人前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒分析檢測說明書

人前列腺素E2（PGE2)ELISA試劑盒解析檢測說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：48T25ng/L—800ng/L使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本前列腺素E2（PGE2)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人前列腺素E2（PGE2）水平。用純化的人前列腺素E2(PGE2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入前列腺素E2(PGE2）,再與HRP標志的前列腺素E2（PGE2）抗體結(jié)合，形成抗體—抗原—酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過完全沖洗后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)變成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)變成最后的黃色.顏色的深淺和樣品中的前列腺素E2（PGE2）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,經(jīng)過標準曲線計算樣品中人前列腺素E2（PGE2）濃度.試劑盒組成120倍濃縮沖洗液20ml×1瓶7停止液3ml×1瓶2酶標試劑3ml×1瓶8標準品0。5ml×1(1600ng/L）瓶3酶標包被板12孔×4條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液3ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液3ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液3ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1．標本收集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文件進行，提取后應(yīng)趕忙進行實驗.若不能夠立刻進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)防備屢次凍融2．不能夠檢測含NaN3的樣品，因NaN3控制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1。標準品的稀釋：本試劑盒供給原倍標準品一支，用戶可依據(jù)以下列圖表在小試管中進行稀釋。800ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液400ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液200ng/Ll3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液100ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液50ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2。加樣：分別設(shè)空白孔(空白比較孔不加樣品及酶標試劑,其他各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品正確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，爾后再加待測樣品10μl（樣品最后稀釋度為5倍）.加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不波及孔壁，輕輕晃動混勻.3。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4。配液:將20倍濃縮沖洗液用蒸餾水20倍稀釋后備用5.沖洗：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿沖洗液，靜置30秒后棄去，這樣重復(fù)5次，拍干。6。加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。7。溫育：操作同3.沖洗：操作同5.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10。停止：每孔加停止液50μl，停止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11。測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加停止液后15分鐘之內(nèi)進行.注意事項：1．試劑盒從冷藏環(huán)境中拿出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃沖洗液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,沖洗時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校正其正確性，以防備試驗偏差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)目多,介紹使用排槍加樣.4．請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋必然倍數(shù)（n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5)。5．封板膜只限一次性使用，以防備交錯污染。6．底物請避光保存。7．嚴格依聽說明書的操作進行，試驗結(jié)果判斷一定以酶標儀讀數(shù)為準.8．全部樣品，沖洗液和各種荒棄物都應(yīng)按傳染物辦理。9．本試劑不同樣批號組分不得混用。10。如與英文說明書有異，以英文說明書為準。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2—8℃.2．有效期:6個月Theperformanceofkit：1sensitivity:minimumdetectionconcentrationislessthan1standard。Linearityofdilution。SamplelinearregressionandtheexpectedconcentrationcorrelationcoefficientRvalueis0.990.2：nospecificreactionwithothercytokines。3repeatability:plate，platebetweenthecoefficientsofvariationwerelessthan10％。HumantypeIIIprocollagenaminoterminalpeptideELISAkitsteps:1beforeuse,allreagentsandmixing。Donotallowliquidtoproducealargenumberofbubbles，soastoavoidaddingalargenumberofbubbles,resultingintheadditionoftheerror.2accordingtodeterminethenumberofsamplenumberplusstandardstripnumber。Eachstandardandblankholeisrecommendedtodothehole。Eachsamplecanbemadeaccordingtoitsownquantity,andcanbeusedasaholeinthehole。3dilutedafterstandard50ulinreactionhole，addedtothesample50ULinreactionholetobemeasured。Immediatelyjoinedthe50ULantibodybiotin。Coverthemembraneplate,gentlyoscillatingmixing，37degreesCelsiusfor45minutes。4leftholeliquid，eachholefilledwithwashingliquid，oscillating30secondsoffthewashingliquid,patdrywithabsorbentpaper.Repeatthisoperation4times.Ifthewashingmachinewithwashing,washingtimesincreasedonce。5perholeaddingchainaffinityenzyme-HRP100ul，gentlyoscillatingmixing,37degrees30minutesincubation.6leftholeliquid,eachholefilledwithwashingliquid，oscillating30secondsoffthewashingliquid,patdrywithabsorbentpaper.Repeatthisoperation4times。Ifthewashingmachinewithwashing,washingtimesincreasedonce.7perholeaddingsubstrateA，B50ul,gentlyoscillatingmixing,37degrees5minutesincubation。Avoidlight。8removeELISAplate，quicklyadd50ulterminatedliquid，addingthestopsolutionimmediatelyafterthedeterminationresults.9oddeterminationofeachholeatthewavelengthof450nm。Theresultofjudgmentandanalysis:1,instrumentvalue:YuBo450nmELISAodreadtheholeontheinstrument2,totheODvalueasaverticalcoordinate(y），correspondingotstandardconcentrationsasahorizontalcoordinate(x），dohavecorrespondingcurve,sampleotcontentcanbeaccordingtotheODvaluebystandardcurveconversionoutcorrespondingconcentration，multipliedbythedilutionmultiple;orwiththestandardconcentrationandtheODvaluecalculatedtheregressionequationo