緒論+紫外部分

儀器分析

徐顯利第一章緒論第二章紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)分析第三章紅外分光光度計(jì)分析第四章

原子吸收分光光度計(jì)分析第五章

氣相色譜分析第六章

高效液相色譜分析

第一章緒論1.與分析儀器發(fā)明發(fā)展相關(guān)的諾貝爾獎(jiǎng)榮獲者2.儀器分析方法的分類儀器分析電化學(xué)分析法光分析法色譜分析法熱分析法分析儀器聯(lián)用技術(shù)質(zhì)譜分析法電學(xué)其他光色譜1）光分析方法的分類光分析法原子吸收法紅外法原子發(fā)射法核磁法熒光法紫外可見(jiàn)法分子光譜原子光譜2）色譜分析方法的分類色譜分析法氣相色譜法薄層色譜法液相色譜法激光色譜法電色譜法超臨界色譜法3）電化學(xué)分析方法的分類電化學(xué)分析法電位分析法電解分析法電泳分析法庫(kù)侖分析法極譜與伏安分析法電導(dǎo)分析法4）其他分析方法的分類其他分析法質(zhì)譜分析法聯(lián)用技術(shù)熱分析法3、儀器分析應(yīng)用領(lǐng)域

社會(huì)：體育（興奮劑）、生活產(chǎn)品質(zhì)量（魚(yú)新鮮度、食品添加劑、農(nóng)藥殘留量）、環(huán)境質(zhì)量（污染實(shí)時(shí)檢測(cè)）、法庭化學(xué)（DNA技術(shù)，物證）

化學(xué)：新化合物的結(jié)構(gòu)表征；分子層次上的分析方法；

生命科學(xué)：DNA測(cè)序；活體檢測(cè)；

環(huán)境科學(xué)：環(huán)境監(jiān)測(cè)；污染物分析；

材料科學(xué)：新材料，結(jié)構(gòu)與性能；

藥物：天然藥物的有效成分與結(jié)構(gòu)，構(gòu)效關(guān)系研究；

4、儀器分析的特點(diǎn)靈敏度高選擇性高準(zhǔn)確度高操作簡(jiǎn)便，分析速度快，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化樣品用量少價(jià)格一般來(lái)說(shuō)比較昂貴5、儀器分析的發(fā)展趨勢(shì)常用的分析儀器圖片常用到的前處理儀器第二章紫外-可見(jiàn)分光光度法分析亞硝酸鹽測(cè)定方法及限量值

2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定.pdfGB2762-2005食品中污染物限量.pdf1、概述2、光的吸收原理3、紫外—可見(jiàn)分光光度計(jì)4、紫外—可見(jiàn)分光光度分析5、食品分析中的應(yīng)用紫外—可見(jiàn)分光光度法是基于物質(zhì)分子對(duì)200—780nm區(qū)域內(nèi)光輻射的吸收而建立起來(lái)的分析方法。1、概述1）紫外—可見(jiàn)分光光度法分類光譜區(qū)域紫外分光光度法（200—380）可見(jiàn)分光光度法（380—780）檢測(cè)器不同目視比色法——人眼光電比色法——光電轉(zhuǎn)換器件（1）靈敏度高。

分光光度法測(cè)定物質(zhì)的濃度下限一般可達(dá)10-5～10-6的微量組分。對(duì)固體試樣一般可測(cè)到10-7。如果對(duì)被測(cè)組分事先加以富集，靈敏度還可以提高1～2個(gè)數(shù)量級(jí)。（2)準(zhǔn)確度高。

分光光度法的相對(duì)誤差為2～5%，其準(zhǔn)確度雖不如化學(xué)分析法，但對(duì)微量成分來(lái)說(shuō)，還是比較滿意的，因?yàn)樵谶@種情況下，化學(xué)分析法不夠準(zhǔn)確了，甚至無(wú)法進(jìn)行測(cè)定。

2）紫外—可見(jiàn)分光光度法的特點(diǎn)（3)操作簡(jiǎn)便，測(cè)定速度快，價(jià)格低廉。（4)應(yīng)用廣泛。

幾乎所有的無(wú)機(jī)離子和有機(jī)化合物都可直接或間接地用分光光度法進(jìn)行測(cè)定。如有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、藥品分析、食品檢驗(yàn)、醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境保護(hù)、生命科學(xué)等領(lǐng)域。

2、光的吸收原理1）單色光和互補(bǔ)光

單色光：具有同一波長(zhǎng)的光。很難獲得。復(fù)合光：含有多種波長(zhǎng)的光。如，白光?；パa(bǔ)光：如果把適當(dāng)顏色的兩種光按一定強(qiáng)度比例混合，也可成為白光，這兩種顏色的光稱為互補(bǔ)光。2）物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收

如果我們把具有不同顏色的各種物體放置在黑暗處，則什么顏色也看不到?？梢?jiàn)物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色與光有著密切的關(guān)系，一種物質(zhì)呈現(xiàn)何種顏色，是與光的組成和物質(zhì)本身的結(jié)構(gòu)有關(guān)的。對(duì)溶液來(lái)說(shuō)，溶液呈現(xiàn)不同的顏色，是由于溶液中的質(zhì)點(diǎn)（分子或離子）選擇性的吸收某種顏色的光所引起的。如果各種顏色的光透過(guò)程度相同，這種物質(zhì)就是無(wú)色透明的。如果只讓一部分波長(zhǎng)的光透過(guò)，其他波長(zhǎng)的光被吸收，則溶液就呈現(xiàn)出透過(guò)光的顏色，也就是溶液呈現(xiàn)的是與它吸收的光成互補(bǔ)色的顏色。例如硫酸銅溶液因吸收了白光中的黃色光而呈藍(lán)色；高錳酸鉀溶液因吸收了白光中的綠色光而呈現(xiàn)紫紅色。3)物質(zhì)的吸收光譜曲線任何一種溶液，對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收程度是不相等的。如果將不同波長(zhǎng)的光依次通過(guò)固定濃度的某一溶液，測(cè)量該溶液對(duì)各種單色光的吸收程度，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)可以得到一條曲線，叫做吸收光譜曲線或光吸收曲線。它清楚地描述了溶液對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收情況。將一固定濃度和厚度的溶液在不同波長(zhǎng)的光下測(cè)定其吸光度，然后以波長(zhǎng)對(duì)吸光度作圖，畫出的曲線即為該物質(zhì)的吸收光譜曲線。波長(zhǎng)400500600700800吸光度0.180.221.10.220.18例00.20.40.60.811.21.40200400600800100000.20.40.60.811.21.40200400600800100000.20.40.60.811.21.40200400600800100000.20.40.60.811.21.40200400600800100000.20.40.60.811.21.40200400600800100000.20.40.60.811.21.402004006008001000橫坐標(biāo)表示吸收光的波長(zhǎng),用nm為單位?？v坐標(biāo)表示吸收光的吸收強(qiáng)度，一般用A(吸光度)來(lái)表示。光譜曲線中最大吸收峰所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)相當(dāng)于躍遷時(shí)所吸收光線的波長(zhǎng)稱為λmax。（1）在進(jìn)行光度測(cè)量時(shí)，通常都是選取在λmax的波長(zhǎng)處來(lái)測(cè)量，因?yàn)檫@時(shí)可得到最大的靈敏度。（2）不同濃度的同一溶液，其吸收曲線形狀相似，最大吸收波長(zhǎng)也一樣。所不同的是吸收峰峰高隨濃度的增大而增高。（3）不同物質(zhì)的吸收曲線，其形狀和最大吸收波長(zhǎng)都各不相同。因此，可利用吸收曲線來(lái)作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)。4）光的吸收定律（1）朗伯—比爾定律

朗伯和比耳分別于1760年和1852年研究了光的吸收與有色溶液按液層的厚度及溶液濃度的定量關(guān)系，奠定了分光光度分析法的理論基礎(chǔ)。當(dāng)一束平行單色光照射到一定濃度的均勻透明溶液時(shí)，光的一部分被介質(zhì)吸收，一部分透過(guò)溶液、一部分被器皿的表面反射。如果入射光的強(qiáng)度為I0，吸收光的強(qiáng)度為Ia，透過(guò)光的強(qiáng)度為It，反射光的強(qiáng)度為Ir，則它們之間的關(guān)系為：I0＝Ir+Ia+It在分光光度測(cè)定中，盛溶液的比色皿都是采用相同質(zhì)且的光學(xué)玻璃制成的，反射光的強(qiáng)度基本上是不變的其影響可以互相抵消，于是可以簡(jiǎn)化為：

I0＝It+Ia溶液濃度液層厚度朗伯定律：反應(yīng)吸光度與溶液厚度的關(guān)系。

A=k1·b比爾定律：反應(yīng)吸光度與溶液濃度的關(guān)系。A=k2·c朗伯—比爾定律：當(dāng)一束平行的單色光垂直照射到一均勻透明的稀溶液時(shí)，其吸光度與溶液濃度和液層厚度成正比。A=Kbc

A：吸光度；溶液對(duì)光的吸收程度；

b：液層厚度，cm；

c：溶液的摩爾濃度，mol·L-１；K：是比例常數(shù)，與入射光的波長(zhǎng)、物質(zhì)的

性質(zhì)和溶液的溫度等因素有關(guān)。如果保持入射光的強(qiáng)度不變，則光吸收程度與溶液的濃度和液層的厚度有關(guān)。（2）吸收定律的適用性入射光為單色平行光首先應(yīng)選擇比較好的單色器。此外還應(yīng)將入射波長(zhǎng)選定在待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)且吸收曲線較平坦處。只適用于稀溶液。朗—比耳定律的假定：所有的吸光質(zhì)點(diǎn)之間不發(fā)生相互作用；假定只有在稀溶液(c<10-2mol/L)時(shí)才基本符合。當(dāng)溶液濃度c>10－2mol/L時(shí)，吸光質(zhì)點(diǎn)間可能發(fā)生締合、解離等相互作用，直接影響了對(duì)光的吸收。3、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)光源單色器樣品室檢測(cè)器顯示（1）光源

在整個(gè)紫外光區(qū)或可見(jiàn)光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命?？梢?jiàn)光區(qū)：鎢燈作為光源，其輻射波長(zhǎng)范圍在320～2500nm。紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射185～400nm的連續(xù)光譜。1）基本組成

2）單色器將光源發(fā)射復(fù)合光分解成所需單色光的光學(xué)系統(tǒng)。3）樣品室樣品室放置各種類型的吸收池（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見(jiàn)區(qū)一般用玻璃池。比色皿使用注意事項(xiàng)：拿取比色皿時(shí),只能用手指接觸兩側(cè)的毛玻璃,避免接觸光學(xué)面。凡含有腐蝕玻璃的物質(zhì)的溶液不得長(zhǎng)期盛放在比色皿中。不能將比色皿放在火焰或電爐上進(jìn)行加熱或干燥箱內(nèi)烘烤;。當(dāng)發(fā)現(xiàn)比色皿里面被污染后，應(yīng)用無(wú)水乙醇清洗，及時(shí)擦拭干凈。盛裝溶液時(shí),高度為比色皿的2/3處即可,用完后立即清洗。

4）檢測(cè)器利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)變成可測(cè)的電信號(hào)，如：光電池、光電管、光電二極管或光電倍增管(目前常用)。5）結(jié)果顯示記錄系統(tǒng)檢流計(jì)、數(shù)字顯示、計(jì)算機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和結(jié)果處理2）分光光度計(jì)的類型（1）單光束分光光度計(jì)是指從光源中發(fā)出的光，經(jīng)過(guò)單色器等一系列光學(xué)元件及吸收池后，最后照在檢測(cè)器上時(shí)始終為一束光。簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，測(cè)定結(jié)果受光源強(qiáng)度波動(dòng)的影響較大，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。（2)雙光束分光光度計(jì)從光源中發(fā)出的光經(jīng)過(guò)單色器后被一個(gè)旋轉(zhuǎn)的扇形反射鏡（即切光器）分為強(qiáng)度相等的兩束光，分別通過(guò)參比溶液和樣品溶液。兩束光在不同的時(shí)間交替地照在同一個(gè)檢測(cè)器上。消除光源不穩(wěn)定引起的誤差、快速全波段掃描，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。（3)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)與單波長(zhǎng)分光光度計(jì)的主要區(qū)別在于采用雙單色器，以同時(shí)得到兩束波長(zhǎng)不同的單色光。光源發(fā)出的光分為兩束，分別經(jīng)過(guò)兩個(gè)可以自由轉(zhuǎn)動(dòng)的光柵單色器，得到兩束具有不同波長(zhǎng)的單色光。借切光器，使兩束光以一定的時(shí)間間隔交替通過(guò)同一吸收池而后到達(dá)檢測(cè)器。由檢測(cè)器顯示出在波長(zhǎng)λ1和λ2的吸光度差值ΔA。ΔA與吸光物質(zhì)c成正比。4、紫外—可見(jiàn)分光光度分析1）紅移與藍(lán)移

有機(jī)化合物的吸收譜帶常常因引入取代基或改變?nèi)軇┦棺畲笪詹ㄩL(zhǎng)λmax和吸收強(qiáng)度發(fā)生變化:

λmax向長(zhǎng)波方向移動(dòng)稱為紅移，向短波方向移動(dòng)稱為藍(lán)移。吸收強(qiáng)度增大或減小的現(xiàn)象分別稱為增色效應(yīng)或減色效應(yīng)。2）定量分析：基礎(chǔ)是朗伯-比耳定律（1）單組份樣品的分析：標(biāo)準(zhǔn)曲線法：

配制一系列不同含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，作A-c曲線，即標(biāo)準(zhǔn)曲線，在相同條件下測(cè)定未知試樣的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可以找到與之對(duì)應(yīng)的未知試樣的濃度。在測(cè)定樣品時(shí)，應(yīng)按相同的方法制備待測(cè)試液（為了保證顯色條件一致，操作上一般是試樣與標(biāo)樣同時(shí)顯色），在相同測(cè)量條件下測(cè)量試液的吸光度，然后在工作曲線上查出待測(cè)試液濃度。待測(cè)試液的濃度應(yīng)在工作曲線線性范圍內(nèi)，最好在工作曲線中部。比較法：

即將待測(cè)溶液與某一已知濃度的標(biāo)樣溶液，

在相同的條件下，測(cè)各自的吸光度A樣和A標(biāo)，建立朗伯-比爾定律，解方程求出未知樣品濃度與含量。（2）多組分樣品的同時(shí)測(cè)定若各組分的吸收曲線互不重疊，則可在各自最大吸收波長(zhǎng)處分別進(jìn)行測(cè)定。這本質(zhì)上與單組分測(cè)定沒(méi)有區(qū)別。若各組分的吸收曲線互有重疊，則可根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。

Aλ1=εaλ1bca

＋εbλ1bcb

Aλ2=εaλ2bca

＋εbλ2bcb

例為測(cè)定含A和B兩種有色物質(zhì)中A和B的濃度，先以純A物質(zhì)作工作曲線，求得A在λ1和λ2時(shí)εA1=4800和εA2=700;再以純B物質(zhì)作工作曲線,求得εA1=800和εA2=4200。對(duì)試液進(jìn)行測(cè)定，得A1=0.580和A2=1.10。求試液中A和B的濃度。上述測(cè)定時(shí)均用1cm比色皿。解：b=1cA=7.94×10-5mol·L-1；cB=2.48×10-4mol·L-1。解方程組得：0.580=4800bcA＋800bcB

1.10=700bcA

＋4200bcB

Aλ1=εA1bcA＋εB1bcB

Aλ2=εA2bcA

＋εB2bcB

（3）雙波長(zhǎng)分光光度法

不需空白溶液作參比；但需要兩個(gè)單色器獲得兩束單色光（λ1和λ2）；以參比波長(zhǎng)λ1處的吸光度Aλ1作為參比，來(lái)消除干擾。在分析渾濁或背景吸收較大的復(fù)雜試樣時(shí)顯示出很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測(cè)量精密度等方面都比單波長(zhǎng)法有所提高。

ΔA

＝Aλ2－Aλ1

＝(ελ2－ελ1)bc

兩波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度差值ΔA與待測(cè)組分濃度成正比。ελ1和ελ2分別表示待測(cè)組分在λ1和λ2處的摩爾吸光系數(shù)。

5、食品分析中的應(yīng)用酸奶中維生素A的測(cè)定水果汁中果糖的測(cè)定番茄紅素的測(cè)定大豆總異黃酮含量的測(cè)定食品中咖啡因的測(cè)定食品中甜蜜素的測(cè)定食品中硝酸鹽的測(cè)定面粉中過(guò)氧化苯甲酰的測(cè)定食品中防腐劑苯甲酸的測(cè)定發(fā)酵食品中黃曲霉毒素含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)：亞硝酸鹽的測(cè)定1、原理：

亞硝酸鹽采用鹽酸萘乙二胺法測(cè)定，試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸條件下亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色燃料，測(cè)定亞硝酸鹽含量。2、操作1）稱取2.5ｇ制成勻漿的試樣經(jīng)一定的樣品前處理（略）得樣品備用液（定容到了250mL容量瓶中）。2）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線

亞硝酸鈉標(biāo)