實驗室生物安全

1實驗室生物安全

與防護基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)實驗室張才軍

電話：1364887200265922847郵箱：caijunzhang2007@教學(xué)大綱及要求張才軍選修課申報\教學(xué)大綱.doc參考書目《病原微生物實驗室生物安全》，祁國明主編.人民衛(wèi)生出版社2.《實驗室生物安全》，葉冬青主編.人民衛(wèi)生出版社3.《實驗室生物安全》，徐濤主編.高等教育出版社考核方式1.大課出勤：20分2.平時成績（作業(yè)）：20分3.考試成績：60分6第一章實驗室生物安全概述7第一節(jié)實驗室生物安全的概念與范圍

一、基本概念（一）生物危害（bio-hazard）：是指各種生物因子對人、環(huán)境和社會造成的危害或潛在危害。有害生物因子包括病原微生物、高等動植物的毒素和過敏原、微生物代謝產(chǎn)物的毒素和過敏原，基因結(jié)構(gòu)生物體等。8（二）生物危害的來源

1.來源于人和動物的各種致病微生物

2.來自外來生物的入侵

3.來自轉(zhuǎn)基因生物可能的潛在危害

4.來自生物恐怖事件9二、生物安全（bio-safety）（一）生物安全的概念：是指避免危險生物因子造成實驗室人員暴露，向?qū)嶒炇彝鈹U散并導(dǎo)致危害的綜合措施。生物安全貫穿于實驗的整個過程，從取樣開始到所有潛在危險材料被處理。生物安全面臨的對象主要包括實驗者本人、操作對象（如動物）、實驗者身邊的人和環(huán)境等。10（二）實驗室生物安全（Laboratoryboisafety）：是指以實驗室為科研和工作場所時，避免危險生物因子對實驗室人員和相關(guān)工作人員的危害，對環(huán)境的污染和對公眾的傷害，為了保證實驗研究的科學(xué)性，還要保護被實驗因子免受污染。11（三）生物安全的相關(guān)術(shù)語：生物因子（bio-agent）:具有一定生物活性的制劑均可稱為生物因子，包括能夠進行基因修飾、細胞培養(yǎng)和生物體內(nèi)寄生的，可能致人、動物感染、過敏或中毒的一切微生物和其相關(guān)的生物活性物質(zhì)。病原體（pathogens）：能致病的生物因子，包括能夠引發(fā)人、動物植物傳染病的生物因子，主要指致病微生物。123.危險廢棄物：即有潛在危險的廢物，如可燃、易爆、腐蝕、有毒、傳染、放射或其他破壞作用的廢物。4.氣溶膠：指懸浮于氣體介質(zhì)中粒徑一般為0.001~100um的固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成的相對穩(wěn)定的分散體系。5.高效粒子空氣過濾器（highefficieneyparticulateairfilter,HEPA）：指在額定風(fēng)量和有效過濾面積下及氣流阻力在245Pa以下時對直徑≥0.3um的粒子捕集效率在99.97%以上的空氣過濾器。136.安全罩：即覆蓋在生物醫(yī)學(xué)實驗室工作臺或儀器設(shè)備上的，內(nèi)部空氣壓力低于環(huán)境壓力，且經(jīng)HEPA過濾的排風(fēng)罩，以減少對實驗室工作人員和環(huán)境的危害。7.實驗室分區(qū)：我國把BSL-3和BSL-4實驗室平面布局明確規(guī)定采取“三區(qū)二緩”的結(jié)構(gòu)，即核心區(qū)（污染區(qū)）、半污染區(qū)、清潔區(qū)和兩個緩沖區(qū)。148.氣鎖：是設(shè)置在氣壓不同的鄰近兩區(qū)之間的氣壓可調(diào)的密閉小室，作為兩區(qū)的過渡通道。9.定向氣流：在氣壓低于外環(huán)境大氣壓的實驗室中，從污染概率小且相對壓力高的區(qū)域向污染概率大且相對壓力低的區(qū)域受控制流動的氣流。1510.生物安全柜（biologicalsafetycabinet，BSC）是為操作原代培養(yǎng)物、菌（毒）株以及診斷性標本等具有感染性的實驗材料時，用來保護操作者本人、實驗環(huán)境及實驗材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設(shè)計的負壓過濾排風(fēng)柜。11.個人防護裝備：人們在實驗室進行科研實驗活動過程中，為防御各種有害因子而穿戴的各種用品的總稱。16第二節(jié)病原微生物實驗室的生物危險一、實驗室感染的來源（一）檢測標本（二）菌毒種（三）儀器設(shè)備使用過程中產(chǎn)生的污染（四）操作過程中產(chǎn)生的污染（五）實驗動物攜帶的病原體17二、實驗室相關(guān)感染的原因（一）誤食（二）皮膚切割、針刺傷（三）動物抓、咬傷（四）氣溶膠吸入（實驗室感染的最重要因素，常引起原因不明的實驗室感染）18病原微生物實驗室相關(guān)感染途徑19病原微生物實驗室相關(guān)感染途徑20病原微生物實驗室相關(guān)感染途徑21三、氣溶膠感染的特點:（一）生物氣溶膠無色無味，不易發(fā)現(xiàn)，實驗人員在自然呼吸中不知不覺吸入而造成感染。（二）與疾病自然感染相比，有些微生物氣溶膠感染的癥狀不典型，病程復(fù)雜，難以及時診治。（三）有些氣溶膠感染只有呼吸道粘膜免疫才有預(yù)防作用，非呼吸道免疫途徑預(yù)防效果較差。（四）經(jīng)呼吸道傳播的微生物特別是高致病性病毒常發(fā)生變異，其抗原性、致病性都可能發(fā)生改變。（五）氣溶膠容易引起病原體在人與人、人與動物、動物與動物之間傳播。（六）氣溶膠可以遠距離或較遠距離傳播。22三、產(chǎn)生氣溶膠的操作（一）接種環(huán)操作：細菌接種和劃線培養(yǎng)、在培養(yǎng)介質(zhì)中冷卻接種環(huán)等。（二）吸管操作：混合微生物懸液、吸管操作液體溢出在固體表面。（三）針頭和注射器操作：排除注射器中的空氣、從塞子里拔出針頭，接種動物、針頭從注射器上脫落。（四）離心機離心、組織勻漿器勻漿、超聲波粉碎、攪拌機粉碎等。（五）雞胚接種和收取雞胚培養(yǎng)液。（六）摔碎菌液培養(yǎng)瓶、干燥菌種管等。微生物氣溶膠顆粒越多，粒徑越?。ī?um），實驗室的環(huán)境越適合微生物生存，引起實驗室感染的可能性越大。23可產(chǎn)生不同程度微生物氣溶膠的實驗室操作輕度（＜10個顆粒）

中度（11~100個顆粒）

重度（＞100個顆粒）玻片凝集實驗傾倒毒液火焰上燒灼接種環(huán)顱內(nèi)接種接種雞胚或抽取培養(yǎng)液腹腔接種動物，局部不涂消毒劑實驗動物尸體解剖用乳缽研磨動物組織離心沉淀后混懸毒液毒液滴落在不同表面上用注射器從安瓿中抽取毒液用接種環(huán)接種平皿、試管摔碎有培養(yǎng)物的平皿打開培養(yǎng)容器的螺旋瓶蓋離心時離心管破裂打碎干燥菌種安瓿打開干燥菌種安瓿攪拌后立即打開攪拌器蓋小白鼠鼻內(nèi)接種注射器針尖脫落噴出毒液刷衣服、拍打衣服24三、病原微生物氣溶膠防護的基本原理：（一）避免或減少操作中氣溶膠的產(chǎn)生規(guī)范工作人員操作過程，避免操作錯誤：實驗室感染事故，大部分是由于疏忽或違反操作規(guī)程造成的。正確選擇和使用儀器、器材和設(shè)備。產(chǎn)品要符合標準，有產(chǎn)品合格證，安全設(shè)備在安裝后，在使用前要由有資質(zhì)的第三方進行性能驗證，按規(guī)定進行年檢。3.加強人員培訓(xùn)：實驗室工作人員應(yīng)經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，并獲得相應(yīng)的資質(zhì)，培訓(xùn)內(nèi)容包括儀器設(shè)備的使用，強化避免或減少操作中產(chǎn)生氣溶膠的意識。改進操作技術(shù)：25（二）防止氣溶膠的擴散圍場操作：圍場操作是把感染性物質(zhì)局限在一個盡可能小的空間（如生物安全柜）內(nèi)進行操作，使其不與人體直接接觸，并與開放空氣隔離，避免人的暴露。屏障隔離：氣溶膠一旦突破圍場，要靠各種屏障防止其擴散，如實驗室的緩沖間或通道。定向氣流：生物安全三級以上實驗室要保持定向氣流，（1）實驗室周圍的空氣向?qū)嶒炇覂?nèi)流動，以杜絕污染空氣向外擴散的可能；（2）在實驗室內(nèi)部，清潔區(qū)的空氣向操作區(qū)流動，保證沒有逆流，減少工作人員的暴露機會；（3）輕污染區(qū)的空氣向嚴重污染的區(qū)域流動。264.有效消毒滅菌：實驗室的空氣，桌面、地面，儀器，廢物，廢水等都需要消毒滅菌后再進一步處理。有效攔截：生物安全實驗室的空氣在排入大氣之前，必須能通過高效粒子空氣過濾器（HEPA）過濾，將感染性顆粒阻攔在濾材上。通常可濾除≥0.3um的微粒。

27（三）個人防護

1.物理防護由于氣溶膠具有很強的擴散能力，除了上述幾種措施外，實驗室工作人員仍然需要進行個人防護，防止氣溶膠的吸入。個人防護裝備包括工作服、手套、口罩、護目鏡、防毒面具、帽子、隔離衣、連體衣、鞋套、正壓頭盔、正壓服等。2.疫苗免疫防護：主動疫苗接種，被動抗血清接種。28第三節(jié)實驗室生物安全發(fā)展概況

和我國現(xiàn)狀一、萌芽期（1826-1949年）

1826年，法國醫(yī)生Laennec接觸結(jié)核病患者而引起左手食指感染。

1849年，維也納一名醫(yī)生解剖患產(chǎn)褥熱敗血癥死亡病例時，因劃破手指而感染發(fā)病死亡。

1898年，Riesman報道一例實驗室白喉感染，同年，維也納一名動物飼養(yǎng)員因處理患皮膚鼠疫的豚鼠而感染肺鼠疫死亡，并導(dǎo)致1名醫(yī)生和1名護士感染而死亡。291899年，Birt和Lamb報道3例實驗室感染布氏桿菌。1903年，Evans報道首例實驗室真菌感染。1938年，美國密歇根州立學(xué)院45名工作人員感染羊布氏桿菌發(fā)病，一人死亡，還有多人隱性感染。1939年，日軍對中國實施細菌戰(zhàn)，自己的實驗室人員有上萬人感染，死亡上千人。301939年，NIH在54天內(nèi)出現(xiàn)了153例立克次體感染引起的Q熱，1人死亡。1947年，NIH再次發(fā)生47例Q熱立克次體感染。此時的實驗室生物安全管理尚處在自發(fā)階段，缺乏對生物安全操作進行管理的完整體系。31二、形成期（1949-1983年）1949年，Sulkin和Pike發(fā)表第一篇實驗室相關(guān)感染的報告，總結(jié)222例病毒性感染，至少1/3的病例，感染原因與操作傳染性動物和組織有關(guān)。到1976年調(diào)查報告累積到3921例，約20%與已知事故有關(guān)，80%以上病例可能與感染氣溶膠有關(guān)。1967年，德國研究人員在處理非洲綠猴的組織時，31人發(fā)病，有7人死亡。實驗室生物安全資料\馬爾堡事件.docx321978年，英國伯明翰大學(xué)醫(yī)學(xué)院1名醫(yī)學(xué)攝影師被確診為天花，并傳給另一工作人員，他的樓下即為天花實驗室，含天花病毒的空氣由電話線管道進入攝影師工作室引發(fā)感染。1979年，莫斯科東部一城市發(fā)生96例炭疽，其中64例死亡，該市郊5個村莊也發(fā)生家禽炭疽爆發(fā)，是由于軍方一個微生物實驗室發(fā)生炭疽桿菌泄漏所致。實驗室生物安全資料\蘇聯(lián)炭疽泄漏事件.docx331976，有調(diào)查表明，在英國醫(yī)學(xué)實驗室的工作人員，結(jié)核感染的危險比普通人群高5倍。丹麥的一個臨床化學(xué)實驗室的肝炎發(fā)病率比普通人群高7倍。針對實驗室感染事故的特點，美國率先在20世紀50-60年代建立了生物安全實驗室。70年代起許多其他國家也認識到實驗室感染的危害，制定了相應(yīng)的實驗室生物安全操作規(guī)則，實驗室感染逐漸減少。341969年，美國學(xué)者首先提出對微生物的實驗室危害性分級，1級危害最低，4級最高。1979年WHO基本采取美國的分級標準。1983年，WHO《實驗室生物安全手冊》第一版出版，標志著實驗室生物安全管理的形成。35三、成熟期（1984-2004年）1976年，美國制定了4個用物理隔離（physicalcontainment）等級來控制實驗室的生物危害，即P1、P2、P3、P4實驗室，1993年淘汰該分級。1993年，生物安全實驗室（BSL）等級制度的建立，1993年和2004年《實驗室生物安全手冊》第二版、第三版的先后出版，標志著實驗室生物安全管理步入成熟期。361990年后，世界各地至少有15個實驗室報道了66例布氏桿菌引起的實驗室感染。1990-1994，美國有13個實驗室共21名工作人員感染結(jié)核菌。2000年，美國發(fā)生兩例流行性腦膜炎球菌感染。從1981年發(fā)現(xiàn)首例AIDS到1995年，至少有223例在工作中感染了HIV。371996年，歐洲“瘋牛病”，原因是用動物骨粉和臟器制成的飼料里含有耐高溫的蛋白因子“朊?！?，導(dǎo)致多人死亡2001年，英國爆發(fā)口蹄疫，可能是波布萊特的口蹄疫病毒實驗室病毒泄露，隨空氣傳播導(dǎo)致38四、我國生物安全概況

1990年和1997年，廣東省分別出現(xiàn)因使用不合格實驗動物而感染人畜共患病。1999年，廣州中醫(yī)藥大學(xué)一博士接觸大鼠，3個月后感染流行性出血熱，2003年診斷為腎衰竭，2006年做了腎移植。2001年，北京發(fā)生流行性出血熱。392002年，湖北藥檢學(xué)校一學(xué)生從事實驗動物工作，感染流行性出血熱而死亡。2003年9月，新加坡國立大學(xué)研究生在環(huán)境衛(wèi)生研究院實驗室中感染SARS病毒，環(huán)境衛(wèi)生研究院只具有BSL-2的生物安全設(shè)備，卻在院內(nèi)設(shè)立了用來進行更具危險性病毒研究的實驗室。2003年12月，臺灣“國防預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所”發(fā)生實驗室感染SARS，直接原因是由于研究人員在實驗室內(nèi)未能遵守規(guī)章，因操作疏忽而感染。。2004年4月，在安徽、北京先后發(fā)現(xiàn)9例新的SARS病例，后經(jīng)證實來自于在中國CDC所屬實驗室受到SARS感染的兩名工作人員。腹瀉病毒室跨專業(yè)從事非典病毒研究，采用未經(jīng)論證和效果驗證的非典病毒滅活方法，在不符合防護要求的普通實驗室內(nèi)操作非典感染材料。

2006年，東北三省個體戶養(yǎng)殖販運不合格實驗動物，導(dǎo)致幾十名教學(xué)、科研人員感染流行性出血熱。2010年12月，實驗室生物安全資料\東北農(nóng)大事件.doc41相關(guān)法律法規(guī)和標準：1986年，《中華人民共和國國境衛(wèi)生檢疫法》1989年，《中華人民共和國傳染病防治法》1991年，《結(jié)核病防治管理辦法》1996年，《中華人民共和國進出境動植物檢疫法》2002年，《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準則》2004年《實驗室生物安全通用要求》422004年，《病原微生物實驗室生物安全管理條例》使我國病原微生物實驗室的管理工作步入法制化軌道實驗室生物安全資料\病原微生物實驗室生物安全管理條例.doc2005年，《可感染人的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》2006年，《人間傳染的病原微生物目錄》43第四節(jié)生物安全實驗室的重要意義一、是建立病原微生物研究安全平臺的需要二、是生物防護的需要（美國9.11后的炭疽恐怖事件，引發(fā)13例炭疽病例和感染者，最終有45例感染者，其中有5人死亡）44三、是傳染病的預(yù)防與控制的需要實驗室生物安全資料\2012-2014年傳染病.docx四、是動物防御的需要452005-2014全球禽流感病例統(tǒng)計46五、是出入境檢驗檢疫的需要六、是醫(yī)院感染控制的需要（2003年，SARS流行期間，醫(yī)院內(nèi)感染的病例占總病人數(shù)的20%。2014年，非洲埃博拉疫區(qū)醫(yī)務(wù)人員感染率約8%，超過240人，死亡120多人）七、GOARN（Theglobeoutbreakalertandresponsenetwork，全球傳染病突發(fā)預(yù)警和應(yīng)對網(wǎng)絡(luò)，）檢測網(wǎng)絡(luò)離不開生物安全實驗室，抵御突發(fā)傳染病的全球傳播472003年SARS統(tǒng)計數(shù)據(jù)4849社會、生活混亂50全民抗擊非典51抗擊非典52全球埃博拉疫情概況53全球埃博拉疫情概況實驗室生物安全資料\埃博拉疫情.doc5455第五節(jié)病原微生物危害程度分類

危害程度分類是病原微生物危險評價的依據(jù)之一，危害類別的高低是根據(jù)微生物對個體和群體的感染后的相對危害程度來劃分的。一、病原微生物危害程度分類依據(jù)（一）微生物的致病性（二）微生物的傳播方式和宿主范圍（三）當(dāng)?shù)厮邆涞牡挠行ьA(yù)防措施（四）當(dāng)?shù)厮邆涞牡挠行е委煷胧?6二、幾個標準的分類比較WHO《實驗室生物安全手冊》《實驗室生物安全通用要求》《病原微生物實驗室生物安全管理條例》Ⅳ級Ⅳ級一類Ⅲ級Ⅲ級二類Ⅱ級Ⅱ級三類Ⅰ級Ⅰ級四類57《病原微生物實驗室生物安全管理條例》分類法的解釋一類

是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物?？死锩讈啞獎偣鲅獰岵《荆ㄐ陆鲅獰岵《荆┌２├《?、拉沙熱病毒、馬爾堡病毒、天花病毒二類是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。

第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。口蹄疫病毒、漢坦病毒、高致病性禽流感病毒、艾滋病毒、乙型腦炎病毒、SARS冠狀病毒、Prion、炭疽芽孢桿菌、結(jié)核分枝桿菌、布魯氏菌屬、立克次體屬、霍亂弧菌、鼠疫耶爾森菌三類是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。肺炎衣原體、肉毒梭菌、破傷風(fēng)梭菌、淋病奈瑟菌、傷寒沙門菌、金黃色葡萄球菌、梅毒螺旋體甲乙丙丁肝炎病毒、流感病毒四類是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。

小鼠白血病病毒、疫苗生產(chǎn)使用的減毒、弱毒微生物菌種58《實驗室生物安全通用要求》分類的解釋個體危害性群體危害性人或動物感染情況Ⅳ級高高通常能引起人或動物嚴重疾病，并且容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預(yù)防和治療措施。Ⅲ級高低通常能引起人或動物嚴重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有有效的預(yù)防和治療措施。Ⅱ級中等低能夠?qū)θ嘶騽游镏虏?，但對實驗室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴重危害。實驗室暴露也許會引起嚴重感染，但對感染有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播危險度有限。Ⅰ級低低不太可能引起人或動物致病，實驗室感染機會少59第六節(jié)人間傳染的病原微生物名錄實驗室生物安全資料\人間傳染的病原微生物.doc60第二章生物安全實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求61第一節(jié)實驗室生物安全防護的基本原理一、生物安全實驗室（BiosafetyLaboratory，BSL）（一）概念：生物安全實驗室是指通過規(guī)范的實驗室設(shè)計、實驗設(shè)備的配置、個人防護裝備的使用等建造的實驗室。（二）分級根據(jù)安全設(shè)備和設(shè)施的不同組合，將BSL分為BSL-1到4級實驗室，BSL-1和BSL-2稱為基礎(chǔ)實驗室，BSL-3稱為生物安全防護實驗室，BSL-4稱為高度生物防護實驗室。62（三）不同BSL實驗室的應(yīng)用范圍與安全設(shè)施生物安全水平應(yīng)用范圍實驗室操作安全設(shè)施基礎(chǔ)實驗室（BSL-1）基礎(chǔ)教學(xué)和研究微生物學(xué)操作技術(shù)規(guī)范（GMT）不需要、開放試驗臺基礎(chǔ)實驗室（BSL-2）初級診斷服務(wù)和研究GMT加防護服、生物危害標志開放試驗臺、需用生物安全柜（BSC）防護可能生成的氣溶膠防護實驗室（BSL-3）特殊診斷和研究在二級水平上加特殊的防護服、進入制度、定向氣流BSC和其他工作所需設(shè)備高度防護實驗室（BSL-4）危險病原體研究在三級水平上加氣鎖、入口出口淋浴、污染物品的特殊處理Ⅲ級或Ⅱ級BSC，并穿著正壓服，雙開門高壓滅菌器，經(jīng)過濾的空氣63二、，BSL實驗室設(shè)施防護原理

BSL實驗室在設(shè)計上采用物理隔離分區(qū)和負壓通風(fēng)過濾技術(shù)（一）物理隔離分區(qū)

BSL實驗室通過圍場操作的原理，用物理防護設(shè)備將病原微生物局限在一定的空間內(nèi)，避免生物因子對人體的暴露和污染環(huán)境。64

在三、四級生物安全實驗室，平面布局規(guī)定采用“三區(qū)二緩”結(jié)構(gòu)：清潔區(qū)（人員通道、機房、控制室等）半污染區(qū)（準備間、制劑和培養(yǎng)基的配置、低溫冰箱的放置）污染區(qū)/核心區(qū)（實驗操作間）緩沖間Ⅰ和Ⅱ65生物安全實驗室分區(qū)示意圖66（二）負壓通風(fēng)過濾技術(shù)負壓通風(fēng)技術(shù)主要用于BSL-3、BSL-4實驗室。通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計要求：各區(qū)室內(nèi)的氣壓保持一定的壓力梯度。使氣流呈單向流動。實驗室送風(fēng)口和排風(fēng)口呈對角分布，上送下排。核心區(qū)和半污染區(qū)的空氣必須經(jīng)過HEPA過濾后才能排放。HEPA安裝位置盡可能靠近污染源。67BSL-3、BSL-4實驗室空氣排出流向：室內(nèi)空氣→前端HEPA→末端HEPA→外環(huán)境生物安全柜內(nèi)空氣→生物安全柜HEPA→排放管道→HEPA→外環(huán)境68第二節(jié)生物安全柜一、生物安全柜（biologicalsafetycabinet，BSC）是為操作原代培養(yǎng)物、菌（毒）株以及診斷性標本等具有感染性的實驗材料時，用來保護操作者本人、實驗環(huán)境及實驗材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設(shè)計的負壓過濾排風(fēng)柜。

69（一）BSC的防護原理：送入安全柜工作區(qū)的空氣經(jīng)過HEPA濾器過濾，在安全柜內(nèi)形成百級潔凈度的環(huán)境，從而保護操作對象。從安全柜排出的空氣經(jīng)過HEPA濾器過濾釋放，保護了外壞境。安全柜內(nèi)形成的負壓和氣幕可以防止氣溶膠外泄，保護了操作者。7071

（二）BSC的分級與用途根據(jù)結(jié)構(gòu)設(shè)計、排風(fēng)比例及保護對象和程度不同，將生物安全柜分為Ⅰ級、Ⅱ級和Ⅲ級。72Ⅰ級、Ⅱ級和Ⅲ級生物安全柜的差異

BSC正面氣流速度（m/s）

氣流百分數(shù)排風(fēng)系統(tǒng)重新循環(huán)部分排除部分Ⅰ級0.360100硬管Ⅱ級A1型0.38~0.517030排到房間或套管連接處Ⅱ級A2型0.517030排到房間或套管連接處Ⅱ級B1型0.513070硬管Ⅱ級B2型0.510100硬管

Ⅲ級不適用0100硬管73Ⅰ級生物安全柜構(gòu)造圖全部直接排出74用途：1.提供人員和環(huán)境保護2.可用于操作放射性核素3.揮發(fā)性有毒化學(xué)試劑4.多用于密閉的設(shè)備,如離心機\小型發(fā)酵罐或伴隨有潛在產(chǎn)生大量氣溶膠的過程中使用5.由于不保護樣品，目前較少使用75Ⅱ級A1型生物安全柜構(gòu)造圖30%外排0.38m/s背面正壓污染區(qū)76用途：用組織和細胞來進行病毒培養(yǎng)，可以保護實驗對象操作危害程度2~4類的微生物在使用正壓防護服的條件下，可以操作危險程度1類的微生物與排風(fēng)系統(tǒng)的管道連接，可以操作微量/少量揮發(fā)性有毒的化學(xué)物質(zhì)或痕量揮發(fā)性放射性核素。77Ⅱ級A2型生物安全柜構(gòu)造圖30%外排背面負壓污染區(qū)0.5m/s兩部風(fēng)機78Ⅱ級A2型用途:

同A1型，但安全性高于A1型79Ⅱ級B1型生物安全柜構(gòu)造圖70%外排80Ⅱ級B2型生物安全柜構(gòu)造圖100%外排81Ⅱ級B1、B2生物安全柜用途：

1.少量揮發(fā)性有毒化學(xué)物質(zhì)和放射性核素

2.適合危險程度2~4類的微生物

3.可進行致癌物、抗腫瘤藥物和低放射水平同位素實驗82Ⅲ級生物安全柜（手套箱型）雙開口滅菌器83Ⅲ級生物安全柜構(gòu)造圖

雙開口滅菌器84Ⅲ級生物安全柜用途：1.

可以提供最好的個體防護全封閉負壓系統(tǒng)，針對1類高危險程度微生物的操作有毒化學(xué)品，揮發(fā)性放射性核素排除空氣不能進入室內(nèi)循環(huán)85（三）生物安全柜的使用操作流程：（1）開啟BSC外排風(fēng)機電源；（2）緩慢打開操作窗，窗口開啟距離為20cm或設(shè)定值，一般BSC應(yīng)有窗口極限報警；（3）開啟工作照明；（4）5~10分鐘后可以開始實驗操作；（5）操作完畢要對BSC進行消毒清洗。862.BSC的使用注意事項：（1）BSC內(nèi)只能放置本次工作所需材料和設(shè)備，不能放置多余物品；（2）操作人員要放慢手臂的進出速度，以減少對氣幕屏障的擾亂；（3）操作人員要穿好個人防護裝備；（4）手臂放進柜體后，要讓氣流恢復(fù)穩(wěn)定，并讓氣流帶走手臂表面的微生物后再開始操作；87（5）不能讓實驗記錄本，廢塑料包裝物等堵塞前格柵以免室內(nèi)空氣直接流向操作區(qū)；（6）BSC的工作臺面，內(nèi)壁表面，觀察窗內(nèi)面等要用乙醇、過氧化氫、次氯酸鈉、過氧乙酸等消毒劑擦拭；（7）放置在柜內(nèi)的材料和容器表面也要用75%乙醇擦拭；（8）可在柜內(nèi)放一塊塑料襯底的毛巾，有液體灑出時能減少氣溶膠和噴濺物的形成；88（9）柜內(nèi)避免使用明火，對接種環(huán)進行滅菌時，可使用微型燃燒器或電爐；（10）要由專業(yè)人員定期對BSC的防護效果進行評估，包括BSC的完整性、HEPA的泄漏、氣流速度、負壓或換氣次數(shù)等；（11）BSC在移動以及更換HEPA之前，要由有資質(zhì)的專業(yè)人員用甲醛蒸汽熏蒸，以清除污染。8990

超凈工作臺

通風(fēng)柜91生物安全柜與通風(fēng)櫥、超凈工作臺的主要區(qū)別92第三節(jié)高壓滅菌器一、壓力蒸汽滅菌器的種類根據(jù)冷空氣排放方式的不同，壓力蒸汽滅菌器分為：（一）下排氣式壓力蒸汽滅菌器（手提式、立式、臥式）（二）預(yù)真空式壓力蒸汽滅菌器93

手提式高壓滅菌器

立式高壓滅菌器94

臥式高壓滅菌器

預(yù)真空高壓滅菌器95（一）下排氣式壓力蒸汽滅菌器工作原理利用重力置換原理，使熱蒸汽在滅菌器內(nèi)從上而下，將冷空氣由下排氣孔排出，排出的冷空氣全部由飽和蒸汽取代，蒸汽的壓力升高，溫度也隨之升高。利用蒸汽釋放的潛熱使物品達到滅菌。96滅菌所需時間、溫度和壓力物品種類滅菌時間(min)蒸汽壓力（kPa）飽和蒸汽相對溫度橡膠類15104~107.9121敷料類15~45104~137.0121~126器械類10104~137.0121~126器皿類15104~137.0121~126瓶裝溶液類20~40104~137.0121~126滅菌溫度與滅菌時間的組合

下列組合可以確保正確裝載的滅菌器的滅菌效果：

134℃3分鐘

126℃10分鐘

121℃15分鐘

115℃25分鐘98（二）預(yù)真空式高壓蒸汽滅菌器工作原理利用機械抽真空的方法，使滅菌器內(nèi)形成負壓，蒸汽得以迅速穿透物品進行滅菌。分為預(yù)真空和脈動真空兩種，后一種空氣排出更徹底，滅菌效果更可靠。99特點：在通入蒸汽前，要由抽負壓系統(tǒng)將滅菌器內(nèi)抽負壓到2.6kPa（空氣排出約98%）；滅菌時間短（整個過程25分鐘），對滅菌物品損害較小；由中心供氣室經(jīng)管道輸入蒸汽，柜體內(nèi)蒸汽分布比較均勻；100設(shè)備比較昂貴，維修費用高，不宜普及；存在小裝量效應(yīng)，即滅菌物品放得過少，殘留空氣較多，滅菌效果反而較差；不能用于瓶裝液體的滅菌。101（三）使用滅菌器的注意事項需滅菌的物品包裹不應(yīng)太大、太緊；放入滅菌器的包裹不要排得太密，以免妨礙蒸汽滲入；要定期用化學(xué)指示劑（熱敏化學(xué)物質(zhì)結(jié)晶紫內(nèi)酯、苯酰亞甲基藍+顯色劑對羥基苯甲酸、水楊酸等）或生物指示劑（嗜熱脂肪桿菌芽孢）監(jiān)測滅菌效果；1024.易燃、易爆的碘仿、苯類禁用高壓蒸汽滅菌法；瓶裝液體滅菌時，要用玻璃紙或紗布包扎瓶口，如用橡皮塞，要插入針頭排氣；已滅菌物品要做好標記，放入潔凈的柜櫥內(nèi)；1037.每次滅菌前，要檢查安全閥性能是否良好，以免發(fā)生意外；8.滅菌時要排凈滅菌器內(nèi)的冷空氣，否則壓力指示表指示的壓力和溫度不一致，達不到滅菌效果；9.達到滅菌時間后，關(guān)閉電源，待壓力表指針降到“0”刻度，升起排氣閥，排盡滅菌器內(nèi)氣體，再打開鍋蓋。滅菌器內(nèi)溫度與冷空氣排出量的關(guān)系壓力（kPa）所達到的溫度（℃）完全排除排除2/3排除1/2排除1/3全未排除34.710910094907269.211510910510090103.4121115112109100138.4126121118115109106第四節(jié)生物安全實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求一、BSL-1的設(shè)施和設(shè)備要求107109實驗室實例：基礎(chǔ)教學(xué)實驗室微生物實例：枯草桿菌、大腸埃希氏桿菌無須特殊選址，普通建筑物即可，但應(yīng)有防止節(jié)肢動物和嚙齒動物進入的設(shè)計。安全設(shè)施：開放實驗臺，無需安全設(shè)施，但應(yīng)有適當(dāng)?shù)南驹O(shè)備。110每個實驗室應(yīng)設(shè)洗手池，宜設(shè)置在靠近出口處。在實驗室門口處應(yīng)設(shè)掛衣裝置，個人便裝與實驗室工作服分開設(shè)置。實驗室的墻壁、天花板和地面應(yīng)平整、易清潔、不滲水、耐化學(xué)品和消毒劑的腐蝕。地面應(yīng)防滑，不得鋪設(shè)地毯。實驗臺面應(yīng)防水，耐腐蝕、耐熱。111實驗室中的櫥柜和實驗臺應(yīng)牢固。櫥柜、實驗臺彼此之間應(yīng)保持一定距離，以便于清潔。實驗室如有可開啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗。實驗室內(nèi)應(yīng)保證工作照明，避免不必要的反光和強光。112設(shè)備要求：對高壓滅菌器、離心機安全罩沒要求，必要時可配BSC。113二、BSL-2的設(shè)施和設(shè)備要求114115實驗室實例：初級衛(wèi)生服務(wù)；診斷、研究。診斷和衛(wèi)生保健實驗室（以公共衛(wèi)生、臨床或醫(yī)院為基礎(chǔ)的）必須設(shè)計成二級或以上生物安全水平。微生物實例：傷寒沙門氏菌、乙型肝炎病毒、淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒116開放實驗臺，有洗手池（靠近出口）在生物安全柜中進行可能發(fā)生氣溶膠的操作程序。配有高壓蒸汽滅菌設(shè)備必要時配備個人防護的機械密閉設(shè)備門可保持關(guān)閉并貼上適當(dāng)?shù)奈ｋU標志有可靠穩(wěn)定的應(yīng)急供電系統(tǒng)117三、BSL-3的設(shè)施和設(shè)備要求118119專門特殊的診斷、研究實驗室，密閉型微生物實例：布魯氏菌屬、拉沙熱病毒、莢膜組織胞漿菌、結(jié)核分枝桿菌、HIV、SARS冠狀病毒等選址：應(yīng)在建筑物中自成隔離區(qū)（如出入控制）或為獨立建筑物

在BSL2基礎(chǔ)上增加特殊防護服、準入制、定向氣流。120配備II級或III級生物安全柜，形成向內(nèi)氣流而且涉及感染性材料的全部工作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進行生物安全柜放置在遠離污染區(qū)入口和頻繁走動的位置應(yīng)有非手控的水槽實驗室與公共通道分開并通過緩沖間（雙門入口或二級生物安全水平的基礎(chǔ)實驗室）或氣鎖室進入。處理廢棄物前，實驗室內(nèi)先行高壓滅菌以清除污染。121四、BSL-4的設(shè)施和設(shè)備要求

分為Ⅲ級生物安全柜型實驗室和正壓服型實驗室

122123危險病原體單位，高度密閉型病原體實例：埃博拉病毒、馬爾堡病毒、天花病毒選址：實驗室應(yīng)建造在獨立建筑物內(nèi)或建筑物中獨立的完全隔離區(qū)域內(nèi)，該建筑物應(yīng)遠離城區(qū)配備III級生物安全柜，正壓服124形成向內(nèi)氣流而且涉及感染性材料的全部工作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進行處理廢棄物前，實驗室內(nèi)先行高壓滅菌以清除污染應(yīng)有非手控的水槽配備雙開門高壓滅菌器

Ⅲ級生物安全柜內(nèi)排出的氣體需經(jīng)兩個HEPA過濾后才能排到室外125第三章

生物安全實驗室個人防護裝備126個人防護裝備（personalprotectiveequipment，PPE）：是指用于防止工作人員受到物理、化學(xué)和生物等有害因子傷害的器材和用品。在生物安全實驗室中，主要用于實驗人員免于感染性材料的暴露，避免實驗室感染。127第一節(jié)各級生物安全實驗室的個人防護要求一、BSL-1實驗室進入實驗室應(yīng)穿工作服。實驗操作時戴手套，必要時帶護目鏡。離開實驗室時，工作服必需脫下留在實驗室。工作服定期消毒128二、BSL-2實驗室符合BSL-1實驗室要求。配備Ⅱ級BSC。進入實驗室，應(yīng)在工作服外加罩衫或穿防護服，戴帽子、口罩。當(dāng)必須在BSC外操作微生物時，必須使用面部保護裝置。129BSL-2實驗室門上應(yīng)標有國際通用的生物危害警告標志，包括通用的生物危險性標志，生物安全的級別、實驗室負責(zé)人姓名、緊急聯(lián)系電話、以及進入實驗室的特殊要求。131三、BSL-3實驗室符合BSL-2實驗室的個人防護要求。必須配備Ⅱ級及以上BSC。進入實驗室，必須使用個體防護裝備，（兩層防護服、兩層手套、生物安全專業(yè)防護口罩）。必要時佩戴眼罩、呼吸保護裝置?？芍貜?fù)使用工作服，必須先消毒后清洗。實驗室必須配備有效的消毒劑、眼部清洗劑或生理鹽水。實驗室區(qū)域應(yīng)配備應(yīng)急藥品。132四、BSL-4實驗室個人防護符合BSL-3實驗室要求。進入BSL-4實驗室時要更換全套服裝，工作后脫下所有防護服，沐浴后再離開。在防護服型或混合型BSL-4實驗室中，工作人員必須穿正壓防護服。室內(nèi)有傳染性靈長類動物時，必須使用面部保護裝置。進行容易產(chǎn)生高危險的氣溶膠操作時，要同時使用BSC和其他防護設(shè)備1336.當(dāng)不能安全有效的限定氣溶膠在一定范圍時，應(yīng)使用呼吸保護裝置。7.不同類型的BSL-4實驗室防護要求:（1）Ⅲ級生物安全柜型，個人防護裝備同BSL-3；（2）防護服型，個人防護裝備加正壓防護服；（3）混合型，（1）和（2）的組合。第二節(jié)生物安全實驗室個人防護裝備裝備避免的危害安全性特征實驗服、隔離服、連體衣污染衣服背部開口、罩在日常服裝外塑料圍裙污染衣服防水鞋襪碰撞和噴濺不露腳趾護目鏡碰撞和噴濺防碰撞鏡片、側(cè)面有護罩安全眼鏡碰撞防碰撞鏡片、側(cè)面有護罩面罩碰撞和噴濺罩住整個面部防毒面具吸入氣溶膠具有空氣凈化和供氣功能手套直接接觸病原由一次性乳膠、聚氯乙烯或聚腈類材料制成的保護手套135第二節(jié)生物安全實驗室個人防護裝備一、眼睛防護裝備（一）安全眼睛與護目鏡使用原則：1.在所有易發(fā)生潛在眼睛損傷（物理、化學(xué)、生物）的實驗室中工作時，必須采取眼睛保護措施，包括實驗室工作人員和設(shè)備維修保養(yǎng)人員。2.如進行有潛在爆炸或混合強腐蝕性和強酸溶液時，必須佩戴面罩和安全眼睛或護目鏡。1363.建議在生物安全實驗室工作時，不要佩戴角膜接觸鏡，如佩戴角膜接觸鏡時有化學(xué)水汽接觸了眼睛，采取以下措施：（1）立即取出角膜接觸鏡鏡片；（2）持續(xù)沖洗眼睛15~30分鐘；（3）及時到醫(yī)院就診。4.不得佩戴眼睛防護裝備離開實驗室區(qū)域。137（二）洗眼裝置

《實驗室生物安全通用要求》規(guī)定，在BSL-2和BSL-3實驗室，應(yīng)配備緊急洗眼裝置，如發(fā)生發(fā)腐蝕性液體或生物危害液體噴濺至眼睛時，立即用洗眼裝置沖洗眼睛15~30分鐘。138（三）沐浴和應(yīng)急消毒噴淋裝置

《實驗室生物安全通用要求》規(guī)定，BSL-2實驗室必要時應(yīng)有應(yīng)急噴淋裝置；BSL-3實驗室應(yīng)在清潔區(qū)設(shè)置沐浴裝置，必要時在半污染區(qū)設(shè)置應(yīng)急消毒噴淋裝置。

139二、頭面部防護裝備（一）口罩外科口罩適用于BSL-1和

BSL-2

實驗室。（二）防護面罩可保護操作者免受血液、體液、排泄物或其他感染性物質(zhì)接觸到臉、眼、口、鼻。（三）防護帽避免頭部受到污染。140三、呼吸防護裝備（一）個人呼吸器（二）正壓面罩（頭盔正壓式呼吸防護系統(tǒng)）由頭盔、呼吸管、高壓空氣調(diào)節(jié)裝置、高壓空氣管、壓縮空氣過濾和調(diào)節(jié)面板組成。（三）正壓防護服具有生命支持系統(tǒng)，一般在BSL-4實驗室使用。141四、手部防護裝置（一）手套1.手套選擇：乳膠手套最常用，對乳膠和滑石粉過敏者，可選用聚氯乙烯或聚腈類。接觸高溫物體：耐熱材料制成的手套；接觸極冷物質(zhì)：絕緣手套；接觸尖銳器械：不銹鋼網(wǎng)手套。1422.手套檢查3.手套使用：BSL-1和BSL-2實驗室戴一副手套，

BSL-3和BSL-4實驗室戴兩副手套。4.手套的更換（1）使用一次性手套，須高壓滅菌后再丟棄；（2）完成感染性物質(zhì)操作離開BSC前，應(yīng)脫去外層手套放入滅菌袋內(nèi)，消毒液噴洗內(nèi)層手套；（3）撕破、損壞或手套污染時要及時更換。143避免手套的觸摸污染脫手套要點（1）手套脫下時，要將手套外表面翻轉(zhuǎn)入內(nèi)；（2）脫下的手套，要高壓滅菌處理后再丟棄。（二）洗手洗手裝置最好是腳控或紅外感應(yīng)，還可配一酒精擦手器。144五、軀體防護裝備（一）實驗服主要在BSL-1實驗室中使用，如動靜脈采血、血液組織標本的處理、儀器設(shè)備的維護、化學(xué)試劑的處理和配制、清洗或在有潛在污染的實驗臺上工作。（二）隔離衣主要在BSL-2和BSL-3實驗室中使用，如處理潛在感染性材料、病原微生物的檢測與研究、尸體解剖等。145（三）連體衣用途同隔離服（四）正壓防護服主要在BSL-4實驗室中使用，操作致死性生物危害物質(zhì)或第一類病原微生物。（五）圍裙在操作大量腐蝕性液體或必須對血液、培養(yǎng)液等物質(zhì)的溢出作處理時，可在實驗服或隔離服外面加穿塑料或橡膠圍裙，提供進一步防護。所有軀體防護裝備不得穿離實驗區(qū)域146六、足部防護裝備在BSL-2和

BSL-3實驗室要穿鞋套，

BSL-3和

BSL-4實驗室使用專用鞋。禁止在生物安全實驗室穿涼鞋、拖鞋或露趾鞋。七、聽力防護裝備暴露于高強度的噪音時（如用超聲粉碎器處理細胞），可用防噪音耳罩、一次性泡沫材料防噪音耳塞保護聽力。147八、個人防護的安全脫卸順序：外層手套面罩或護目鏡隔離衣口罩或防毒面具和防護帽鞋套內(nèi)層手套148實驗室生物安全資料\防護用品穿戴視頻\download\個人防護用品的穿脫程序_標清.flv149第三節(jié)個人防護用品的去污染消毒一、塑料、橡膠、無紡布制品1.一次性用品，包括防護帽、口罩、手套、防護服等經(jīng)高壓滅菌后，作醫(yī)療廢棄物統(tǒng)一處理。擬回收的塑料器材，按要求打包，表面消毒后，高壓蒸汽滅菌處理。不耐熱擬回收的塑料器材，用0.5%過氧乙酸或有效氯為2000mg/L的含氯消毒劑浸泡一小時以上，或用環(huán)氧乙烷氣體處理4~6小時。150橡膠手套121℃，15分鐘高壓滅菌后用肥皂水或洗滌劑清洗。可重復(fù)使用的工作服、帽子、口罩等，

121℃，15分鐘高壓滅菌后再清洗。二、操作過程中的手套消毒操作高致病性微生物時，佩戴雙層手套，隨時對外層手套進行消毒，雙手撤離BSC時，對手套進行藥物消毒，最后放入醫(yī)療廢棄物袋內(nèi)進一步處理。151三、正壓服和正壓面罩的消毒離開實驗室前對正壓服和正壓面罩進行消毒劑沐浴消毒，然后放入環(huán)氧乙烷或過氧化氫等離子體滅菌柜內(nèi)熏蒸滅菌后清洗。152第四章

動物實驗室的生物安全153第一節(jié)實驗動物過程的行為規(guī)范一、動物實驗的風(fēng)險（一）動物約有200種傳染病，80種寄生蟲病，其中半數(shù)可傳染給人。（二）動物感染實驗，有病原體隨動物尿液、唾液、糞便排出，可能形成氣溶膠引起實驗室感染。（三）解剖動物時，有接觸病原體的危險，還可能被動物抓咬傷，或注射器、手術(shù)刀等利器造成的傷害。（四）感染動物的破壞和逃逸，造成病原微生物的擴散。154二、實驗動物過程的行為規(guī)范（一）物理限制

1.限制的工具不能作為常規(guī)的飼養(yǎng)工具。

2.工具的設(shè)計要合理，盡量減少動物的不適。

3.盡量減少限制時間。

4.在限制過程中，如果發(fā)生損傷或嚴重的行為改變，應(yīng)暫?；蚪瓜拗?，并給與處理和治療。5.保證實驗人員和周圍人員的安全。155（二）手術(shù)操作

1.操作時要選用適當(dāng)?shù)逆?zhèn)靜、鎮(zhèn)痛或麻醉方法，最大程度減輕動物的痛苦。2.禁止不必要的重復(fù)操作。

3.不提倡用一只動物進行多個手術(shù)實驗，，但為充分利用動物資源，經(jīng)動物倫理委員會許可，可以實施。4.嚴格實驗操作規(guī)程，防止血液、體液外濺和利器刺傷。

5.手術(shù)后動物、標本以及所用器材必須按規(guī)定妥善處置。156（三）飲食的限制1.實驗動物原則上要求隨時飲食。

2.如因?qū)嶒炐枰_需限制飲食，應(yīng)保證動物存活的最低需求量。

3.食物的限量應(yīng)經(jīng)科學(xué)論證，限量標準容易操作。

4.要保持動物的膳食平衡。157（四）廢棄物和尸體的處理

1.血液和體液標本：用于抗原、抗體、病原微生物等的檢測，檢測后用121℃,30分鐘高壓滅菌處理。

2.動物臟器組織：如用于病原微生物的分離，按標準操作程序進行，病理切片的組織，需用甲醛固定，剩余組織用121℃,30分鐘高壓滅菌處理。朊病毒感染的標本，134℃-137℃,18分鐘高壓滅菌后焚燒處理。1583.動物尸體：普通實驗動物取材完畢后經(jīng)121℃,30分鐘高壓滅菌，集中送環(huán)保部門處理。

4.動物咽拭子、肛拭子：用于病原體的分離或PCR檢測，剩余標本121℃,30分鐘高壓滅菌。5.病原體分離培養(yǎng)物：無論陽性還是陰性結(jié)果，均需121℃，30分鐘高壓滅菌。159動物福利

動物福利：是指為了保證動物在健康舒適的狀態(tài)下生存，而人為給動物提供相應(yīng)的物質(zhì)條件和采取的行為方式，以保證動物處于生理和心理愉快的感受狀態(tài)。遵循的基本原則：負責(zé)任、合乎道德地使用動物，確保動物在實驗過程中享有合理的福利。實驗室生物安全資料\實驗動物.docx160第二節(jié)實驗動物使用程序和要求一、實驗動物的基本使用程序和要求實驗室如需要使用實驗動物，應(yīng)先向生物安全和倫理委員會提出申請，填寫申請表。根據(jù)申請表中申請的動物種屬和數(shù)量，安排實驗動物的飼養(yǎng)和使用。動物必須在指定區(qū)域飼養(yǎng)和使用，實驗操作結(jié)束后，動物須返回指定飼養(yǎng)區(qū)域，不能在實驗室內(nèi)過夜。動物實驗應(yīng)在實驗室指定區(qū)域進行。161二、含有感染性材料的動物實驗要求涉及感染性材料的操作（解剖、取材、采血、病原接種等）要在BSC內(nèi)進行。動物籠具在清洗前要先做消毒處理。污物、一次性用品須高壓滅菌后才能拿出實驗室。動物尸體用雙層醫(yī)療廢棄物專用袋包裹后運至解剖區(qū)域解剖。BSC使用后要進行消毒、擦洗。1626.廢液應(yīng)按比例倒入有消毒液的桶內(nèi)，倒入時要沿容器壁輕倒并戴眼罩。7.如有感染性材料濺到BSC或地上，要采取適當(dāng)方法進行消毒處理。8.每天工作結(jié)束時，應(yīng)用消毒劑擦拭門把、地面、工作臺等表面。9.廢棄物放入高壓滅菌器時要同時放入滅菌指示卡，以檢測是否達到滅菌要求。163三、小動物的飼養(yǎng)原則使用動物必須按國家標準或?qū)嶒炋厥庖髾z驗合格，充分準備后進入飼養(yǎng)系統(tǒng)。及時觀察動物飲食、精神狀況，有無異常表現(xiàn)、患病或死亡。動物應(yīng)可自由進食，飲水，并及時補充，同時保證其他飼養(yǎng)條件完備。164四、大動物的飼養(yǎng)原則1.使用動物必須按國家標準或?qū)嶒炋厥庖髾z驗合格，充分準備后進入飼養(yǎng)系統(tǒng)。2.應(yīng)將每只動物日攝取總量分批次喂給，以保證動物的進食量和減少浪費。3.應(yīng)經(jīng)常檢查飲水裝置，及時補充。4.動物飼養(yǎng)區(qū)應(yīng)每天打掃，保持清潔，每周將地面消毒3次。5.喂給的瓜果、蔬菜等要洗凈、消毒。6.室內(nèi)光照要求明暗各12小時自動交替。165五、動物的檢疫實驗動物進入檢疫室前，在檢疫室的緩沖間內(nèi)用75%酒精噴灑動物外包裝，打開紫外燈照射10~15分鐘。將經(jīng)上述處理的動物移入檢疫室，根據(jù)要求進行檢驗。各動物的檢疫期：大動物2周，小動物1周。在檢疫期內(nèi)觀察動物的精神、飲食、營養(yǎng)等，如有任何異常，應(yīng)退出動物檢疫室。檢疫合格的動物由緩沖間或動物通道進入動物實驗室。166六、動物實驗的有關(guān)操作投藥：不同的動物，按不同途徑給藥，主要包括灌胃和靜脈注射。對接種了高致病性病原體的動物，尤其是大動物，可將動物麻醉后再給藥，小動物可根據(jù)情況選擇，靜脈注射時需用固定器。采樣：對大動物活檢時應(yīng)進行麻醉，小動物采樣可不用麻醉，但要防止動物抓咬。標本運輸：要用防滲漏的容器裝標本，放入標本的容器應(yīng)確保密封。標本傳出實驗室要嚴格按有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。167第三節(jié)動物安全實驗室設(shè)施與防護要求一、一級動物生物安全實驗室（animal

biosafety

level

1

,ABSL-1）（一）適用范圍：飼養(yǎng)大多數(shù)經(jīng)過檢疫的實驗動物，接種了危險等級4類微生物的動物。（二）安全裝備：推薦連體衣、隔離服、工作服；接觸靈長類動物應(yīng)評估粘膜暴露風(fēng)險，穿戴眼部和面部保護裝備。

168（三）設(shè)施要求除滿足BSL-I實驗室要求外，還應(yīng)滿足：1

.動物設(shè)施選址與建筑物內(nèi)的開放區(qū)域隔離2.門能自動關(guān)閉和上鎖3.設(shè)施的設(shè)計、建造、安裝要便于清潔和保養(yǎng)，內(nèi)表面要防水。4.窗戶盡可能密閉，能開啟的要安裝紗窗，5.應(yīng)設(shè)有洗手池，動物籠具清洗應(yīng)滿足清潔要求。169二、

ABSL-2實驗室（一）適用范圍：接種了危險度3類微生物的動物。（二）安全裝備：處理感染性材料要戴手套；可能產(chǎn)生氣溶膠時，應(yīng)使用BSC和呼吸器、面罩等個人裝備。170（三）設(shè)施要求：在BSL-2和ABSL-1的基礎(chǔ)上還要滿足：出入口要設(shè)緩沖間。動物實驗室的門應(yīng)具有可視窗，并可自動關(guān)閉，有適當(dāng)?shù)幕馂?zāi)報警器。處理固體廢棄物的高壓滅菌器應(yīng)經(jīng)特殊設(shè)計，合理擺放，焚燒爐也需特殊設(shè)計，同時配備補燃和消煙設(shè)備，污染的廢水必須經(jīng)過消毒處理。171三、ABSL-3實驗室（一）適用范圍：接種了危險度2類微生物的動物，（二）安全裝備：1.進行感染性材料或感染動物操作時，應(yīng)使用個人防護裝備。2.進入實驗室人員應(yīng)戴面罩或防毒面具。3.應(yīng)有專用長統(tǒng)靴、鞋套及用于腳部消毒的消毒池。4.動物飼養(yǎng)籠可戴濾過帽或置于隔離器內(nèi)。172（三）設(shè)施要求：除滿足BSL-3和ABSL-2要求外，還應(yīng)滿足：1.建筑物應(yīng)當(dāng)具備符合要求的抗震能力，以及防盜、防鼠、防蟲功能。2.實驗室由清潔區(qū)、半污染區(qū)、污染區(qū)組成，半污染區(qū)和污染區(qū)之間要設(shè)緩沖