病原微生物實驗室生物安全

病原微生物實驗室生物安全湖南省疾病預(yù)防控制中心微生物檢驗科黃一偉2012-3-14

內(nèi)容病原微生物實驗室生物安全概述病原微生物危害評估生物安全實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求生物安全實驗室的使用病原微生物生物安全實驗室的管理病原微生物實驗室生物安全概述實驗室生物安全概述-定義《病原微生物實驗室生物安全》中的實驗室，主要是指與病原微生物相關(guān)的實驗室，即是具有傳染性物質(zhì)操作活動的實驗室。為了避免微生物和醫(yī)學(xué)實驗室中有害或有潛在危害的生物因子對人、環(huán)境和社會造成的危害或潛在危害，而采取的防護措施（硬件）和管理措施（軟件），達到對人、環(huán)境和社會的安全防護目的。實驗室的生物安全要素操作者、合作者操作對象環(huán)境實驗室設(shè)施設(shè)備材料實驗者管理者維護者相關(guān)者樣本菌（毒）種廢棄物廢氣廢水廢物人員動物器械、試劑、耗材圍護結(jié)構(gòu)桌椅板凳水電通訊溫濕光風安全設(shè)備檢驗設(shè)備實驗室生物安全概述-發(fā)展和現(xiàn)狀1二十世紀五十年代，美國在開展生物武器、化學(xué)武器的實驗室研究中，為了防止病原微生物和化學(xué)毒劑泄漏逃逸到實驗室外環(huán)境，研制了一系列的防護裝備和設(shè)備，如高效粒子空氣過濾器、生物安全柜等；建設(shè)了BSL-3實驗室和BSL-4實驗室等。1983年WHO第一版《實驗室生物安全手冊》（LaboratoryBiosafetyManual），1993年第二版，2002年第二版的修訂版，2004年正式發(fā)布了第三版，該手冊鼓勵各國接受和執(zhí)行生物安全的基本概念，并鼓勵針對本國實驗室如何安全處理致病微生物制訂操作規(guī)范。在2004年的第三版中，在下列幾個方面增加了新的內(nèi)容：危險度評估、重組DNA技術(shù)的安全利用以及感染性物質(zhì)運輸以及生物安全保障。實驗室生物安全概述-發(fā)展和現(xiàn)狀2關(guān)于實驗室生物安全規(guī)范化管理，美國、歐洲、加拿大等國家做得都比較好。由美國疾病預(yù)防控制中心/國立衛(wèi)生研究院（CDC/NIH）發(fā)布了《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全手冊》（BiosafetyintheMicrobiologicalandBiomedicalLaboratoriesManual,3theditionCDC/NIH）1983第一版，1999年發(fā)布第四版，目前已被國際公認為“金標準”。/biosafety/publications/bmbl5/BMBL.pdf（2009年12月第5（2009年12月第5版本）加拿大的《實驗室生物安全指南》2004年第三版《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全手冊》在1983年第一版的《微生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)實驗室的生物安全》(BMBL)中，最早提出了把病原微生物和實驗室活動分為四級的概念。1993年由CDC/NIH有關(guān)專家編寫的《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室的生物安全》的第三版著重描述了微生物實驗室標準操作、實驗室設(shè)計和安全設(shè)備的不同組合，形成1～4級的實驗室生物安全防護等級，并依據(jù)微生物對人的危險程度分為四級危險組，在實驗室實際操作中加以應(yīng)用。1999年美國生物安全協(xié)會、CDC和NIH的生物安全專家，根據(jù)近年發(fā)生的一些新情況，如新出現(xiàn)的傳染病、生物恐怖活動、BSL-3和BSL-4實驗室的設(shè)計、病原微生物的國際運輸?shù)葐栴}，在第三版的基礎(chǔ)上進行了必要的修改和新的補充，出版了第四版。實驗室生物安全概述-國內(nèi)情況1進口少數(shù)BSL-3實驗室。20世紀80年代我國自己研制第一個國產(chǎn)三級生物安全防護水平（biosafetylevel3,BSL-3）實驗室誕生。我國也建造了一批此種防護水平或接近BSL-3水平的生物安全實驗室。2002年頒布了《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準則》（WS233－2002），這是一個開創(chuàng)性工作。該通用準則是以美國CDC/NIH《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室的生物安全》第四版為藍本制定的。2003年《獸醫(yī)實驗室生物安全通用標準》并已頒布實施。實驗室生物安全概述-國內(nèi)情況2SARS期間，2003年5月6日科技部、衛(wèi)生部、國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家環(huán)境保護總局聯(lián)合發(fā)布了關(guān)于印發(fā)《傳染性非典型肺炎病毒研究實驗室暫行管理辦法》的通知。其內(nèi)容包括《傳染性非典型肺炎病毒研究實驗室暫行管理辦法》和《傳染性非典型肺炎病毒的毒種保存、使用和感染動物模型的暫行管理辦法》。實驗室生物安全概述-國內(nèi)情況3《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2004）。2004年5月，中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局和中華人民共和國標準化管理委員會正式頒布了該標準。2004年9月1日中華人民共和國建設(shè)部與國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局又聯(lián)合發(fā)布了《生物安全實驗室建設(shè)技術(shù)規(guī)范》(GB50346-2004）。2004年11月12日，由溫家寶總理簽發(fā)中華人民共和國國務(wù)院令（第424號）公布施行《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（簡稱《條例》）。該《條例》規(guī)定了在病原微生物實驗活動中保護實驗人員和公眾健康的宗旨，從而使我國病原微生物實驗室的管理工作步入法制化管理軌道。《中華人民共和國傳染病防治法》（2004年8月28日修訂版）第二十二條、第二十六條、第六章監(jiān)督管理《實驗室生物安全通用要求》

（GB19489－2004）《實驗室生物安全通用要求》（GB19489－2004）是國家實驗室生物安全強制執(zhí)行的標準，是生物安全實驗室認證認可的唯一國家標準。該通用準則是在參考了WHO、美國、加拿大和衛(wèi)生部的行業(yè)標準的基礎(chǔ)上，結(jié)合我國的實際情況編寫而成的，內(nèi)容包括20節(jié)，主要包括：實驗室生物安全防護屏障和水平分級、生物安全實驗室的設(shè)施、生物安全動物實驗室的設(shè)施、生物安全實驗室的個人防護、生物安全動物實驗室的個人防護、管理要求、事故處理、感染性樣品的標志和運輸、廢物處理、生物安全柜的性能、分類、選擇和使用、化學(xué)品安全、放射品安全、實驗室生物安全標準操作規(guī)程等?！秾嶒炇疑锇踩ㄓ靡蟆?/p>

（GB19489－2008）GB19489-2008與GB19489-2004相比，主要變化如下：對標準要素的劃分進行了調(diào)整，明確區(qū)分了技術(shù)要素和管理要素。

2004版第6章至第20章為技術(shù)要素和管理要素，兩類要素交織在一起。

2008版第5章、第6章為技術(shù)要素，第7章為管理要素。調(diào)整了名詞術(shù)語刪除了危害程度分級（2004版的第3章）修訂和增加了風險評估和風險控制的要求（2004版的第4章，本版的第3章）修訂了對實驗室設(shè)計原則、設(shè)施和設(shè)備的部分要求（2004版的第6章、第7章和9.3節(jié)，本版的第5章和第6章）增加了對實驗室設(shè)施自控系統(tǒng)的要求（本版的6.3.8）增加了對從事無脊椎動物操作實驗室設(shè)施的要求（本版的6.5.5）增加了管理的要求（本版的7.4、7.5、7.8～7、13）刪除了部分與GB19781-2005《醫(yī)學(xué)實驗室安全要求》重復(fù)的內(nèi)容（2004版的第3章、第12章～第15章、第17章）增加了附錄A、附錄B、附錄C，本標準的附錄A、附錄B、附錄C均為資料性附錄附錄A:實驗室圍護結(jié)構(gòu)嚴密性檢測和排風HEPA過濾器檢漏方法指南附錄B:生物安全實驗室良好工作行為指南附錄C:實驗室生物危險物質(zhì)溢灑處理指南本標準的第3.1.10、、、、和條為推薦性條款其余均為強制性條款GB19489-2008與GB19489-2004比較普通實驗室P1實驗室P3實驗室P4實驗室P2實驗室19條要求2008版22條要求8條要求76條要求2004版P1實驗室P3實驗室P4實驗室P2實驗室9條要求11條要求38條要求《生物安全實驗室建設(shè)技術(shù)規(guī)范》（GB50346－2004）由中華人民共和國建設(shè)部制定頒布的《生物安全實驗室建設(shè)技術(shù)規(guī)范》（GB50346-2004）共九章，包括總則、術(shù)語、生物安全實驗室分級和技術(shù)指標、建筑和裝修、暖通空調(diào)和空氣凈化、給水排水與氣體供應(yīng)、電氣和自控、安全和消防、施工驗收九章組成。該規(guī)范將用于指導(dǎo)生物安全實驗室的建造、系統(tǒng)和設(shè)備安裝、裝飾、空調(diào)凈化、電氣和自控要求、檢測驗收等過程。實驗室生物安全概述-有關(guān)概念1污染

(contamination)：是指物質(zhì)或事物由外來的物質(zhì)或因子的混入，而造成的不希望的影響。例如空氣、水體和固體受到物理的(灰塵)、氣體的(有害氣體)、生物(氣溶膠微生物)的污染。在生物安全實驗室里的空氣、水體和固體都視為被實驗生物因子的污染。去除污染

(decontamination)：即為了安全，去除或減少污染物（原）或其影響的過程或方法。去除生物污染不一定殺滅微生物。所以：（1）安全柜內(nèi)操作（2）向室外排放的空氣要用高效空氣顆粒(high-efficiencyparticulateair,HEPA)濾器過濾（3）排出的廢水和廢物要進行高壓滅菌,對傳出的儀器和樣本容器表面進行消毒實驗室生物安全概述-有關(guān)概念2生物安全防護：是指避免生物危險因子，特別是偶然的和有意利用的生物因子，對生物體包括實驗室工作者在內(nèi)的傷害和對環(huán)境的污染的意識和措施。實驗室生物安全防護分為一級防護（屏障）和二級防護（屏障）。一級屏障：包括兩方面內(nèi)容，（1）生物安全柜和類似的設(shè)備等，分成三個級別；（2）個人防護裝備，也分成三個級別。二級屏障：是指實驗室屏障設(shè)施，其建設(shè)有4種不同的結(jié)構(gòu)。（1）實驗室的設(shè)施結(jié)構(gòu)（2）通風空調(diào)系統(tǒng)（3）給水排水（4）電氣和控制系統(tǒng)各種一級屏障和二級屏障的組合構(gòu)成不同防護水平級別的實驗室（BSL-1?4）。概念的區(qū)別潔凈實驗室與生物安全實驗室一些健康相關(guān)產(chǎn)品的檢測標準提出了100級潔凈度的要求，100級潔凈實驗室是必需的潔凈實驗室不能代替生物安全實驗室生物安全實驗室不允許正壓潔凈實驗室僅提供了對樣品的保護生物安全實驗室有潔凈度的要求，但要求不高實驗室生物安全概述-病原微生物實驗室的生物危害生物危害：由生物因子形成的傷害。生物因子：一切微生物和生物活性物質(zhì)?！恫≡⑸飳嶒炇疑锇踩芾項l例》按危害程度將病原微生物分為四類：第四類危險程度最低，第一類危險程度最高第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為“高致病性病原微生物”?！秾嶒炇疑锇踩ㄓ靡蟆罚℅B19489-2004）對微生物的危害進行分類，評價標準和等級劃分與WHO《生物安全手冊》第三版（2004）基本一致，但危害程度由4級至1級遞減。國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較《病原微生物實驗室生物安全管理條例》《實驗室生物安全通用要求》(GB19489-2008)WHO《生物安全手冊》（第三版，2004）四類在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。

Ⅰ級（低個體危害，低群體危害）不會導(dǎo)致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。Ⅰ級（無或極低的個體和群體危險）不太可能引起人或動物致病的微生物。

國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較管理條例 通用要求 WHO安全手冊三類能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。

Ⅱ級

(中等個體危害，有限群體危害)能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原微生物。實驗室感染不導(dǎo)致嚴重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風險有限。Ⅱ級（個體危險中等，群體危險低）病原微生物能夠?qū)θ嘶騽游镏虏?，但對實驗室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴重危害。實驗室暴露也許會引起嚴重感染，但對感染有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險有限。國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較二類能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。Ⅲ級（高個體危害，低群體危害）能引起人類或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原微生物。Ⅲ級（個體危險高，群體危險低）病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有有效的預(yù)防和治療措施。國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較一類能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。

Ⅳ級(高個體危害，高群體危害)能引起人類或動物非常嚴重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原微生物。Ⅳ級（個體和群體的危險均高）病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，并且很容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預(yù)防和治療措施。病原微生物實驗室等級一類微生物（國際四級）二類微生物（國際三級）三類微生物（國際二級）四類微生物（國際一級）四級生物安全（高度防護）實驗室（BSL-4，P4）三級生物安全（防護）實驗室（BSL-3，P3)二級生物安全（基礎(chǔ)）實驗室（BSL-2，P3)一級生物安全實驗室（BSL-1，P1)生物因子危害分級與實驗室生物安全級別、操作及所用設(shè)備的關(guān)系危害分級生物安全防護水平實驗室操作安全設(shè)備I級四類BSL-1標準的微生物操作技術(shù)開放式工作臺、洗手池Ⅱ級三類BSL-21、標準的微生物操作技術(shù)以及防護服、手套，若需要則采取面部保護措施2、限制進入、生物危險警告標志、“銳器”安全措施、生物安全手冊等開放式工作臺、洗手池以及高壓滅菌器、I級或II級生物安全柜、沖洗眼裝置Ⅲ級二類BSL-3同BSL-2，加：1、專用的防護服，若需要則采取呼吸保護措施2、受控的入口、定向的氣流II級或III級生物安全柜，不排蒸汽的高壓蒸汽滅菌器、緊急消毒淋浴裝置Ⅳ級一類BSL-4同BSL-3，加：入口氣閘室、出口淋浴室及專門的廢棄物處理III級生物安全柜，或II級生物安全柜與正壓防護服配合BSL-4BSL-3BSL-2病原微生物危害評估病原微生物危害評估1、為什么要進行危害評估2、什么時候進行危害評估3、怎樣進行危害評估4、如何書寫危害評估報告為什么要進行微生物危害評估1.確定生物安全防護水平：根據(jù)評估的結(jié)果，確保實驗室的空間、設(shè)施與設(shè)備能滿足所從事工作的需要。2.依據(jù)病原微生物危害評估結(jié)果制定微生物操作、儀器設(shè)備使用的操作程序與管理規(guī)程：微生物保藏、運輸、滅活、銷毀程序；潛在危害分析與意外事故處理程序；人員培訓(xùn)、個人防護及健康保障與監(jiān)督程序。3.生物危害評估中包含大量相關(guān)微生物以及引起相關(guān)疾病的背景信息，是所有工作人員必須學(xué)習的參考資料。4.是評價病原微生物實驗室生物安全狀況的依據(jù)。什么時候進行危害評估微生物的危害評估是生物安全的核心工作，規(guī)范的危害評估工作應(yīng)始于實驗室設(shè)計改造和實驗研究之前；危害評估是一種動態(tài)發(fā)展的工作，它必須考慮到科學(xué)的最新進展，實時評估于實驗活動之中，定期階段性再評估于使用之后。怎樣進行微生物危害評估病原微生物危害評估的要素一、一般生物學(xué)特性：起源、基因組及編碼產(chǎn)物、形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、流行特征等。二、致病性和感染劑量：是評估病原微生物引起人類感染輕重程度的重要參考依據(jù)。致病性主要是闡述病原微生物引發(fā)疾病的過程或者發(fā)病機制，感染劑量是給出引起人類或動物模型發(fā)病的劑量范圍或者最低閾值。不同病原微生物的致病力強弱不同，即使同類病原微生物不同菌、毒株也還可以有不同強度的致病力。判斷病原微生物的致病性應(yīng)考慮宿主類型、病原微生物的種、型、株、入侵的部位、體內(nèi)的定位、是否產(chǎn)生特異性毒素等。病原微生物危害評估的要素三、感染途徑及潛在暴露結(jié)果：空氣傳播途徑要比其他感染途徑更容易引起實驗室感染的發(fā)生。病原微生物的致病力和機體的抵抗能力決定了機體暴露后產(chǎn)生的后果。同時還取決于所感染病原微生物的數(shù)量，當大量病原微生物侵襲人體時，潛伏期一般較短，而病情則較為嚴重；反之，則潛伏期較長而病情較輕，或不發(fā)病。不同個體被傳染后，可產(chǎn)生各種不同的結(jié)局，最輕的不出現(xiàn)任何癥狀、最重的發(fā)生嚴重型臨床疾病而死亡。病原微生物危害評估的要素四、環(huán)境中的穩(wěn)定性：指其抵抗外界環(huán)境的存活能力。在自然界中的穩(wěn)定性；對物理因素、化學(xué)消毒劑的敏感性。五、被操作微生物的濃度和劑量的影響六、自然宿主和易感人群七、實驗動物研究、實驗室感染或院內(nèi)感染信息病原微生物危害評估的要素八、實驗活動評估因?qū)嶒灢僮髟斐煞亲匀煌緩礁腥镜臋C會是很多：清除和處理感染性材料時可能導(dǎo)致手污染；微生物操作中釋放的較大粒子和液滴（直徑大于5μm）會迅速沉降到工作臺面和操作者的手上，可以引起經(jīng)消化道、皮膚和眼睛的感染；破損玻璃器皿刺傷，或注射器扎傷可以引起經(jīng)血液的感染；血清樣本采集時可能經(jīng)噴濺和氣溶膠引起呼吸道感染或眼結(jié)膜感染；進行動物實驗時被動物咬傷、抓傷可導(dǎo)致感染。應(yīng)預(yù)先確定擬進行的實驗項目；應(yīng)預(yù)先確定實驗操作中可能產(chǎn)生氣溶膠的實驗步驟：如攪拌機、離心機、勻漿機、振蕩機、超聲波粉碎儀和混合儀等設(shè)備的使用。病原微生物危害評估的要素九、重組DNA操作和可能擴大的宿主范圍十、預(yù)防和治療措施是否有有效的治療藥物或其他有效的治療措施；是否有針對該傳染病的疫苗；是否有可靠的診斷措施，以便在查出感染時能及時進行有效的隔離與預(yù)防。此外，還應(yīng)考慮“當?shù)亍笔欠裼袟l件進行上述有效的預(yù)防或治療。十一、人員安全狀況評估應(yīng)對所有涉及病原微生物操作的工作人員進行評估:

知識背景 工作經(jīng)驗 工作能力 個人心理素質(zhì) 健康狀態(tài)對實驗室管理者還應(yīng)評估：管理能力處理緊急事故能力病原微生物危害評估的要素十二、評估結(jié)論1.病原微生物分類分級。我國對具體病原微生物的分類詳見衛(wèi)生部頒布的《人間傳染的病原微生物名錄》。該名錄不僅對病原微生物的危害程度進行了分類，而且還規(guī)定了其不同實驗操作的防護水平以及運輸?shù)陌b要求。病原微生物危害程度分類與實驗室生物安全防護水平的關(guān)系是相對應(yīng)而非“等同”。在確定所從事特定工作的生物安全水平時，應(yīng)根據(jù)危害評估結(jié)果來進行專業(yè)判斷，而不應(yīng)單純根據(jù)所使用病原微生物所屬的某一危害程度分類來機械地確定所需的實驗室生物安全水平。衛(wèi)生部頒布的《人間傳染的病原微生物名錄》列出的微生物實驗操作時應(yīng)采取的最低防護水平。病原微生物危害評估的要素十二、評估結(jié)論2.實驗活動、實驗室級別以及個人防護要求。3.人員健康和素質(zhì)要求。4.預(yù)防和治療措施要求。5.菌（毒）種和實驗活動管理要求。6.應(yīng)急預(yù)案和措施要求。病原微生物危害評估實例SARS甲型H1N1流感含未知的病原微生物的物質(zhì)

在待檢樣品信息不足時，可以利用病人的醫(yī)學(xué)資料、流行病學(xué)資料（發(fā)病率和病死率資料、可疑的傳播途徑、其他有關(guān)暴發(fā)的調(diào)查資料）以及有關(guān)標本來源地的信息，幫助確定處理這些樣本的危害程度。處理這類標本時應(yīng)當謹慎：對于取自病人的標本，均應(yīng)當遵循標準防護方法，并采用隔離防護措施（如手套、防護服、眼睛保護等）；處理這類標本時最低需要二級生物安全水平；標本的運送應(yīng)當遵循國家和／或國際的規(guī)章和規(guī)定。生物安全實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求BSL-1實驗室1.1實驗室的門應(yīng)有可視窗并可鎖閉，門鎖及門的開啟方向應(yīng)不妨礙室內(nèi)人員逃生。1.2

應(yīng)設(shè)洗手池，宜設(shè)置在靠近實驗室的出口處。1.3在實驗室門口處應(yīng)設(shè)存衣或掛衣裝置，可將個人服裝與實驗室工作服分開放置。1.4實驗室的墻壁、天花板和地面應(yīng)易清潔、不滲水、耐化學(xué)品和消毒滅菌劑的腐蝕。地面應(yīng)平整、防滑，不應(yīng)鋪設(shè)地毯。BSL-1實驗室1.5

實驗室臺柜和座椅等應(yīng)穩(wěn)固，邊角應(yīng)圓滑。1.6

實驗室臺柜等和其擺放應(yīng)便于清潔，實驗臺面應(yīng)防水、耐腐蝕、耐熱和堅固。1.7實驗室應(yīng)有足夠的空間和臺柜等擺放實驗室設(shè)備和物品。1.8應(yīng)根據(jù)工作性質(zhì)和流程合理擺放實驗室設(shè)備、臺柜、物品等，避免相互干擾、交叉污染，并應(yīng)不妨礙逃生和急救。1.9實驗室可以利用自然通風。如果采用機械通風，應(yīng)避免交叉污染。1.10如果有可開啟的窗戶，應(yīng)安裝可防蚊蟲的紗窗。BSL-1實驗室1.11實驗室內(nèi)應(yīng)避免不必要的反光和強光。1.12若操作刺激或腐蝕性物質(zhì)，應(yīng)在30m內(nèi)設(shè)洗眼裝置，必要時應(yīng)設(shè)緊急噴淋裝置。1.13若操作有毒、刺激性、放射性揮發(fā)物質(zhì)，應(yīng)在風險評估的基礎(chǔ)上，配備適當?shù)呢搲号棚L柜。1.14若使用高毒性、放射性等物質(zhì)，應(yīng)配備相應(yīng)的安全設(shè)施、設(shè)備和個體防護裝備，應(yīng)符合國家、地方的相關(guān)規(guī)定和要求。1.15若使用高壓氣體和可燃氣體，應(yīng)有安全措施，應(yīng)符合國家、地方的相關(guān)規(guī)定和要求。1.16應(yīng)設(shè)應(yīng)急照明裝置。1.17應(yīng)有足夠的電力供應(yīng)。1.18應(yīng)有足夠的固定電源插座，避免多臺設(shè)備使用共同的電源插座。應(yīng)有可靠的接地系統(tǒng)，應(yīng)在關(guān)鍵節(jié)點安裝漏電保護裝置或監(jiān)測報警裝置。1.19供水和排水管道系統(tǒng)應(yīng)不滲漏，下水應(yīng)有防回流設(shè)計。1.20應(yīng)配備適用的應(yīng)急器材，如消防器材、意外事故處理器材、急救器材等。1.21應(yīng)配備適用的通訊設(shè)備。1.22必要時，應(yīng)配備適當?shù)南緶缇O(shè)備。BSL-2實驗室2.1適用時，應(yīng)符合BSL-1的要求。2.2實驗室主入口的門、放置生物安全柜實驗間的門應(yīng)可自動關(guān)閉；實驗室主入口的門應(yīng)有進入控制措施。2.3實驗室工作區(qū)域外應(yīng)有存放備用物品的條件。BSL-2實驗室2.4應(yīng)在實驗室工作區(qū)配備洗眼裝置。2.5應(yīng)在實驗室或其所在的建筑內(nèi)配備高壓蒸汽滅菌器或其他適當?shù)南緶缇O(shè)備，所配備的消毒滅菌設(shè)備應(yīng)以風險評估為依據(jù)。BSL-2實驗室2.6應(yīng)在操作病原微生物樣本的實驗間內(nèi)配備生物安全柜。2.7應(yīng)按產(chǎn)品的設(shè)計要求安裝和使用生物安全柜。如果生物安全柜的排風在室內(nèi)循環(huán)，室內(nèi)應(yīng)具備通風換氣的條件；如果使用需要管道排風的生物安全柜，應(yīng)通過獨立于建筑物其他公共通風系統(tǒng)的管道排出。2.8應(yīng)有可靠的電力供應(yīng)。必要時，重要設(shè)備如培養(yǎng)箱、生物安全柜、冰箱等應(yīng)配置備用電源。BSL-2實驗室分類

常壓狀態(tài)負壓狀態(tài)負壓狀態(tài)的生物安全防護性能高于常壓狀態(tài)。選擇—根據(jù)需要BSL-2實驗室－負壓狀態(tài)平面設(shè)置－應(yīng)設(shè)更衣室、緩沖間、主實驗室。壓力梯度－氣流由潔凈區(qū)流向污染區(qū)。氣流組織－上送下排均勻單向流。建筑結(jié)構(gòu)－縫隙必須密封，耐腐蝕。BSL-2實驗室的運行規(guī)范-實驗室的進入未經(jīng)批準，任何人不得進入實驗室工作區(qū)域。兒童不得進入實驗室工作區(qū)域?？赡茉黾荧@得性感染的危險性或感染后可能引起嚴重后果的人員不允許進入實驗室或動物房。實驗室的門應(yīng)保持關(guān)閉。工作人員進入動物房應(yīng)當經(jīng)過特別批準。與實驗室工作無關(guān)的動物不得帶入實驗室。實驗室的進入BSL-2實驗室門上應(yīng)標有國際通用的生物危害警告標志，包括通用的生物危險性標志，生物安全的級別、實驗室負責人姓名、緊急聯(lián)系電話、以及進入實驗室的特殊要求。工作人員的防護要求1.在實驗室工作時，必須穿著合適的工作服或防護服。2.在進行可能接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的操作時，應(yīng)戴上合適的手套。手套用完后，應(yīng)先消毒再摘除，隨后必須洗手。3.在處理完感染性實驗材料和動物后，以及在離開實驗室工作區(qū)域前，都必須洗手。工作人員的防護要求4.為了防止眼睛或面部受到噴濺物的污染、碰撞或人工紫外線輻射的傷害,必須戴合適的安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護設(shè)備。5.嚴禁穿著實驗室防護服離開實驗室工作區(qū)域。6.不得在實驗室內(nèi)穿露腳趾的鞋。7.禁止在實驗室工作區(qū)域進食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。工作人員的防護要求7.禁止在實驗室工作區(qū)域儲存食品和飲料。8.在實驗室內(nèi)用過的防護服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。有關(guān)操作的指導(dǎo)原則嚴禁用口吸移液管,嚴禁將實驗材料置于口內(nèi)。嚴禁舔標簽。所有的實驗操作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來進行。應(yīng)限制使用注射針頭和注射器；不要打碎注射器、彎曲注射針頭、用后裝上針頭套、重復(fù)使用針管或針頭；不要把針頭或利器放在辦公室的垃圾收集處，可使用利器收集器收集；不要用手直接接觸破碎的玻璃；有關(guān)操作的指導(dǎo)原則可能產(chǎn)生致病微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作均應(yīng)在生物安全柜或其他物理抑制設(shè)備中進行處理高濃度或大容量感染性材料均必須在生物安全柜或其他物理抑制設(shè)備中進行有關(guān)操作的指導(dǎo)原則實驗室應(yīng)制訂并執(zhí)行處理溢出物的標準操作程序。出現(xiàn)溢出、事故以及明顯或可能暴露于感染性物質(zhì)時，必須向?qū)嶒炇邑撠熑藞蟾妗嶒炇覒?yīng)如實記錄有關(guān)暴露和處理的情況，保存相關(guān)記錄。污染的液體在排放到生活污水管道以前必須清除污染（采用化學(xué)或物理學(xué)方法）。根據(jù)所處理的微生物因子的危險度評估結(jié)果準備專門的污水處理系統(tǒng)。只有保證在實驗室內(nèi)沒有受到污染的文件紙張才能帶出實驗室。有關(guān)操作的指導(dǎo)原則實驗室應(yīng)保持清潔整齊，嚴禁擺放和實驗無關(guān)的物品。每天工作結(jié)束后應(yīng)清除工作臺面的污染。若發(fā)生具有潛在危害性的材料溢出應(yīng)立即清除污染。所有受到污染的材料、標本和培養(yǎng)物在廢棄或清潔再利用之前，必須先清除污染。生物安全管理的指導(dǎo)原則實驗室負責人負責制訂和采用生物安全管理計劃以及實驗室安全或/和操作手冊。實驗室應(yīng)能提供常規(guī)的實驗室安全培訓(xùn)（每年都要進行相關(guān)培訓(xùn)），并且建立制度。實驗室負責人（或生物安全負責人）要將生物安全實驗室的特殊危害告知實驗室人員，同時要求他們閱讀生物安全或/和操作手冊，并遵循標準的操作程序。實驗室內(nèi)應(yīng)備有可供取閱的安全或/或操作手冊。所有實驗室人員必須經(jīng)過培訓(xùn)，了解所從事工作的危險、掌握有關(guān)的管理規(guī)定和操作程序，通過考核后方可從事相關(guān)實驗室工作。應(yīng)當制訂節(jié)肢動物和嚙齒動物的控制方案。如有必要，應(yīng)為所有實驗室人員提供適宜的醫(yī)學(xué)評估、監(jiān)測和治療，并建立健康檔案（保留基線血清樣品和必要的預(yù)防接種）。生物安全柜（BSC）的使用規(guī)范①保護產(chǎn)品；②保護操作者；③保護環(huán)境。安全柜比較前窗氣流（m/s）氣流組分（%）排氣連接循環(huán)氣流排出氣流Ⅰ級>0.40100硬管式連接A1型>0.47030排入室內(nèi)或套管（罩）式連接A2型>0.57030排入室內(nèi)或套管（罩）式連接B1型>0.53070硬管式連接B2型>0.50100硬管式連接III級>0.7*0100硬管式連接I級BSCA-前窗操作口B-觀察窗

C-排氣過濾器D-負壓排氣系統(tǒng)

圖1Ⅰ級安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖

Ⅰ級安全柜操作者可通過前窗操作口在安全柜內(nèi)進行操作。

前窗操作口向內(nèi)吸入的負壓氣流保護人員的安全污染氣流經(jīng)高效過濾器過濾后排出，保護環(huán)境不受污染。

不能對產(chǎn)品實施保護。II級BSC操作者可以通過前窗操作口在安全柜內(nèi)進行操作。操作口流入氣流：保護人員經(jīng)高效過濾器過濾的下降氣流：保護產(chǎn)品被污染氣流經(jīng)高效過濾器過濾后排出：保護環(huán)境Ⅱ級安全柜根據(jù)結(jié)構(gòu)特點和氣流模式的不同分為A1、A2、B1、B2四種類型II級BSC使用范圍Ⅱ級A1型安全柜污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實驗室或經(jīng)安全柜的外排接口通過排風管道排到大氣中；安全柜內(nèi)的污染部位可以處于正壓狀態(tài)，且這些正壓區(qū)域可以沒有負壓區(qū)域包圍。A1型安全柜不能用于揮發(fā)性有毒化學(xué)品和揮發(fā)性放射性核素的實驗。A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器

D下降氣流過濾器E壓力排氣系統(tǒng)F風機

圖2Ⅱ級A1型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖（側(cè)視圖）Ⅱ級A2型安全柜操作口流入氣流的最低速率為0.50m/s。下降氣流為部分流入氣流和部分下降氣流的混合，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)。污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實驗室或經(jīng)安全柜的外排接口通過排風管道排到大氣中。安全柜內(nèi)所有污染部位均處于負壓狀態(tài)或者被負壓通道和負壓通風系統(tǒng)環(huán)繞。安全柜用于進行以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實驗時，必須連接功能合適的排氣罩。Ⅱ級A2型安全柜A-前窗操作口B-觀察窗C-排氣過濾器

D-下降氣流過濾器E-壓力排氣系統(tǒng)F-風機

圖3Ⅱ級A2型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖Ⅱ級B1型安全柜操作口流入氣流的最低平均速率為0.50m/s下降氣流大部分由未污染的流入氣流循環(huán)提供，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)。大部分被污染的下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用的排氣管道排入大氣中。安全柜內(nèi)所有被污染部位均處于負壓狀態(tài)或者被負壓通道和負壓通風系統(tǒng)包圍。如果揮發(fā)性有毒化學(xué)品或放射性核素隨空氣循環(huán)不影響實驗操作或?qū)嶒炘诎踩竦闹苯优艢鈪^(qū)域進行，B1型安全柜可以用于以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實驗。Ⅱ級B1型安全柜B-觀察窗C-排氣過濾器D-下降氣流過濾器

E-負壓排氣系統(tǒng)F-風機G-下降氣流過濾器

圖4Ⅱ級B1型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖Ⅱ級B2型安全柜前窗操作口流入氣流的最低平均速率為0.50m/s；下降氣流來自經(jīng)過高效過濾器過濾的實驗室或室外空氣(即安全柜排出的氣體不再循環(huán)使用)；流入氣流和下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用排氣管道排到大氣中，不允許回到安全柜和實驗室中；所有污染部位均處于負壓狀態(tài)或者被直接排氣（不在工作區(qū)循環(huán)）的負壓通道和負壓通風系統(tǒng)包圍。B2型安全柜可以用于以揮發(fā)性有毒化學(xué)品和放射性核素為輔助劑的微生物實驗。Ⅱ級B2型安全柜A-前窗操作口B-觀察窗C-排氣過濾器

D-下降氣流過濾器E-負壓排氣系統(tǒng)F-風機G散流器

圖5Ⅱ級B2型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖Ⅲ級安全柜具有全封閉、不泄漏結(jié)構(gòu)的通風柜。人員通過與柜體連接的密閉手套在安全柜內(nèi)實施操作。安全柜內(nèi)對實驗室的負壓應(yīng)不低于120Pa。下降氣流經(jīng)高效過濾器過濾后進入安全柜。排出氣流一般經(jīng)兩道高效過濾器過濾。III級BSC使用范圍Ⅲ級安全柜A-操作口B-觀察窗C-排氣過濾器

D-進氣過濾器E-傳遞窗

圖5Ⅲ級安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖生物安全柜與超凈臺的區(qū)別超凈臺正壓柜氣流從頂部或底部經(jīng)過過濾器后從操作區(qū)正面流向工作臺面，被樣品污染的氣流排出柜外，沒有循環(huán)氣流。保護樣品不受污染，適用于普通實驗室或1級生物安全水平中對人員和環(huán)境無保護要求的實驗生物安全柜（BSC）的操作要點1.在開始工作前把本次工作所有器材放入BSC；

2.打開BSC，讓氣體流動5-10分鐘；

3.用薄紙檢查操作口的氣流方向是否向內(nèi)；

4.直線方向進入BSC，其內(nèi)的操作要緩慢而規(guī)則；

5.操作完成后對移出BSC的器材進行必要消毒；

6.對BSC內(nèi)部進行消毒處理；

7.讓BSC再運轉(zhuǎn)5-10分鐘；

8.關(guān)機，開啟紫外線燈照射30分鐘?！窠乖贐SC內(nèi)使用酒精燈物品擺放與污染預(yù)防措施1.生物安全柜內(nèi)應(yīng)盡量少放儀器和物品，只擺放本次工作所需的物品；2.器材預(yù)先放入BSC，不要放在前排的氣道網(wǎng)架上，也不要阻塞后面氣口處的空氣流通。物品擺放與污染預(yù)防措施3.操作時廢物袋或廢物盤應(yīng)放置在BSC內(nèi)；污染的吸管、器材在移出BSC前要消毒；

4.潔凈物品和使用過的污染物品要分開放在不同區(qū)域，操作應(yīng)從清潔區(qū)到污染區(qū)的方向進行，以免交叉污染；

classII型生物安全柜操作面器材放置平面圖物品擺放與污染預(yù)防措施5.在安全柜內(nèi)的操作都要在工作臺中央或后部進行，操作者不要頻繁移動及揮動手臂以免破壞定向氣流；6.盡量減少操作者背后人員的走動以及快速開關(guān)房間的門，以防對生物安全柜的氣流造成影響；7.禁止將工作用紙放在生物安全柜內(nèi)。生物安全柜的操作要點生物安全柜內(nèi)感染性材料溢灑的處理1.當發(fā)生少量溢灑時，應(yīng)用吸水紙巾立即處理，并立即用浸滿消毒液的毛巾或紗布對生物安全柜及其內(nèi)部的所以物品進行擦洗。2.若發(fā)生大量溢灑，液體會通過生物安全柜前面或后面的格柵流到下面去，生物安全柜內(nèi)所有的物品都應(yīng)該進行表面消毒并拿出生物安全柜，在確保生物安全柜的排水閥被關(guān)閉后，可將消毒液倒在工作臺面上，使液體通過格柵流到排水盤上。所有接觸溢出物品的材料都要進行消毒和/或高壓滅菌處理。實驗室儀器設(shè)備的使用規(guī)范干燥器爆裂、瓶子碎片和感染性物質(zhì)飛出培養(yǎng)物攪拌器，混合器，攪拌器產(chǎn)生氣溶膠、噴濺和溢出皮下注射針頭意外接種產(chǎn)生氣溶膠或感染性物質(zhì)溢出離心機產(chǎn)生氣溶膠、濺出和管子破裂超速離心機管子破裂高速攪拌器，組織勻漿器飛沫、滲漏和容器破裂超聲波破碎機、超聲波清潔器產(chǎn)生氣溶膠、聽力受損、皮炎凍干機（冷凍干燥機）產(chǎn)生氣溶膠、直接接觸污染水浴微生物生長，疊氮化鈉和一些金屬形成爆炸復(fù)合物

儀器相關(guān)危險吸管和移液器的使用1.為防止感染，嚴禁用嘴吸液，應(yīng)使用機械移液裝置。2.所有的吸管都應(yīng)該有棉塞以減少對移液器或吸球的污染。建議使用帶有濾芯的吸頭。在BSL-2及以上級別實驗室中，最好避免使用玻璃吸管。吸管和移液器的使用對于感染性材料不能用吸管吹打來達到混勻的目的，操作時吸管應(yīng)放入操作液面下的三分之二處，以防止產(chǎn)生氣泡和氣溶膠。從吸管吹出液體時也不要太用力，吸管內(nèi)的液體應(yīng)自動流出，不要強制性排出預(yù)留液。污染的吸管應(yīng)立即浸沒在含有適宜的消毒劑的防破碎的容器里。在處理之前，應(yīng)浸泡足夠長的時間。盛裝廢棄吸管的容器應(yīng)放在生物安全柜里，而非外面。嚴禁用帶有注射針頭的注射器吸液。為防止從吸管滴落的感染性物質(zhì)發(fā)生擴散，工作臺表面應(yīng)放一塊具有吸收性能的材料，使用后應(yīng)按感染性廢棄物予以處理。離心機的使用所有的離心機應(yīng)處于正常的工作狀態(tài)并具有合格的機械性能，要根據(jù)廠家的說明書進行操作。離心機應(yīng)放到適宜的位置和高度，以使工作人員能看見離心桶并便于進行各項操作。用于離心的離心管和標本容器應(yīng)該根據(jù)廠家要求選用，最好使用塑料制品，而且在使用前應(yīng)檢查有無破損。必須在安全柜內(nèi)打開蓋子。離心機的使用使用轉(zhuǎn)頭時應(yīng)注意轉(zhuǎn)頭蓋與轉(zhuǎn)頭型號是否匹配。空離心桶配平時應(yīng)該用蒸餾水或70％乙醇、異丙醇，不應(yīng)使用鹽水和次氯酸鹽溶液。離心管內(nèi)液面水平距管口應(yīng)留出一定空隙，以確保離心過程中液體不會溢出，尤其是使用角轉(zhuǎn)頭時更要注意。離心機的使用對于高致病性病原微生物，必須要高度警惕離心過程中產(chǎn)生的氣溶膠風險。

大型離心機上應(yīng)加裝負壓罩，以及時吸出離心機排出的氣體，并排至實驗室的過濾通風系統(tǒng)，在BSL-3及以上級別實驗室尤其要注意。

微型離心機則可放在安全柜內(nèi)離心。

如果不能在安全柜內(nèi)離心也無負壓罩，則必須將密封的轉(zhuǎn)頭在安全柜內(nèi)打開。

所有的離心管必須帶蓋密封，其開啟應(yīng)在安全柜內(nèi)進行。BSL-3實驗室-平面布局3.1.1實驗室應(yīng)明確區(qū)分輔助工作區(qū)和防護區(qū)，應(yīng)在建筑物中自成隔離區(qū)或為獨立建筑物，應(yīng)有出入控制。3.1.2防護區(qū)中直接從事高風險操作的工作間為核心工作間，人員應(yīng)通過緩沖間進入核心工作間。3.1.3適用于4.4.1的實驗室輔助工作區(qū)應(yīng)至少包括監(jiān)控室和清潔衣物更換間；防護區(qū)應(yīng)至少包括緩沖間（可兼作脫防護服間）及核心工作間。3.1.4適用于4.4.2的實驗室輔助工作區(qū)應(yīng)至少包括監(jiān)控室、清潔衣物更換間和淋浴間；防護區(qū)應(yīng)至少包括防護服更換間、緩沖間及核心工作間。3.1.5適用于4.4.2的實驗室核心工作間不宜直接與其他公共區(qū)域相鄰。3.1.6如果安裝傳遞窗，其結(jié)構(gòu)承壓力及密閉性應(yīng)符合所在區(qū)域的要求，并具備對傳遞窗內(nèi)物品進行消毒滅菌的條件。必要時，應(yīng)設(shè)置具備送排風或自凈化功能的傳遞窗，排風應(yīng)經(jīng)HEPA過濾器過濾后排出。BSL-3實驗室-平面布局國內(nèi)某BSL-3實驗室平面工藝布置物流BSL-3實驗室-圍護結(jié)構(gòu)3.2.1圍護結(jié)構(gòu)（包括墻體）應(yīng)符合國家對該類建筑的抗震要求和防火要求。3.2.2天花板、地板、墻間的交角應(yīng)易清潔和消毒滅菌。3.2.3實驗室防護區(qū)內(nèi)圍護結(jié)構(gòu)的所有縫隙和貫穿處的接縫都應(yīng)可靠密封。3.2.4實驗室防護區(qū)內(nèi)圍護結(jié)構(gòu)的內(nèi)表面應(yīng)光滑、耐腐蝕、防水，以易于清潔和消毒滅菌。3.2.5實驗室防護區(qū)內(nèi)的地面應(yīng)防滲漏、完整、光潔、防滑、耐腐蝕、不起塵。3.2.6實驗室內(nèi)所有的門應(yīng)可自動關(guān)閉，需要時，應(yīng)設(shè)觀察窗；門的開啟方向不應(yīng)妨礙逃生。3.2.7實驗室內(nèi)所有窗戶應(yīng)為密閉窗，玻璃應(yīng)耐撞擊、防破碎。3.2.8實驗室及設(shè)備間的高度應(yīng)滿足設(shè)備的安裝要求，應(yīng)有維修和清潔空間。3.2.9在通風空調(diào)系統(tǒng)正常運行狀態(tài)下，采用煙霧測試等目視方法檢查實驗室防護區(qū)內(nèi)圍護結(jié)構(gòu)的嚴密性時，所有縫隙應(yīng)無可見泄漏（參見附錄A）。BSL-3實驗室-通風空調(diào)系統(tǒng)3.3.1應(yīng)安裝獨立的實驗室送排風系統(tǒng)，應(yīng)確保在實驗室運行時氣流由低風險區(qū)向高風險區(qū)流動，同時確保實驗室空氣只能通過HEPA過濾器過濾后經(jīng)專用的排風管道排出。3.3.2實驗室防護區(qū)房間內(nèi)送風口和排風口的布置應(yīng)符合定向氣流的原則，利于減少房間內(nèi)的渦流和氣流死角；送排風應(yīng)不影響其他設(shè)備（如:II級生物安全柜）的正常功能。3.3.3不得循環(huán)使用實驗室防護區(qū)排出的空氣。3.3.4應(yīng)按產(chǎn)品的設(shè)計要求安裝生物安全柜和其排風管道，可以將生物安全柜排出的空氣排入實驗室的排風管道系統(tǒng)。3.3.5實驗室的送風應(yīng)經(jīng)過HEPA過濾器過濾，宜同時安裝初效和中效過濾器。3.3.6實驗室的外部排風口應(yīng)設(shè)置在主導(dǎo)風的下風向（相對于送風口），與送風口的直線距離應(yīng)大于12m，應(yīng)至少高出本實驗室所在建筑的頂部2m，應(yīng)有防風、防雨、防鼠、防蟲設(shè)計，但不應(yīng)影響氣體向上空排放。3.3.7HEPA過濾器的安裝位置應(yīng)盡可能靠近送風管道在實驗室內(nèi)的送風口端和排風管道在實驗室內(nèi)的排風口端。3.3.8應(yīng)可以在原位對排風HEPA過濾器進行消毒滅菌和檢漏（參見附錄A）。3.3.9如在實驗室防護區(qū)外使用高效過濾器單元，其結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固，應(yīng)能承受2500Pa的壓力；高效過濾器單元的整體密封性應(yīng)達到在關(guān)閉所有通路并維持腔室內(nèi)的溫度在設(shè)計范圍上限的條件下，若使空氣壓力維持在1000Pa時，腔室內(nèi)每分鐘泄漏的空氣量應(yīng)不超過腔室凈容積的0.1%。3.3.10應(yīng)在實驗室防護區(qū)送風和排風管道的關(guān)鍵節(jié)點安裝生物型密閉閥，必要時，可完全關(guān)閉。應(yīng)在實驗室送風和排風總管道的關(guān)鍵節(jié)點安裝生物型密閉閥，必要時，可完全關(guān)閉。3.3.11生物型密閉閥與實驗室防護區(qū)相通的送風管道和排風管道應(yīng)牢固、易消毒滅菌、耐腐蝕、抗老化，宜使用不銹鋼管道；管道的密封性應(yīng)達到在關(guān)閉所有通路并維持管道內(nèi)的溫度在設(shè)計范圍上限的條件下，若使空氣壓力維持在500Pa時，管道內(nèi)每分鐘泄漏的空氣量應(yīng)不超過管道內(nèi)凈容積的0.2%。3.3.12應(yīng)有備用排風機。應(yīng)盡可能減少排風機后排風管道正壓段的長度，該段管道不應(yīng)穿過其他房間。3.3.13不應(yīng)在實驗室防護區(qū)內(nèi)安裝分體空調(diào)。BSL-3實驗室-供水與供氣系統(tǒng)3.4.1應(yīng)在實驗室防護區(qū)內(nèi)的實驗間的靠近出口處設(shè)置非手動洗手設(shè)施；如果實驗室不具備供水條件，則應(yīng)設(shè)非手動手消毒滅菌裝置。3.4.2應(yīng)在實驗室的給水與市政給水系統(tǒng)之間設(shè)防回流裝置。3.4.3進出實驗室的液體和氣體管道系統(tǒng)應(yīng)牢固、不滲漏、防銹、耐壓、耐溫（冷或熱）、耐腐蝕。應(yīng)有足夠的空間清潔、維護和維修實驗室內(nèi)暴露的管道，應(yīng)在關(guān)鍵節(jié)點安裝截止閥、防回流裝置或HEPA過濾器等。3.4.4如果有供氣（液）罐等，應(yīng)放在實驗室防護區(qū)外易更換和維護的位置，安裝牢固，不應(yīng)將不相容的氣體或液體放在一起。3.4.5如果有真空裝置，應(yīng)有防止真空裝置的內(nèi)部被污染的措施；不應(yīng)將真空裝置安裝在實驗場所之外。BSL-3實驗室-污物處理及消毒滅菌系統(tǒng)3.5.1應(yīng)在實驗室防護區(qū)內(nèi)設(shè)置生物安全型高壓蒸汽滅菌器。宜安裝專用的雙扉高壓滅菌器，其主體應(yīng)安裝在易維護的位置，與圍護結(jié)構(gòu)的連接之處應(yīng)可靠密封。3.5.2對實驗室防護區(qū)內(nèi)不能高壓滅菌的物品應(yīng)有其他消毒滅菌措施。3.5.3高壓蒸汽滅菌器的安裝位置不應(yīng)影響生物安全柜等安全隔離裝置的氣流。3.5.4如果設(shè)置傳遞物品的渡槽，應(yīng)使用強度符合要求的耐腐蝕性材料，并方便更換消毒滅菌液。3.5.5淋浴間或緩沖間的地面液體收集系統(tǒng)應(yīng)有防液體回流的裝置。3.5.6實驗室防護區(qū)內(nèi)如果有下水系統(tǒng)，應(yīng)與建筑物的下水系統(tǒng)完全隔離；下水應(yīng)直接通向本實驗室專用的消毒滅菌系統(tǒng)。3.5.7所有下水管道應(yīng)有足夠的傾斜度和排量，確保管道內(nèi)不存水；管道的關(guān)鍵節(jié)點應(yīng)按需要安裝防回流裝置、存水彎（深度應(yīng)適用于空氣壓差的變化）或密閉閥門等；下水系統(tǒng)應(yīng)符合相應(yīng)的耐壓、耐熱、耐化學(xué)腐蝕的要求，安裝牢固，無泄漏，便于維護、清潔和檢查。3.5.8應(yīng)使用可靠的方式處理處置污水（包括污物），并應(yīng)對消毒滅菌效果進行監(jiān)測，以確保達到排放要求。3.5.9應(yīng)在風險評估的基礎(chǔ)上，適當處理實驗室輔助區(qū)的污水，并應(yīng)監(jiān)測，以確保排放到市政管網(wǎng)之前達到排放要求。3.5.10可以在實驗室內(nèi)安裝紫外線消毒燈或其他適用的消毒滅菌裝置。3.5.11應(yīng)具備對實驗室防護區(qū)及與其直接相通的管道進行消毒滅菌的條件。3.5.12應(yīng)具備對實驗室設(shè)備和安全隔離裝置（包括與其直接相通的管道）進行消毒滅菌的條件。3.5.13應(yīng)在實驗室防護區(qū)內(nèi)的關(guān)鍵部位配備便攜的局部消毒滅菌裝置（如：消毒噴霧器等），并備有足夠的適用消毒滅菌劑。BSL-3實驗室-電力供應(yīng)系統(tǒng)3.6.1電力供應(yīng)應(yīng)滿足實驗室的所有用電要求，并應(yīng)有冗余。3.6.2生物安全柜、送風機和排風機、照明、自控系統(tǒng)、監(jiān)視和報警系統(tǒng)等應(yīng)配備不間斷備用電源，電力供應(yīng)應(yīng)至少維持30min

。保證實驗人員有充足的時間進行緊急處理和撤離。3.6.3應(yīng)在安全的位置設(shè)置專用配電箱。BSL-3實驗室-照明系統(tǒng)3.7.1實驗室核心工作間的照度應(yīng)不低于350lx，其他區(qū)域的照度應(yīng)不低于200lx，宜采用吸頂式防水潔凈照明燈。3.7.2應(yīng)避免過強的光線和光反射。3.7.3應(yīng)設(shè)不少于30min的應(yīng)急照明系統(tǒng)。BSL-3實驗室-自控、監(jiān)視與報警系統(tǒng)3.8.1進入實驗室的門應(yīng)有門禁系統(tǒng)，應(yīng)保證只有獲得授權(quán)的人員才能進入實驗室。3.8.2需要時，應(yīng)可立即解除實驗室門的互鎖；應(yīng)在互鎖門的附近設(shè)置緊急手動解除互鎖開關(guān)。3.8.3核心工作間的緩沖間的入口處應(yīng)有指示核心工作間工作狀態(tài)的裝置（如：文字顯示或指示燈），必要時，應(yīng)同時設(shè)置限制進入核心工作間的連鎖機制。3.8.4啟動實驗室通風系統(tǒng)時，應(yīng)先啟動實驗室排風，后啟動實驗室送風；關(guān)停時，應(yīng)先關(guān)閉生物安全柜等安全隔離裝置和排風支管密閉閥，再關(guān)實驗室送風及密閉閥，后關(guān)實驗室排風及密閉閥。3.8.5當排風系統(tǒng)出現(xiàn)故障時，應(yīng)有機制避免實驗室出現(xiàn)正壓和影響定向氣流。3.8.6當送風系統(tǒng)出現(xiàn)故障時，應(yīng)有機制避免實驗室內(nèi)的負壓影響實驗室人員的安全、影響生物安全柜等安全隔離裝置的正常功能和圍護結(jié)構(gòu)的完整性。3.8.7應(yīng)通過對可能造成實驗室壓力波動的設(shè)備和裝置實行連鎖控制等措施，確保生物安全柜、負壓排風柜（罩）等局部排風設(shè)備與實驗室送排風系統(tǒng)之間的壓力關(guān)系和必要的穩(wěn)定性，并應(yīng)在啟動、運行和關(guān)停過程中保持有序的壓力梯度。3.8.8應(yīng)設(shè)裝置連續(xù)監(jiān)測送排風系統(tǒng)HEPA過濾器的阻力，需要時，及時更換HEPA過濾器。3.8.9應(yīng)在有負壓控制要求的房間入口的顯著位置，安裝顯示房間負壓狀況的壓力顯示裝置和控制區(qū)間提示。3.8.10中央控制系統(tǒng)應(yīng)可以實時監(jiān)控、記錄和存儲實驗室防護區(qū)內(nèi)有控制要求的參數(shù)、關(guān)鍵設(shè)施設(shè)備的運行狀態(tài)；應(yīng)能監(jiān)控、記錄和存儲故障的現(xiàn)象、發(fā)生時間和持續(xù)時間；應(yīng)可以隨時查看歷史記錄。3.8.11中央控制系統(tǒng)的信號采集間隔時間應(yīng)不超過1min，各參數(shù)應(yīng)易于區(qū)分和識別。3.8.12中央控制系統(tǒng)應(yīng)能對所有故障和控制指標進行報警，報警應(yīng)區(qū)分一般報警和緊急報警。3.8.13緊急報警應(yīng)為聲光同時報警，應(yīng)可以向?qū)嶒炇覂?nèi)外人員同時發(fā)出緊急警報；應(yīng)在實驗室核心工作間內(nèi)設(shè)置緊急報警按鈕。3.8.14應(yīng)在實驗室的關(guān)鍵部位設(shè)置監(jiān)視器，需要時，可實時監(jiān)視并錄制實驗室活動情況和實驗室周圍情況。監(jiān)視設(shè)備應(yīng)有足夠的分辨率，影像存儲介質(zhì)應(yīng)有足夠的數(shù)據(jù)存儲容量。BSL-3實驗室-實驗室通訊系統(tǒng)3.9.1實驗室防護區(qū)內(nèi)應(yīng)設(shè)置向外部傳輸資料和數(shù)據(jù)的傳真機或其他電子設(shè)備。3.9.2監(jiān)控室和實驗室內(nèi)應(yīng)安裝語音通訊系統(tǒng)。如果安裝對講系統(tǒng)，宜采用向內(nèi)通話受控、向外通話非受控的選擇性通話方式。3.9.3通訊系統(tǒng)的復(fù)雜性應(yīng)與實驗室的規(guī)模和復(fù)雜程度相適應(yīng)。BSL-3實驗室-參數(shù)要求3.10.1實驗室的圍護結(jié)構(gòu)應(yīng)能承受送風機或排風機異常時導(dǎo)致的空氣壓力載荷。3.10.2適用于4.4.1的實驗室核心工作間的氣壓（負壓）與室外大氣壓的壓差值應(yīng)不小于30Pa，與相鄰區(qū)域的壓差（負壓）應(yīng)不小于10Pa；適用于4.4.2的實驗室的核心工作間的氣壓（負壓）與室外大氣壓的壓差值應(yīng)不小于40Pa，與相鄰區(qū)域的壓差（負壓）應(yīng)不小于15Pa。3.10.3實驗室防護區(qū)各房間的最小換氣次數(shù)應(yīng)不小于12次/h3.10.4實驗室的溫度宜控制在18℃～26℃范圍內(nèi)。3.10.5正常情況下，實驗室的相對濕度宜控制在30%～70%范圍內(nèi)；消毒狀態(tài)下，實驗室的相對濕度應(yīng)能滿足消毒滅菌的技術(shù)要求。3.10.6在安全柜開啟情況下，核心工作間的噪聲應(yīng)不大于68dB(A)。3.10.7實驗室防護區(qū)的靜態(tài)潔凈度應(yīng)不低于8級水平。BSL-3實驗室-儀器設(shè)備負壓罩、福爾馬林薰蒸滅菌器BSL-3實驗室認證認可－環(huán)評BSL-3實驗室環(huán)評1、項目概況及工程分析2、項目所在地環(huán)境概況3、環(huán)境影響分析4、環(huán)境風險評價與風險管理5、污染防治措施及可行性論證6、項目選址可行性分析7、清潔生產(chǎn)與總量控制8、環(huán)境管理、生物安全管理與監(jiān)測計劃9、經(jīng)濟損益分析10、公眾參與BSL-3實驗室認證認可－第三方檢測報告檢測單位：國家建筑工程質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心檢測結(jié)論：換氣次數(shù)、靜壓差、潔凈度、溫度與相對濕度、噪聲、送風高效過濾器檢漏、工況轉(zhuǎn)換、安全柜檢測指標均達到設(shè)計和實驗室規(guī)范要求。生物安全管理體系運行1、成立生物安全委員會和生物安全管理辦公室；2、編制并修訂生物安全管理手冊；3、開展風險評估；4、開展安全檢查和內(nèi)部評審和管理評審；5、對所有相關(guān)人員進行培訓(xùn)、考核和評估；6、對所有設(shè)施設(shè)備建立檔案，進行定期檢查維護；7、建立廢棄物處置程序，按程序處理廢棄物；8、建立意外事故應(yīng)急處置預(yù)案并開展處置演練。中國合格評定國家認可委員會（CNAS）認可申請資料：1、申請實驗室法律地位的證明文件2、組織機構(gòu)框圖3、平面設(shè)計方案、論證報告及實驗室建設(shè)背景資料4、《實驗室操作生物因子及其危害程度分級一覽表》5、風險評估報告6、相關(guān)主管部門審批證明7、實驗室現(xiàn)行有效的安全管理體系文件8、實驗室自查報告及對CNAS認可要求的符合性聲明9、實驗室簡介視頻資料10、BSL-3實驗室環(huán)境影響評審資料11、BSL-3實驗室實驗室工程驗收報告12、感染人員緊急救治醫(yī)院的協(xié)議書13、BSL-3實驗室標準操作規(guī)程現(xiàn)場演示視頻資料CNAS現(xiàn)場評審，整改，認證BSL-4生物安全實驗室的使用個人防護主要是保護實驗人員免于感染性材料的各種方式的暴露，避免實驗室相關(guān)感染。個人防護裝備所涉及的防護部位：眼睛、頭面部、軀體、手、足、耳（聽力）、呼吸道裝備包括：眼鏡（安全鏡、護目鏡）、口罩、面罩、防毒面具、帽子、防護衣(實驗服、隔離衣、連體衣、圍群)、手套、鞋套、聽力保護器等眼睛防護裝備安全眼鏡和護目鏡：當在進行有可能發(fā)生化學(xué)和生物污染物質(zhì)濺出的實驗時，必須佩戴護目鏡。當進行更為危險的操作時，如進行有潛在爆炸的反應(yīng)和使用或混合強腐蝕性和強酸溶液時，必須佩戴面罩或同時佩戴面罩和護目鏡或安全眼鏡。洗眼裝置：如果發(fā)生感染性物質(zhì)或腐蝕性物質(zhì)濺至工作人員眼睛時，工作人員應(yīng)該（或在同事的幫助下）使用就近的洗眼裝置用大量清水沖洗眼睛表面至少15-30分鐘。淋浴和應(yīng)急消毒噴淋裝置：

BSL-2實驗室在必要時應(yīng)設(shè)應(yīng)急噴淋裝置；BSL-3實驗室應(yīng)在清潔區(qū)設(shè)淋浴裝置，必要時在半污染區(qū)設(shè)應(yīng)急消毒噴淋裝置。頭面部防護裝備口罩：外科口罩可以保護部分面部免受生物危害物質(zhì)如血液、體液、分泌液以及排泄物等噴濺物的污染。外科口罩單獨使用不能為工作人員提供呼吸保護。防護面罩防護帽：可以保護工作人員避免化學(xué)和生物危害物質(zhì)飛濺至頭部（頭發(fā)）所造成的污染。呼吸防護裝備個人呼吸器使用要點：佩戴時選擇合格的個人呼吸器，遮蓋住鼻、口和下鄂用橡皮筋（松緊帶）固定在頭部調(diào)整在合適的面部位置并加以檢驗吸氣時個人呼吸器應(yīng)該有塌陷呼氣時在呼吸器周圍不應(yīng)漏氣正壓面罩正壓防護服FFP3N95手部防護裝備－手套手套的選擇根據(jù)不同用途選擇合適的手套。生物安全實驗室最常用的是乳膠手套。橡膠或塑料手套不能接觸高溫物體。處理極冷物體如液氮或干冰時要用特殊的絕緣耐冷手套。手套的使用一般情況下，佩戴一副手套即可，操作高致病性或潛在高致病性病原微生物時應(yīng)戴兩副手套。在操作過程中，外層手套被污染時應(yīng)立即用消毒劑噴灑手套，脫下后丟在生物安全柜內(nèi)的高壓袋中，并立即戴上新手套繼續(xù)實驗。手套戴好后應(yīng)覆蓋實驗服袖口。身體和足部的防護裝備身體防護裝備實驗服隔離衣正壓防護服圍裙套袖足部防護裝備鞋鞋套禁止在生物安全實驗室中穿涼鞋、拖鞋、露趾和機織物鞋面的鞋病原微生物菌(毒)種或樣本管理病原微生物實驗室從事實驗活動中，除了使用菌（毒）種和樣本等感染性物質(zhì)以外，還可能涉及菌（毒）種和樣本的采集、攜帶、運輸和保存（藏）管理。特點：所有生物安全的內(nèi)容均涉及；政策性強；菌（毒）種及樣本的管理和生物安全防護等級并不完全一致。我國對病原微生物菌（毒）種及樣本運輸?shù)挠嘘P(guān)規(guī)定

盡量陸路運輸；報衛(wèi)生主管部門批準（跨省報衛(wèi)生部）包裝、容器和標識符合要求二人護送，不能通過城市公交發(fā)生泄漏2小時內(nèi)報告國際上對所運輸?shù)母腥拘晕镔|(zhì)感染性物質(zhì)分類管理，和實驗室操作時的四級危害分類不同，在運輸過程中，被運輸?shù)母腥拘晕镔|(zhì)感染性物質(zhì)只分為A類和B類兩大類。A類比B類危害性大。A類感染性物質(zhì)感染性物質(zhì)[聯(lián)合國編號UN2814和UN2900（只導(dǎo)致動物致?。┎捎肞620包裝要求。

A類之外，僅具有一般危險性，引起感染的機會較少的感染性物質(zhì)感染性物質(zhì)為B類（聯(lián)合國編號UN3373），采用P650包裝要求。消毒與滅菌消毒和滅菌(滅活)是保護人員和環(huán)境不被病原微生物感染和污染的重要環(huán)節(jié)。含有病原微生物的廢物必須經(jīng)過滅菌才能作為普通廢物處理；對操作中可能產(chǎn)生的迸濺或泄漏，必須通過消毒達到對病原微生物的殺滅，對操作人員進行保護,對環(huán)境保護。關(guān)于清除污染的特殊要求，要根據(jù)實驗工作類型以及所操作的感染性物質(zhì)的特性來決定。親脂類病毒或中等大小的病毒（如：HSV,CMV,RSV,HIV,HBV）細菌繁殖體（如：金葡，綠膿）真菌（如，念珠菌屬，曲霉屬）非脂類或小病毒（如脊髓灰質(zhì)炎病毒,柯薩奇病毒）分枝桿菌（如TB，M.terrae）Cryptosporidiumparvum細菌芽孢Prions敏感耐受低效中效高效滅菌（高，延時）消毒劑水平氣體滅菌蒸汽滅菌

常用化學(xué)滅菌劑的性能比較殺菌劑使用濃度（％）消毒水平滅活特征細菌親脂類病毒親水類病毒結(jié)核分枝桿菌細菌芽孢含氯

高效+++++/-過氧乙酸0.001～0.2

高效+++++戊二醛2化學(xué)滅菌/高效+++++甲醛3～8高效/中效+++++/-酒精60～

95中效++-+-季胺鹽0.4～1.6低效++---常用化學(xué)滅菌劑的安全性及特征殺菌劑腐蝕性殘留物有害被有機物滅活皮膚、眼刺激性呼吸道刺激性含氯

++++-過氧乙酸+-++-戊二醛-+-++甲醛-+-++酒精+/--++-季胺鹽--++-表面消毒－氯（次氯酸鈉）當氯作為漂白劑使用時是強堿性的，能夠腐蝕金屬。一般而言：一天多次浸泡、含高濃度有機物的材料，應(yīng)每天至少更換一次；而使用頻率較低的漂白劑溶液，則可以維持一周時間。常規(guī)實驗室用于消毒的有效氯濃度應(yīng)為1g/L。感染性物質(zhì)的溢出以及含有大量有機物的物質(zhì)，推薦使用更強作用的含5g/L有效氯的溶液來處理。在緊急情況下也可以用終濃度含1～2mg/L有效氯的漂白劑來消毒飲用水。注意事項：1）氯氣具有強毒性！因此漂白劑只能在通風良好的地方儲存和使用。2）漂白劑也不能與酸混合以避免氯氣快速釋放。3）氯的許多副產(chǎn)物可能對人體及環(huán)境有害，應(yīng)該避免濫用含氯消毒劑，特別是漂白劑。酒精醫(yī)用酒精包括乙醇和異丙醇，都具有快速殺滅細菌作用，可殺滅結(jié)核分枝桿菌、真菌和親脂類病毒，但不能殺滅芽孢。最佳殺菌濃度為60％-90％，不同的病原微生物所需消毒濃度不同。酒精主要通過使微生物蛋白質(zhì)變性來達到殺菌作用，可作為儀器外表面和手的消毒劑。酒精能破壞用膠鑲嵌的儀器鏡頭，可使橡膠及某些塑料管在延長使用或重復(fù)使用后變硬膨脹，故用酒精來消毒儀器應(yīng)加以注意。酒精屬易燃物，需置冷及通風處保存。過氧乙酸

過乙酸或過氧乙酸可在低濃度（0.001%～0.2%）下快速殺滅所有微生物，包括細菌的芽孢。其作用機制是使蛋白質(zhì)變性，破壞細胞壁的滲透性，將蛋白質(zhì)、酶及其他代謝產(chǎn)物氧化、巰基化和硫基化。過氧乙酸的突出優(yōu)點在于分解產(chǎn)物無害（如乙酸、水、氧和過氧化氫）缺點是腐蝕性大，能腐蝕銅、黃銅、白鋼、鍍鋅鐵皮（馬口鐵）。通常不穩(wěn)定，特別當稀釋后，6d后1%溶液損失一半效力，40%溶液每月活性丟失1%～2%。空氣熏蒸多使用甲醛（HCHO）進行空氣熏蒸。在溫度高于20℃時，甲醛是一種能夠殺滅所有微生物及其孢子的氣體。但甲醛對朊病毒沒有殺滅活性。甲醛起效相對較慢，需要70％左右的相對濕度。市場上出售的產(chǎn)品：

甲醛多聚體福爾馬林[甲醛濃度約為370g/L（37％）的水溶液，其中含甲醇（100mL/L）作為穩(wěn)定劑]兩種產(chǎn)品經(jīng)加熱都可以產(chǎn)生氣體，用于封閉空間（如生物安全柜和房間）的清除污染和消毒（見本章“清除局部環(huán)境污染”部分）。甲醛被懷疑是一種致癌劑，具有刺鼻的氣味，其氣體能夠刺激眼睛和黏膜，因此必須在通風櫥或通風良好的地方儲存和使用。甲醛的使用必須遵守國家化學(xué)品安全規(guī)定。高壓滅菌壓力飽和蒸汽滅菌（高壓滅菌）是對實驗材料進行滅菌的最有效和最可靠的方法。對于大多數(shù)目的，下列組合可以確保正確裝載的高壓