薄層色譜及其在藥物分析的應(yīng)用

會(huì)計(jì)學(xué)1薄層色譜及其在藥物分析的應(yīng)用1薄層色譜（Thinlinerchromatography,TLC）概況1.1薄層色譜分類(lèi)1.1.1按機(jī)理分類(lèi)：吸附薄層，分配薄層，離子交換薄層，凝膠薄層1.1.2按分離效能：經(jīng)典薄層，高效薄層（HPTLC）第1頁(yè)/共57頁(yè)

1.2.薄層色譜的特點(diǎn)

1.2.1.設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，快速。1.2.2.與紙色譜比較，斑點(diǎn)擴(kuò)散少，檢出靈敏度高10～100倍。1.2.3.可以使用腐蝕性顯色劑，如濃硫酸，濃鹽酸等。1.2.4.可以同時(shí)分析多個(gè)樣品，無(wú)交叉污染。1.2.5.流動(dòng)相選擇范圍大。1.2.6.為一次性板，對(duì)前處理要求不高。

第2頁(yè)/共57頁(yè)薄層色譜與高效液相色譜方法比較（1）比較項(xiàng)目薄層色譜準(zhǔn)確性相當(dāng)相當(dāng)重復(fù)性相當(dāng)相當(dāng)靈敏度相當(dāng)相當(dāng)特效性相當(dāng)相當(dāng)有效分析時(shí)間（少）較長(zhǎng)較短有效分析時(shí)間（多）較短較長(zhǎng)流動(dòng)相流量控制不是關(guān)鍵是關(guān)鍵檢測(cè)波長(zhǎng)下溶劑的影響無(wú)大對(duì)全部被分離組分的檢測(cè)方便局限性大吸附劑再生不要求關(guān)鍵第3頁(yè)/共57頁(yè)薄層色譜與高效液相色譜方法比較（2）時(shí)間有效利用方便方便對(duì)污染物抗受力顆粒物質(zhì)無(wú)影響影響大腐蝕性物質(zhì)無(wú)影響影響大不可逆吸附物質(zhì)無(wú)影響有影響自動(dòng)樣品處理可以可以色譜后衍生方便、便宜受限、昂貴操作成本低高在線光譜圖記錄可以可以進(jìn)一步發(fā)展?jié)摿Υ筝^小第4頁(yè)/共57頁(yè)2.薄層色譜吸附劑2.1硅膠（Silicage）：具有表面活性，略帶酸性。硅膠G,硅膠H,硅膠GF2542.2氧化鋁（Aluminumoxide）：具有表面活性，略帶堿性（pH8～10）；酸性（pH4）；中性（pH7～7.5）2.3纖維素(Cellulose)：是一種天然多糖類(lèi)，，主要用于液-液分配薄層色譜擔(dān)體，其固定液一般就是從環(huán)境中吸附的水，通常不需加黏結(jié)劑。纖維素勻漿的配制：纖維素與水以1：5～6的比例混合均勻，即可涂布。纖維素薄層干燥后的厚度只有涂布厚度的一半，2.4硅藻土(Diatomaceous)：中性吸附劑，主要用于分配薄層色譜中的擔(dān)體。主要成分使硅膠。用時(shí)需要純化。2.5葡聚糖凝膠（Sephadex）：鋪板：以適量溶劑，如水、二甲亞砜或乙二醇進(jìn)行溶脹，薄層厚度0.4～1.0mm。配制參數(shù)見(jiàn)下表：第5頁(yè)/共57頁(yè)葡聚糖凝膠配制參數(shù)凝膠型號(hào)（粒度25um）凝膠量(g/100ml)最少溶脹時(shí)間（h）室溫沸水浴SephadexG-5010.531SephadexG-757.5242SephadexG-1006.5723SephadexG-1504.8723SephadexG-2004.5723第6頁(yè)/共57頁(yè)2薄層吸附劑2.6聚酰胺：屬有機(jī)薄層材料，常用的時(shí)聚己內(nèi)酰胺（聚酰胺6）和聚十一酰胺（聚酰胺11）適合分離含酚羥基、羧基、氨基酸等結(jié)構(gòu)和基團(tuán)的化合物，選擇性較高。聚酰胺板制備：16g聚酰胺粉末與65ml蒸餾水，充分振動(dòng)；或16g聚酰胺粉末與65ml甲醇混勻。薄層板于室溫下干燥。第7頁(yè)/共57頁(yè)注意：A剛涂布的薄層板不能立即活化。B不是活度越高越好。如硅膠板當(dāng)含水量為0時(shí)，活度太強(qiáng)。反之，當(dāng)硅膠含水高于17%，氧化鋁含水高于6%時(shí)，則活性太低，分離效率低。下表是活性級(jí)別與含水量的關(guān)系。第8頁(yè)/共57頁(yè)活性級(jí)別與含水量的關(guān)系

布羅克曼活性級(jí)活性強(qiáng)弱薄層材料含水量（W/W%）硅膠氧化鋁1強(qiáng)002533156425105弱3815第9頁(yè)/共57頁(yè)吸附劑選擇原則6.1.1酸性物質(zhì)一般用酸性或中性，如硅膠，酸性或中性氧化鋁。6.1.2極性大的物質(zhì)用低活性吸附劑，反之，則用高活性吸附劑。6.1.3常用的吸附劑吸附強(qiáng)弱順序：硅膠》氧化鋁》硅藻土（適合分離極性物質(zhì)）第10頁(yè)/共57頁(yè)3.載板

3.1.載板要求：

化學(xué)惰性

一定的強(qiáng)度

表面光滑、平整

厚度均勻

價(jià)格便宜

第11頁(yè)/共57頁(yè)3.載板3.2.載板種類(lèi)：玻璃板聚酯箔鋁箔3.3.薄層預(yù)制板第12頁(yè)/共57頁(yè)4薄層色譜點(diǎn)樣點(diǎn)樣的一般要求：溶劑、點(diǎn)樣量、點(diǎn)樣器、原點(diǎn)大小

4.1手工點(diǎn)樣：定容毛細(xì)管（1μl～5μl）CamagCo,DrummondScentifinCo4.2自動(dòng)點(diǎn)樣：手工點(diǎn)樣缺點(diǎn)：精度差，時(shí)間長(zhǎng)，不易操作。噴樣儀：Camag公司生產(chǎn)，為條帶狀噴樣系統(tǒng)，基本實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。優(yōu)點(diǎn)：適合于較大量稀樣品溶液的噴加，通過(guò)加大點(diǎn)樣量降低了檢測(cè)限。條狀色譜圖更方便于狹逢式掃描，系統(tǒng)誤差小。自動(dòng)點(diǎn)樣儀：Camag生產(chǎn)，是一種適合定量分析的全自動(dòng)點(diǎn)樣儀，液既可以點(diǎn)點(diǎn)狀斑點(diǎn)，也可以點(diǎn)條狀斑點(diǎn)。第13頁(yè)/共57頁(yè)5薄層色譜的展開(kāi)5.1多次展開(kāi)：目的是增加有效分離距離。經(jīng)多次展開(kāi)后的Rf值可由下式計(jì)算：Rfn=1-(1-Rf)n5.2分步展開(kāi)：幾種展開(kāi)劑從低極性到高極性依次展開(kāi)。5.3連續(xù)展開(kāi)：使流動(dòng)相沿薄層連續(xù)流動(dòng)。目的是增加有效分離距離。由于沒(méi)有展開(kāi)前沿，故需對(duì)照物做參照。

5.4二維展開(kāi)：沿2個(gè)垂直的方向分別展開(kāi)。方法：將被分離的樣品點(diǎn)于薄層板的一個(gè)角上，展開(kāi)到一定距離后，將薄層板取出，揮干溶劑，再將薄層板沿原方向垂直方向展開(kāi)。5.5離心展開(kāi)：大大提高分離速度，用于制備色譜。5.6梯度洗脫展開(kāi)和梯度薄層5.7多維展開(kāi)、加壓展開(kāi)、控溫展開(kāi)第14頁(yè)/共57頁(yè)薄層色譜的展開(kāi)第15頁(yè)/共57頁(yè)

6.展開(kāi)劑選擇

關(guān)于溶劑系統(tǒng)的選擇和分類(lèi)方法：溶劑強(qiáng)度法、三角優(yōu)化法、均勻設(shè)計(jì)等基本原則：相似相溶原則；由簡(jiǎn)到繁，由單元到多元。6.1展開(kāi)劑選擇要點(diǎn)6.1.1增加溶劑強(qiáng)度，使Rf值增大，但可能降低分離能力，反之亦然。6.1.2若展開(kāi)劑中較強(qiáng)組分得體積比小于5%或大于50%，選擇性是最大的有利于溶質(zhì)與展開(kāi)劑組分的選擇性相互作用。6.1.3用乙醚或甲醇代替展開(kāi)劑中的一種較強(qiáng)組分，可由于形成氫鍵爾改善選擇性。6.1.4若出現(xiàn)斑點(diǎn)拖尾，向展開(kāi)劑中加少量水，或使用脫活薄層，有利于改善分離。第16頁(yè)/共57頁(yè)6.展開(kāi)劑選擇

6.2用多元展開(kāi)劑時(shí)注意事項(xiàng)6.2.1多元溶劑系統(tǒng)作展開(kāi)劑時(shí)，若溶劑組分極性相差較大，且極性大的組分所占比例又很小時(shí)，易在展開(kāi)時(shí)出現(xiàn)溶劑脫混現(xiàn)象。其原因是吸附劑對(duì)溶劑吸附程度不同，對(duì)極性組分易吸附。6.2.2當(dāng)各組分揮發(fā)性不同時(shí)，且比例相差較大時(shí)，在飽和過(guò)程中易發(fā)生比例變化第17頁(yè)/共57頁(yè)6.3邊緣效應(yīng)及其克服方法

6.3.1定義：點(diǎn)于同一薄層板上同一物質(zhì)的斑點(diǎn)，在色譜展開(kāi)過(guò)程中，靠近薄層板邊緣處斑點(diǎn)的Rf值與中心區(qū)域斑點(diǎn)的Rf值有所不同。第18頁(yè)/共57頁(yè)6.3.2凹形邊緣效應(yīng)：

○○○○○○○·······第19頁(yè)/共57頁(yè)6.3.2凹形邊緣效應(yīng)：被吸附劑吸附較弱的弱極性溶劑或沸點(diǎn)較低的溶劑，在薄層邊緣易揮發(fā)，又因薄層背面蒸汽較稀薄，致使邊緣蒸汽向背面流動(dòng)，而邊緣處蒸發(fā)掉的溶劑由溶劑貯存器得到補(bǔ)充，邊緣與中心相比，有更多展開(kāi)劑沿邊緣移動(dòng)，推動(dòng)溶質(zhì)斑點(diǎn)向更高處前進(jìn)。第20頁(yè)/共57頁(yè)

○○○○○○○········6.3.3凸形邊緣效應(yīng)第21頁(yè)/共57頁(yè)6.3.3凸形邊緣效應(yīng)由于邊緣處溶劑蒸發(fā)后溶劑的補(bǔ)充，不僅來(lái)源于貯存器，且從中心向邊緣移動(dòng)，點(diǎn)的移動(dòng)向邊緣偏移（葉脈形斑點(diǎn)也是如此）。第22頁(yè)/共57頁(yè)6.3.4輻射狀邊緣效應(yīng)：

。。。。。。。

·······第23頁(yè)/共57頁(yè)6.3.4輻射狀邊緣效應(yīng)：化合物展開(kāi)時(shí)，除向上移動(dòng)外，尚橫向往外移動(dòng)。化合物越大，往外移動(dòng)的距離也越大，原點(diǎn)越靠近邊緣，往外移動(dòng)也越明顯第24頁(yè)/共57頁(yè)6.3.5克服措施：1.用小體積層析槽或進(jìn)行預(yù)飽和或低溫下展開(kāi)。2.在層析槽內(nèi)壁貼上浸濕展開(kāi)劑的濾紙條。3.采用小板或高效板。4.更換展開(kāi)系統(tǒng)。5在展開(kāi)槽與玻璃蓋交接處涂抹凡士林，以保持密封。

第25頁(yè)/共57頁(yè)

7.薄層色譜的記錄7.1描圖就是用鉛筆將薄層板上的斑點(diǎn)的形狀、大小、相對(duì)位置記錄下來(lái)的一種方法，具有方便、快速的特點(diǎn)，缺點(diǎn)是過(guò)于簡(jiǎn)單、抽象，也不夠直觀和準(zhǔn)確。7.2掃描以選擇一至三個(gè)波長(zhǎng)，對(duì)展開(kāi)軌跡從原點(diǎn)開(kāi)始掃描直至展開(kāi)前沿，記錄掃描曲線。具有快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，但對(duì)無(wú)紫外吸收或在所選擇的波長(zhǎng)處無(wú)吸收的斑點(diǎn)則無(wú)吸收峰。且也不夠直觀。第26頁(yè)/共57頁(yè)7.3薄層照相目前普遍采用，在中、西新藥研究中均要求附薄層照片。7.3.1薄層照片的要求：清晰、真實(shí)還原色彩、照片大小適宜7.3.2濾色鏡的選擇原理拍攝照片時(shí)，當(dāng)光源的色溫與膠卷的色溫匹配時(shí)，色彩能得到真實(shí)還原，否則就應(yīng)該選擇合適的濾色鏡來(lái)升高或降低光源的色溫使兩者匹配。膠卷按色溫不同分為日光型和燈光型，宜分別在5400±1200K與3600±700K內(nèi)使用。常用來(lái)升高色溫的濾光鏡有柯達(dá)雷登80系列和82系列，前者升幅較大，后者用來(lái)小幅升溫。常用來(lái)降低色溫的濾光鏡有柯達(dá)雷登85系列和81系列，前者降幅較大，后者降幅小。第27頁(yè)/共57頁(yè)薄層色譜照相7.3.3日光下拍攝：一般在室外光線充足的地方，最好配有自動(dòng)測(cè)光儀，距離30～50cm，調(diào)準(zhǔn)焦距，測(cè)光，以快門(mén)線啟動(dòng)快門(mén)。一般不需濾光鏡。7.3.5紫外燈下拍攝：紫外燈下藍(lán)紫色偏重，色溫較高，宜用日光型膠片，但光源色溫仍偏高，應(yīng)選用降低色溫的濾光鏡，如雷登85系列（A、B、C三種類(lèi)型）。判斷方法：照片色彩偏藍(lán)，說(shuō)明光源色溫偏高，照片偏紅，則光源色溫偏低。

第28頁(yè)/共57頁(yè)7.3.6輔助設(shè)備近攝鏡為使實(shí)物在拍出的照片中所占比例適宜，有時(shí)用到。UV-鏡可以濾除紫外線?？扉T(mén)線可以消除震動(dòng)，在拍攝紫外照片時(shí)可以不必長(zhǎng)時(shí)間用手按住快門(mén)。三腳架保證相機(jī)穩(wěn)定，拍攝的照片大小一致。第29頁(yè)/共57頁(yè)7.3.6曝光方法與時(shí)間的確定日光照片與正常照相相似。紫外光下拍攝薄層照片應(yīng)在暗室中進(jìn)行，可將薄層板置于兩盞紫外光燈之間，使薄層板各個(gè)部分所照光線均勻，采用自動(dòng)曝光，曝光時(shí)間一般5～30秒。不熟悉拍攝技巧時(shí)可采用同一張薄層板分別以10、20、30秒曝光，選最佳者。第30頁(yè)/共57頁(yè)8色譜技術(shù)樣品預(yù)處理方法

8.1樣品預(yù)處理的目的概述8.1.1.使待測(cè)物質(zhì)有效的從樣品基質(zhì)中釋放出來(lái)。8.1.2.除去雜志，純化樣品。8.13.富集濃縮樣品或進(jìn)行衍生化。色譜分析的試樣形式及所用溶劑都應(yīng)符合一定的要求。TLC的樣品常以溶液狀態(tài)點(diǎn)于薄層板上，應(yīng)易揮發(fā)，通常選用乙醇、甲醇，或兩種溶劑與其他溶劑的混合溶劑，在定量研究時(shí)一般不用乙醚、正丁醇或氯仿。第31頁(yè)/共57頁(yè)8.2物理的分離與濃縮技術(shù)8.2.1過(guò)濾：商品濾膜孔徑在幾十微米至0.025微米之間，常用的為0.05和0.2微米兩種。各種濾膜對(duì)溶劑的適用性見(jiàn)下表。第32頁(yè)/共57頁(yè)濾膜對(duì)溶劑的適用性

溶劑纖維素膜聚四氟乙烯膜聚酰胺膜乙腈、甲醇、丙醇、四氫呋喃、二氯乙烷、二氯甲烷不適用適用適用氯仿、環(huán)乙烷、己烷、庚烷適用適用適用水、鹽酸（1mol/L）適用難以通過(guò)適用氫氧化鈉（5mol/L）不適用難以通過(guò)適用第33頁(yè)/共57頁(yè)8.2物理的分離與濃縮技術(shù)8.2.1超濾：膜材：醋酸纖維素、聚酰胺、聚砜。除去大分子物質(zhì)，不改變pH值，不稀釋試樣，適合小樣，尤其是對(duì)酸堿不穩(wěn)定的化合物樣品。在藥物分析中常用于血漿中游離藥物的測(cè)定。缺點(diǎn)是待測(cè)物質(zhì)可能被結(jié)合在濾膜上而影響回收率。也不適合能與蛋白質(zhì)或大分子結(jié)合的藥物。第34頁(yè)/共57頁(yè)8.2.2沉淀分離法

沉淀法是測(cè)定血清、血漿、全血、組織勻漿等生物樣本中的藥物時(shí)經(jīng)常采用的樣品預(yù)處理技術(shù)，既可以獨(dú)立使用，也可以與萃取等其他技術(shù)配合使用。常用的有：酸沉淀：常用三氯醋酸、高氯酸。其作用是在低于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的條件下，蛋白質(zhì)陽(yáng)離子與沉淀劑陰離子形成難溶性鹽而沉淀。濃度一般為5%～20%。注意：不適合酸不穩(wěn)定成分；當(dāng)上清液直接進(jìn)樣時(shí)（HPLC），應(yīng)考慮酸對(duì)流動(dòng)相和色譜柱的影響，最好用緩沖溶液作流動(dòng)相。與水混溶的有機(jī)溶劑：常用的是甲醇、乙醇、乙腈和丙酮，沉淀機(jī)理是使蛋白質(zhì)脫水而沉淀。第35頁(yè)/共57頁(yè)8.3吸附和吸收分散在液體或蒸汽介質(zhì)中的溶質(zhì)可以利用吸附或吸收的方法分離出來(lái)。機(jī)理：溶質(zhì)與吸附劑間的范德華力、氫鍵力的作用。分為物理吸附和化學(xué)吸附。蒸餾：在氣相色譜中，適合于被測(cè)組分為揮發(fā)性物質(zhì)，目的是除去非揮發(fā)性成分。如在分析含揮發(fā)性成分的中藥材或中成藥時(shí)，常常采用這種方法。第36頁(yè)/共57頁(yè)8.4溶劑的揮發(fā)與濃縮

對(duì)于液體樣品或經(jīng)過(guò)處理后得到的液體樣品，如果其濃度在檢測(cè)限以下往往需要對(duì)樣品溶液進(jìn)行濃縮處理。其原則是不損失或破壞待分析物質(zhì)，同時(shí)考慮安全性與經(jīng)濟(jì)性。8.4.1自然揮散或在氮?dú)饬飨麓蹈伞榧涌鞊]發(fā)速度，有時(shí)可以加熱。本法適合小體積樣品和揮發(fā)性溶劑。如固相萃取的溶液。8.4.2減壓蒸發(fā)。本法具有溫度低、速度快的特點(diǎn)，適合熱不穩(wěn)定樣品。8.4.3冷凍干燥。適合受熱易分解樣品。第37頁(yè)/共57頁(yè)8.5溶劑萃取從固體基質(zhì)或溶液中萃取待測(cè)組分。是溶劑進(jìn)入固體基質(zhì)溶解，通過(guò)浸潤(rùn)、溶解、置換、擴(kuò)散四個(gè)過(guò)程，使待測(cè)成分從固體基質(zhì)中分散與溶劑中。常用的有加熱回流法（索氏提?。┖蜐B漉法、超聲波處理法、微波處理法。索氏提取法提取效率高，但不適合熱不穩(wěn)定性成分。超聲波處理法對(duì)熱不穩(wěn)定性樣品較好。以上方法均應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)考察，如提取時(shí)間、次數(shù)、基質(zhì)顆粒大小、超聲波頻率、溶劑、溫度、pH值等。第38頁(yè)/共57頁(yè)8.5.1液-液萃取是利用待測(cè)組分與樣品中干擾雜質(zhì)在互不相溶的兩種溶劑中的分配系數(shù)不同而實(shí)現(xiàn)樣品的純化，提高分析方法的選擇性。方法：溶劑選擇：常用溶劑有氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚等。第39頁(yè)/共57頁(yè)8.5.1.1萃取溶劑選擇原則①保證待測(cè)組分被充分萃取進(jìn)溶劑，有具有很好的選擇性，是能完全溶解待測(cè)組分中藥物及其代謝產(chǎn)物的所有溶劑中極性最弱的一種。②應(yīng)選擇低沸點(diǎn)的溶劑，便于濃縮試樣。③選用低黏度溶劑，有利于與樣品基質(zhì)的充分接觸，提高萃取效率。④萃取溶劑在操作pH下要有足夠穩(wěn)定性。⑤PH的控制：通過(guò)調(diào)節(jié)pH值，使待測(cè)組分至少95%以非離子化狀態(tài)存在。第40頁(yè)/共57頁(yè)

離子對(duì)萃取與衍生化萃取離子對(duì)萃?。簩?duì)于強(qiáng)極性化合物或兩性化合物的萃取，需要用離子對(duì)技術(shù)使強(qiáng)極性化合物的離子與具有相反電荷的反離子形成離子對(duì)，這種離子對(duì)很容易被弱極性的有機(jī)溶劑萃取。衍生化萃?。簩?duì)于不溶于有機(jī)溶劑的化合物，可以通過(guò)衍生化方法在樣品基質(zhì)內(nèi)將其轉(zhuǎn)化成能溶于有機(jī)溶劑的衍生物，然后再進(jìn)行萃取。第41頁(yè)/共57頁(yè)8.5.2固相萃?。╯olid-phaseextraction,SPE）優(yōu)點(diǎn)：安全性，可以避免使用毒性較強(qiáng)或易燃的溶劑。無(wú)乳化現(xiàn)象，萃取回收率高，重現(xiàn)性好。操作簡(jiǎn)便，快速，可同時(shí)進(jìn)行批量樣品的預(yù)處理。由于可選擇的固相萃取材料種類(lèi)很多適用面廣

第42頁(yè)/共57頁(yè)固相萃取劑種類(lèi)8.5.2.1吸附劑經(jīng)典吸附劑：氧化鋁，硅膠新型吸附劑：多孔碳，石墨碳8.5.2.2大孔吸附樹(shù)脂8.5.2.3離子交換樹(shù)脂：將離子交換樹(shù)脂引入聚四氟乙烯（PTFE）薄膜，得到離子交換樹(shù)脂固相萃取劑。8.5.2.4鍵合硅膠：鍵合非極性基團(tuán)：C1、C2、C8、C18、環(huán)己烷、苯基等非極性或弱極性基團(tuán)。鍵合極性基團(tuán)：NH2、CN2、OH鍵合離子性基團(tuán)：-COOH、-SO3H第43頁(yè)/共57頁(yè)3薄層板的活化處理固定相活化溫度活化時(shí)間硅膠110℃1h纖維素105℃20～30min氧化鋁110℃30min硅藻土110℃30min聚酰胺60～80℃30min不同材料的薄層板的活化條件第44頁(yè)/共57頁(yè)9定量薄層色譜方法的認(rèn)證與方法學(xué)評(píng)價(jià)

9.1認(rèn)證實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)9.2主要認(rèn)證參數(shù)9.2.1方法的選擇性：是指該方法在待測(cè)組分存在的樣品介質(zhì)中含有雜質(zhì)組分的情況下，定性檢測(cè)此組分的能力。當(dāng)待測(cè)組分在0.3～0.7時(shí)，掃描峰拖尾因子在0.9～1.1之間時(shí)，分離度應(yīng)大于1.0。9.2.2待測(cè)組分在分析過(guò)程中的穩(wěn)定性：應(yīng)注意樣品在采樣、樣品預(yù)處理、儲(chǔ)存、展開(kāi)、薄層板上的行為等過(guò)程進(jìn)行研究，應(yīng)保證樣品在此過(guò)程中的穩(wěn)定性。9.2.3線性及其范圍：薄層色譜的線性范圍應(yīng)在待測(cè)組分檢出量的20%～120%。第45頁(yè)/共57頁(yè)9.2主要認(rèn)證參數(shù)9.2.4靈敏度：在考察線性范圍時(shí)，其靈敏度也同時(shí)得到驗(yàn)證。9.2.5精密度：檢驗(yàn)一系列結(jié)果的一致性程度，一般用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示。重現(xiàn)性（）

再現(xiàn)性（）9.2.5.1重復(fù)性：是指在相同測(cè)定條件下方法的精密度，往往指同一操作者，使用同一儀器設(shè)備，同一批號(hào)在短時(shí)間內(nèi)測(cè)定結(jié)果的一致性。薄層色譜的要求小于3.0%。第46頁(yè)/共57頁(yè)9.2.5.2回收率實(shí)驗(yàn)

一般要求回收率在95%～105%，《5%注意：①在線性范圍內(nèi)②對(duì)照品加入量與樣品量一般1：1③不能直接加對(duì)照品到已處理好的供試品溶液中4.3檢出限，可檢測(cè)限：考查靈敏度4.4穩(wěn)定性考查：確定合適的測(cè)定時(shí)間范圍第47頁(yè)/共57頁(yè)10薄層掃描定量

10.1原理（略）10.2薄層掃描方法：反射式，透射式，熒光式（253.6，313.1，334.2，365.0，404.7，435.8，546.1，578.0）nm10.3薄層掃描方式：直線掃描（規(guī)則圓形或條狀斑點(diǎn)）鋸齒掃描（直徑小于3mm的大斑點(diǎn)，不規(guī)則）飛點(diǎn)掃描10.