收率表示,括號(hào)內(nèi)數(shù)字字為%RSD1/4/202324反相－－離子子交換換雙重重機(jī)理理吸附附劑MCX：陽(yáng)陽(yáng)離子子交換換—反反相吸吸附劑劑—用于于堿性性物質(zhì)質(zhì)提取取MAX：陰陰離子子交換換—反反相吸吸附劑劑—用于于酸性性物質(zhì)質(zhì)提取取WCX：弱弱陽(yáng)離離子交交換——反相相吸附附劑—用于于強(qiáng)堿堿性物物質(zhì)(如季銨銨鹽類類)提取WAX：弱弱陰離離子交交換——反相相吸附附劑—用于于強(qiáng)酸酸性物物質(zhì)提提取1/4/202325適合于于堿性性藥物物提取取的MCX小小柱1/4/202326雙機(jī)理吸吸附劑：：堿性化化合物的的保留1/4/202327混合機(jī)理理:陽(yáng)離離子交換換與反相相的保留留1/4/202328MCXSPE通用方方法1/4/202329常見獸藥殘留留的SPE推薦方法法名稱規(guī)規(guī)格克侖特羅MCX/SCX/PCX沙丁胺醇MCX/SCX/PCX磺胺C18/PEP/AluminaB氯霉素C18/PEP/Silica氟喹諾酮PEP/C18硝基咪唑類藥藥物PEP/C18己烯雌酚PEP/C18四環(huán)素PEP/C18萊克多巴胺AluminaA/MCX1/4/202330SPE在殘留留分析方面的的成功實(shí)例硝基咪唑類藥藥物：JAOACInternational,2003,86(3),505-509四環(huán)素:JchromatographyA,2003,987,227-233動(dòng)物組織中鹽鹽酸克倫特羅羅的SPE與GC/MS分析液相色譜通訊訊，37，13-141/4/202331SPE在殘留留分析方面的的成功實(shí)例萊克多巴胺：：Analyticachim,2003,483(1-2)P137-145氯霉素：動(dòng)物源食品中中氯霉素的液液相色譜-質(zhì)質(zhì)譜測(cè)定,分分析測(cè)試學(xué)報(bào)報(bào)，2002，21增刊刊，185-186磺胺：動(dòng)物組織中磺磺胺類藥物殘殘留量檢測(cè)方方法---HPLC法1/4/202332磺胺藥物樣品品前處理—SPE法HLB雞組織中磺胺胺類藥物殘留留量檢驗(yàn)方法法－高效液相相色譜紫外檢檢測(cè)法–廣州出入境境檢驗(yàn)檢疫局局食品檢驗(yàn)處處B(堿性氧化化鋁小柱)羊肉組織中七七種磺胺殘留留的測(cè)定–《Waters液相色色譜通訊》35期，2002年動(dòng)物源食品中中磺胺類藥物物殘留的檢測(cè)測(cè)方法－高效效液相色譜法法–農(nóng)業(yè)部３８８號(hào)文C18高效液相色譜譜法測(cè)定肉類類奶粉中四種種磺胺藥物殘殘留量的方法法研究–《Waters液液相色色譜通通訊》》15期，，1990年動(dòng)物源源食品品中磺磺胺二二甲嘧嘧啶殘殘留檢檢測(cè)方方法－－高效效液相相色譜譜法–農(nóng)業(yè)業(yè)部３３８號(hào)號(hào)文；；1/4/202333典型成成功開開發(fā)：：動(dòng)物組組織中中磺胺胺藥物物的殘殘留檢檢測(cè)方方法——HPLC法—NY5029-2001農(nóng)農(nóng)業(yè)業(yè)部““無公公害畜畜產(chǎn)品品例行行監(jiān)測(cè)測(cè)”專專用方方法艾杰爾爾科技技———磺胺胺專用用柱1/4/202334動(dòng)物源源食品品中磺磺胺類類藥物物殘留留檢測(cè)測(cè)方法法－－高效效液相相色譜譜法簡(jiǎn)介農(nóng)業(yè)部部畜禽禽產(chǎn)品品質(zhì)量量監(jiān)督督檢驗(yàn)驗(yàn)測(cè)試試中心心1/4/202335主要內(nèi)內(nèi)容一、適適用范范圍二、原原理三、試試劑和和材料料四、儀儀器設(shè)設(shè)備五、檢檢驗(yàn)步步驟1/4/2023361、、適適用用范范圍圍本方方法法用用于于測(cè)測(cè)定定動(dòng)動(dòng)物物可可食食性性組組織織中中磺磺胺胺間間甲甲氧氧嘧嘧啶啶（（SMM）、、磺磺胺胺二二甲甲基基嘧嘧啶啶（（SM2）、、磺磺胺胺甲甲噁噁唑唑（（SMZ）、、磺磺胺胺二二甲甲氧氧嘧嘧啶啶（（SDM）、、磺磺胺胺喹喹噁噁啉啉（（SQ）單單個(gè)個(gè)或或混混合合物物的的殘殘留留量量。。1/4/2023372．．原原理理組織織經(jīng)經(jīng)乙乙腈腈提提取取后后，，其其上上清清液液加加入入正正己己烷烷進(jìn)進(jìn)行行液液液液分分配配，，取取下下層層溶溶液液加加入入正正丙丙醇醇減減壓壓干干燥燥，，殘殘留留物物用用乙乙腈腈溶溶解解，，過過Sep-Pak堿堿性性氧氧化化鋁鋁柱柱,洗洗脫脫，，干干燥燥后后定定容容，，用用高高效效液液相相色色譜譜儀儀進(jìn)進(jìn)行行檢檢測(cè)測(cè)。。1/4/2023383、試劑劑和材料料除特別注注明外，，所用試試劑均為為分析純純；水為為超純水水。3.1磺磺胺類類藥物標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品（（SMM、SDM、SM2、SMZ和SQ），（（Sigma公公司，含含量不少少于98.9%）3.2甲甲醇醇色色譜純3.3乙乙腈腈色色譜純3.4正正已已烷3.5正正丙丙醇3.6無無水水硫酸鈉鈉1/4/2023393、試劑劑和材料料3.7堿堿性性氧化鋁鋁SPE柱（6毫升，，500毫克））3.8磺磺胺胺類藥物物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)儲(chǔ)備液（（1mg/mL）分分別精精密稱取取上述磺磺胺類藥藥物標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品各50mg，甲醇醇溶解并并轉(zhuǎn)移到到50mL容量量瓶，定定容，搖搖勻。置置-20℃以下下冰箱中中保存,有效期期3個(gè)月月。3.9磺磺胺類類藥物標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作作液取取磺胺胺類藥物物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)儲(chǔ)備液用用流動(dòng)相相稀釋成成濃度為為0.05,0.1,0.2,0.5,1.0，，2.0μg/mL的的標(biāo)準(zhǔn)工工作液。。置2℃℃-8℃℃冰箱中中保存，，有效期期1周。1/4/2023404、儀器器設(shè)備4.1高高效液液相色譜譜儀（配配紫外檢檢測(cè)器））4.2離離心機(jī)機(jī)4.13固相相萃取裝裝置（配配考克閥閥）4.4分分析析天平精精度度0.0001g4.5天天平平精精度0.01g4.6旋旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀儀4.7振振蕩蕩器4.8勻勻漿漿機(jī)4.9渦渦動(dòng)動(dòng)混合器器4.10分分液漏斗斗50mL4.11梨梨形瓶100mL4.12離離心管50mL4.13微微孔濾膜膜0.45μm1/4/2023415檢檢驗(yàn)驗(yàn)步驟驟5.1試料的的制備備5.1.1取絞碎碎后的的供試試樣品品,作為供供試試試料。。5.1.2取絞碎碎后的的空白白樣品品,作為空空白試試料（（陰性性對(duì)照照）。。5.1.3取絞碎碎后的的空白白樣品品5g,添加5μg/mL的工工作液液0.1mL，，作為為空白白添加加試料料（陽(yáng)陽(yáng)性對(duì)對(duì)照））。1/4/2023425檢檢驗(yàn)驗(yàn)步驟驟5.2提取取和純純化5.2.1組織樣樣品5.00g———5g無水水硫酸酸鈉+25mL乙乙腈———均均質(zhì)———振振蕩10min———以3000r/min的速速度離離心5min———重重復(fù)兩兩次———并并兩次次的上上清液液———加入入正己己烷30mL———振振蕩10min———離心心5min———取下下層液液體于于100mL梨形形瓶中中。1/4/2023435檢檢驗(yàn)驗(yàn)步驟驟5.2.1（續(xù)續(xù)）加正丙丙醇5mL，50℃℃下減減壓干干燥至至干，，殘留留物用用95%乙乙腈3ml溶解解，過氧化化鋁B柱。。用5mL乙腈腈-水水（95+5））過柱柱，不不收集集，再再用10mL乙乙腈腈-水水（70+30）洗洗脫。。洗脫液液中加加入5mL正丙丙醇，，50℃下下減壓壓干燥燥至干干，殘殘留物物用2.0mL流動(dòng)動(dòng)相溶溶解，，溶液用用濾膜膜過濾濾，作作為試試樣溶溶液，，供高高效液液相色色譜分分析。。1/4/2023445檢檢驗(yàn)驗(yàn)步驟驟5.3色色譜條條件5.3.1色譜柱柱：C18柱，250×4.6mm（i.d.），粒粒徑5μm，或相相當(dāng)者者；5.3.2流動(dòng)相相：乙乙腈-甲醇醇-水水-乙乙酸(2+2+9+0.2)；5.3.3流速：：1mL／min；5.3.4檢測(cè)波波長(zhǎng)：：270nm；5.3.5進(jìn)樣量量：20μμL。1/4/2023455檢驗(yàn)驗(yàn)步驟5.5測(cè)測(cè)定法5.5.1取試樣樣溶液和0.05μμg/mL的對(duì)照溶溶液，作單單點(diǎn)校準(zhǔn)，，以峰面積積計(jì)算。對(duì)對(duì)照溶液及及試樣溶液液中磺胺類類藥物的響響應(yīng)值均應(yīng)應(yīng)在儀器檢檢測(cè)的線性性范圍之內(nèi)內(nèi)，試樣溶溶液測(cè)定過過程中應(yīng)參參插注入對(duì)對(duì)照溶液，，以便準(zhǔn)確確定量。5.5.2試劑劑空白試驗(yàn)驗(yàn)除不加試料料外，采用用完全相同同的測(cè)定步步驟進(jìn)行平平行操作。。5.5.3結(jié)果果計(jì)算和表表述按下式計(jì)算算供試組織織中磺胺類類藥物的殘殘留量：Xi=(CSVA)/(ASm)1/4/2023465檢驗(yàn)驗(yàn)步驟5.6結(jié)結(jié)果判定5.6.1線性性范圍在0.02μg/mL～1.0μg/mL范圍圍考察線性性，計(jì)算回回歸方程，，其相關(guān)系系數(shù)≥0.995。。5.6.2準(zhǔn)確度本方法在100μg/kg添添加濃度水水平上的回回收率范圍圍為50%～110%。5.6.3允許許相對(duì)偏差差允許相對(duì)偏偏差≤26%。1/4/202347SPE在鹽鹽酸克侖特特羅（瘦肉肉精）殘殘留檢測(cè)中中的應(yīng)用樣品前處理理：SPE法–參見：中中華人民共共和國(guó)農(nóng)業(yè)業(yè)部行業(yè)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)：飼料料中鹽酸克克侖特羅的的測(cè)定參見：中華華人民共和和國(guó)國(guó)家標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)：動(dòng)物物組織中鹽鹽酸克侖特特羅的測(cè)定定1/4/202348SPE在鹽酸酸克侖特羅（（瘦肉精）殘殘留檢測(cè)中中的應(yīng)用中華人民共和和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T468——2005動(dòng)物組織中鹽鹽酸克倫特羅羅的測(cè)定－氣氣相色譜-質(zhì)質(zhì)譜法NY/XQ421-2003“動(dòng)物尿液中中鹽酸克倫特特羅（瘦肉精精）殘留的檢檢測(cè)氣相色色譜-質(zhì)譜（（GC-MS）方法”——起草單位位：農(nóng)業(yè)部畜畜禽產(chǎn)品質(zhì)量量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)測(cè)試中心1/4/202349動(dòng)物組織中鹽鹽酸克倫特羅羅的測(cè)定－氣氣相色譜-質(zhì)質(zhì)譜法——原理對(duì)樣品在堿化化的條件下用用乙酸乙酯提提取，合并提提取液后，利利用鹽酸克倫倫特羅易溶于于酸性溶液的的特點(diǎn)，用稀稀鹽酸反萃取取，萃取的樣樣液pH調(diào)至至5.2后用SCX固相相萃取小柱凈凈化，分離的藥物物殘留經(jīng)過雙雙三甲基硅烷烷三氟乙酰胺胺（BSTFA）衍生后后用帶有質(zhì)量量選擇檢測(cè)器器的氣相色譜譜儀測(cè)定。1/4/202350動(dòng)物組織中鹽鹽酸克倫特羅羅的測(cè)定－氣氣相色譜-質(zhì)質(zhì)譜法提取(5±0.05)g動(dòng)物物肝組織———加入15mL乙酸乙酯酯——加入3mL10.0%碳酸鈉鈉溶液——均均質(zhì)——離心心2min———上層有機(jī)機(jī)溶劑——在在殘?jiān)性俅未翁崛『蟆⒑稀蛹尤?mL0.10mol/L的鹽鹽酸——離心心2min———重復(fù)萃取取——合并下下層溶液———2.5mol/L氫氧氧化鈉溶液調(diào)調(diào)節(jié)pH至5.2。1/4/202351動(dòng)物組織中鹽鹽酸克倫特羅羅的測(cè)定－氣氣相色譜-質(zhì)質(zhì)譜法凈化SCX小柱———5mL甲甲醇——5mL水———5mL30mmol/L鹽酸活化———萃取液上上樣——5mL水———5mL甲甲醇——淋洗洗柱子——抽抽干SCX小小柱——5mL4%氨化甲醇醇溶液——洗洗脫。衍生化在50℃水浴浴——氮?dú)獯荡蹈伞?00L甲苯———100LBSTFA——80℃衍生lh——冷卻———加入0.3mL甲苯苯——?dú)庀嗌V-質(zhì)譜分分析。1/4/202352動(dòng)物組織中鹽鹽酸克倫特羅羅的測(cè)定－氣氣相色譜-質(zhì)質(zhì)譜法GC/MS測(cè)測(cè)定參數(shù)設(shè)定定色譜柱：HP-5MS5%苯基甲甲基聚硅氧烷烷，30m××0.25mm（內(nèi)徑）），0.25m（膜厚）；；進(jìn)樣口：220℃；進(jìn)樣方式：不不分流；進(jìn)樣體積：1L；柱溫：70℃℃（保持0.6min））,以25℃/min升溫至200℃（保保持6min），以25℃/min升溫至280℃（保持持5min））；載氣：氦氣，，流速：0.9mL/min（恒流流）；GC/MS傳傳輸線溫度度：280℃℃；溶劑延遲：8min；EM電壓：高高于調(diào)諧電壓壓200V；；離子源(EI)溫度：200℃；四極桿溫度：：160℃；；選擇離子監(jiān)測(cè)測(cè):(m/z)86，212，262，2771/4/202353動(dòng)物物尿尿液液中中鹽鹽酸酸克克倫倫特特羅羅的的測(cè)測(cè)定定－－氣氣相相色色譜譜-質(zhì)質(zhì)譜譜法法凈化化依次次用用甲甲醇醇5mL、、水水5mL和和30mmol/L鹽鹽酸酸5mL潤(rùn)潤(rùn)洗洗固固相相萃萃取取小小柱柱，，將將上上述述備備用用液液過過柱柱，，依依次次用用水水5mL、、甲甲醇醇5mL淋淋洗洗，，真真空空抽抽干干，，用用4%氨氨化化甲甲醇醇5mL洗洗脫脫SCX小小柱柱，，收收集集洗洗脫脫液液于于具具塞塞玻玻璃璃試試管管中中，，50℃℃下下氮氮?dú)鈿獯荡蹈筛?。。在在樣樣液液過過柱柱和和洗洗脫脫過過程程中中流流速速控控制制在在1mL/min左左右右。。1/4/202354殘留留分分析析SPE前前處處理理應(yīng)應(yīng)用用小小結(jié)結(jié)———以以常常規(guī)規(guī)方方法法為為起起點(diǎn)點(diǎn)———如如需需要要，，根根據(jù)據(jù)樣樣品品性性質(zhì)質(zhì)與與基基質(zhì)質(zhì)進(jìn)進(jìn)行行方方法法優(yōu)優(yōu)化化———對(duì)對(duì)于于堿堿性性或或酸酸性性組組分分采采用用雙雙機(jī)機(jī)理理吸吸附附劑劑1/4/202355SPE小小柱柱的的典典型型應(yīng)應(yīng)用用實(shí)實(shí)例例磺胺胺：：Sep-PakAl2O3(B),12cc/2g,WAT054260–動(dòng)動(dòng)物物源源食食品品中中磺磺胺胺類類藥藥物物殘殘留留物物檢檢測(cè)測(cè)方方法法———HPLC金霉霉素素：：Sep-PakC18或者者tC18–金金霉霉素素殘殘留留的的HPLC測(cè)定定伊維維菌菌素素：：Sep-PakC18或者者tC18–伊伊維維菌菌素素殘殘留留的的HPLC測(cè)定定法法1/4/202356SPE小小柱柱的的典典型型應(yīng)應(yīng)用用實(shí)實(shí)例例恩諾沙星星，環(huán)丙丙沙星：：Sep-PaktC18(含碳量≥≥16%)–動(dòng)物性性食品中中恩諾沙沙星和環(huán)環(huán)丙沙星星殘留物物檢測(cè)方方法——HPLC噁喹酸，，氟甲喹喹：Sep-PaktC18(含碳量≥≥16%)–動(dòng)物性性食品中中噁喹酸酸和氟甲甲喹殘留留物檢測(cè)測(cè)方法——HPLC1/4/202357國(guó)家科技技攻關(guān)計(jì)計(jì)劃課題題畜禽產(chǎn)品品質(zhì)量安安全關(guān)鍵鍵控制技技術(shù)系列列標(biāo)準(zhǔn)研研究(課題編編號(hào)：2002BA906A75)農(nóng)業(yè)部畜畜禽產(chǎn)品品質(zhì)量監(jiān)監(jiān)督檢驗(yàn)驗(yàn)測(cè)試中中心1/4/202358國(guó)家科技技攻關(guān)計(jì)計(jì)劃子課課題三種獸藥藥使用規(guī)規(guī)范驗(yàn)證證和四種獸獸藥殘留留檢測(cè)方方法研究究(子課題題編號(hào)：：2002BA906A37-01)農(nóng)業(yè)部畜畜禽產(chǎn)品品質(zhì)量監(jiān)監(jiān)督檢驗(yàn)驗(yàn)測(cè)試中中心2005年11月10日1/4/20235920種種獸藥藥殘留留檢測(cè)測(cè)方法法的技技術(shù)要要點(diǎn)22.1豬豬組織織中已已烯雌雌酚、、已烷烷雌酚酚、已已二烯烯雌酚酚殘留留檢測(cè)測(cè)方法法研究究（氣氣相色色譜-質(zhì)譜譜法））在堿化化的條條件下下用乙酸乙乙酯提提取豬組織織樣品品中己己烯雌雌酚、、已二二烯雌雌酚和和已烷烷雌酚酚殘留留，然然后通通過碳酸鈉鈉溶液液和硅硅膠柱柱對(duì)洗洗脫物物質(zhì)進(jìn)進(jìn)行凈凈化處理。。凈化化后的的樣品品平均均分兩兩份進(jìn)進(jìn)行吹吹干后后衍生，，BSTFA衍衍生后進(jìn)行行氣相相色譜譜－質(zhì)質(zhì)譜分分析。。檢測(cè)限限:0.25g/kg-0.5g/kg；；回收收率:60.9%～～85.6%批內(nèi)變變異系系數(shù)≤≤15%，，批間間變異異系數(shù)數(shù)≤20%1/4/20236022.1豬豬組織織中已已烯雌雌酚、、已烷烷雌酚酚、已已二烯烯雌酚酚殘留留檢測(cè)測(cè)方法法研究究（氣氣相色色譜-質(zhì)譜譜法））已二烯烯雌酚酚標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)溶液液經(jīng)衍衍生化化后選選擇離離子模模式下下的總總離子子流圖圖豬肝添添加樣樣品總總離子子流圖圖(已已二烯烯雌酚酚添加加濃度度為4μg/kg)1/4/2023612.2豬豬組織中雌雌二醇?xì)埩袅魴z測(cè)方法法研究（液液相色譜-質(zhì)譜法））試樣勻漿后后,加入氘代雌二醇醇內(nèi)標(biāo),經(jīng)正己烷脫脂脂,經(jīng)HLB柱、硅硅膠柱、氨氨基柱凈化化后，于液液質(zhì)聯(lián)用儀儀上進(jìn)行測(cè)定定。同位素素內(nèi)標(biāo)定量量。檢測(cè)限:1g/kg；；回收率:97.1%～106.1%批內(nèi)變異系系數(shù)≤15%，批間間變異系數(shù)數(shù)≤20%1/4/2023622.2豬豬組織中雌雌二醇?xì)埩袅魴z測(cè)方法法研究（液液相色譜-質(zhì)譜法））豬肝添加雌雌二醇色譜譜圖(從上至下添添加濃度依依次為0μg/kg,5μg/kg,2μg/kg,1μg/kg)1/4/2023632.3豬豬尿液中丙丙酸睪酮?dú)垰埩魴z測(cè)方方法（液相相色譜-質(zhì)質(zhì)譜法）豬尿樣品經(jīng)經(jīng)固相萃取小小柱凈化后后，供液相相色譜-質(zhì)質(zhì)譜儀測(cè)定。丙酸睪酮檢檢測(cè)限:1.0g/kg丙酸睪酮回回收率:62.2%～73.5%批內(nèi)變異系系數(shù)≤15%，批間間變異系數(shù)數(shù)≤20%丙酸睪酮標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)質(zhì)譜圖空白豬尿中中添加50μg/L的丙酸睪睪酮標(biāo)準(zhǔn)溶溶液后的SIR色譜譜圖1/4/2023642.5豬組組織及豬尿尿中克倫特特羅、沙丁丁胺醇?xì)埩袅魴z測(cè)方法法（氣相色色譜-質(zhì)譜譜法）試樣用高氯酸溶液勻漿、、超聲加熱熱提取，用用異丙醇+乙乙酸乙酯(40+60)萃取，有機(jī)機(jī)相濃縮，，經(jīng)弱陽(yáng)離子交交換柱進(jìn)行行分離，用乙醇+濃氨氨水(98+2)溶液洗脫，，洗脫液濃濃縮，經(jīng)N,O雙三三甲基硅烷烷三氟乙酰酰胺(BSTFA)衍生后于氣質(zhì)聯(lián)聯(lián)用儀上進(jìn)進(jìn)行測(cè)定。。外標(biāo)法定定量。檢測(cè)限:1g/kg；；回收率:60.37%～93.86%批內(nèi)變異系系數(shù)≤15%，批間間變異系數(shù)數(shù)≤20%1/4/2023652.5豬豬組織及豬豬尿中克倫倫特羅、沙沙丁胺醇?xì)垰埩魴z測(cè)方方法（氣相相色譜-質(zhì)質(zhì)譜法）豬肝加標(biāo)樣樣色譜圖(2g/kg)1/4/2023662.6豬豬組組織及豬豬尿中萊萊克多巴巴胺殘留留檢測(cè)方方法（氣氣相色譜譜-質(zhì)譜譜法）樣品經(jīng)過過高氯酸水解提取取，用乙酸乙酯酯和異丙丙醇（4：6））再次提取取后過SCX陽(yáng)陽(yáng)離子小小柱凈化，用用合適的的溶劑選選擇洗脫脫后,氮氮?dú)獯荡蹈?，供供高效液液相色譜譜定量（（質(zhì)譜檢檢測(cè)器））測(cè)定。。外標(biāo)法法定量。。檢測(cè)限:1g/kg；回收收率:66.47%～～86.21%批內(nèi)變異異系數(shù)≤≤15%，批間間變異系系數(shù)≤20%1/4/2023672.6豬豬組組織及豬豬尿中萊萊克多巴巴胺殘留留檢測(cè)方方法（氣氣相色譜譜-質(zhì)譜譜法）300g/L標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液液質(zhì)譜圖圖肉添加10g/kg質(zhì)譜圖1/4/2023682.7豬豬組織織中氯霉霉素殘留留檢測(cè)方方法（液液相色譜譜-質(zhì)譜譜法）樣品經(jīng)過過乙腈-水水（1+1）溶液、乙酸乙乙酯重復(fù)提取取，用正己烷除去樣品品中的脂脂肪等雜雜質(zhì)，C18固相萃取取柱進(jìn)一步凈凈化，N2氣吹干后后供高效效液相色色譜定量量（質(zhì)譜譜檢測(cè)器器）測(cè)定定。外標(biāo)標(biāo)法定量量。檢測(cè)限:0.1g/kg；回收收率:67.4%～87.0%批內(nèi)變異異系數(shù)≤≤15%，批間間變異系系數(shù)≤20%1g/L標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液液圖肉添加1g/kg圖1/4/2023692.7豬豬組織織中氯霉霉素殘留留檢測(cè)方方法（液液相色譜譜-質(zhì)譜譜法）1/4/2023702.8豬組組織中粘桿菌菌素殘留檢測(cè)測(cè)方法（液相相色譜法）待測(cè)動(dòng)物組織織中殘留的粘粘桿菌素經(jīng)三氯乙酸-甲甲醇溶液提取，C18固相萃取柱凈化后，與熒光衍生化試劑反應(yīng)，用用高效液相色色譜（熒光檢檢測(cè)器）進(jìn)行行檢測(cè)，外標(biāo)標(biāo)法定量。檢測(cè)限:75g/kg；定定量限:150g/kg,回回收率:80.1%～108.5%批內(nèi)變異系數(shù)數(shù)≤15%，，批間變異系系數(shù)≤20%a：空白樣品品圖b：添添加0.05μg/g粘粘桿菌素樣品品圖1/4/2023712.9豬組組織中磺胺類類藥物殘留檢檢測(cè)方法（液液相色譜法））組織樣品經(jīng)乙腈提取后，在上上清液中加入入正己烷進(jìn)行液液分配配，取下層溶溶液加入正丙醇減壓干燥，殘殘留物用乙酸乙酯溶解，過氨基鍵合小柱柱,以乙酸乙乙醇溶液洗脫脫，氮?dú)獯蹈筛珊笥昧鲃?dòng)相相溶解，定容容后用高效液液相色譜儀進(jìn)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)限:3～～5g/kg；回回收率:65.1%～92.1%批內(nèi)變異系數(shù)數(shù)≤15%，，批間變異系系數(shù)≤20%1/4/2023722.9豬豬組織織中磺磺胺類類藥物物殘留留檢測(cè)測(cè)方法法（液液相色色譜法法）磺胺類類藥物物標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品色色譜圖圖豬肝添添加磺磺胺類類藥物物色譜譜圖1/4/2023732.10豬豬組組織中中乙酰酰甲喹喹殘留留檢測(cè)測(cè)方法法（液液相色色譜法法）動(dòng)物組組織勻勻漿用用雙蒸水水、三三氯乙乙酸提取，，經(jīng)C18固相小小柱凈化，，80%甲醇醇洗脫，，收集集洗脫脫液，，作為為試樣樣溶液液供高高效液液相色色譜（（配紫紫外檢檢測(cè)器器）分分析，，外標(biāo)標(biāo)法定定量檢測(cè)限限:50g/kg回回收率率:60.1%～83.1%批內(nèi)變變異系系數(shù)≤≤15%，，批間間變異異系數(shù)數(shù)≤20%空白豬豬肉組組織試試樣色色譜圖圖豬肉試試樣中中添加加乙酰酰甲喹喹色譜譜圖1/4/2023742.11動(dòng)動(dòng)物物組織織（豬豬、雞雞）中中硝基基咪唑唑類藥藥物多多殘留留檢測(cè)測(cè)方法法（液液相色色譜-質(zhì)譜譜法））待測(cè)動(dòng)動(dòng)物組組織中中殘留留的硝硝基咪咪唑類類藥物物用乙酸乙乙酯提取，，液/液萃萃取分分離,固相萃萃取柱柱凈化化后，通通過高高效液液相色色譜/質(zhì)譜譜聯(lián)用用的大氣壓壓化學(xué)學(xué)電離離正離離子檢測(cè)（APCI+））方式,進(jìn)行行選擇擇離子子(SIR)檢測(cè)測(cè)，外外標(biāo)法法定量量，實(shí)實(shí)現(xiàn)了了三種種硝基基咪唑唑類化化合物物的多多殘留留確證證。。。檢測(cè)限限:0.5-1.0g/kg；；回收收率:55.31%～88.66%批內(nèi)變變異系系數(shù)≤≤15%，，批間間變異異系數(shù)數(shù)≤20%豬肝加加標(biāo)樣樣選擇擇離子子檢測(cè)測(cè)色譜譜圖.(a)洛硝噠噠唑(M/Z=201,2.0μμg/kg);(b)甲硝唑唑（M/Z=172,1.0μg/kg）;(c)地美硝硝唑（（M/Z=142,1.0μg/kg）1/4/2023752.12動(dòng)動(dòng)物物（羊羊、豬豬）組組織中中伊維維菌素素類藥藥物多多殘留留檢測(cè)測(cè)方法法（液液相色色譜法法）待測(cè)測(cè)動(dòng)動(dòng)物物組組織織中中殘殘留留的的伊伊維維菌菌素素類類藥藥物物經(jīng)經(jīng)乙腈腈提取取，，堿性性氧氧化化鋁鋁固相相萃萃取取柱柱凈凈化化后后，，與與熒光光衍衍生生化化試試劑劑反應(yīng)應(yīng)，，用用高高效效液液相相色色譜譜（（熒熒光光檢檢測(cè)測(cè)器器））,進(jìn)進(jìn)行行檢檢測(cè)測(cè)，，外外標(biāo)標(biāo)法法定定量量，，實(shí)實(shí)現(xiàn)現(xiàn)了了三三種種阿阿維維菌菌素素類類藥藥物物的的多多殘殘留留分分析析。。檢測(cè)測(cè)限限:1.0g/kg；