免疫檢驗第十四章細胞因子的檢查優(yōu)秀課件

免疫檢驗第十四章細胞因子的檢查第一頁，共四十三頁，2022年，8月28日在免疫細胞分化發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、造血功能中均發(fā)揮重要作用，并參與人體多種生理和病理過程的發(fā)生和發(fā)展。細胞因子由活化的免疫細胞及部分基質(zhì)細胞分泌的、主要介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)的具有高活性、多功能的小分子蛋白質(zhì)。細胞粘附分子是一類介導(dǎo)細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)間粘附作用的膜表面糖蛋白。在胚胎的發(fā)育和分化、正常組織結(jié)構(gòu)的維持、炎癥與免疫應(yīng)答、傷口修復(fù)、凝血與血栓形成、腫瘤轉(zhuǎn)移等過程中具有重要作用。第二頁，共四十三頁，2022年，8月28日一、細胞因子的共同特性與作用方式與相應(yīng)受體特異性結(jié)合才能發(fā)揮作用。細胞因子可以旁分泌、自分泌或內(nèi)分泌的方式發(fā)揮作用。第三頁，共四十三頁，2022年，8月28日CKs的共同特性1.高效性：靶細胞-受體；高親和力結(jié)合2.多效性：一CK多靶多效3.重疊性：多CK一靶一效4.協(xié)同性：一CK強化它CK5.拮抗性：一CK抑制它CK6.網(wǎng)絡(luò)性：多CK互相平衡第四頁，共四十三頁，2022年，8月28日肥大細胞胸腺細胞BIL-4

多效性pleiotropy活化、增殖、分化增殖增殖第五頁，共四十三頁，2022年，8月28日IL-2、IL-4、IL-5IL-4+IL-5B細胞IL-4IFN-g

拮抗性antagonism

重疊性redundancy協(xié)同性synergy均有刺激B細胞增殖的功能更有效地誘導(dǎo)IgE類別轉(zhuǎn)換IFN-g阻斷IL-4誘導(dǎo)類別轉(zhuǎn)化的作用，IL-4抑制IFN-gBBB第六頁，共四十三頁，2022年，8月28日三、T細胞相關(guān)細胞因子與功能（一）TH1型細胞因子：介導(dǎo)細胞免疫

1.IFN-γ2.IL-123.IL-184.IL-2（二）TH2型細胞因子：介導(dǎo)體液免疫主要分泌IL-4、IL-5等（三）TH3型細胞因子：免疫調(diào)節(jié)與免疫抑制

1.TGF-:腫瘤早晚期

2.IL-10（四）TH17型細胞因子：介導(dǎo)炎癥反應(yīng)

1.IL-172.TNF3.IL-23

第七頁，共四十三頁，2022年，8月28日第二節(jié)趨化因子及趨化因子受體的特性與功能趨化因子：8～12kD已發(fā)現(xiàn)50余個成員根據(jù)結(jié)構(gòu)中C的位置、排列方式和數(shù)量,分C、CC、CXC、CXXXC四類。是細胞因子中唯一作用于G蛋白偶聯(lián)受體的超家族成員。由白細胞與造血微環(huán)境中的基質(zhì)細胞分泌，具有對中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞、嗜酸性細胞和嗜堿性細胞的趨化和激活活性。第八頁，共四十三頁，2022年，8月28日趨化因子的生物學特性1、趨化移行效應(yīng)：趨化單核細胞向炎癥部位移行2、不但能使免疫細胞向感染部位移行，也可促使天然免疫應(yīng)答向獲得性免疫應(yīng)答的轉(zhuǎn)變。3、趨化因子及其受體在T、B細胞的分化發(fā)育中起重要作用。4、不同極化的T淋巴細胞表達不同的趨化因子受體。第九頁，共四十三頁，2022年，8月28日第三節(jié)細胞粘附分子與細胞粘附分子受體的特性與功能分類5、可溶性粘附分子1、整合素家族2、免疫球蛋白超家族3、選擇素家族4、鈣粘蛋白家族第十頁，共四十三頁，2022年，8月28日整合素家族最初是因此類粘附分子主要介導(dǎo)細胞與細胞外基質(zhì)的粘附，使細胞得以附著而形成整體而得名。

1、整合素家族第十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日

免疫系統(tǒng)以及神經(jīng)系統(tǒng)和其它生物學系統(tǒng)中，許多參與抗原識別或細胞間相互作用的分子，具有與Ig相似的結(jié)構(gòu)特征，即具有1個或多個Ig樣或樣結(jié)構(gòu)域。這些種類繁多、分布廣泛、識別功能多樣的分子稱之為免疫球蛋白超家族。

2、免疫球蛋白超家族第十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日選擇素家族最初被稱為外源凝集素細胞粘附分子家族（LEC-CAM家族）。3、選擇素家族第十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日第十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日

鈣粘蛋白是一類鈣離子依賴的粘附分子家族。鈣粘蛋白在維持實體組織的形成以及在生長發(fā)育過程中細胞選擇性的相互聚集、重排有重要作用。4、鈣粘蛋白家族第十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日

一般只有胞外區(qū)，同樣具有粘附活性，檢測可溶性粘附分子的增高水平可作為監(jiān)測某些疾病狀態(tài)的指標。5、可溶性粘附分子第十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日淋巴細胞活化的輔助信號分子介導(dǎo)白細胞與血管內(nèi)皮細胞粘附介導(dǎo)淋巴細胞歸巢二、粘附分子的功能第十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日

輔助受體和輔助活化信號是指免疫細胞在接受抗原刺激的同時，還必須有輔助的受體接受輔助活化信號才能被活化。

最為常見的提供輔助刺激信號的T細胞上粘附分子結(jié)合抗原提呈細胞（APC）上相應(yīng)粘附分子有：CD4/MHCⅡ類分子、CD8/MHCⅠ類分子、CD28/CD80及CD86、CD2/CD58、LFA-1/ICAM-1等。T細胞識別APC細胞提呈的抗原后，如缺乏粘附分子提供的輔助刺激信號，則T細胞的應(yīng)答處于無能狀態(tài)。（一）淋巴細胞活化的輔助信號分子第十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日（二）介導(dǎo)白細胞與血管內(nèi)皮細胞粘附第十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日淋巴細胞歸巢是淋巴細胞的定向游動，包括淋巴干細胞向中樞淋巴器官歸巢，成熟淋巴細胞向外周淋巴器官歸巢，繼而經(jīng)淋巴管、胸導(dǎo)管進入血液進行淋巴細胞再循環(huán)，以及淋巴細胞向炎癥部位滲出。（三）介導(dǎo)淋巴細胞歸巢第二十頁，共四十三頁，2022年，8月28日第四節(jié)臨床常用的測定方法生物學測定法免疫學測定法第二十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日

1.基于DNA檢測的分子生物學測定法：

DNA擴增法

RNA印跡法原位雜交法核酸酶保護分析

2.生物活性測定法

生物學測定法分類第二十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日根據(jù)細胞因子特定的生物學活性,應(yīng)用相應(yīng)的指示系統(tǒng),同時與標準品對比測定,從而得知樣品中細胞因子的活性水平,一般以活性單位(U/ml)表示生物活性測定法原理有助于細胞因子檢測的活性作用包括有助于細胞因子檢測的活性作用刺激細胞增殖或集落形成的活性維持細胞生長和存活的特性抑制細胞生長或破壞細胞的效應(yīng)促進細胞趨化或抗病毒作用第二十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日敏感性較高特異性不高操作繁瑣易受干擾生物學活性測定方法學評價第二十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日免疫學測定法ELISA流式細胞分析法酶聯(lián)免疫斑點試驗（enzymelinkedimmunospot,ELISPOT）第二十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日1.雙抗體夾心法2.雙位點一步法一、ELISA方法標本：1.血清、血漿、關(guān)節(jié)液、胸腔液、腦脊液、腹腔液2.細胞體外培養(yǎng)后的培養(yǎng)上清液第二十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日敏感性偏低不能判斷細胞因子的生物學活性。ELISA特異、簡便易于推廣和標準化等優(yōu)點可同時檢測大量標本且試驗廢棄物便于處理細胞因子測定的首選方法優(yōu)點缺點第二十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日二、流式細胞分析法1．分離和培養(yǎng)待檢細胞2．細胞固定、破膜3．封閉非特異性結(jié)合位點4．染色與分析基本步驟細胞內(nèi)細胞因子的測定：第二十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日細胞表面的粘附分子或細胞因子受體？區(qū)分不同分泌特性的細胞亞群：

Th1細胞IFN-γTh2細胞IL-4

第二十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日三、酶聯(lián)免疫斑點試驗(enzymelinkedimmunospot,ELISPOT)第三十頁，共四十三頁，2022年，8月28日1個斑點代表1個細胞因子分泌細胞，斑點的顏色深淺程度與細胞分泌的細胞因子量相關(guān)?；驹鞥LISPOT第三十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日ELISPOT方法學評價優(yōu)點：特異性高操作簡便、快速，無需依賴細胞株影響因素較少且易控制，重復(fù)性好，方法容易標準化。缺點：所測定的只是細胞因子的蛋白含量，與其生物活性不一定呈正比結(jié)果與所用的抗體來源及親和力有很大的關(guān)系敏感性相對較低標本中細胞因子的可溶性受體，會影響特異性抗體對細胞因子的結(jié)合第三十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日四、其他檢測技術(shù)偏振熒光檢測技術(shù)激光共聚焦顯微鏡發(fā)光技術(shù)免疫組織化學技術(shù)第三十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日第五節(jié)

細胞因子與細胞粘附分子測定的臨床應(yīng)用細胞因子的測定主要應(yīng)用于：特定疾病的輔助診斷機體免疫狀態(tài)的評估臨床疾病治療效果的監(jiān)測和指導(dǎo)用藥疾病預(yù)防第三十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日一、臨床應(yīng)用原則

細胞因子和粘附分子的異質(zhì)性、功能交叉性和多樣性、來源的復(fù)雜性和組織細胞的非特異性，決定了在進行這些分子檢測時，必須對方法選擇和結(jié)果判斷作出綜合考慮。第三十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日細胞因子的檢測方法多種多樣，各有利弊。高敏感性方法：特異性的降低、廢棄物難處理活性測定方法：定性試驗基因分析法：利于細胞內(nèi)定位分析、操作煩瑣（一）方法的聯(lián)合應(yīng)用第三十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日常用臨床標本：抗凝全血并分離獲得單個核細胞。血清或血漿炎癥局部細胞因子的水平：局部分泌液細胞因子或粘附分子的細胞內(nèi)定位檢測：相應(yīng)細胞相應(yīng)細胞因子的基因和mRNA表達：相應(yīng)細胞療效觀察和預(yù)后判斷：疾病急性期和恢復(fù)期雙份標本進行動態(tài)觀測免疫熒光染色和流式細胞分析：注意待檢細胞的活性和狀態(tài)，以保證結(jié)果的特異性（二）標本的適當選取第三十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日意義：舉例：

T細胞、巨噬細胞和上皮樣細胞分泌相應(yīng)細胞因子的功能：IL-1、IL-2、IFN-γ和GM-CSFTh1/Th2細胞平衡狀態(tài)：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ（三）細胞因子的聯(lián)合檢測第三十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日二、特定疾病診斷的輔助指標（一）細胞因子檢測在特定疾病診斷中的意義感染性疾病、免疫炎癥、移植排斥反應(yīng)：TNF、IL-1、IL-6、IFN-γ肝臟損傷的兩種炎癥介質(zhì)：TNF、IL-6活動性結(jié)核：IL-4↑，IFN-γ及IL-2↓結(jié)核性胸膜炎：

IFN-γ及IL-2↑,IL-4↓類風濕關(guān)節(jié)炎：TNF、IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1↑潰瘍性結(jié)腸炎：IL-15↑哮喘：IL-5↑第三十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日（二）粘附分子檢測在特定疾病診斷中的意義E-鈣粘素：表達缺失，提示胃腺癌及其分化程度的早期輔助診斷；突變與動脈粥樣硬化有關(guān)。CD44：高表達，提示腫瘤轉(zhuǎn)移第四十頁，共四十三頁，2022年，8月28日三、評估機體的免疫狀態(tài)、判斷治療效果及預(yù)后TNF-α：自身免疫性疾病GM-CSF：血液病IFN-γ：腫瘤。

第四十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日1．細胞因子和細胞粘附分子的特性是什么？可分為幾類？2．細胞因子生物活性測定法的種類，各用于哪些細胞因子的檢測，主要優(yōu)缺點？3．ELISPOT的原理、用途、與ELISA的異