GB 15193.20-2014食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)體外哺乳類細(xì)胞TK基因突變?cè)囼?yàn)

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB1519320—2014

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食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

體外哺乳類細(xì)胞TK基因突變?cè)囼?yàn)

2014-12-24發(fā)布2015-05-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)發(fā)布

國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)

GB1519320—2014

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前言

本標(biāo)準(zhǔn)代替基因突變?cè)囼?yàn)

GB15193.20—2003《TK》。

本標(biāo)準(zhǔn)與相比主要變化如下

GB15193.20—2003,:

標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)體外哺乳類細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)

———“TK”;

修改了范圍

———;

增加了術(shù)語(yǔ)和定義

———;

修改了試驗(yàn)?zāi)康暮驮?/p>

———;

增加了代謝活化系統(tǒng)

———;

增加了和選擇培養(yǎng)基的配制方法

———THMGTHG;

增加了和選擇培養(yǎng)基的配制方法

———CHATCHT;

增加了三氟胸苷的配制方法

———;

增加了磷酸鹽緩沖液的配制方法

———;

修改了受試物劑量設(shè)定的要求

———;

修改了對(duì)照的設(shè)定

———;

增加了備選細(xì)胞系及相應(yīng)的試驗(yàn)方法及數(shù)據(jù)處理

———;

增加了試驗(yàn)報(bào)告的要求

———;

增加了試驗(yàn)的解釋的要求

———。

Ⅰ

GB1519320—2014

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食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

體外哺乳類細(xì)胞TK基因突變?cè)囼?yàn)

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了體外哺乳類胸苷激酶基因突變?cè)囼?yàn)的基本試驗(yàn)方法與技術(shù)

(thymidinekinase,TK)

要求

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于評(píng)價(jià)受試物的致突變作用

。

2術(shù)語(yǔ)和定義

21TK基因

.

哺乳類動(dòng)物的胸苷激酶基因人類的基因定位于號(hào)染色體長(zhǎng)臂遠(yuǎn)端小鼠的則定位于

。TK17;

號(hào)染色體

11。

22突變頻率

.

在某種細(xì)胞系中某一特定基因突變型的細(xì)胞集落占細(xì)胞集落總數(shù)的比例單位通常為-6

,()()(10)。

3試驗(yàn)?zāi)康暮驮?/p>

基因突變?cè)囼?yàn)的檢測(cè)終點(diǎn)是基因的突變基因突變屬于常染色體基因突變

TKTK。TK。

基因的產(chǎn)物胸苷激酶在體內(nèi)催化從脫氧胸苷生成胸苷酸的反應(yīng)在正常情況

TK(TdR)(TMP)。

下此反應(yīng)并非生命所必需原因是體內(nèi)的主要來(lái)自于脫氧尿嘧啶核苷酸即由胸苷酸

,,TMP(dUMP),

合成酶催化的甲基化反應(yīng)生成但如在細(xì)胞培養(yǎng)物中加入胸苷類似物如三氟胸苷即

dUMPTMP。(,

則在胸苷激酶的催化下可生成三氟胸苷酸進(jìn)而摻入造成致死

trifluorothymidine,TFT),TFT,DNA,

性突變故細(xì)胞不能存活若基因發(fā)生突變導(dǎo)致胸苷激酶缺陷則不能磷酸化亦不能摻入

,。TK,,TFT,

故突變細(xì)胞在含有的培養(yǎng)基中能夠生長(zhǎng)即表現(xiàn)出對(duì)的抗性根據(jù)突變集落形成數(shù)

DNA,TFT,TFT。,

可計(jì)算突變頻率從而推斷受試物的致突變性在基因突變?cè)囼?yàn)結(jié)果觀察中可發(fā)現(xiàn)兩類明顯不同

,。TK

的集落即大小集落細(xì)胞或正常生長(zhǎng)緩慢生長(zhǎng)集落細(xì)胞有研究表明大集落正常

,/(L5178Y)/(TK6),,/

生長(zhǎng)集落主要由點(diǎn)突變或較小范圍的缺失等引起而小集落緩慢生長(zhǎng)集落主要由較大范圍的染色體畸

,/

變或由涉及調(diào)控細(xì)胞增殖的基因缺失引起

,。

4儀器和試劑

41儀器

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實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備低溫冰箱