腫瘤個(gè)體化治療相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑-2014年3月13日發(fā)布

——PAGE——PAGE83——PAGE——PAGE82腫瘤個(gè)體化治療相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)腫瘤個(gè)體化治療相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。本指導(dǎo)原則是針對(duì)腫瘤個(gè)體化治療相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政但需要詳細(xì)闡明理由，并對(duì)其科學(xué)合理性進(jìn)行驗(yàn)證，提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。一、范圍本指導(dǎo)原則所述腫瘤個(gè)體化治療相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑是指利用基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）方法的核酸檢測(cè)技術(shù)，以腫瘤個(gè)體化治療相關(guān)的突變基因?yàn)闄z測(cè)目標(biāo)，對(duì)人體樣本（包括組織、體液等）提取的核酸組分中的目標(biāo)序列進(jìn)行體外檢測(cè)的試劑。本指導(dǎo)原則所指基因突變的類型包括置換、插入、缺失、基因重排、拷貝數(shù)異常及核糖核酸（RNA）表達(dá)異常等廣義的基因突變。PCRPCR方法、LuminexPCR的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)，可能部分要求不完全適用或本指導(dǎo)原則所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請(qǐng)人可以根據(jù)實(shí)際產(chǎn)品特性選同時(shí)確認(rèn)性能評(píng)價(jià)的充分性。本指導(dǎo)原則所涉及試劑的方法學(xué)不包括熒光原位雜交（FluorescenceinsituHybridization，F(xiàn)ISH）化技術(shù)等用于腫瘤個(gè)體化治療指導(dǎo)的其他方法學(xué)。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。二、注冊(cè)申報(bào)資料要求（一）綜述資料綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)及不同基因突變類型檢出能力等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。若尚無同品種批準(zhǔn)上市，則應(yīng)詳細(xì)論述作為檢測(cè)靶標(biāo)的突變基因與個(gè)體化治療方案的相關(guān)性，說明理論依據(jù)。提交的資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）》（2007229號(hào)）（以下簡(jiǎn)稱《辦法》）（〔2007〕609號(hào)）的相關(guān)要求。（二）產(chǎn)品說明書說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、實(shí)驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對(duì)腫瘤個(gè)體化治療相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說明書編制。需要強(qiáng)調(diào)的是，產(chǎn)品說明書內(nèi)容應(yīng)與申請(qǐng)人前期完成的分析性能評(píng)估、穩(wěn)定性研究、臨床實(shí)驗(yàn)研究等技術(shù)資料完全一致?！绢A(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：待測(cè)靶基因序列的特征及選擇依據(jù)，靶基因及其表達(dá)蛋白在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中可能起到的作用，相關(guān)藥物或其他治療技術(shù)及其作用機(jī)理、與待測(cè)突變位點(diǎn)可能存在的關(guān)系等。如申報(bào)試劑未與具體治療方案聯(lián)合進(jìn)行相應(yīng)的臨床試驗(yàn)研究，關(guān)于靶基因突變與腫瘤疾病及治療方案的相關(guān)性描述僅僅來自診療指南、書籍、文獻(xiàn)等資料，則在本項(xiàng)下應(yīng)注明參考資料的出處，預(yù)期用途的相關(guān)表述中不應(yīng)涉及具體藥物產(chǎn)品（商品）名稱、生產(chǎn)企業(yè)信息等，并注明未將該產(chǎn)品與具體藥物聯(lián)合進(jìn)行臨床試驗(yàn)，僅針對(duì)靶基因突變的檢測(cè)性能進(jìn)行了驗(yàn)證；若已將試劑盒與具體藥品聯(lián)合進(jìn)行了相關(guān)臨床試驗(yàn)，并證明其具有指導(dǎo)治療的臨床意義，則可在此明確具體藥物，并在說明書中對(duì)相關(guān)的臨床研究情況進(jìn)行簡(jiǎn)介。基因突變，對(duì)臨床上特定腫瘤患者的個(gè)體化治療提供參考意見。腫瘤的類別及適用樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究完成情況進(jìn)行確認(rèn)。治療反應(yīng)及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)等因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷?！緳z驗(yàn)原理】對(duì)試劑盒檢測(cè)能夠覆蓋的所有突變位點(diǎn)或突變類型進(jìn)行詳細(xì)描述（基因座位、突變類型及相關(guān)特征等，對(duì)引物及探針設(shè)計(jì)、不同樣品反應(yīng)管組合、對(duì)照品設(shè)置及熒光信號(hào)檢測(cè)原理等進(jìn)行逐項(xiàng)介紹。核酸分離/純化方法、原理等。染組分（DNAUDG/UNG等，也應(yīng)對(duì)其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹?！局饕M成成份】詳細(xì)說明試劑盒內(nèi)各組分的名稱、數(shù)量、內(nèi)容物、比例或濃度等信息，陰性/陽性對(duì)照品（或質(zhì)控品）可能含有生物源性物質(zhì)的組分，應(yīng)說明其生物學(xué)來源、活性及其他特性；說明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/注冊(cè)證號(hào)（如有）及其他必要的信息。如果試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸分離/注冊(cè)證號(hào)（如有）等詳細(xì)信息?！緝?chǔ)存條件及有效期】試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等?！具m用儀器】所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：對(duì)適用的樣本類型作詳細(xì)介紹，包括樣本來源及取材要求、樣本處理方式（織樣本的固定及包埋方式、腫瘤細(xì)胞比例等。樣本的取材及處理方式等若有通用的技術(shù)規(guī)范或指南，則應(yīng)遵循，并在此處引用。樣本處理及保存：核酸分離/純化前樣本的預(yù)處理、保存條件及期限（期、運(yùn)輸條件等。在核酸分離/純化過程結(jié)束后，應(yīng)采用適當(dāng)方法對(duì)分離/質(zhì)量控制。比如，采用分光光度計(jì)法對(duì)分離/并依據(jù)性能驗(yàn)證結(jié)果在此給出用于擴(kuò)增試驗(yàn)的核酸溶液濃度范圍要求。舉例：擴(kuò)增反應(yīng)50ng的脫氧核糖核酸（DNA）25μLDNADNA分離/DNA2ng/μL的濃度。如分離/純化后的核酸儲(chǔ)備液質(zhì)量（如濃度范圍）不符合要求，應(yīng)重新取材或擴(kuò)大樣本量再進(jìn)行核酸分離/純化。（MixDNA/RNA反應(yīng)終體系等(常溫/冷藏/冷凍/凍融次數(shù)限制等?！緳z驗(yàn)方法】詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：試劑配制方法、注意事項(xiàng)。詳述核酸分離/純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)。對(duì)照品（質(zhì)控品）酸的平行提?。ㄈ缬斜匾詫?duì)核酸分離/純化環(huán)節(jié)進(jìn)行合理的質(zhì)量控制。擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：各組分加樣體積、順序、相關(guān)注意事項(xiàng)等。逆轉(zhuǎn)錄過程（如涉及）PCR數(shù)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。8.【參考值（參考范圍】參考值（參考范圍）的描述包括基線的確定方法和閾值循環(huán)數(shù)（Ct）的要求（用CtS形曲線對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷?！緳z驗(yàn)結(jié)果的解釋】（Ct值能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。如存在檢測(cè)灰區(qū)，應(yīng)對(duì)灰區(qū)結(jié)果的處理方式一并詳述?！緳z驗(yàn)方法的局限性】本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者個(gè)體化治療的選擇應(yīng)結(jié)合其癥狀/征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。解或擴(kuò)增反應(yīng)體系中靶基因濃度低于檢測(cè)限亦可造成陰性結(jié)果。腫瘤組織（細(xì)胞）結(jié)果。致假陰性或假陽性結(jié)果。明確該檢測(cè)僅限于規(guī)定的樣本類型及檢測(cè)系統(tǒng)（包括適用機(jī)型、核酸分離/試劑、檢測(cè)方法等。詳述以下性能指標(biāo)：對(duì)相應(yīng)國(guó)家參考品（如有）檢測(cè)的符合情況。所有突變類別的最低檢出濃度，重點(diǎn)考慮原始模板中突變基因的百分率和擴(kuò)增終體系中核酸濃度兩個(gè)因素對(duì)最低檢測(cè)限的影響；并簡(jiǎn)單介紹最低檢測(cè)限的確定方法。企業(yè)內(nèi)部陽性/置以及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)等信息。密度參考品的檢測(cè)結(jié)果（變異系數(shù)。分析特異性覆蓋范圍內(nèi)的所有突變類型間進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。應(yīng)驗(yàn)證。潛在干擾物質(zhì)驗(yàn)證。如果經(jīng)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)某些序列與靶序列的交叉反應(yīng)出現(xiàn)陽性結(jié)果，則應(yīng)該對(duì)存在交叉反應(yīng)的核酸序列及濃度進(jìn)行驗(yàn)證并在產(chǎn)品說明書中表明這種假陽性發(fā)生的可能，做出相關(guān)的提示。對(duì)比試驗(yàn)研究（如有：簡(jiǎn)要介紹參比試劑（方法）法及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010194號(hào)或現(xiàn)行有效版本規(guī)范執(zhí)行。（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料基本要求》（國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕609號(hào)）的相關(guān)規(guī)定。另外，對(duì)于國(guó)產(chǎn)試劑，應(yīng)參考《中國(guó)生物制品規(guī)程》（2000年版），將申報(bào)產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類”項(xiàng)中引出該附錄內(nèi)容。附錄中應(yīng)將待測(cè)靶基因的基因位點(diǎn)、引物/探針設(shè)計(jì)及來源、參考品設(shè)置、來源及驗(yàn)證情況、各種酶的來源、特性及驗(yàn)證等重點(diǎn)內(nèi)容予以明確。腫瘤個(gè)體化治療相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑的注冊(cè)檢測(cè)應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：物理/陽性對(duì)照品（質(zhì)控品）的Ct值要求（包括內(nèi)標(biāo)/率、精密度、最低檢測(cè)限等。陽性參考品主要考察對(duì)試劑盒覆蓋范圍內(nèi)不同突變基因的檢測(cè)符合性，陰性參考品則重點(diǎn)對(duì)申報(bào)試劑的分析特異性進(jìn)行驗(yàn)證。如果申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國(guó)家//標(biāo)準(zhǔn)的要求。（四）注冊(cè)檢測(cè)根據(jù)《辦法》的要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類產(chǎn)品應(yīng)該在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢測(cè)。對(duì)于已經(jīng)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)項(xiàng)目，在注冊(cè)檢測(cè)時(shí)應(yīng)采用相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行,對(duì)于目前尚無國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的項(xiàng)目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立自己的參考品體系并提供相應(yīng)的內(nèi)部參考品。（五）主要原材料研究資料應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析并提交工藝驗(yàn)證報(bào)告；如主要原材料購自其他供貨商，應(yīng)提供的資料包括：供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。核酸分離/純化組分（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。PCR和/或逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)組分的主要原料（包括引物、探針、各種酶及其他主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)研究資料，主要包括以下內(nèi)容：脫氧三磷酸核苷（dNTP）核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTPdTTP度、保存穩(wěn)定性等的驗(yàn)證資料。引物dNTPDNA能性實(shí)驗(yàn)等的驗(yàn)證資料。如為外購，還應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE結(jié)果或高效液相色譜法（HPLC）分析圖譜。探針特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測(cè)。合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳5-端(和/3-端)HPLC或其他適宜方法純化，純度HPLCHPLC分析圖譜，應(yīng)對(duì)探針的分子量、純度及標(biāo)記的熒光素進(jìn)行核實(shí)，并進(jìn)行功能性試驗(yàn)驗(yàn)證。酶DNADNA150%活性；尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG），糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性；逆轉(zhuǎn)錄酶，具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性。應(yīng)對(duì)酶活性進(jìn)行合理驗(yàn)證。核酸類檢測(cè)試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無脫氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）污染。等試驗(yàn)資料。具體要求如下：陽性參考品試劑盒（分型或不分型）所能覆蓋的所有突變位點(diǎn)均應(yīng)設(shè)置相應(yīng)的陽性參考品，每個(gè)突變位點(diǎn)設(shè)置至少三個(gè)突變百分率梯度，其中需包括至少一份弱陽性參考品。陽性參考品的突變形式及濃度需經(jīng)過金標(biāo)準(zhǔn)方法或已上市同類分型試劑的確認(rèn)。DNA樣本的檢測(cè)，則陽性參考品可以采用臨床樣本提取的DNA儲(chǔ)備液、相應(yīng)質(zhì)?；蚣?xì)胞系（如有）RNA樣本的檢測(cè)，陽性參RNARNA（假病毒的形式；如覆蓋突變位點(diǎn)過多，可以對(duì)其中部分突變位點(diǎn)采用質(zhì)粒的形式，但不能全部采用質(zhì)粒，需包括部分突變類型（申請(qǐng)人自行確定其代表性為模板的陽性參考品以對(duì)逆轉(zhuǎn)錄（RT）過程進(jìn)行監(jiān)控。陰性參考品可采用經(jīng)確認(rèn)無相應(yīng)靶突變序列的野生型DNA儲(chǔ)存液。檢測(cè)限參考品檢測(cè)限參考品的原料要求參考陽性參考品，需包括所有的突變類型。在進(jìn)行最低檢測(cè)限性能評(píng)估時(shí)，應(yīng)設(shè)置多個(gè)梯度，主要從擴(kuò)增反應(yīng)終體系核酸濃度和突變序列所占百95%（n≥20）95%100%檢出，應(yīng)明確參考品中靶核酸濃度水平和突變百分率。精密度參考品精密度參考品原料要求參考陽性參考品，需至少包括弱陽性、中或強(qiáng)陽性水平的精密度驗(yàn)證，中/強(qiáng)陽性精密度參考品可不必包括所有突變類型，以常見突變類型（自行確定其代表性）為主，但弱陽性參考品需包括所有突變位點(diǎn)；如有必要，建議同時(shí)設(shè)置陰性參考品精密度驗(yàn)證。試劑盒內(nèi)對(duì)照品（質(zhì)控品）試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒對(duì)照品來實(shí)現(xiàn)，質(zhì)控體系需考慮對(duì)樣本核酸分離/純化、配液及加樣、試劑及儀器性能、擴(kuò)增反應(yīng)抑制物（管內(nèi)抑制）靶核酸降解等因素可能造成的假陰性或假陽性結(jié)果進(jìn)行合理的質(zhì)量控制。所有陽性對(duì)照DNARNA粒、假病毒或臨床樣本的核酸提取液等進(jìn)行配置。申報(bào)資料應(yīng)對(duì)試劑盒對(duì)照品有關(guān)原料選擇、制備、定值過程等試驗(yàn)資料詳細(xì)說明。申請(qǐng)人應(yīng)視申報(bào)產(chǎn)品具體情況設(shè)置合理的試劑盒對(duì)照品（質(zhì)控品），試劑盒質(zhì)控體系主要考慮以下幾方面要求。5.1陽性對(duì)照品（質(zhì)控品）建議對(duì)每個(gè)樣品反應(yīng)管設(shè)置至少一份陽性對(duì)照品（質(zhì)控品），陽性對(duì)照品應(yīng)參與樣本核酸的平行提?。ㄈ缬斜匾?，以對(duì)樣本核酸分離過程等環(huán)節(jié)進(jìn)行質(zhì)量控制，企業(yè)應(yīng)對(duì)各種陽性對(duì)照品（質(zhì)控品）的Ct要求。如樣本反應(yīng)管內(nèi)可以覆蓋多種突變序列的檢測(cè)（分型或不分型），相應(yīng)的陽性對(duì)照管可以不必涉及所有突變類型，但應(yīng)選擇較常見突變序列或理論上較難測(cè)得的突變序列作為陽性對(duì)照。內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）可以對(duì)管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，尤其是靶核酸為RNA、用于基因重排或基因表達(dá)異常等檢測(cè)目的時(shí)，可以采用管家基因或與靶基因濃度水平相當(dāng)?shù)钠渌蛐蛄凶鳛橄鄳?yīng)的內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）的引物、探針和模板濃度做精確驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽性曲線又要盡量降低對(duì)靶基因檢測(cè)造成的抑制而導(dǎo)致假陰性。陰性對(duì)照陰性對(duì)照可以是含有野生型核酸序列的核酸溶液，也可以是空白對(duì)照，以對(duì)可能存在的交叉污染進(jìn)行假陽性結(jié)果的質(zhì)控。陰性對(duì)照品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取。從而影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，造成假陰性的可能性。因此，除上述對(duì)照品外，申報(bào)試劑的反應(yīng)體系中應(yīng)充分考慮對(duì)核酸分離純化環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，比如，設(shè)置專門的質(zhì)控管對(duì)管家DNA的靶序列進(jìn)行擴(kuò)增，以對(duì)核酸分離純化的質(zhì)量及效率進(jìn)行評(píng)估。（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如臨床樣本用臨界）值確定等，提供確切的依據(jù)，配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對(duì)pH導(dǎo)率、離子濃度等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。主要包括以下內(nèi)容：主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示。反應(yīng)原理介紹。基因位點(diǎn)選擇、(RT)-PCR方法學(xué)特性介紹。確定最佳(RT)-PCR/dNTP度、陽離子濃度等。確定逆轉(zhuǎn)錄過程（如涉及）間及循環(huán)數(shù)的研究資料。對(duì)于基線閾值（threshold）和閾值循環(huán)數(shù)（Ct）確定的研究資料。不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。如申報(bào)產(chǎn)品包含核酸分離/純化試劑，應(yīng)提交對(duì)核酸分離/的研究資料。（七）分析性能評(píng)估資料企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體研究方法、內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。若試劑用于RNA樣本檢測(cè)，則在性能評(píng)估中（除非特別說明）需對(duì)所有突變位點(diǎn)均采用RNA樣本，從而對(duì)逆轉(zhuǎn)錄過程進(jìn)行驗(yàn)證。建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。樣本核酸分離/純化樣本核酸的分離/PCRPCR抑制物，樣本核酸分離/純化是決定后續(xù)核酸擴(kuò)增過程成敗的要素之一。尤其是石蠟包埋組織樣本在福爾馬林固定過程中，會(huì)使樣品中的核酸與核酸之間，核酸與蛋白之間發(fā)生交聯(lián)，并且樣本在不當(dāng)?shù)谋４鏃l件下容易造成核酸的片段化或降解，增加了核酸分離/純化的難度。因此，無論申報(bào)產(chǎn)品是否含有核酸分離//PCR抑制物。常見的核酸分離純化均有其優(yōu)勢(shì)和不足，申請(qǐng)人應(yīng)結(jié)合申報(bào)產(chǎn)品的特性，合理選擇核酸分離/純化試劑，并提供詳細(xì)的驗(yàn)證資料。陽性/陰性參考品符合率各水平、各突變位點(diǎn)的陽性參考品均應(yīng)按要求檢出陽性，考慮到濃度梯度的不同，Ct件下均應(yīng)檢出為陰性；如有野生型參考品的設(shè)置，在其相應(yīng)的引物探針組合下檢測(cè)應(yīng)為陽性。最低檢測(cè)限95%（n≥20）的陽性檢出率作為最低檢測(cè)限確定的標(biāo)準(zhǔn)，擴(kuò)增反應(yīng)終體系中的突變序列百分率和總核酸濃度兩個(gè)因素對(duì)最低檢測(cè)限的影響較大，終體系中突變序列的百分率越高、所含的限主要考慮以下兩種情形。在擴(kuò)增反應(yīng)終體系特定核酸濃度下，突變序列所占百分率的最低檢測(cè)限。采用野生型臨床樣本和較高突變百分率的臨床樣本提取的核酸儲(chǔ)備液進(jìn)行混合，確定擴(kuò)增反應(yīng)終體系中的核酸濃度，采用合理的試驗(yàn)方法（如深測(cè)序）對(duì)混合后樣本中突變序列所占百分率進(jìn)行確認(rèn)，并逐漸調(diào)整野生型和突變型核酸儲(chǔ)備液的比例以得到含不同突變序列百分率的混合液。如上述方法不易實(shí)現(xiàn)，也可采用含相應(yīng)突變類型的質(zhì)粒與或野生型質(zhì)粒）混合的方法來制備相應(yīng)的混合液。對(duì)各份混合液進(jìn)2095%可以檢測(cè)到的最低的突變序列百分率。50ng/40μL95%10%。在特定突變序列百分率下，反應(yīng)終體系中核酸濃度的最低檢測(cè)限。采用合理的實(shí)驗(yàn)方法確定待測(cè)樣本中的突變序列所占的百分率，或采用突變型質(zhì)?；蛞吧唾|(zhì)粒）按一定比例混合（如固定在10%的水平），20DNA（RNA）濃度。10%的突變序列百分率水平，40μL擴(kuò)增反應(yīng)終體系中，DNA50ng/40μL。建議評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞比例、DNA（RNA）降解等因素對(duì)最低檢測(cè)限可能造成的影響。分析特異性野生型驗(yàn)證：采用不同濃度的野生型核酸樣本進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果應(yīng)為陰性。交叉反應(yīng)，對(duì)于此類產(chǎn)品的交叉反應(yīng)驗(yàn)證主要考慮以下幾方面情形：申報(bào)試劑所覆蓋的全部突變類型間的交叉反應(yīng)；的交叉反應(yīng)。體現(xiàn)。干擾物質(zhì)申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)試劑盒所采用的樣本類型，確定潛在的干擾物質(zhì)。本，使用醫(yī)學(xué)相關(guān)水平的干擾物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。此外，建議申請(qǐng)人同時(shí)在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(“最差條件”)條件下同樣進(jìn)行評(píng)價(jià)。有關(guān)干擾物質(zhì)的研究結(jié)果亦應(yīng)總結(jié)于產(chǎn)品說明書的【產(chǎn)品性能指標(biāo)】項(xiàng)下。精密度測(cè)量精密度的評(píng)價(jià)方法并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考國(guó)際或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的文件進(jìn)行。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求。對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除申報(bào)試劑（包括核酸分離/組分）PCR分析儀、操作者、地點(diǎn)等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。2022//行綜合評(píng)價(jià)。如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。2有必要，建議同時(shí)設(shè)置陰性參考品進(jìn)行驗(yàn)證，要求如下:100%（n≥20）。弱陽性參考品：待測(cè)靶核酸濃度略高于試劑盒的最低檢測(cè)限，陽性檢出率應(yīng)達(dá)100%（n≥20）。（弱陽性參考品需包括所有的突變位點(diǎn)，如果待測(cè)物靶核酸為RNARNA干粉或相應(yīng)的假病毒）高濃度參考品：待測(cè)靶核酸呈中到強(qiáng)陽性的濃度，陽性檢出率為 100%CV≤15%（n≥20）。（如果試劑盒可以覆蓋多個(gè)突變位點(diǎn)的檢測(cè)，該參考品可以設(shè)置為對(duì)全部突變位點(diǎn)進(jìn)行精密度驗(yàn)證，也可以選擇其中部分突變位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證，但應(yīng)至少包含常見突變序列或理論上較難測(cè)得的突變序列）其他需注意問題對(duì)于適用多個(gè)機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用儀器】項(xiàng)中所列的所有型號(hào)儀器的性能評(píng)估資料。若試劑盒適用的樣本類型不止一種，如既包含石蠟包埋組織切片亦包含冷凍組織切片或血液樣本等，則需對(duì)所有樣本類型的適用性進(jìn)行評(píng)估，并提交評(píng)估資料。（八）參考值（參考范圍）確定資料對(duì)于此類試劑，參考值確定資料主要是指Ct值的確認(rèn)資料，建議申請(qǐng)人采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式對(duì)申報(bào)產(chǎn)品用于結(jié)果判斷的臨界值予以確認(rèn)。（九）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括效期穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于效期穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。另外，樣本穩(wěn)定性的研究對(duì)于實(shí)驗(yàn)的成敗也至關(guān)重要。特別是當(dāng)使用標(biāo)本類型包括組織標(biāo)本時(shí)，腫瘤組織標(biāo)本經(jīng)過特殊處理后其核酸序列的完整性容易遭到破壞，因此應(yīng)提供對(duì)樣本保存條件、保存時(shí)間等方面的詳細(xì)研究資料。樣本穩(wěn)定性研究主要包括核酸分離/純化前樣本穩(wěn)定性和分離/圍內(nèi)選擇多個(gè)溫度點(diǎn)（應(yīng)至少包括范圍的上限和下限溫度），每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。（十）臨床試驗(yàn)研究對(duì)于國(guó)內(nèi)外尚無同類產(chǎn)品被批準(zhǔn)上市或無充足資料證明其臨床預(yù)期用途的新型腫瘤相關(guān)基因突變，相關(guān)檢測(cè)試劑的臨床研究不能單純采用對(duì)比試驗(yàn)的方法，而應(yīng)將試劑盒臨床研究納入相關(guān)藥物的臨床研究或臨床應(yīng)用中，通過對(duì)特定的腫瘤病人進(jìn)行治療前后的跟蹤隨訪，以臨床對(duì)于患者個(gè)體化治療方案及有效性的綜合判斷為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)此類試劑用于指導(dǎo)腫瘤個(gè)體化治療的臨床性能。其中，有關(guān)診斷試劑臨床研究的臨床試驗(yàn)資料應(yīng)符合《辦法》、《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料基本要求》（國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕609號(hào)）以及《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。對(duì)于已有同類產(chǎn)品上市的、基因突變類型與腫瘤個(gè)體化治療方案的相關(guān)性已經(jīng)得到確認(rèn)的產(chǎn)品，則申請(qǐng)人既可采用試劑盒檢測(cè)與相關(guān)藥物治療相結(jié)合對(duì)特定的腫瘤病人進(jìn)行治療前后的跟蹤臨床研究的方法，亦可在充分結(jié)合相關(guān)的病例信息的情況下，采用考核試劑與參比方法進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)的研究方法，對(duì)考核試劑的臨床應(yīng)用有效性進(jìn)行評(píng)價(jià)。以下要求均針對(duì)采用對(duì)比試驗(yàn)方法的臨床研究提出。參比方法的選擇可以考慮以下幾方面：較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報(bào)產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。但應(yīng)充分考慮已上市同類試劑的突變位點(diǎn)選擇、靶序列選擇、最低檢測(cè)限等特性，確?？己嗽噭┡c申報(bào)試劑具有明確可比性?？己嗽噭z測(cè)結(jié)果與核酸序列測(cè)定（測(cè)序）結(jié)果之間的一致性情況。臨床研究報(bào)告中應(yīng)對(duì)選用的測(cè)序方法作詳細(xì)介紹，并對(duì)委托測(cè)序服務(wù)的機(jī)構(gòu)（如涉及）資質(zhì)和選擇依據(jù)作簡(jiǎn)要說明或提供相關(guān)資料。務(wù)機(jī)構(gòu)的簽章確認(rèn)。測(cè)序方法原理、測(cè)序儀型號(hào)、測(cè)序試劑及消耗品的相關(guān)信息。資料。引物設(shè)計(jì)應(yīng)合理涵蓋考核試劑擴(kuò)增的靶核酸區(qū)段、位點(diǎn)、及所有突變類型。所選測(cè)序方法與申報(bào)試劑的相關(guān)性能進(jìn)行適當(dāng)比對(duì)分析。量控制。提交有代表性的樣本測(cè)序圖譜及結(jié)果分析資料。此外，在充分考慮檢測(cè)結(jié)果具有明確可比性的前提下，也可以選擇熒光原位雜交（FISH）或免疫組化等染色體或蛋白水平的檢測(cè)技術(shù)作為參比方法，但考慮到檢測(cè)結(jié)果之間不具有直接的可比性，建議對(duì)所有陽性病例采用其他分子生物學(xué)技術(shù)（如核酸序列測(cè)定）對(duì)結(jié)果予以確認(rèn)。測(cè)序部分資料的提交參考上一條要求。臨床研究單位的選擇建議申請(qǐng)人在選擇臨床單位時(shí)，應(yīng)在國(guó)內(nèi)不同區(qū)域選擇臨床單位，盡量使各單位的臨床樣本有一定的區(qū)域代表性；臨床研究單位應(yīng)具有分子病理診斷和分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，考核試劑和參比方法都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。臨床試驗(yàn)方案臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑應(yīng)完全一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。臨床方案中還應(yīng)明確復(fù)核試劑及方法。另外，考核試劑適用的樣本類型、可檢測(cè)的基因突變類型不應(yīng)超越參比試劑的相應(yīng)檢測(cè)要求，若此種情況發(fā)生，則應(yīng)選擇其他合理參比方法對(duì)額外的樣本類型和基因突變類型進(jìn)行驗(yàn)證。病例選擇及陽性病例比例臨床試驗(yàn)應(yīng)以腫瘤患者為研究對(duì)象，其中試劑盒規(guī)定范圍的每種突變類型均應(yīng)有一定量的陽性病例。對(duì)于陰性病例的選擇，也應(yīng)考慮到交叉反應(yīng)驗(yàn)證的需要，以從臨床角度考察其分析特異性。陰/陽性病例均應(yīng)覆蓋所有適用的腫瘤類型。若產(chǎn)品適用于多種樣本類型，則應(yīng)對(duì)所有樣本類型均進(jìn)行臨床驗(yàn)證。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如檢測(cè)結(jié)果一致性分析、受試者工作特征（ROC）曲線分析、陰性/χ2檢驗(yàn)kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果有無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證“金標(biāo)準(zhǔn)”臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進(jìn)行復(fù)核，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述情況介紹。病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。具體的臨床試驗(yàn)情況品的注冊(cè)情況。給出具體例數(shù)及百分比。質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估。具體試驗(yàn)過程，樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本保存、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對(duì)方案的修改。陽性符合率、陰性符合率、總體符合率。以交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表χ2檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。另外考慮到對(duì)不同樣本類型以及不同年齡段人群的檢測(cè)結(jié)果可能存在一定差異，故建議對(duì)不同樣本類型及不同年齡段人群分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以對(duì)考核試劑的臨床性能進(jìn)行綜合分析。討論和結(jié)論對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。三、名詞解釋聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)polymerasechainreaction,PCR：DNARNA速擴(kuò)增的方法。由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。雜交hybridization具有一定同源序列的兩條核酸單鏈（DNA或RNA）互補(bǔ)配對(duì)原則相結(jié)合。PCRPCRPCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，釋放的熒PCRPCR。分析特異性analyticalspecificity測(cè)量程序只測(cè)量被測(cè)量物的能力。分析特異性用于描述檢測(cè)程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時(shí)只測(cè)量被測(cè)量物的能力。通常以一個(gè)被評(píng)估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度。（潛在干擾物包括干擾物和交叉反應(yīng)物）精密度precision在規(guī)定條件下，相互獨(dú)立的測(cè)試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的測(cè)量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。檢測(cè)限detectionlimit,limitofdetection樣品中以一定概率可被聲明與零有差異的被測(cè)測(cè)量的最低值。閾值循環(huán)數(shù)cyclethreshold,Ct實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過程中，反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)指數(shù)擴(kuò)增時(shí)經(jīng)歷的循環(huán)周期數(shù)。主31510超過閾值時(shí)的循環(huán)數(shù)則為閾值循環(huán)數(shù)（Ct）。突變mutation是細(xì)胞中DNA核苷酸序列發(fā)生了穩(wěn)定的可遺傳的改變。內(nèi)標(biāo)internalcontrol在同一反應(yīng)管中與靶序列共同擴(kuò)增的一段非靶序列分子，其目的是鑒別儀器故障、試劑因素、聚合酶活性因素或樣本中存在抑制物等造成的結(jié)果不理想的原因。四、參考文獻(xiàn)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）,（國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕229號(hào)）,2007419日。,（國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕240號(hào)）,2007428日。2007240號(hào)4月28日。EstablishingthePerformanceCharacteristicsofInVitroDiagnosticDevicesforDetectionorDetectionandDifferentiationofInfluenzaViruses.CDRH,FDA,USA,February15,2008。彭文偉.傳染病學(xué),第五版.人民衛(wèi)生出版社，2001。李金明.PCR技術(shù),第一版.人民軍醫(yī)出版社,2007。RobertF.Weaver.MolecularBiology,4thEdition,2008。劉艷芳,張勇建,蘇明.臨床病毒學(xué)檢驗(yàn).軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社,2009。MolecularDiagnosticMethodsforInfectiousDiseases;ApprovedGuidelineEdition.ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute(FormerlyNCCLS),MM3-A2,No.8,ISBN1-56238-596-8。Quantitative Molecular Methods for Infectious Diseases; Approved 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