高尿酸血癥動物模型的建立及抗痛風中藥的篩選解析

ft東大學博士學位論文姓名：劉文波申請學位級別：博士專業(yè)：內科學（風濕病學指導教師：李興福20080420ft符號說明英文縮寫ＸＯＤＣＯＸ英文全稱ｘａｎｔｈｉｎｅｏｘｉｄａｓｅｃｙｃｌｏｘｙｇｅｎａｓｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ．１中文全稱黃嘌嶺氧化酶環(huán)氧化酶白細胞介素１Ｂ腫瘤壞死因子Ｑ微晶型尿酸鈉ＩＬ—ｌｐＴＮＦ．ａＢｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ．ｎＭＳＵＵＡＯＡＮＳＡＩＤｓｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍｕｒａｔｅｃｒｙｓｔａｌｕｒｉｃａｃｉｄｏｘｏｎｉｃａｃｉｄＮｏｎ．ｓｔｅｒｏｉｄａｌａｎｔｉ．．尿酸氧嗪酸非甾體抗炎藥ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｄｒｕｇＬＴＰＧＩｇＩｐｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａＩｉｎｏｓｉｎｅ白細胞三烯前列腺素灌胃給藥腹腔注射次黃嘌呤核苷酸５一磷酸核糖一１譜技術ｉｎｊｅｃｔｉｏｎＩＭＰＰＲＰＰｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅＰｈｏｓｐｈｏｒｂｏｓｙｌ—ｌ－ｐｙｒｏｐｈｏｓ—ｐｈａｔｅＡＡａａｃｈｉｄｏｎｉｃａｃｉｄＭ／ＺＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳＭａｓｓ／ＣｈａｒｇｅＳｕｒｆａｃｅｅｎｈａｎｃｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｔｉｍｅ－ｏｆ－ｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｌｌ原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。論文作者簽名：翻童遺Ｅｌ期：矽扎５．矽關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解ft東大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權ft東大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。（保密論文在解密后應遵守此規(guī)定）論文作者簽名：三盟遮導師簽名：虹日ft東大學博士學位論文高尿酸血癥動物模型的建立及抗痛風中藥的篩選博士研究生專業(yè)劉文波內科學（風濕病學）李興福教授博士生導師中文摘要痛風（ｇｏｕｔ）是長期嘌呤代謝障礙、血尿酸增高引起組織損傷的一組異質性疾?。R床特點是：高尿酸血癥（ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ）、痛風性急性關節(jié)炎反復發(fā)作、痛風石沉積、特征性慢性關節(jié)炎和關節(jié)畸形，常累及腎臟引起的尿酸鹽呈超飽和狀態(tài)，一般認為血尿酸４ｌ６ｔｔｍｏｌ／Ｌ時為高尿酸血癥。約５％－ｌ２％高尿酸血癥患者會發(fā)展成為痛風。痛風的急性發(fā)作是尿酸鈉（ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍｃｒｙｓｔａｌ，ＭＳＵ）在關節(jié)危害人類健康的一種嚴重的代謝性疾病。避免關節(jié)炎反復發(fā)作和腎臟病變形成，痛風患者需要長期服用有降低血尿酸ｒｉｃａｃｉｄ。ＵＡ）ＵＡ作用的中草藥制劑具有重要的意義。降尿酸機制；第三部分建立急性痛風性關ft東大學博士學位論文節(jié)炎動物模型，觀察中藥對急性痛風性關節(jié)炎的治療效果并分析其作用機制；第四部分應用表面增強激光解吸電離飛行時間質譜技術（ｓｕｒｆａｃｅ．ｅｎｈａｎｃｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳ）分析急性痛風性關節(jié)炎動物模型與正常小鼠之間及模型小鼠中藥治療前后血清蛋白質譜的變化。本研究主要目的、方法、結果和結論概述如下：研究目的：建立高尿酸血癥及急性痛風性關節(jié)炎動物模型，篩選具有降尿酸及抗炎鎮(zhèn)痛作用的中藥并分析其可能作用機制，應用蛋白組學方法尋找急性痛風性關節(jié)炎動物模型的血清蛋白標志物，分析急性痛風性關節(jié)炎動物中藥治療前后血清蛋白質譜的變化。ｋｇ／ｄ灌胃給藥，每日２次，乙胺丁醇按２５０ｍｇ／ｋｇ次，均連續(xù)用藥７天。尿酸、氧嗪酸鉀鹽分別按２５０ｍｇ／ｋｇ及／ｋｇ－－酸鉀鹽法造模，雄性昆明小鼠隨機分組，分別予苯溴馬?。玻埃恚纾耄邕蚀迹矗埃恚纾耄缧岳ッ餍∈箅S機分為９組，采用腹腔注射氧嗪酸鉀鹽法建模，分別給予生理鹽Ｗｉｓｔａｒ每日１次，連續(xù)７天，收集第６—７天２４ｈ每日１次，連續(xù)６天。觀察給藥后關節(jié)腫脹度以及關節(jié)周圍組織炎癥介質ｌＬ．１ｐ和ＴＮＦ．ａ水平的變化，并進行關節(jié)病理學檢查。２６．分別采用醋酸腹腔注射誘導小鼠扭體反應法和熱板法的鎮(zhèn)ft東大學博士學位論文瀉、車前子和吲哚美辛的鎮(zhèn)痛抗炎作用。７．用ＣＭｌ０芯片結合ＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳ技術檢測正常組、模型組、土茯苓組各Ｉ２只小鼠血清ｈｅｒｇｅｎＰｒｏｔｅｉｎＣｈｉｐ３．１性關節(jié)炎小鼠成模判斷模型，觀察模型小鼠中藥治療后蛋白質峰的動態(tài)變化。水平較正常對照組均顯著升高（尿酸組從ｌ０８．９±ｌ０．１Ｉ．ｔｍｏｌ／Ｌ升高到３０１．８＋＿２４．７ｔｔｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜Ｏ．０ｌ：組從１１９．Ｉ±２０．６９ｍｏｌ／Ｌ升高到２７６．３＋３２．５Ｉｔｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜Ｏ．０ｌ：氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇組從ｌｌ５．７±１７．４９ｍｏｌ／Ｌ升高到２８２．２＋＿４０．７ｐ．ｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．０１）澤瀉組小鼠用藥后血尿酸水平下降，分別為ｌ７１．２－４－２８．８１且ｌ／Ｌ、１６３．０士４８．８ｐ．ｍｏｌ／Ｌ、１５８．７士ｏｌ／Ｌ，與模型組（２５０．４４－５５．８“ｍｏｌ／Ｌ）比較有明顯差小鼠肝臟黃嘌呤氧化酶活性分別為７３．２３－４－７．２ｌＵ／Ｌ９士５．８４Ｕ／Ｌ，與模型組（８９．０７士８．３４Ｕ／Ｌ）比較明顯下低。萆薜、澤瀉、車前子組小鼠肝臟黃嘌呤氧化酶活性與模型組比較無明顯差度為ｌ８７．５０士４６．８ｌｐｍｏｌ／Ｌ，較模型組（１３６．０２＋１１．５５“ｍｏｌft東大學博士學位論文／Ｌ）明顯增加，但低于苯溴馬隆組（２３１．５５４－２９．３２９ｍｏｌ／Ｌ）尿尿酸濃度，同時，澤瀉組大鼠２４ｈ尿量較模型組有增加趨勢。土茯苓組大鼠尿量及尿尿酸濃度與模型組比較無明顯差異。５．小鼠關節(jié)內注射ＭＳＵ溶液，２４ｈ后關節(jié)明顯腫脹，ＩＬ．１模型組小鼠腫脹關節(jié)周圍組織中炎癥介質ｐ和ＴＮＦ．ａ水平明顯增高，病理學檢查發(fā)現(xiàn)模型組小鼠軟骨破壞，滑膜組織充血、壞死伴炎細胞浸潤。土茯苓組小鼠關節(jié)腫脹度明顯減輕，關節(jié)周圍組織中炎癥介質ＩＬ．１ｐ和ＴＮＦ．ａ水平顯著降低，關節(jié)組織病理學改變顯著改善。澤瀉、車前子組小鼠關節(jié)腫脹度、病理檢查結果與模型組比較無明顯差異。６．土茯苓ｌ２９／ｋｇ灌胃給藥能顯著減輕蛋清致小鼠足跖腫脹度及二甲苯致耳腫脹度；延長醋酸腹腔注射致小鼠扭體反應的潛伏期，減少扭體次數(shù)；對熱板致小鼠疼痛反應潛伏期與模型組無明顯差異，但有延長趨勢。澤瀉、車前子組小鼠鎮(zhèn)痛抗炎實驗結果與模型組比較無明顯差異。７．急性痛風性關節(jié)炎模型組與正常組間表達差異有統(tǒng)計學意義的蛋白質峰２７個。９個蛋白質峰的ｔ檢驗或Ｍａｎｎ．Ｗｈｉｔｎｅｙ秩和檢驗所得Ｐ值在ｌ０。數(shù)量級以下．Ｍ／Ｚ位于４６ｌ２、ｌ２９ｌ５、５６３７、３０ｌ８和２３ｌ０３Ｄａ的５４＂差異蛋白峰在模型組高表達，Ｍ／Ｚ位于６４５６、４９７３、３９２３和ｌ５０９０Ｄａ的４個蛋白質峰在模型組血清低表達；急性痛風性關節(jié)炎模型組與土茯苓組間表達差異有統(tǒng)計學意義的蛋白質峰ｌ５個。其中６個蛋白質峰的ｔ檢驗或Ｍａｎｎ．Ｗｈｉｔｎｅｙ秩和檢驗所得Ｐ值在１０‘３數(shù)量級以下。Ｍ／Ｚ位于２５９８、４６ｌ４、３４４４、９６８６和３０ｌ－８Ｄａ的５個蛋白峰在模型組高表達，Ｍ／Ｚ為２９３７的１個蛋白質峰在中藥組血清高表達．４６ｌ２Ｄａ和６４５６Ｄａ兩個蛋白質峰組合所構建的模型能達到鑒別急性痛風性關節(jié)炎小鼠和正常小鼠的最佳檢測效果，總準確率７５．Ｏ％。４６ｌ２Ｄａ在正常組低表達，模型組高表達；４６ｌ４Ｄａ在模型組高表達，中藥治療后低表達，軟件分析二者為同一個融合峰，提示該峰可能為急性痛風性關節(jié)炎的候選標志蛋白質峰。研究結論：１．腹腔注射氧嗪酸鉀鹽法可作為建立高尿酸血癥動物模型、篩選降尿酸藥物的可靠方法。２．黃柏、土茯苓、澤瀉能降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平；土茯苓降低高尿酸血癥小鼠血尿酸水平的機制至少部分在于對肝臟黃嘌呤氧化酶的抑制作用；澤瀉降低高尿４ft東大學博士學位論文酸血癥小鼠血尿酸水平的機制可能主要在于促進尿酸排泄及增加尿量。３．土茯苓能減輕急性痛風性關節(jié)炎的關節(jié)腫脹，減少炎細胞浸潤，降低局部組織炎癥介質ＩＬ．１Ｂ和ＴＮＦ．ａ的水平表明土茯苓有較強的抗炎及鎮(zhèn)痛作用。４．ＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳ技術檢測到急性痛風性關節(jié)炎動物模型與正常小鼠及模型小鼠與中藥治療組間血清蛋白質譜的差異，對尋找急性痛風性關節(jié)炎模型小鼠血清蛋白標志物提供了有用的信息。研究意義：１．確立了簡便可靠的高尿酸血癥動物模型。２．研究中發(fā)現(xiàn)中藥土茯苓在高尿酸血癥動物模型表現(xiàn)出降尿酸效果，對急性痛風性關節(jié)炎模型有抗炎鎮(zhèn)痛作用，對研制安全、經(jīng)濟、有效的新型抗痛風藥制劑有重要意義．３．運用ＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳ蛋白芯片技術，檢測到急性痛風性關節(jié)炎動物模型血清中特異性標志蛋白質峰，為進一步發(fā)現(xiàn)痛風性關節(jié)炎的特異性診斷標志物提供實驗依據(jù)。關鍵詞高尿酸血癥；痛風；動物模型；中藥；ＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳft東大學博士學位論文ＥＳＴＡＢＬＩＳＨＭＥＮＴｏＦＡＮＩＭＡＬＨＹＰＥＲＵＲＩＣＥＭＩＡＭＯＤＥＬＡＮＤＳＥＬＥＣＴＩＯＮｏＦＣＨＩＮＥＳＥＴＲＡＤＩＴＩｏＮＡＬＭＥＤＩＣＩＮＥＦｏＲＡＮＴＩＧｏＵＴＳＡＢＳＴＲＡＣＴＧｏｕｔｉｓａｃｌｉｎｉｃａｌｓｙｎｄｒｏｍｅｏｆｔｉｓｓｕｅｄａｍａｇｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙａｃｈｒｏｎｉｃｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｄｉｓｏｒｄｅｒｏｆｐｕｒｉｎｅ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｍａｒｋｅｄｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ．Ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｌｅａｄｓｔｏｔｈｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｃｉｄｏｆｕｒｉｃａｃｉｄｉｎｔｈｅｂｏｄｙｃａｕｓｉｎｇｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｕｒｉｃｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｎｅｐｈｒｏｌｉｔｈｉａｓｉｓ．Ｐｒｉｍａｒｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｓｕｃｈａｓｇｏｕｔｗａｓｏｂｅｓｉｔｙ，ｏｆｓｅｖｅｒａｌａｎｄｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ，ｄｉａｂｅｔｅｓｓｅｒｉｏｕｓｍｅｔａｂｏｌｉｃｉｓｍｅｌｌｉｔｕｓａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ａｓ晷ｋｉｎｄｃａｕｓｅｄｉｓｅａｓｅ，ｇｏｕｔｄｏｅｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｔｏｈａｒｍｔｏｈｕｍａｎｈｅａｌｔｈ．ｃａｎＴｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｉｔｐｒｅｖｅｎｔａｎｄＩｎｒｅｃｅｎｔｇｒｅａｔｌｙｅｘｐｌｏｒｅａｓｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓｔｈａｔｃｕｒｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ，ａｓｗｅｌｌｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｇｏｕｔ．ａｎｄｇｏｕｔｈａｓｙｅａｒｓ，ｔｈｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｇｒａｄｕａｌｌｙｒｉｓｅｎａｌｏｎｇｗｉｔｈｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｌｉｖｉｎｇｓｔａｎｄａｒｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｇｏｕｔｅｎｔａｉｌｓｔｈｅｕｓｅｏｆａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｇｅｎｔｓｔｏｒｅｌｉｅｖｅｔｈｅｓｙｍｐｔｏｍｓｏｆｔｈｅｄｉｓｅａｓｅａｓａｓｗｅｌｌｘａｎｔｈｉｎｅｏｘｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｔｏｕｓｅｂｌｏｃｋｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｕｒｉｃａｃｉｄｃａｎｆｒｏｍｐｕｒｉｎｅ．Ｂｕｔｔｈｅｏｆｃｕｒｒｅｎｔｍｅｄｉｃａｔｉｏｎａｓｒｅｓｕｌｔｉｎａｎｕｍｂｅｒｏｆａｄｖｅｒｓｅｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓ，ｓｕｃｈａｄｖｅｒｓｅｅｆｆｅｃｔｓｌｉｍｉｔｈｅｐａｔｉｔｉｓａｎｄａｌｌｅｒｇｉｃｔｈｅｒａｐｙ．Ｔｈｕｓ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｒｅａｃｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｏｆｎｅｗｔｈｅｉｒｓｏｆｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｓａｆｅｔｙｉｓｈｙｐｏｕｒｉｃｅｍｉｃｗａｒｒａｎｔｅｄ．ａｇｅｎｔｓｇｒｅａｔｅｒｈｉｇｈｌｙＡｌｔｈｏｕｇｈｔｈｅｏｆｕｓｅｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔｓｉｎｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｏｕｔｉｓｆｒｅｑｕｅｎｔＵＳｅＳｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａａｎｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎｅｓｙｓｔｅｍｓ，ｔｈｅｉｒｔｈｅｌａｃｋｏｆｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｉｎｍｏｄｅｒｎｍｅｄｉｃｉｎｅｓｕｆｆｅｒｆｒｏｍｈａｓｂｅｅｎｆｏｃｕｓｅｄｏｎｅｖｉｄｅｎｃｅｓ．Ａｔｔｅｎｔｉｏｎｐｌａｎｔｓｅｌｅｃｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｉｔｓ６ftｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇｔｈｅｎｅｗｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ．Ａｉｍ：１．ＥｓｔａｂｌｉｓｈａｎｉｍａｌｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａａｎｄｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｍｏｄｅｌａｎｄｓｅｌｅｃｔｌｅｖｅｌＣｈｉｎｅｓｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎｅａｎｄｈａｖｅｗｈｉｃｈａｎｄｃａｎｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｕｒｉｃａｃｉｄｅｆｆｅｃｔｓ．Ｕｓｅａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｒｙｌａｓｅｒａｎａｌｇｅｓｉｃｔｉｍｅｏｆｓｕｒｆａｃｅｅｎｈａｎｃｅｄｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＳＥＬＤＩ—ＴＯＦＭＳ）ｔｏａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｍｏｄｅｌ．ｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｓｅｒｕｍｐｒｏｔｅｉｎｍａｒｋｅｒｉｎＭｅｔｈｏｄｓ：１．Ｍｉｃｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉｃｍｏｄｅｌｓｗｅｒｅｍａｄｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｏｎｍａｌｅｋｕｎｍｉｎｇｍｉｃｅｂｙｙｅａｓｔｏｘｏｎａｔｅｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅｉｇ，ｕｒｉｃａｃｉｄｉｐ，ｐｏｔａｓｓｉｕｍｉｇ，ａｎｄｉｐ，ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅｐｌｕｓｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅｉｐｐｌｕｓｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｉｇ．Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｕｒｉｃａｃｉｄｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｓｙｓｔｅｍａｎｄｔｈｅｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ’Ｓａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｎｅｐｈｒｉｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．２．Ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌａｎｄｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅｗｅｒｅｇｉｖｅｎｔｏｔｈｅｍｏｕｓｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｗｉｔｈｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅｆｏｒｔｈｒｅｅｄａｙｓ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｂｌｏｏｄａｎｄｕｒｉｎｅｕｒｉｃａｃｉｄｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｄ．３．Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉｃｏｒｔｅｘ，ｄｉｏｓｃｏｒｅａｃｅａｅ，ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌａｎｄｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂ，ａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅ，ｇｉｖｅｎｔｏｐｌａｎｔａｇｉｎａｃｅａｅ，ｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅｗｅｒｅｍｉｃｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｗｉｔｈｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅｆｏｒｓｅｖｅｎｄａｙｓ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｉｎｍｏｕｓｅｌｅｖｅｌｏｆｂｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄａｎｄｘａｎｔｈｉｎｅｏｘｉｄａｓｅ（ＸＯＤ）ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｌｉｖｅｒｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｄ．４．ＳｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂ，ａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅ，ｐｌａｎｔａｇｉｎａｃｅａｅ，ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌａｎｄｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅｗｅｒｅｇｉｖｅｎｔｏｒａｔｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｆｏｒｓｅｖｅｎｄａｙｓ，ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ２４ｈｏｕｒｕｒｉｎｅａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｕｒｉｎｅａｃｉｄｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｄ．５．ＭｉｃｅｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｕｒｉｎｅｕｒｉｃｍｏｄｅｌｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙＭＳＵｉｎｔｒａａｒｔｉｃｕｌａｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂ，ａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅ，ｐｌａｎｔａｇｉｎａｃｅａｅａｎｄｉｎｄｏｍｅｔａｃｉｎｗｅｒｅｇｉｖｅｎｔｏｔｈｅｍｏｄｅｌｆｏｒｓｉｘｄａｙｓ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｊｏｉｎｔｓｗｅｌｌｄｅｇｒｅｅ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｉｎｔｈｅｊｏｉｎｔｌｅａｃｈａｔｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ，ｆｅｅｔｍｏｒｅｏｖｅｒｗａｓｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｉｎｄｕｃｅｄｂｙｏｖｉｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｗａｓｅａｒｄｏｎｅ．６．Ｍｉｃｅｓｗｅｌｌｉｎｇａｌｂｕｍｉｎ，ｍｉｃｅｓｗｅｌｌｉｎｇｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ，ｔｈｅｍｉｃｅ７ft東大學博士學位論文ｗｒｉｔｈｉｎｇｉｎｄｕｃｅｄｒｅｓｐｏｎｓｅｒｅｓｐｏｎｅｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙａｃｅｔｉｃｂｙｈｏｔｐｌａｔｅ．Ｉｎａｎｄｔｈｅｓｅｍｏｄｅｌｓａｃｉｄｔｈｅａｎｄｔｈｅｍｉｃｅｓｗｅｌｌｉｎｇｐａｉｎｗａｓｄｅｇｒｅｅ，ｐａｉｎｄｅｔｅｃｔｅｄｌａｔｅｎｃｙｐａｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．７．ＳＥＬＤＩ—ＴＯＦＭＳａｎｄＣＭ１０ＰｒｏｔｅｉｎＣｈｉｐｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｓｅｒｕｍｐｒｏｔｅｏｍｉｃｐａｔｔｅｒｎｓｏｆ３６ｍｉｃｅｓｅｒｕｍｓｐｅｃｉｍｅｎｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｆｒｏｍｔｈｅｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂ．Ｔｈｅｄｅｃｉｓｉｏｎｍｏｄｅｌｆｏｒａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｎｔａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｆｔｅｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｍｅｄｉｃｉｎｅｈｅｒｂｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：１．Ｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｉｎｕｒｉｃａｃｉｄｇｒｏｕｐ，ｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅｇｒｏｕｐａｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅｐｌｕｓｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｇｒｏｕｐａｌｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｂｕｔｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｉｎｎｏｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅｇｒｏｕｐａｎｄｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅｐｌｕｓｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｈａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｆｒｏｍｔｈａｔｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．２．Ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌａｎｄｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅｂｏｔｈｃｏｕｌｄｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅ，ｍｏｒｅｏｖｅｒｌｅｖｅｌｏｆｍｏｄｅｌ．３．ａｌｌｃｏｕｌｄｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅＣＯＵｌｄｄｅｃｒｅａｓｅＰｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｔｈｅｕｒｉｎｅｕｒｉｃａｃｉｄｇｌａｂｒａｌｅｖｅｌｃｏｒｔｅｘ，ｓｍｉｌａｘｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄＲｏｘｂ，ａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｏｆｍｉｃｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅ，ｂｕｔｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｄｉｏｓｃｏｒｅａｃｅａｅｏｒ．ｐｌａｎｔａｇｉｎａｃｅａｅｈａｓｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．Ｉｎｔｈｅｍｏｕｓｅｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｆｒｏｍｔｈａｔｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉｂｙｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｉｎｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅ，ｔｈｅｓｅｒｕｍＸＯＤａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｇｒｏｕｐａｎｄｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂｔｈｅｓｅｒｕｎｂｃｏｒｔｅｘｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｄ，ｂｕｔＸＯＤａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｎｏｉｎａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｇｒｏｕｐａｎｄｐｌａｎｔａｇｉｎａｃｅａｅｔｈａｔｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．４．Ｉｎｔｈｅｒａｔｇｒｏｕｐｈａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｆｒｏｍｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅ，ｔｈｅｕｒｉｎｅｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｉｎａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｇｒｏｕｐｍａｒｋｅｄｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｕｔｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅ．Ｔｈｅ２４ｈｕｒｉｎｅｖｏｌｕｍｅｏｆｒａｔｓｉｎａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｇｒｏｕｐｓｅｅｍｅｄｔｏａｄｄｂｕｔｈａｓｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｆｒｏｍｔｈａｔｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．５．Ｉｎ８ft東大學博士學位論文ｔｈｅｍｏｕｓｅｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｍｏｄｅｌ，ｔｈｅｊｏｉｎｔｓｗｅｌｌｉｎｇｗａｓｖｅｒｙｏｂｖｉｏｕｓａｔ２４ｈ．ＴｈｅｌｅｖｅｌｏｆＩＬ一１ＢａｎｄＴＮＦ一旺ｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄａｎｄｈｉｓｔｏｐａｔｈｏＩｏｇｉｃｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｙｎｏｖｉａｌＲｏｘｂｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｅｒｉｏｕｓｌｙｉｎｊｕｒｅｄｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．ＳｍｉｌａｘｇｌａｂｒａｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔＩＬ?ｌｊｏｉｎｔｓｗｅｌｌｉｎｇｏｆｍｏｕｓｅ，ｒｅｄｕｃｅｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｐａｎｄＴＮＦ?口ａｎｄｍａｒｋｅｄｌｙｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｃｈａｎｇｅｓ．６．Ｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙｏｖｉｇｌａｂｒａａｌｂｕｍｉｎ，ｔｈｅｓｗｅｌｌｉｎｇｄｅｇｒｅｅｉｎｓｍｉｌａｘｄｅｃｒｅａｓｅｄＲｏｘｂｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．Ｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎａｎｄｗｒｉｔｈｉｎｇｒｅｓｐｏｎｅｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｒｅｄｕｃｅｂｙａｃｅｔｉｃｅａｒａｃｉｄ，ｓｍｉｌａｘｓｗｅｌｉｎｇｔｏｇｌａｂｒａＲｏｘｂｏｆｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｍｏｕｓｅａｎｄｆｒｅｑｕｅｎｃｙｗｒｉｔｈｉｎｇｒｅｓｐｏｎｅ．ＳｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂｓｅｅｍｅｄｏｎｐｒｏｌｏｎｇｐａｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｌａｔｅｎｃｙｈｏｔｐｌａｔｅｂｕｔｈａｓｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｆｒｏｍｔｈａｔｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．７．２７ｏｂｖｉｏｕｓｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎｓｅｒｕｍａｒｅａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ４６ｌ２，ｌ２９ｌ５，５６３７，３０１８ａｎｄ２３ｌ０３Ｄａａｒｅｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｐｒｏｔｅｉｎａｒｅｐｅａｋｓａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ６４５６，４９７３，３９２３ａｎｄｌ５０９０Ｄａｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．１５ｓｅｒｕｍｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｒｅｄｏｗｎ?ｒｅｇｕｌａｔｅｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ２５９８，４６ｌ４，３４４４，１９６８６ａｎｄ３０ｌ８Ｄａａｒｅｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ２９３７Ｄａｉｓｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ａｄｅｃｉｓｉｏｎｍｏｄｅｌｗａｓｂｕｉｌｔｗｉｔｈｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓｏｆ４６ｌ２Ｄａａｎｄ６４５６Ｄａ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｅｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｆｒｏｍｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｓｗｉｔｈｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙｏｆ７５．Ｏ％．Ｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ４６１２Ｄａａｎｄ４６１４Ｄａｗｅｒｅｔｗｏｐａｒｔｓｏｆｔｈｅｓａｍｅｉｎｍｏｄｅｌｏｂｔｕｓｅｐｅａｋ，ｏｆｗｈｉｃｈｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｗａｓｕｐ?－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｇｒｏｕｐａｎｄｄｏｗｎ??ｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｂｏｔｈｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ４６ｌ２ａｎｄ４６１４Ｄａａｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｃａｎｄｉｄａｔｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｏｆａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ｏｘｏｎａｔｅＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：１．Ｐｏｔａｓｓｉｕｍｇｉｖｅｎｂｙｉｐｃｏｕｌｄｅａｔａｂｌｉｓｈｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌ．２．Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉｃｏｒｔｅｘ，ｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂａｎｄ９ft東大學博士學位論文ａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｃｏｕｌｄｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌ．ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂｍａｙｂｅｒｅｌｅｖａｎｔｉｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＸＯＤａｎｄｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｍａｙｂｅｒｅｌｅｖａｎｔｉｎａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｃｒｅｔｉｏｎｏｆｕｒｉｃａｃｉｄ．３．ＳｍｉｌａｘｍｅｃｈａｎｉｓｍｇｌａｂｒａｍａｙＲｏｘｂｂｅｐｏｓｓｅｓｓｅｄｔｏａｎｔｉｇｏｕｔａｒｔｈｒｉｔｉｓｐｒｏｄｕｃｔｅｆｆｅｃｔｓ，ａｎｄｏｆｉｔｓｒｅｌａｔｅｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．４．ＳＥＬＤＩ－ＴＯＦＭＳｃｏｕｌｄｄｉｓｃｒｉｍａｎａｔｅｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｆｒｏｍｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｓａｎｄｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｆｒｏｍｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｉｔｉｓｕｓｅｆｕｌｆｏｒｆｉｎｄｉｎｇｔｈｅｃａｎｄｉｄａｔｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｏｆａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ：１．ＥｓｔａｂｌｉｓｈＳｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂａｒｅｌｉａｂｌｅａｎｉｍａｌｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌ．２．ｉｓｆｏｕｎｄｔｏｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌａｎｄｈａｖｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｒｙａｎｄａｎａｌｇｅｓｉｃｅｆｆｅｃｔｓ．Ｉｔｉｓｕｓｅｆｕｌｆｏｒｆｉｎｄｉｎｇａｎｅｗｔｏｍｅｄｉｃａｍｅｎｆｉｎｄｔｈｅｆｏｒｇｏｕｔ．３．ＳＥＬＤＩ－ＴＯＦＭＳｉｓａｆａｖｏｕｒａｂｌｅａｒｔｈｒｉｔｉＳ．ｔｏｏｌｃａｎｄｉｄａｔｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｏｆａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙＫｅｙＷｏｒｄｓ：ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ；ｇｏｕｔ；ａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌ；ｔｒａｎｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ；ＳＥＬＤＩ—ＴＯＦＭＳft東大學博士學位論文前言痛風（ｇｏｕｔ）是長期嘌呤代謝障礙、血尿酸增高引起組織損傷的一組異質性疾病…。臨床特點是：高尿酸血癥（ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ）、急性痛風性關節(jié)炎反復發(fā)作、痛風石沉積、特征性慢性關節(jié)炎和關節(jié)畸形，常累及腎引起慢性間質性腎炎和腎尿酸結石形成。上述表現(xiàn)可單獨或聯(lián)合存在．痛風的生化標志是高尿酸血癥，指細胞外液的尿酸鹽呈超飽和狀態(tài)，一般認為血尿酸鹽＞４ｌ７￥ｔｍｏｌ／Ｌ時應考慮高尿酸血癥。約５％一ｌ２％高尿酸血癥患者會發(fā)展成為痛風。痛風的急性發(fā)作是尿酸鈉ｕｒａｔｅ（ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍｃｒｙｓｔａｌ，ＭＳＵ）在關節(jié)及關節(jié)周圍組織以結晶形式沉積引起的急性炎癥反應。ＭＳＵ晶體作用于中性粒細胞、滑膜細胞、單核細細胞因子能夠介導細胞間信號傳導，在炎癥反應中發(fā)揮作用。有研究表明ＩＬ．ＩＢ、ＩＬ．８和ＴＮＦ．ａ的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，分析滑液中相關細胞因子有利于指導臨床診斷、治療和疾病預測心】。痛風不僅可以侵犯骨和關節(jié)，而且還容易累及腎臟和心血管系統(tǒng)。高尿酸血癥及原發(fā)性痛風與肥胖癥、高脂血癥、高血壓病、糖尿病、動脈粥樣硬化等疾病呈顯著正相關陽。５１．因此，痛風是危害人類健康的一種嚴重的代謝性疾病。近年來，隨著人們生活水平的提高，飲食結構的變化，糖、脂肪、蛋白質攝入量明顯增加，無論是歐美國家還是東方各國，痛風的患病率有逐年遞增的趨勢¨１。目前對高尿酸血癥和痛風的預防主要是限制高嘌呤食物，控制飲酒，在治療上既要控制急性發(fā)作的關節(jié)炎，又要長期治療高尿酸血癥，預防痛風石沉積ｎ引。化學藥物分為治療痛風性關節(jié)炎和糾正高尿酸血癥兩類…一引。前者有秋水仙堿、非甾體類抗炎藥、糖皮質激素，它們能快而有效地緩解疼痛，減輕炎癥；后者有丙磺舒、苯溴馬?。ù龠M尿酸的排泄）和別嘌呤醇（抑制尿酸的生成）ｎ３ｑ引。但這些藥物的不良反應較多，苯溴馬隆可導致嚴重的肝損害及神經(jīng)系統(tǒng)¨卜１８１。別嘌呤醇是唯一在臨床上使用的黃嘌呤１２ft東大學博士學位論文氧化酶抑制劑，能夠通過抑制黃嘌呤氧化酶抑制尿酸的生成，但其可致皮膚過安全使用ｎ尿酸血癥藥物成為今后的一個發(fā)展方向，也是藥學研究的一個熱點．中醫(yī)中藥治療高尿酸血癥和原發(fā)性痛風的報道較多心ｋ２益氣健脾，泄?jié)犰钇５龋R床報道多為回顧性的總結，無對照觀察，診斷標并初步探討其作用機制。１３ft東大學博士學位論文參考文獻痛風．內科學第６版．葉任高主編．人民衛(wèi)生出版社．２００４；８６２．８．２ＰｕｎｚｉＬ，ＣａｌｏＬ，ＰｌｅｂａｎｉｉｎｓｙｎｏｖｉａｌＭ．Ｃｌｉｎｉｃａｌｆｌｕｉｄ．ＣｒｉｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅＲｅｖＣｌｉｎｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅＳｃｉ．２００２；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ３９：６３．８８．３Ｌａｂ志．１９９９；３：２４４．６．４ＫｏｈａＷＨ，ＳｅａｈＡ，ＣｈａｉＰ．Ｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｄｉｓｅａｓｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓｏｆｇｏｕｔ：ｈｏｓｐｉｔａｌｂａｓｅｄｓｔｕｄｙｏｆｌ００ｐａｔｉｅｎｔｓｉｎＳｉｎｇａｐｏｒｅ．ＡｎｎＡｃａｄＭｅｄＳｉｎｇａｐｏｒｅ．１９９８：２７：７－１０．５ＴａｋａｈａｓｈｉＳ，ＹａｍａｎｏｔｏＴ，ＭｏｒｉｗａｌｄＹ，ｅｔａ１．ＩｎｃｒｅａｓｅｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｓｅｒｕｍＬｐ（ａ）ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｐｒｉｍａｒｙｇｏｕｔ．ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ．１９９５；５４：９０－３．６ＬａｗｒｅｎｃｅｐｒｅｖａｌｅｎｃｅＲＣ，ＨｅｌｍｉｃｋＣＧ，ＡｒｎｅｔｔＦＣ，ｅｔａ１．ＥｓｔｉｍａｔｅｓｏｆｔｈｅｏｆａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｓｅｌｅｃｔｅｄｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌｄｉｓｏｒｄｅｒｓｉｎｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓ．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．１９９８；４ｌ：７７８—９．７杜蕙，陳順樂，王員等．上海市黃埔區(qū)社區(qū)高尿酸血癥與痛風的流行病學調查．中華風濕病學雜志．１９９８；２：７５．８．分析中華流行病學志．１９９６；ｌ７：ｌ０．１２．９苗志敏，趙世華，王顏剛等．ft東沿海居民高尿酸血癥及痛風的流行病學調查．中華內分泌代謝雜志．２００６；２２：４２１．５．１０ＰｏｌｌｍａｎｎＧ，ＫｕｌｌｉｃｂＷ，ＫｌｅｉｎＧ．Ｔｈｅｒａｐｙｏｆｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａａｎｄｇｏｕｔ．ＷｉｅｎＭｅｄＷｏｃｈｅｎｓｃｈｒ．１９９７；１４７：３８２－７．１ｌＥｍｍｅｒｓｏｎＢＴ．Ｔｈｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆｇｏｕｔ．ＮＥｎｇｌ４４５．５１．１２ＪＭｅｄ，ｌ９９６；３３４：研究進展．國外醫(yī)學內分泌學分冊．２００５；２５：２７７．９．１３ＦａｒｏＡＧ．Ｍａｎａｇｉｎｇｐｒｏｂｌｅｍｇｏｕｔ．ＡｎｎＡｃａｄＭｅｄＳｉｎｇａｐｏｒｅ．１９９８；１４ft東大學博士學位論文２７：９３．９．１４ＳｈｉｍｉｚｕＴ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｇｏｕｔａｒｔｈｉｔｉｓ．ＮｉｐｐｏｎＲｉｎｓｈｏ．１９９６；５４：３２６７．７１．１５ＴａｍａｎａｋａＨ．Ｈｏｗｔｏｓｅｌｅｃｔａｎｄｕｓｅｕｒａｔｅｌｏｗｅｒｉｎｇｆｏｒｈｙｐｅｒ－ｕｒｉｃｅｍｉａ．ＮｉｐｐｏｎＲｉｎｓｈｏ．１９９６；５４：３２６ｌ－５．．２０００；２ｌ：２８５。１７苯溴馬?。阂蚋螕p害報告被撤回．藥物警戒通訊．２００３；５：ｌ６．７．１８張開達．痛風利仙致神經(jīng)系統(tǒng)嚴重不良反應ｌ志．２０００；２０：６３９．１９ＫｅｌｌｅｙＷＮ．Ａｎｔｉｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉｃｄｒｕｇｓ．Ｉｎ：ＫｅｌｌｅｙＷＮ，ＨａｒｒｉｓＥＤ，ＲｕｄｄｙＳ，ＳｌｅｄｇｅＣＢ．ＴｅｘｔｂｏｏｋｏｆＲｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＷＢＳａｕｎｄｅｒｓ．１９９ｌ；８６２—７７．。ＨｏｕｓｓｅｔＣ，ｅｔａ１．Ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌｈｙｐｅｒ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ．Ａｐｏｓｓｉｂｌｅｃａｕｓｅｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓａｎｄｍｕｃｏｃｕｔａｎｅｏｕｓｅｒｕｐｔｉｏｎｓｉｎａｐａｔｉｅｎｔｕｎｄｅｒ－ｇｏｉｎｇａｎｔｉｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＲｅｖｕｅｄｅｓＭａｌａｄｉｅｓＲｅｓｐｉｒａｔｏｉｒｅｓ．１９９５；１２：３１４—６．ｌ陳光亮，徐叔云．中藥治療痛風研究近況．安徽中醫(yī)學院學報．２００３；２２：５７－９．陳文照，姜宏，顧瑞生等．經(jīng)方治療痛風臨床研究進展．中醫(yī)正骨．１９９６；８：３３．ＫｏｎｇＬＤ，ＹａｎｇＣ，ＧｅＦ，ｅｔａ１．ＡＣｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂａｌｍｅｄｉｃｉｎｅＥｒｍｉａｏｗａｎｒｅｄｕｃｅｓｓｅｒｕｍｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｓｌｉｖｅｒｘａｎｔｈｉｎｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅａｎｄｘａｎｔｈｉｎｅｏｘｉｄａｓｅｉｎｍｉｃｅ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．２００４；９３：３２５—３０．ＣｈｅｎＧＬ，ＷｅｉＷ，ＸｕＳＹ．ＥｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＴｏｔａｌＳａｐｏｎｉｎｏｆＤｉｏｓｃｏｒｅａｏｎａｎｉｍａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ．ＡｍＪＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄ．２００５；３４：７７．８５．２２２２３２４ft東大學博士學位論文第一部分高尿酸血癥動物模型的建立高尿酸血癥（ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ）是指由嘌呤代謝紊亂和（或）尿酸排泄障礙所致血尿酸增高，細胞外液尿酸鹽呈超飽和的狀態(tài)。正常男性血尿酸為ｌ５０－３８０９ｍｏｌ／Ｌ，女性更年期以前為ｌ００－３００９ｍｏｌ／Ｌ，更年期后其值接近男性。３７℃時，血清尿酸的飽和濃度約為４ｌ６ｐｍｏｌ／Ｌ，高于此值即為高尿酸血癥…。超高蛋白膳食是引起嘌呤代謝紊亂的重要原因，過量糖、脂肪、蛋白質、鹽的攝入及大量飲酒與患病率增加有重要關系他１。約５％－ｌ２％高尿酸血癥患者會發(fā)展成為痛風，痛風不僅可以侵犯骨和關節(jié)，而且還容易累及腎臟和心血管系統(tǒng)。高尿酸血癥和痛風是當前危害人類健康的一種嚴重的代謝性疾病。目前能夠降低血尿酸的藥物主要有兩類，一類是抑制尿酸產(chǎn)生的黃嘌呤氧化酶抑制劑，主要有別嘌呤醇：另一類是促進腎臟清除尿酸的藥物，主要有丙磺舒、苯溴馬隆等。這些藥物或價格昂貴（如苯溴馬隆），或容易發(fā)生過敏等不良反應（如別嘌呤醇、丙磺舒），使高尿酸血癥的臨床治療受到一定程度的限制。更加安全、有效、經(jīng)濟的降尿酸藥物急待研究。建立高尿酸血癥動物模型，對研究尋找防治高尿酸血癥的藥物具有重要意義門外。所以大多數(shù)動物體內血尿酸值較低，不宜用于觀察藥物對血尿酸水平的影劑，增加體內尿酸、尿酸前體（次黃嘌呤、黃嘌呤、腺嘌呤）高尿酸血癥建模方法，并利用別嘌呤醇和苯溴馬隆對其進行檢驗。１６ft東大學博士學位論文材料與方法１．實驗動物昆明種小鼠７２只，雄性，體重２０－２５克，由ft東大學實驗動物中心提供。２．試劑與藥物酵母膏（ｙｅａｓｔａｃｉｄＥＣｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅ９ｌｌ９４８）英國Ｏｘｉｏｄ公司；尿酸（ｕｒｉｃａｃｉｄ，２００．７２０—７）美國Ｓｉｇｍａ公司；氧嗪酸鉀鹽（ｏｘｏｎｉｃｓａｌｔｐｏｔａｓｓｉｕｍ９７％ＥＣ２ｌ８．６２７．５）美國Ａｌｄｒｉｃｈ公司；苯溴馬?。ǎ埃叮埃常欤欤叮┑聡章笏帍S生產(chǎn)；別嘌呤醇（０６１００１）上海信宜萬象藥業(yè)股份有限公司；鹽酸乙胺丁醇片（０６０４０５）上海醫(yī)藥集團有限公司信宜制藥總廠．３．藥物配制及使用方法酵母膏（ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅＹＥ）：用滅菌蒸餾水配成７５９／１００ｍｌ的混懸液，按照３０９／ｋｇ／ｄ體重的劑量每日分２次灌胃。尿酸（ｕｒｉｃａｃｉｄＵＡ）－用滅菌蒸餾水配成１２５０ｍｇ／１００ｍｌ的混懸液．按照２５０ｍｇ／ｋｇ體重的劑量一次性腹腔注射．氧嗪酸鉀鹽（ｏｘｏｎｉｃａｃｉｄ，ｐｏｔａｓｓｉｕｍｓａｌｔＯＡ）：用滅菌熱蒸餾水配成１．５９／ｌ００ｍｌ的混懸液，按照３００ｍｇ／ｋｇ體重的劑量一次性腹腔注射。鹽酸乙胺丁醇片（ｅｔｈａｍｂｕｔｏｌＥ）：將藥片壓碎，加蒸餾水溶解、混勻，配成１０００ｍｇ／ｌ００ｍｌ，按照２５０ｍｇ／ｋｇ體重的劑量每日灌胃１次．苯溴馬?。簩⑺幤瑝核?，加蒸餾水溶解、混勻，配成按照２０ｍｇ／ｋｇ體重的劑量每日灌胃１次．別嘌呤醇：將藥片壓碎，加蒸餾水溶解、混勻，配成按照４０ｍｇ／ｋｇ體重的劑量每日灌胃１次．４．主要儀器設備羅氏全自動生化分析儀；ＬＤ４．２Ａ離心機（北京醫(yī)用離心機廠）；Ｏｌｙｍｐｕｓ高倍光學顯微鏡；ＤＦ—ｌｌＯ型電子分析天平；ＪＥＭ．２００ＣＸ透射電子顯微鏡（日本ＪＥＯＬ公司）；會好優(yōu)速尿酸測試儀（美國會好醫(yī)療１７ft東大學博士學位論文有限公司）：代謝籠：由ft東省實驗動物中心提供。５．動物分組及建模將４８只小鼠隨機分為６組，每組８只，分別為正常對照組（Ｃ）、酵母膏組（Ｙ）、尿酸組（ＵＡ）、氧嗪酸鉀鹽組（ＯＡ）、酵母膏＋乙胺丁醇組Ｅ）、氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇組（ＯＡ＆Ｅ）。酵母膏按３０９／ｋｇ／ｄ量每日灌胃２次，共７天，乙胺丁醇按照２５０ｍｇ／ｋｇ的劑量每日灌胃１次，共７天。尿酸、氧嗪酸鉀鹽分別按２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ劑量在第７日取血前２小時腹腔注射一次。各組藥物劑量見表１．５．１觀察指標與測定方法第７日腹腔注射尿酸或氧嗪酸鉀鹽后２小時，鼠尾取血，用尿酸儀檢測血尿酸構觀察第７日取血后處死小鼠，迅速取出腎臟髓質組織，應用鋒利刀片修成約的小塊，置于４℃預冷的５％戊二醛中固定。取出固定好的組織塊，用４℃０．１Ｍ的ＰＢＳ緩沖液反復沖洗，每次約２０ｍｉｎ；再用４℃ｌ％固定約Ｉｈ，４＂Ｃ條件下乙醇梯度（５０％，６０％，７０％，８０％，９０％，ｌ００％）常規(guī)脫水３次，每次ｌ０ｍｉｎ，Ｅｐｏｎ８ｌ２包埋劑浸透，無水丙酮脫水３次，每次ｌ０ｍｉｎ，ｌ／２無水丙酮＋ｌ／２包埋劑ｌｈ，包埋劑過夜；后先經(jīng)３７℃與４５℃加溫各１２ｈ，２４ｈ；ＬＫＢ．ｖ超薄切片機切片，醋酸雙氧鈾染色３０ｍｉｎ，３０ｒａｉｎ，ＪＥＭ．２００ＣＸ透射電鏡觀察并攝片。６．檢驗模型的藥物篩選作用采用氧嗪酸鉀鹽腹腔注射法建模，將２４只小鼠隨機分為４組，每組６只，連續(xù)灌胃給藥３天．正常對照組和模型組用生理鹽水灌胃，苯溴馬隆組按照２０ｍｇ／ｋｇ體重的劑量每日灌胃１次，別嘌呤醇組按照４０ｍｇ／ｋｇ日灌胃１次．除正常對照組外第３日灌胃給藥前ｌ藥后ｌ中飼養(yǎng)，收集每組動物第３—４日２４ｄ，時的尿液測尿尿酸濃度。７．統(tǒng)計學分析１８ft東大學博士學位論文所測數(shù)據(jù)以均值標準差（工４－Ｓ）２．０軟件，用藥前后比較、組間比較采用ｔ檢驗。１９ft東大學博士學位論文結果１．高尿酸血癥動物模型建立方法１．１血０Ａ濃度的變化用藥前，比較各組小鼠血尿酸水平無顯著性差異（Ｐ＞Ｏ．０５）。用藥后，尿酸組、氧嗪酸鉀鹽組、氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇組小鼠血尿酸值明顯升高（尿酸組從ｌ０８．９＋１０．１１．ｔｍｏｌ／Ｌ升高到３０１．８＋＿２４．７ｐ．ｍｏｌ／Ｌ；氧嗪酸鉀鹽組從ｌｌ９．１±２０．６ｐ．ｍｏｌ／Ｌ升高到２７６．３±３２．５ｐ．ｍｏｌ／Ｌ；氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇組從１１５．７＋１７．４ｐ．ｍｏｌ／Ｌ升高到２８２．２±４０．７ｐｍｏｌ／Ｌ），與用藥前比較均有顯著性差異（Ｐ＜Ｏ．０１）；而尿酸組、氧嗪酸鉀鹽組、氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇組血尿酸值組間比較無顯著性差異（Ｐ＞０．０５）。酵母膏組和酵母膏＋乙胺丁醇組血尿酸值用藥前后無明顯差異（Ｐ＞Ｏ．０ｓ）。（見表２、圖１）１．２血尿素氮濃度的變化用藥后，酵母膏組和酵母膏＋乙胺丁醇組血尿素氮水平明顯升高（酵母膏組從７．９５＋１．Ｉ４ｍｍｏｌ／Ｌ升高到ｌ１．３２±４．０４ｍｍｏｌ／Ｌ；酵母膏＋乙胺丁醇組從８．０９＋１．３０ｍｍｏｌ／Ｌ升高到ｌ２．０５±５．６６ｍｍｏｌ／Ｌ），與用藥前比較有顯著差異（Ｐ＜０．０１）。尿酸差異（Ｐ＞Ｏ．０５）。（見表３、圖２）１．３血肌酐濃度的變化用藥后，酵母膏組和酵母膏＋乙胺丁醇組血肌酐水平明顯升高（酵母膏組從４７．５５±６．１２ｐ．ｍｏｌ／Ｌ升高到８９．２３十６．８３ｐ．ｍｏｌ／Ｌ；酵母膏＋乙胺丁醇組從４２．６９＋５．５７ｐ．ｍｏｌ／Ｌ升高到９０．０９十７．４２９ｍｏｌ／Ｌ），與用藥前比較有顯著差異（Ｐ＜０．０５）。尿酸組、氧嗪酸鉀鹽組和氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇組血肌酐水平與用藥前比較無顯著差異（Ｐ＞０．０５）。（見表４、圖３）１．４造模小鼠腎組織超微結構觀察結果電鏡顯示空白組（圖４Ａ）：態(tài)規(guī)則；酵母膏組（圖４Ｂ）：腎近曲小管上皮細胞線粒體多處出現(xiàn)局部嵴缺失、空化；酵母膏＋乙胺丁醇組（圖４Ｃ）：腎近ft東大學博士學位論文曲小管上皮細胞核周池腫脹、內質網(wǎng)擴張，形成大小不等的空泡；氧嗪酸鉀鹽組（圖４Ｄ）：腎近曲小管上皮細胞線粒體結構正常。氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇組（圖４Ｅ）：腎近曲小管上皮細胞線粒體結構正常，部分線粒體基質呈低密度。尿酸組（圖４Ｆ）：腎小管上皮細胞線粒體結構正常。２．檢驗模型的藥物篩選作用與對照組比較，模型組小鼠的血ＵＡ水平明顯升高，有顯著差異（Ｐ＜Ｏ．０１）。與模型組相比，苯溴馬隆組和別嘌呤醇組血ＵＡ值均明顯降低，表明別嘌呤醇和苯溴馬隆均可降低尿酸酶缺乏時異常升高的血ＵＡ值（Ｐ＜０．０Ｉ）．（見表５）２．２別嘌呤醇和苯溴馬隆對尿ＵＡ濃度的影響與對照組比較，模型組小鼠的尿ＵＡ濃度明顯升高（Ｐ＜０．０５）。與模型組比較，別嘌呤醇組尿ＵＡ濃度降低（Ｐ＜０．０５）而苯溴馬隆組尿ＵＡ濃度明顯增加，提示苯溴馬隆促進了模型組小鼠尿尿酸的排泄（Ｐ＜０．０５）．（見表６）ft東大學博士學位論文討１．建立高尿酸血癥動物模型的意義論高尿酸血癥和痛風是由于嘌呤代謝障礙，血尿酸增高引起的代謝性疾病。一般情況下，成人血尿酸值≥４ｌ６９ｍｏｌ／Ｌ即為高尿酸血癥。由于尿酸的水溶性較差，血尿酸超過其溶解度時會形成結晶，沉積于關節(jié)、腎臟等處，引起關節(jié)炎癥和腎臟損害。率約占總人口的Ｏ．１３％－０．３７％，年發(fā)病率約為０．２０％－０．３５％，而高尿酸血癥的發(fā)病率遠高于痛風的發(fā)病率，約為２％－ｌ８％…的痛風發(fā)病僅報道５８例，而到ｌ９９８年僅上海地區(qū)的一項流行病學調查顯ft東沿海五市（青島、煙臺、東營、日照、威海）調查顯示Ｈ引，高尿酸血癥的患病率為ｌ３．１９％，痛風患病率為１．１４％。與ｌ９９５一ｌ９９６年對東營、日照和威海市的調查結果相比…近ｌｏｇ內，ft速增加，對高尿酸血癥和痛風的研究已經(jīng)逐漸受到重視?！б?，尿酸可以清除氧自由基，保護肝、肺、血管內皮細胞的ＤＮＡ，延緩自由基所引起的器官退行性病防御能力。臨床還發(fā)現(xiàn)高尿酸血癥常常與肥胖…１、糖尿?。睿罚薄⒏咧Y‘¨‘２０１、高血壓Ⅲ一２１和冠心病旺３’于闡述各種與尿酸升高有關的疾病和醫(yī)學現(xiàn)象亦有重要意義．２．高尿酸血癥動物模型研究現(xiàn)狀動物模型是研究疾病發(fā)病機理，尋找新型治療藥物的重要工具。動物模型設計應首先遵循相似性、再現(xiàn)性、可靠性、適用性、可控性ft東大學博士學位論文及易行性原則，而動物模型的評價則主要應從造模因素、模型癥狀表現(xiàn)、病理變化、反證治療及模型穩(wěn)定等方面進行．開展關于高尿酸血癥和痛風的研究也應首先建立起可靠的高尿酸血癥動物模型。而從現(xiàn)有對高尿酸血癥動物模型的研究來看，不論在造模方法，還是實驗動物的選擇上，都存在很大的差異。由此可見，建立可靠的高尿酸血癥動物模型是研究高尿酸血癥及其相關疾病的發(fā)病、尋找新型治療藥物的基礎。２．１動物的選擇乳類動物體內存在尿酸酶，可以將尿酸進一步分解為尿囊素，尿囊素為無毒物水平升高發(fā)生高尿酸血癥。有研究證實，禽類與人類的嘌呤核苷酸代謝途徑相驗動物，且普通實驗室飼養(yǎng)不太方便。嚙齒、哺乳類動物體內尿酸代謝與人類有很大區(qū)別，其體內的尿酸酶將尿酸分解為尿囊素排出體外，很少在體內蓄積，也不會在組織內沉積造成損害．因此，將嚙齒、哺乳類動物造成高尿酸動物模型比較困難，印使造成模型，在其驗證、評估藥物作用部位及機制或在進行高尿酸血癥發(fā)生機理研究時，均存在難以確定藥物作用環(huán)節(jié)等。盡管存在這些不足，但大、小鼠是實驗室的常用動物，操作、飼養(yǎng)較為方便，另外，在種屬上與人類較為接近，都是哺乳動物，故仍廣泛應用于高尿酸血癥造模研究。在動物選擇方面，除了動物種類外，還包括動物性別、年齡。雖有實驗證明雌雄動物無明顯差異，但在實際操作中，一般均用雄性動ft東大學博士學位論文物，因為雌雄動物及同性動物之間，血尿酸正常值差異較大，尤以雌鼠個體之間血尿酸值波動更為明顯，可能與雌性動物激素分泌波動有關。實驗證明年老的動關，但在實驗中通常選用機體各項機能正常的年輕動物。２．２造模方法的研究酵母法：酵母含有豐富的蛋白質、核苷酸、Ｂ族維生素等物質，在體內充分水解能產(chǎn)生含氮的有機堿（包括嘌呤堿類、嘧啶堿類）及磷酸，大劑量的酵母進入體內，引起嘌呤代謝紊亂、黃嘌呤氧化酶活性增加，從而使尿酸的生成增加，產(chǎn)生高尿酸血癥。陳光亮等凹引采用酵母膏灌胃建立小鼠高尿酸血癥模型，發(fā)現(xiàn)以ｌ５－３０９／ｋｇ／ｄ連續(xù)灌胃卜２周，小鼠血清尿酸顯著升高，別嘌呤醇及苯溴馬隆均可降低此高尿酸血癥模型小鼠的血清尿酸水平。劉小青等ｎ引以酵母食餌飼養(yǎng)鵪鶉建立高尿酸血癥模型，結果表明連續(xù)飼喂酵母食餌（１５９／ｋｇ）７天，鵪鶉血清尿酸水平明顯升高，且穩(wěn)定持續(xù)５周。補充尿酸或尿酸前體法：在體內，尿酸的產(chǎn)生過程表現(xiàn)為腺嘌呤核苷一次黃嘌呤核苷一次黃嘌呤一黃嘌呤一尿酸，最終尿酸經(jīng)腎小管分泌排出體外．故增加體內尿酸、尿酸前體（腺嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤）的量或抑制腎小管尿酸的分泌均可導致體內血尿酸含量的增高而致高尿酸血癥．陳光亮等婦＂給小鼠腹腔分別注射ｌ２５，２５０，５００，ｌ０００ｍｇ／ｋｇ尿酸，ｌｈ后取血測定血尿酸水平，結果發(fā)現(xiàn)小鼠腹腔注射尿酸可以形成高尿酸血癥動物模型，以２５０ｍｇ／ｋｇ劑量較好，并且觀察到小鼠腹腔注射尿酸２５０ｍｇ／ｋｇ，ｌＯｍｉｎ后血尿酸達高峰，高尿酸血癥維持４ｈ以上．金沈銳等強釘使用黃嘌呤６００ｍｇ／ｋｇ力Ｎ乙胺丁醇２５０ｍｇ／ｋｇ或５００ｍｇ／ｋｇ給小鼠灌胃５天，建立高尿酸血癥模型。結果顯示造模兩組血尿酸水平均升高，與正常對照組小鼠血尿酸水平有顯著性差異（Ｐ＜Ｏ．０５），以別嘌呤醇及苯溴馬隆進行治療反證，顯示兩組小鼠血尿酸均明顯降低。唐燦等心引采用尿酸生成的前體物質次黃嘌呤（１０００ｍｇ／ｋｇ）腹腔注射小鼠，能顯著升高尿酸，制備了一種較為穩(wěn)定的高尿酸血癥模型，并對造模的量效、時效、動物性別、黃嘌呤氧化酶抑制２４ft東大學博士學位論文增加血尿酸的排泄或抑制黃嘌呤氧化酶活性。熊湘明等陽采用腺嘌呤（ＡｄｅｎｉｎｅＡ）加乙胺丁醇（ＥｔｈａｍｂｕｔｏｌＥ）動物模型，分高、中、低劑量組分別給藥：ｍｇ／ｋｇ，Ｅ高劑量組Ａ２００２５０ｍｇ／ｋｇ：中劑量組ｋｇ，Ｅ２５０ｍｇ／ｋｇ；低劑量組Ａ５０ｍｇ／ｋｇ，Ｅ２５０ｍｇ／ｋｇ，結果高劑量組于第７天、１４天、２ｌ腎損害（ＢＵＮ、Ｃｒ）尿酸酶抑制劑法：人類缺乏尿酸酶，而實驗易得的嚙齒、哺乳類動物體內有尿酸酶，如何抑制動物體內的尿酸酶、建立一個接近于人類尿酸代謝的高尿酸血癥動物模型成為研究的熱點。ｌ９６５年Ｆｒｉｄｏｖｉｅｈ¨¨發(fā)現(xiàn)氧嗪酸鉀鹽（ｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅ）無論在體內還是體外作為尿酸酶抑制劑都具有很強的活性，都可以有效地提高血液和尿液中的尿酸水平。此后Ｊｏｈｎｓｏｎ¨含有５％的氧嗪酸鉀鹽的飼料喂養(yǎng)大鼠３周，大鼠的血漿尿酸鹽水平在幾天內就可達到對照組的３倍，尿液中尿酸水平可達對照組的四倍，尿囊素可降至正常水平的一半．而當上述飼料中再加入ｌ％的尿酸喂養(yǎng)９天，血清中尿酸水平可達對照組的６；倍，尿中尿酸水平甚至可達２２倍．并且隨著時間延長發(fā)生了類似于人類的尿酸性腎病。此后這種方法成為國外高尿酸血癥造模的主流方法，但給藥ｍｇ／ｋｇ）的方法在Ｗｉｓｔａｒ大鼠建立高尿酸血癥動物模型。國內近年來也廣為采用此種模型，如孔令東等釘在研究二妙丸對高尿酸血癥小鼠的影響遍用此法評價藥物的抗高尿酸血癥作用ｎ５。圳．破壞尿酸酶基因及基因重組¨引通過首先破壞小鼠尿酸ft東大學博：ｔ學位論文氧化酶基因，再用基因重組法，獲得尿酸酶缺乏的突變小鼠，從而造成高尿酸血癥模型小鼠。但該方法使半數(shù)以上突變的小鼠活期不到４周，因此不是理想的動物模型。酸水平在實驗前后變化不顯著。因此，灌胃比飼料喂養(yǎng)效果好。２。３陽性藥物的選擇降低血尿酸，清除體內的尿酸池是高尿酸血癥的治療原則。降低血尿酸水平的藥物在臨床上可分為兩大類，一是抑制尿酸合成的嘌呤氧化酶抑制劑；二是促進尿酸排泄的藥物。抑制尿酸合成的藥物別嘌呤醇（ａｌｌｏｐｕｒｉｎ０１）是次黃嘌呤的同分異構體，在體內可緩慢地氧化為黃嘌呤類似物氧嘌呤，別嘌呤和氧嘌呤均是黃嘌呤氧化酶的抑制物，其在體內與黃嘌呤氧化酶的親和力大于次黃嘌呤及黃嘌呤，故別嘌呤醇是臨床上常用的能有效減少尿酸生成、降低血及尿中尿酸水平的藥物。促尿酸排泄的藥物苯溴馬?。ǎ猓澹睿猓颍铮恚幔颍铮睿澹┘捌浯x產(chǎn)物均可主動抑制腎臟近曲小管的主動吸收，從而促進尿酸排泄。在本實驗中我們選用了別嘌呤醇和苯溴馬隆作為陽性對照藥，以保證該研究的客觀性。３．本研究高尿酸血癥動物模型建立方法３．１建模方法的選擇本實驗共驗證了５種建立高尿酸血癥模型的方法，分別應用酵母膏（Ｙ）、尿酸（ＵＡ）、氧嗪酸鉀鹽（ＯＡ）、酵母膏＋乙胺丁醇（Ｙ＆Ｅ）、氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇（ＯＡ＆Ｅ）五種藥物或藥物組合進行建模。尿酸組（ＵＡ）、氧嗪酸鉀鹽組（ＯＡ）以及氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇（ＯＡ＆Ｅ）組小鼠用藥后血尿酸水平較用藥前均明顯升高，分別升高了ｌ７６．７％，ｌ３１．９％，ｌ４３．２％，說明這三種方法均造模成功。氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇（ＯＡ＆Ｅ）組血尿酸水平較單用氧嗪酸鉀鹽稍高，但二者無統(tǒng)計學差異。曾有報道，抗結核藥物毗嗪酰胺可使８６％的服藥者發(fā)生高尿酸血癥∞＂，進一步研究發(fā)現(xiàn)其代謝產(chǎn)物吡嗪酸抑制了腎小管對ft東大學博士學位論文尿酸的分泌從而抑制腎臟對ＵＡ的排泄使血尿酸升高ｎ＂．金沈銳等ｎ。１曾報道用尿酸前體黃嘌呤加抗結核藥乙胺丁醇灌胃給藥５天，在小鼠成功建立了高尿酸血癥模型。本實驗中除驗證氧嗪酸鉀鹽單用的建模效果，另觀察氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇（ＯＡ＆Ｅ）聯(lián)合應用的建模效果，但本實驗數(shù)據(jù)顯示聯(lián)用乙胺丁醇組血尿酸值與單用氧嗪酸鉀鹽組無明顯差異說明乙胺丁醇在本實驗中促血尿酸升高的作用不明顯，原因可能在于小鼠具有強大的排泄尿酸的能力，削弱了乙胺丁醇的抑尿酸排泄作用，另外近來有報道認為高濃度的吡嗪酸鹽可以促進動物的尿酸¨的實驗研究中也發(fā)現(xiàn)，給予黃嘌呤ｋｇ、乙胺丁醇２５０ｍｇ／ｋｇ和黃嘌呤６００ｍｇ／ｋｇ、乙胺丁醇５００ｍｇ／ｋｇ均造模成功，但乙胺丁醇低劑量組中小鼠血尿酸水平更高，提示乙胺丁醇在不同濃度下對尿酸排泄的作用可能也存在差異。因此乙胺丁醇在高尿酸血癥發(fā)生中的確切機制還有待進一步研究。建模成功的尿酸組和氧嗪酸鉀鹽組小鼠腎臟超微結構檢查未發(fā)現(xiàn)明顯異常，原因可能在于該法成模時間短，尿酸雖有明顯升高，但短時間內難以對腎臟造成明顯損害。聯(lián)用乙胺丁醇組小鼠腎臟超微結構除腎近曲小管上皮細胞線粒體密度稍低外，無明顯異常亦說明短期應用乙胺丁醇不會引起腎臟的損害。同樣，檢測這三組小鼠血尿素氮及肌酐水平與空白組比較無明顯差異亦提示這些動物模型的腎功能無明顯損害，與電鏡結果相符。從升高血尿酸的情況來看，這三組模型對研究評價高尿酸血癥適合，但不適合進行尿酸性腎病的相關研究．酵母膏組（Ｙ）、酵母膏＋乙胺丁醇（Ｙ＆Ｅ）組小鼠用藥后血尿酸水平與用藥前比較有升高趨勢但無統(tǒng)計學差異，提示在本實驗中這兩種方法建立高尿酸血癥模型未成功．酵母富含蛋白質、核苷酸、Ｂ族維生素等物質，在體內充分水解能產(chǎn)生含氮的有機堿（包括嘌呤堿類、嘧啶堿類）濃度不宜準確定量，同時用酵母膏灌胃時，按３０９／Ｋｇ體重劑量配ft東大學博：ｂ學位論文制時酵母膏已相當粘稠，而小鼠的灌胃容積量有限使溶媒量不宜過多，故酵母膏的濃度增加受限，較直接給予黃嘌呤、次黃嘌呤造模時嘌呤攝入量的可控性身存在遺傳缺陷，如磷酸核糖焦磷酸合成酶（ＰＰＳ）呤磷酸核糖轉移酶（ＨＧＰＲＴ）部分缺乏癥、腺嘌呤磷酸核糖轉移酶Ｔ）缺乏癥等酶缺陷存在及（或）腎臟尿酸轉運蛋白如ＵＲＡＴｌ酸水平升高不大。所以上述因素可能是造成酵母膏組（Ｙ）（Ｙ＆Ｅ）組血尿酸水平升高不明顯的原因，但電鏡檢查發(fā)現(xiàn)酵母膏組和酵母膏＋乙胺丁醇（Ｙ＆Ｅ）此酵母膏灌胃制造的動物模型可能更適合作為尿酸性腎病來研究．３．２選擇建模方法的依據(jù)通過對５種建立高尿酸血癥模型方法的比較，決定選用氧嗪酸鉀鹽（ＯＡ）法作為本研究后續(xù)實驗的建模方法，選擇該方法的依據(jù)：（１）從建模動物小鼠與人類尿酸代謝的差異點入手，給予尿酸酶抑制劑抑制尿酸代謝，直接升高尿酸，效果肯定。（２）該法是目前國際上最普遍使用的高尿酸血癥動物造模方法，在降尿酸藥物篩選、評價研究時，與國外相關研究的可比性強。ft東大學博士學位論文（３）該法操作方便，干擾因素少，可重復性好。３．３對氧嗪酸鉀鹽建模方法的驗證組血、尿ＵＡ濃度均低于模型組，亦符合其抑制ＵＡ合成的藥理作用。ft東大學博士學位論文結論腹腔注射尿酸、腹腔注射氧嗪酸鉀鹽、腹腔注射氧嗪酸鉀鹽＋灌胃乙胺丁醇均可成功建立小鼠高尿酸血癥動物模型。腹腔注射氧嗪酸鉀鹽因操作簡便、可比性強、可重復性好被作為后續(xù)實驗的造模方法。平，表明該模型可用來篩選降尿酸藥物，并且協(xié)助判斷藥物的可能作用機理。ft東大學博士學位論文附表表１各造模組的藥物及劑量Ｔａｂｌｅ１Ｔｈｅｎａｍｅａｎｄｄｏｓａｇｅｏｆｄｒｕｇｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ表２各組小鼠血尿酸水平變化Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏ用藥前后比較，★★Ｐ＜０．０１ft東大學博士學位論文表３各組小鼠血尿素氮水平變化Ｔａｂｌｅ３Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏｄｕｒｅａｎｉｔｒｏｇｅｎｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ用藥前后比較，★★Ｐ＜Ｏ．０ｌ表４各組小鼠血肌酐水平變化Ｔａｂｌｅ４Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏｄｃｒｅａｔｉｎｉｎｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ用藥前后比較，★★Ｐ＜Ｏ．０１３２ft表５Ｔａｂｌｅ５藥物對高尿酸血癥小鼠血尿酸水平的影響Ｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｄｒｕｇｏｎｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｏｆｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｉｃｅ與對照組比較，★★Ｐ＜０．０１；與模型組比較，木木Ｐ＜Ｏ．０Ｉ表６Ｔａｂｌｅ６藥物對高尿酸血癥小鼠尿尿酸水平的影響Ｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｄｒｕｇｏｎｕｒｉｎｅｕｒｉｃａｃｉｄｏｆｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｉｃｅ與對照組比較，★★Ｐ＜０．０１，★Ｐ＜Ｏ．０５：與模型組比較，木Ｐ＜０．０５３３ft東大學博士學位論文附圖圖ｌ各建模組用藥前后血尿酸水平的變化Ｆｉｇｕｒｅ１Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ圖２各建模組用藥前后血尿素氮水平的變化Ｆｉｇｕｒｅ２Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏｄｕｒｅａｎｉｔｒｏｇｅｎｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐft東大學博士學位論文圖３各建模組用藥前后血肌酐水平的變化Ｆｉｇｕｒｅ３Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏｄｃｒｅａｔｉｎｉｎｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ３５ftＡ重ＤＥＦ圖４電鏡掃描觀察各造模組小鼠腎臟超微結構的變化Ａ正常對照組Ｂ酵母膏組Ｄ氧嗪酸鉀鹽組Ｆ尿酸組Ｃ酵母膏＋乙胺丁醇組Ｅ氧嗪酸鉀鹽＋乙胺丁醇組ft東大學博士學位論文ＴｈｅｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅＳａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｅｎｅｐｈｒｉｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．ＡｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐＢｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｇｒｏｕｐＣｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ＆ｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｇｒｏｕｐＤｏｘｏｎｉｃａｃｉｄｇｒｏｕｐＥｏｘｏｎｉｃａｃｉｄ＆ｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｇｒｏｕｐＦｕｒｉｃａｃｉｄｇｒｏｕｐ３７Ｆｉｇｕｒｅ４ft東大學博士學位論文參考文獻葉任高，８６２．５．２ＣｈｏｉＨＫ，ＬｉｕＳ，ＣｕｒｈａｎＣ．Ｉｎｔａｋｅｏｆｐｕｒｉｎｅ－ｒｉｃｈｆｏｏｄｓ，ｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎｄｄａｉｒｙｐｒｏｄｕｃｔｓａｎｄｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｔｏｔｈｅＴｈｉｒｄＮａｔｉｏｎａｌＨｅａｌｔｈａｎｄｓｅｒｕｍｌｅｖｅｌｓｏｆｕｒｉｃａｃｉｄ；ＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎＳｕｒｖｅｙ．陸再英主編．內科學第６版．人民衛(wèi)生出版社．２００４；ＮｕｔｒｉｔｉｏｎＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．２００５；５２：２８３—９．３１ｗａｔａｎｉＭ，ＷａｓａｄａＴ，１ｗａｍｏｔｏＹ，ｅｔａ１．Ｉｎｓｕｌｉｎｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒａｎｄｕｒａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．ＮｉｐｐｏｎＲｉｎｓｈｏ．２０００；５８：４３０－４．４ＪｉｎｇＦ，ＡｌｄｅｒｍａｎＭＨ．血清尿酸與心血管病死亡率—ｌ９９２年版．２００１；２０：５３．９．５陳光亮，徐叔云．高尿酸血癥動物模型研究進展．中國藥理學通報．２００４；２０：３６９－７３．驗動物科學與管理．２０００；ｌ７：６．９．７唐燦，楊奎．高尿酸血癥動物模型初探．中藥新藥與臨床藥理．２０００；ｌｌ：２９２－４．８周小舟，張盛光，楊曉等．腺嘌呤所致大鼠慢性腎功能衰竭的機制研究．基礎醫(yī)學與１１６ｉ床。ｌ９９７；ｌ７：５４．７．９奚九一，趙兆琳，魯培基等．高尿酸血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