MALDI-TOF-MS在女性生殖道惡性腫瘤診斷中的運(yùn)用-中國(guó)腫瘤生物

MALDI-TOF-MS在女性生殖道惡性腫瘤診斷中的運(yùn)用TheapplicationofMALDI-TOF-MSinthediagnosisofmalignanttumorofthefemalegenitaltract滕志淳綜述，傅芬審閱(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，江西南昌330006)［摘要］：基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(Matrix-AssistedLaserDesorptionIonizationTimeofFlightMassSpectrometry，MALDI-TOF-MS)作為一種新的質(zhì)譜技術(shù)成功檢測(cè)出許多與疾病相關(guān)的新型生物標(biāo)記物。本文著重介紹了近年來(lái)運(yùn)用MALDI-TOF-MS對(duì)宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌三大女性生殖道惡性腫瘤的早期篩查診斷的研究進(jìn)展，并對(duì)于MALDI-TOF-MS不足之處進(jìn)行了指正及展望。［關(guān)鍵詞］:MALDI-TOF-MS；女性生殖道惡性腫瘤；子宮內(nèi)膜癌；卵巢癌；宮頸癌［中圖分類(lèi)號(hào)］:R737,3［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］:A ［文章編號(hào)］:由于經(jīng)濟(jì)發(fā)展與全民衛(wèi)生教育的不同步、環(huán)境惡化等因素的影響，女性生殖道惡性腫瘤，特別是排名前三位的宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌的發(fā)病率明顯提高。因此，尋找一種新型高敏感、高特異性且創(chuàng)傷小的檢測(cè)方法，在腫瘤早期篩查中進(jìn)行推廣，從而實(shí)現(xiàn)疾病的早診斷、早治療，具有重大現(xiàn)實(shí)意義。基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(matrix-assistedlaserdesorptionionizationtimeofflightmassspectrometry，MALDI-TOF-MS)是近些年來(lái)蛋白質(zhì)組學(xué)研究中最為熱門(mén)的質(zhì)譜技術(shù)川，目前已經(jīng)成功運(yùn)用于篩選出與疾病相關(guān)的新型生物標(biāo)記物，為臨床疾病的早期診斷和治療提供了良好的依據(jù)以及更為廣闊的空間。.MALDI-TOF-MS技術(shù)概況當(dāng)個(gè)體發(fā)生疾病的時(shí)候，其自身組織、細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)成分也將隨之發(fā)生相應(yīng)改變。MALDI-TOF-MS技術(shù)主要就是通過(guò)快速分析細(xì)胞以及組織中的蛋白質(zhì)荷比的變化來(lái)了解細(xì)胞所產(chǎn)生的生物學(xué)變化⑵。將組織或細(xì)胞與等量的基質(zhì)混合構(gòu)成共晶體，經(jīng)激光照射，共晶體中的基質(zhì)將樣品解吸附并電離，生成帶有電荷的蛋白質(zhì)分子被引入飛行時(shí)間質(zhì)量分析器進(jìn)行質(zhì)譜分析。由于離子的質(zhì)荷比與離子的飛行時(shí)間成正比，所以根據(jù)各個(gè)離子的檢測(cè)到的飛行時(shí)間可以出測(cè)定其分子質(zhì)量，并通過(guò)專(zhuān)用軟件分析，制定出特異的指紋圖譜3］。與傳統(tǒng)質(zhì)譜技術(shù)相比，MALDI-TOF-MS適用于混合物及生物大分子的軟電離，具有許多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)：一、靈敏度高；二、準(zhǔn)確度高，女Maurer等⑷將經(jīng)MALDI-TOF-MS分析獲得的頭頸部鱗癌的差異蛋白質(zhì)譜圖再次用于單盲測(cè)試，發(fā)現(xiàn)其準(zhǔn)確率高達(dá)96.5%；三、制備樣品的要求低，過(guò)程簡(jiǎn)單，樣品中允許有一定量的雜質(zhì)，如在預(yù)處理過(guò)程中加入的緩沖劑等濃度控制在一定范圍，可不必在分析前除去；四、檢測(cè)范圍廣，可測(cè)定相對(duì)分子質(zhì)量500~100000大小的多肽及蛋白；五、可以用于組織切片的直接分析，切片大小要求低，即使是將直徑只有幾毫米的組織切片放置在MALDI的靶板上，向組織樣品添加基質(zhì)后無(wú)需任何分離步驟，該組織的分子及空間分布信息即可快速通過(guò)質(zhì)譜分析獲得；六、檢測(cè)樣本多樣，可以是血清、血漿、尿液、腦脊液、乳頭抽吸液等臨床上可直接獲得的標(biāo)本；七、兼容性好，可以與雙向電泳、液相色譜技術(shù)以及磁珠技術(shù)結(jié)合用于蛋白種類(lèi)分析［5-6］；八、速度快，高通量檢測(cè)技術(shù)［7-8］。綜合以上的優(yōu)點(diǎn)，MALDI-TOF-MS技術(shù)更加適合用于臨床檢驗(yàn)中的大量標(biāo)本的檢測(cè)。.MALDI-TOF-MS技術(shù)與腫瘤檢測(cè)腫瘤的發(fā)生是多基因多步驟調(diào)控的結(jié)果。目前很多腫瘤缺乏早期準(zhǔn)確的、特異性的診斷方法，大多數(shù)患者都是在出現(xiàn)相應(yīng)臨床癥狀后，再通過(guò)影像學(xué)、血液分析、病理學(xué)檢查來(lái)診斷，延誤了最佳的治療時(shí)間，極大的降低了患者的存活率。研究發(fā)現(xiàn)，即使是無(wú)臨床癥狀的早期癌癥患者，其血液、尿液或者其他組織中的蛋白質(zhì)的種類(lèi)或數(shù)量已悄然改變9］。通過(guò)早期篩查體液或組織的蛋白差異，及早發(fā)現(xiàn)隱性的腫瘤患者，將為腫瘤診治發(fā)揮重要作用。MALDI-TOF-MS技術(shù)諸多優(yōu)勢(shì)的展現(xiàn)，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外有很多將其運(yùn)用在一些癌癥研究上的成功案例，如乳腺癌口0］、食管鱗狀細(xì)胞癌［口］、胃癌［⑵、肺癌口引、肝癌口引、膀胱癌［⑸、前列腺癌［16］等。它可以快速檢測(cè)出癌癥患者體內(nèi)特異的蛋白表達(dá)，與臨床上直到患者出現(xiàn)相應(yīng)病理學(xué)改變才能運(yùn)用影像學(xué)檢測(cè)出來(lái)相比，大大提前了診斷時(shí)間，提高了患者的生存期，節(jié)省了治療費(fèi)用，被認(rèn)為是一種潛在的早期診斷工具，并可以運(yùn)用于預(yù)測(cè)制定患者特異性的療法、預(yù)見(jiàn)患者的治療效果以及是否有復(fù)發(fā)可能等方面。.MALDI-TOF-MS技術(shù)與女性生殖道惡性腫瘤檢測(cè)MALDI-TOF-MS在宮頸癌診斷中的運(yùn)用宮頸癌作為最常見(jiàn)的女性生殖道惡性腫瘤，與高危型人乳頭瘤病毒(humanpapillomaviruses，HPV)的持續(xù)感染有緊密聯(lián)系［⑺。但是，單獨(dú)檢測(cè)HPV缺乏診斷特異性，目前宮頸癌的診斷、治療效果及預(yù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估主要依賴(lài)于腫瘤的臨床病理參數(shù)。隨著蛋白質(zhì)組診斷模式的發(fā)展，運(yùn)用MALDI-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)宮頸癌患者的特異多肽標(biāo)志物，為新型早期診斷方法提供更多的選擇空間。Zhu等［18］采用二維凝膠電泳對(duì)10對(duì)宮頸癌患者的癌灶及癌旁正常組織蛋白進(jìn)行分離，將差異表達(dá)的55個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)通過(guò)MALDI-TOF-MS進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)包含TYK2,S100A9和鋅指蛋白217在內(nèi)的24個(gè)蛋白質(zhì)在癌癥組織中高表達(dá)。另外，Song等［19］采用相同方法對(duì)宮頸癌與單純性子宮肌瘤患者的宮頸組織進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)20個(gè)在癌癥組異常表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)，經(jīng)RT-PCR、Westernblot、免疫組化學(xué)綜合檢測(cè)后，鎖定B-FABP、NCK-1、CDK4可能作為新的宮頸癌病理腫瘤標(biāo)志物。以上研究結(jié)果表明，通過(guò)MALDI-TOF-MS技術(shù)發(fā)現(xiàn)癌癥患者活體組織中的異常蛋白具有實(shí)驗(yàn)可行性。至于兩者實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異，可能來(lái)源于實(shí)驗(yàn)步驟中的差異或者試劑使用的不同，也可能出于MALDI-TOF-MS技術(shù)重現(xiàn)性還需改善的原因。值得指出的是，活體組織蛋白質(zhì)組學(xué)研究雖然較為成熟，但臨床上取材較為艱難，檢測(cè)前處理較為繁復(fù)，不適于臨床早期的疾病篩查和診斷，血清蛋白質(zhì)組的研究漸漸開(kāi)展開(kāi)來(lái)。Liu等［20］通過(guò)PBSII-C蛋白芯片技術(shù)預(yù)處理了85例宮頸癌組及80例健康女性的血清標(biāo)本，運(yùn)用BiomarkerWizard系統(tǒng)分析獲得的指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)兩組血清蛋白存在明顯差異，經(jīng)過(guò)篩選確定了3個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量分別為3974、4175、5906的差異多肽和蛋白。運(yùn)用這些多肽和蛋白將癌癥患者與健康人群分組的靈敏度達(dá)93.3%，特異性達(dá)95%。其中相對(duì)分子質(zhì)量5906的蛋白質(zhì)與Liu早期研究發(fā)現(xiàn)的差異蛋白（相對(duì)分子質(zhì)量5904.14）相近，這很可能是同一個(gè)蛋白質(zhì)，分子量差異可能與樣本預(yù)處理方式及分析統(tǒng)計(jì)軟件的不同有關(guān)，這也意味著一個(gè)新型潛在生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)。此外，MALDI-TOF-MS還可以用于分析如四乙基銨（TEA）等特定物質(zhì)的結(jié)構(gòu)等，幫助理解其誘導(dǎo)細(xì)胞毒性的機(jī)制，并提供潛在的癌癥生物標(biāo)志物，這已經(jīng)在人宮頸癌細(xì)胞Hela中得到證實(shí)［21］。雖然MALDI-TOF-MS技術(shù)具有高效性，但是目前大量的研究都是建立在已知癌癥患者，且大多數(shù)是晚期癌癥患者的取樣或者已知腫瘤細(xì)胞的研究上，癌癥病人的數(shù)量及臨床分期的限制導(dǎo)致建立出的診斷模型缺乏廣泛性，因此暫無(wú)研究報(bào)道在對(duì)照組或者隨機(jī)取樣中檢測(cè)到隱性癌癥病人。繼續(xù)擴(kuò)增樣本數(shù)量，研究早期宮頸癌的質(zhì)譜圖，將更有利于我們實(shí)現(xiàn)腫瘤早期診斷的目標(biāo)。MALDI-TOF-MS在子宮內(nèi)膜癌診斷的運(yùn)用分段診刮術(shù)是目前診斷子宮內(nèi)膜癌最常用、最有價(jià)值的檢查方法。但因診刮術(shù)屬于有創(chuàng)操作，并不屬于每年體檢常規(guī)項(xiàng)目，甚至很多已經(jīng)出現(xiàn)臨床癥狀的患者因懼怕其有創(chuàng)操作的風(fēng)險(xiǎn)而拒絕或者不配合診刮，導(dǎo)致篩查工作的難以有效展開(kāi)。MALDI-TOF-MS可以檢測(cè)固態(tài)、液態(tài)等多種形態(tài)的樣本，為尋求無(wú)創(chuàng)早期診斷的內(nèi)膜癌研究者提供了新的研究方法。Yang等［22］對(duì)21例惡性子宮內(nèi)膜及23例良性子宮內(nèi)膜組織蛋白進(jìn)行分級(jí)分離，通過(guò)MALDI-TOF-MS分析發(fā)現(xiàn)兩組間存在差異性，其中CPN10在惡性子宮內(nèi)膜組織中高度表達(dá)，并用Westernblot及免疫組化等方法進(jìn)一步證實(shí)。之后，Qiu等四］人利用MALDI-TOF-MS及ClinProTools軟件對(duì)比分析了子宮內(nèi)膜癌組（30例）及對(duì)照組（30例）的血清蛋白，確定在坐標(biāo)pk14，1012.6及pk115,6052.9內(nèi)的2種蛋白質(zhì)有明顯差異表達(dá)，通過(guò)差異明顯的多肽和蛋白m/z2902.49、m/z5068.89、m/z6052.9和m/z7010.58建立的子宮內(nèi)膜癌診斷模型靈敏性達(dá)97.62%、特異性達(dá)100%，這證明了MALDI-TOF-MS在臨床診斷方面的優(yōu)勢(shì)可行性。其次，MALDI-TOF-MS的早期篩查可行性在分析子宮內(nèi)膜病變機(jī)制的實(shí)驗(yàn)中獲得了肯定［24］。另外，Zhang等［25］通過(guò)MALDI-TOF-MS對(duì)比經(jīng)孕激素治療和未治療的子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞株的蛋白差異，為孕激素分子機(jī)制的進(jìn)一步調(diào)查提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為子宮內(nèi)膜癌治療研究奠定了基礎(chǔ)，也為臨床選藥、評(píng)估病人療效以及藥物治療靶向提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。3.3MALDI-TOF-MS在卵巢癌診斷中的運(yùn)用作為女性生殖器官惡性腫瘤中死亡率最高的卵巢癌，由于發(fā)病部位隱匿，早期癥狀非特異性，依靠目前雙合診檢查、CA-125及陰道超聲相結(jié)合的診斷方式，早期診斷的陽(yáng)性率只有30%-45%［26］。大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)是臨床晚期，極大地減低了5年生存率?，F(xiàn)在已有多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)將MALDI-TOF-MS運(yùn)用于卵巢癌的早期診斷、治療以及預(yù)后判斷的研究中。Qiu等［27］人利用MB-WCX預(yù)處理20例卵巢癌患者及20例健康對(duì)照人群血清樣本后，質(zhì)譜分析并采集血清多肽指紋圖譜，采用ClinProTools軟件分析獲得了5個(gè)作為兩組分類(lèi)的差異多肽和蛋白，質(zhì)荷比分別為m/z4648.21、m/z3886.1、m/z9066.38、m/z9294.03和m/z4254.71，其中前四個(gè)質(zhì)峰在癌癥組表達(dá)升高，后者在癌癥組表達(dá)降低。挑選其中質(zhì)荷比為m/z4648.21及m/z9294.03的多肽和蛋白質(zhì)建立卵巢癌血清診斷模型可以很好地將卵巢癌患者與健康對(duì)照者區(qū)分開(kāi)來(lái)。Wu等［281人采用同法預(yù)處理40例卵巢癌患者及60例健康對(duì)照組的血清樣本，但在運(yùn)用MALDI-TOF-MS質(zhì)譜檢測(cè)時(shí)，將質(zhì)量范圍擴(kuò)大為1000~50000Da，并刪除小于2000Da的質(zhì)峰以排除誤差，獲得27個(gè)差異蛋白，選用其中表達(dá)上調(diào)明顯的m/z5486、m/z6440和m/z13720建立卵巢癌血清診斷模型辨別兩組患者，敏感性和特異性分別為90%、86.7%。以上兩人的實(shí)驗(yàn)樣品預(yù)處理方法大致相同，但由于Wu實(shí)驗(yàn)中相關(guān)參數(shù)的修改及優(yōu)化等處理，所獲得的差異蛋白也不盡相同。在未來(lái)擴(kuò)大樣本例數(shù)、規(guī)范化的研究中，應(yīng)該注意保持實(shí)驗(yàn)儀器參數(shù)設(shè)定的一致性，方便深入探討所獲得的差異蛋白與卵巢癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系，其高表達(dá)是腫瘤細(xì)胞本身侵襲增殖的顯示，亦或者是本體細(xì)胞免疫反應(yīng)的表達(dá)，增加或減少這兩個(gè)蛋白質(zhì)在細(xì)胞中的表達(dá)，對(duì)臨床治療有無(wú)靶向作用提供依據(jù)。目前卵巢癌的化療主要是采用順伯及其類(lèi)似化合物作為藥物，耐藥反應(yīng)往往是卵巢癌患者治療失敗的主要原因［29］。雖然一些基因，如GST-pi［30］、XIAPM、BCL-XL132^E與耐藥性卵巢癌顯示出一些相關(guān)性，但具體機(jī)制尚未達(dá)到普遍的共識(shí)。建立腫瘤抗化療耐藥相關(guān)分子的檢測(cè)將在腫瘤的治療方案的選擇中發(fā)揮重要作用。Zh0U等網(wǎng)基于先前的研究及順伯耐藥機(jī)制的研究，通過(guò)二維凝膠電泳、MALDI-TOF-MS和高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)MS聯(lián)合分析人類(lèi)卵巢癌順伯耐藥細(xì)胞株(COC1/DDP),確定5個(gè)與順伯耐藥相關(guān)、顯著改變COC1/DDP親代細(xì)胞的差異蛋白點(diǎn)：角蛋白9,角蛋白1,dUTPase,ADCK4和絲切蛋白。且Zhou通過(guò)定量PCR和Westernblotting等方法進(jìn)一步驗(yàn)證了以上蛋白質(zhì)的異常表達(dá)。Li等［34］通過(guò)MALDI-TOF-MS對(duì)人類(lèi)上皮性卵巢癌耐藥細(xì)胞株的22個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行分析，其中16個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)了強(qiáng)度不同的特異性，并且確定了絲切蛋白1在紫杉醇抗性中發(fā)揮重要作用。以上兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)于絲切蛋白的耐藥影響有共同的結(jié)果，為卵巢癌耐藥機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)，也為臨床選藥、評(píng)估病人療效以及藥物治療靶向提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。另外，食療作為新型的輔助治療的手段越來(lái)越被人們所推崇。AjayP等閡通過(guò)MALDI-TOF-MS檢測(cè)越蔓莓成分，發(fā)現(xiàn)原花青素的含量明顯高于其他水果，有利于增強(qiáng)卵巢癌患者對(duì)于伯類(lèi)耐藥細(xì)胞敏感性。這些研究都為卵巢癌耐藥機(jī)制、靶向治療等方面的研究擴(kuò)展新的思路。卵巢癌的高復(fù)發(fā)率也是導(dǎo)致其死亡率居高不下的重要原因。統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)初級(jí)腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和化療等治療后，仍有高達(dá)70%的患者存在復(fù)發(fā)可能。Wang等的運(yùn)用MB-WCX預(yù)處理了49例原發(fā)上皮性卵巢癌、21例經(jīng)6個(gè)月綜合治療后復(fù)發(fā)的卵巢癌、40例良性婦科腫瘤患者及40例健康體檢女性的血清樣本，運(yùn)用MALDI-TOF-MS分析獲得相應(yīng)指紋圖譜，以良性組及健康組作為對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)篩查惡性腫瘤特異蛋白。在原發(fā)組中發(fā)現(xiàn)8個(gè)差異蛋白質(zhì)峰高表達(dá)，根據(jù)其建立原發(fā)性卵巢癌診斷模型用于盲測(cè)的精確度為87.50%；而復(fù)發(fā)組中發(fā)現(xiàn)了10個(gè)差異蛋白高表達(dá)，2個(gè)差異蛋白低表達(dá)，其盲測(cè)時(shí)準(zhǔn)確性達(dá)88.90%以上。以上研究證明，運(yùn)用MALDI-TOF-MS及早發(fā)現(xiàn)含有高復(fù)發(fā)率表達(dá)蛋白的患者，從而進(jìn)行對(duì)癥適量的治療，在當(dāng)前臨床工作中具有必需性及可行性。。.問(wèn)題與展望雖然MALDI-TOF-MS顯示了很多強(qiáng)大的功能，但也面臨著一系列的挑戰(zhàn)，最突出的問(wèn)題就是如何進(jìn)一步提高M(jìn)ALDI檢測(cè)的靈敏度以及滿(mǎn)足蛋白質(zhì)組學(xué)研究高通量的需要。此外，疾病和健康對(duì)照在研究中樣本數(shù)量有限，疾病組大多數(shù)為中晚期癌癥患者，血清預(yù)處理的方法是大多通過(guò)使用磁珠和質(zhì)譜數(shù)據(jù)的分析，而不是分離出血清混合物樣品的真實(shí)構(gòu)成［37］。在無(wú)癥狀的早期癌癥患者的血液中蛋白質(zhì)或多肽的差異變化也許無(wú)法最大程度地發(fā)現(xiàn)異常［38］,特異性不高，因此取同一個(gè)體的多種體液進(jìn)行篩選從而確定最適合早期診斷和治療靶點(diǎn)的媒介日益顯現(xiàn)其重要性［39］。且研究［40］發(fā)現(xiàn)，癌癥患者在手術(shù)前的體液組成含量與手術(shù)后相比有明顯差別，故選擇手術(shù)前后體液進(jìn)行對(duì)比檢驗(yàn)，有助于觀察術(shù)后恢復(fù)，或提早準(zhǔn)備進(jìn)一步治療方案。另外不同學(xué)者實(shí)驗(yàn)結(jié)果中所得到的差異蛋白質(zhì)荷比往往有所不同，這可能主要是由于樣本選取標(biāo)準(zhǔn)、預(yù)處理方法、分析軟件、人為因素等不同所造成的［41］。因此有必要在未來(lái)的研究中加大規(guī)模、集中規(guī)范的進(jìn)行審查以及制定規(guī)范化的標(biāo)準(zhǔn)國(guó)]。最后，MALDI-TOF-MS還需進(jìn)一步改造為更低成本、更高效率的檢測(cè)儀器，作為可以用于臨床常規(guī)檢驗(yàn)加以推廣。[參考文獻(xiàn)]PuschW,KostrzewaM.ApplicationofMALDI-TOFMassSpectrometryinScreeningandDiagnosticResearch[J].CurrPharmDes,2005,11(20):2577-2591.VestalML.ModernMALDItime-of-flightmassspectrometry[J].JMassSpectrom,2009,44(3):303-17.VoortmanJ,PhamTV,KnolJC,etal.Predictionofoutcomeofnon-smallcelllungcancerpatientstreatedwithchemotherapyandbortezomibbytime-courseMALDI-TOF-MSserumpeptideprofiling[J].ProteomeSci,2009,7:34.MaurerK,EschrichK,SchellenbergerW,etal.OralbrushbiopsyanalysisbyMALDI-ToFMassSpectrometryforearlycancerdiagnosis[J].OralOncol,2013,49(2):152-6.MejiasJH,LuX,OsorioC,etal.AnalysisofWheatProlamins,theCausativeAgentsofCeliacSprue,UsingReversedPhaseHighPerformanceLiquidChromatography(RP-HPLC)andMatrix-AssistedLaserDesorptionIonizationTimeofFlightMassSpectrometry(MALDI-TOF-MS)[J].Nutrients,2014,6(4):1578-97.RanaA,MinzRW,AggarwalR,etal.AcomparativeproteomicstudyofserainpaediatricsystemiclupuserythematosuspatientsandinhealthycontrolsusingMALDI-OF-TOFandLCMS-Apilotstudy[J].PediatrRheumatolOnlineJ,2012,10(1):24.BryanRT,WeiW,ShimwellNJ,etal.Assessmentofhigh-throughputhigh-resolutionMALDI-TOF-MSofurinarypeptidesforthedetectionofmuscle-invasivebladdercancer[J].ProteomicsClinAppl,2011,5(9-10):493-503.SogawaK,Watanabe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