第一章-血液一般檢驗(yàn)

第一章血液學(xué)一般檢查第一節(jié)概論血液一般檢查的臨床應(yīng)用血液生理血液標(biāo)本采集血液標(biāo)本的抗凝血涂片的制備血細(xì)胞染色血細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)血液一般檢查的臨床應(yīng)用

1、診斷與鑒別診斷臨床檢驗(yàn)的結(jié)果是支持診斷、鑒別診斷、甚至確定診斷的主要依據(jù)。例：anemia依據(jù)：血中紅細(xì)胞和血紅蛋白量減少leukemia依據(jù)：血象和骨髓象腎臟有實(shí)質(zhì)性損傷的依據(jù)：尿液中出現(xiàn)蛋白、細(xì)胞、管型2、為分析病情、觀(guān)察療效、判斷預(yù)后提供依據(jù)在疾病過(guò)程中，血液、體液、分泌物和排泄物也會(huì)隨之發(fā)生相應(yīng)的變化。如：尿中成分變化、ESR、網(wǎng)織紅細(xì)胞等。3、為預(yù)防疾病提供資料和職業(yè)病診斷提供依據(jù)如血象和腫瘤細(xì)胞學(xué)的普查等用于預(yù)防疾病、點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù)用于鉛中毒診斷。4、為臨床安全用藥提供保障及手術(shù)前準(zhǔn)備。血液生理概要1、血液的組成有血細(xì)胞(45%)和血漿(55%)兩部分組成。血液生理概要血清與血漿的區(qū)別血液生理概要2、血液的主要理化性質(zhì)（1）血量占體重的6-8%，成人約4-5ml；（2）顏色來(lái)自血紅蛋白（3）懸浮穩(wěn)定性RBC膜上唾液酸根形成的Zeta電位的作用。（4）粘滯性血液的粘度主要取決于血細(xì)胞比容和血漿粘度。(5)比重和滲透濃度：比重：全血為1.051～1.060；RBC約為1.090；血漿為1.025～1.030。血漿滲量為290～310mOsm/kg?H2o(6)PH及凝固性:PH7.35～7.453、血液的功能：運(yùn)輸、協(xié)調(diào)、維護(hù)內(nèi)環(huán)境、防御。血液標(biāo)本的抗凝物理抗凝化學(xué)抗凝生物抗凝物理抗凝將血液注入有玻璃珠的小瓶中，不斷地旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)，使形成的纖維蛋白全部纏繞粘附于玻璃珠上，使血液不能凝固。適合于免疫學(xué)、細(xì)胞菌學(xué)、SLE等檢驗(yàn)?；瘜W(xué)抗凝1、檸檬酸鈉（枸櫞酸鈉）a.抗凝原理：螯合鈣離子使用方法配成109mmol/L的濃度和血液1:9；若用于血沉試驗(yàn)為1:4c.適用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)、血沉、血液保養(yǎng)液（毒性?。?。不適用于白細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查（可導(dǎo)致白細(xì)胞形態(tài)改變）。2.草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a.抗凝原理：草酸鈣沉淀b.使用方法草酸鈉0.1mol/L和血液1：9c.適用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)化學(xué)抗凝3.雙草酸鹽抗凝劑a.抗凝原理：草酸鈣沉淀。使用方法：草酸鉀0.8g,草酸銨1.2g（100ml）與血液1:10（80°C以下烘干）。適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞比積、計(jì)數(shù)）。不適于血小板計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)（可導(dǎo)致血小板聚集及白細(xì)胞形態(tài)改變）?；瘜W(xué)抗凝4.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽a.抗凝原理：螯合鈣離子b.使用方法：15g/L濃度EDTA和血液為1：10（血細(xì)胞分析儀用EDTA-K2作抗凝劑的用量為1.5～2.2mg/ml

）適用范圍：對(duì)血細(xì)胞形態(tài)影響小---血細(xì)胞計(jì)數(shù)；但影響血小板聚集和白細(xì)胞吞噬功能---不宜做止血學(xué)檢驗(yàn)及血小板功能檢驗(yàn)及制備血涂片等。

化學(xué)抗凝5.肝素（含硫酸基團(tuán)的粘多糖）抗凝原理：低濃度時(shí)抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之間的作用，加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成，還能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用；高濃度時(shí)阻斷凝血酶和纖維蛋白的反應(yīng)。

b.適用方法：1g/L濃度的肝素鈉與血液1:10生物抗凝優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不致溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定、紅細(xì)胞比積）和多種生化分析。不適用于白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)計(jì)數(shù)（可使涂片產(chǎn)生藍(lán)色背景、白細(xì)胞聚集）。生物抗凝血涂片制備新玻片的處理舊玻片的清潔血涂片制備的方法：影響手工法血膜厚度的因素：手工法血膜的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：血細(xì)胞染色常用染色方法：瑞氏染色的原理瑞氏染液的組成：pH對(duì)細(xì)胞染色的影響：瑞氏染色的質(zhì)量評(píng)價(jià)：常采用瑞氏染液的吸光度比值(RA)作為質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)。且RA（A650nm/A525nm）=1.3±0.1為適宜成熟指數(shù)。三、血細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)法（一）原理用一定的稀釋液將標(biāo)本作定量稀釋?zhuān)靹虺淙胗?jì)數(shù)池中，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定容積中的血細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求得每升血液中的血細(xì)胞總數(shù)。可用于血液中細(xì)胞計(jì)數(shù)；尿液中細(xì)胞、管型計(jì)數(shù)；精液中精子計(jì)數(shù)等。器材普通光學(xué)顯微鏡微量吸管改良Neubauer計(jì)數(shù)板蓋玻片1855年發(fā)明計(jì)數(shù)紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)板血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法是最可靠和最經(jīng)典計(jì)數(shù)技術(shù)改良Neubauer計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)池

質(zhì)量控制(一)、技術(shù)誤差1、采血部位不當(dāng)2、血液凝固3、稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)4、充液不當(dāng)5、識(shí)別錯(cuò)誤6、器材不符合要求(二)、固有誤差（inherenterrors)泊森分布：

SD=m

CV=注：SD為標(biāo)準(zhǔn)差、m為計(jì)數(shù)的平均數(shù)、CV為變異系數(shù)。由此，計(jì)數(shù)范圍大，計(jì)數(shù)細(xì)胞多，計(jì)數(shù)誤差就小。1/21m1/2第二節(jié)血液常用檢查(Rt)

白細(xì)胞計(jì)數(shù)白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)白細(xì)胞形態(tài)檢查紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血紅蛋白測(cè)定紅細(xì)胞形態(tài)檢查血小板計(jì)數(shù)血小板形態(tài)檢查白細(xì)胞(whitebloodcell,WBC)計(jì)數(shù)白細(xì)胞呈球形，有核，直徑7-25μm，在機(jī)體內(nèi)具有防御的功能。正常外周血中常見(jiàn)的白細(xì)胞有中性粒細(xì)胞(N)、嗜酸性粒細(xì)胞(E)、嗜堿性粒細(xì)胞(B)、淋巴細(xì)胞(L)、單核細(xì)胞(M)五種。白細(xì)胞的發(fā)育：骨髓內(nèi)的多能干細(xì)胞原始粒細(xì)胞成熟粒細(xì)胞。（一）測(cè)定方法及評(píng)價(jià)1、顯微鏡計(jì)數(shù)法2、血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)法（二）、參考值白細(xì)胞計(jì)數(shù)的參考值：成人：（4-10）×109/L

兒童：（5-12）×109/L6個(gè)月-2歲小兒：（11-12）×109/L

新生兒：（15-20）×109/L見(jiàn)后若含有有核紅細(xì)胞，需校正白細(xì)胞數(shù)。

校正公式：白細(xì)胞數(shù)=式中：X校正前白細(xì)胞數(shù)

Y分類(lèi)計(jì)數(shù)時(shí)計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞見(jiàn)到的有核紅細(xì)胞數(shù)例：校正前白細(xì)胞數(shù)為12.5×109/L，分類(lèi)計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞見(jiàn)到有核紅細(xì)胞25個(gè)。則：白細(xì)胞數(shù)/L=12.5×109/L×X·100100+Y100100+25=10×109/L

常規(guī)考核標(biāo)準(zhǔn)（RCS）RCS=WBC≤4×109/L,RCS＜30%；WBC(4.1～14.9)×109/L,RCS＜20%；WBC≥15×109/L,RCS＜15%；超出上述標(biāo)準(zhǔn)為不合格×100%

四大格所見(jiàn)白細(xì)胞最大值-最小值四大格所見(jiàn)白細(xì)胞數(shù)平均值白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)法（differentialcount,DC)(一)測(cè)定方法及評(píng)價(jià)制備血涂片血涂片染色白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)計(jì)算百分率注意事項(xiàng)1、減少計(jì)數(shù)誤差（計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)、計(jì)數(shù)方法）。2、注意有無(wú)有核紅細(xì)胞、幼稚白細(xì)胞、寄生蟲(chóng)等。白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)法（differentialcount,DC)白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)的參考值細(xì)胞名稱(chēng)百分率（%）絕對(duì)值（×109/L

）中性桿狀核粒細(xì)胞1-50.04-0.5中性分葉核粒細(xì)胞50-702-7嗜酸性粒細(xì)胞0.5-50.05-0.5嗜堿性粒細(xì)胞0-10-0.1淋巴細(xì)胞20-400.8-4單核細(xì)胞3-80.12-0.8報(bào)告方式白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)結(jié)果以各種白細(xì)胞所占的比值或百分率表示。發(fā)現(xiàn)幼稚或異常白細(xì)胞，應(yīng)分類(lèi)報(bào)告。發(fā)現(xiàn)有核紅細(xì)胞，應(yīng)報(bào)告分類(lèi)計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞見(jiàn)到的有核紅細(xì)胞數(shù)。發(fā)現(xiàn)寄生蟲(chóng)應(yīng)報(bào)告。發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)有異常應(yīng)報(bào)告。臨床意義白細(xì)胞總數(shù)高于參考值上限為白細(xì)胞增多，低于下限為白細(xì)胞減少。中性粒細(xì)胞在白細(xì)胞中所占百分比最多。其變化直接影響到白細(xì)胞總數(shù)的變化。一般情況下，中性粒細(xì)胞增多，白細(xì)胞增多，中性粒細(xì)胞減少，白細(xì)胞總數(shù)減少。即中性粒細(xì)胞增減與白細(xì)胞總數(shù)增減的意義基本一致。但也有不一致的情況。粒細(xì)胞的來(lái)源多能造血干細(xì)胞粒-單系祖細(xì)胞粒細(xì)胞系單核細(xì)胞系臨床意義粒細(xì)胞的動(dòng)力學(xué)中性粒細(xì)胞根據(jù)功能和形態(tài)分為三個(gè)階段：干細(xì)胞池、生長(zhǎng)成熟池、功能池。干細(xì)胞池包括多能干細(xì)胞至粒－單系祖細(xì)胞。粒細(xì)胞的動(dòng)力學(xué)2.成長(zhǎng)成熟池包括原粒細(xì)胞至成熟分葉核粒細(xì)胞。其中原粒至中幼粒階段具有分裂能力，稱(chēng)分裂池；晚幼粒至分葉核階段不再分裂稱(chēng)成熟池；未釋放至外周血中的成熟粒細(xì)胞稱(chēng)貯備池。粒細(xì)胞的動(dòng)力學(xué)3.從骨髓中釋放到外周血的成熟粒細(xì)胞稱(chēng)為功能池。其中一部分細(xì)胞隨血液循環(huán)稱(chēng)循環(huán)池，另一部分附著于小靜脈和微血管壁上稱(chēng)邊緣池。二者交換形成動(dòng)態(tài)平衡。多能干細(xì)胞定向干細(xì)胞原粒細(xì)胞早幼粒細(xì)胞中幼粒細(xì)胞晚幼粒細(xì)胞桿狀核細(xì)胞分葉核細(xì)胞增殖池(分裂池)干細(xì)胞池貯備池循環(huán)池邊緣池組織細(xì)胞炎癥骨髓象外周血象外周組織象4－6天5－7天6－12h2-3天粒細(xì)胞動(dòng)力學(xué)示意圖說(shuō)明：根據(jù)細(xì)胞分布和細(xì)胞動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，粒細(xì)胞可分為干細(xì)胞池、分裂池、成熟、貯存

池、循環(huán)池和邊緣池五個(gè)部分。平常說(shuō)的外周血是循環(huán)池中的血。1、生理性變化年齡日間變化運(yùn)動(dòng)、疼痛和情緒影響妊娠與分娩生理變化年齡因素形成中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞變化曲線(xiàn)的二次交叉。

6-9d4-5y生理變化日間變化

活動(dòng)進(jìn)食后較高下午高于上午運(yùn)動(dòng)、疼痛和情緒影響

當(dāng)劇烈運(yùn)動(dòng)、劇痛和情緒激動(dòng)時(shí)，可引起白細(xì)胞顯著增加。妊娠與分娩

妊娠期白細(xì)胞常輕度增加。產(chǎn)后2周左右恢復(fù)正常、此后如再次升高，就有產(chǎn)后感染的可能。2、病理變化（1）中性粒細(xì)胞與白細(xì)胞總數(shù)的增多與減少

A、中性粒細(xì)胞增多見(jiàn)于：急性感染、急性中毒、急性大出血、嚴(yán)重的組織損傷、白血病及惡性腫瘤。

B、中性粒細(xì)胞減少見(jiàn)于：某些傳染病、理化損傷、某些血液病、脾功能亢進(jìn)、自身免疫性疾病等。（2）嗜酸性粒細(xì)胞增多或減少A、增多見(jiàn)于過(guò)敏性疾病、寄生蟲(chóng)病、某些皮膚病、某些傳染病、某些腫瘤、某些血液病等。B、減少見(jiàn)于長(zhǎng)期使用腎上腺皮質(zhì)激素、某些急性傳染病的早期。（3）淋巴細(xì)胞增多與減少A、淋巴細(xì)胞增多見(jiàn)于某些傳染病、血液病、惡性腫瘤等。B、淋巴細(xì)胞減少見(jiàn)于長(zhǎng)期接觸放射線(xiàn)、細(xì)胞免疫缺陷病等。（4）嗜堿性粒細(xì)胞增多和減少

A、嗜堿性粒細(xì)胞增多見(jiàn)于慢性粒細(xì)胞性白血病、嗜堿性粒細(xì)胞性白血病、過(guò)敏性疾病、骨髓纖維化及某些轉(zhuǎn)移癌。B、嗜堿性粒細(xì)胞減少一般無(wú)意義。（5）單核細(xì)胞增多和減少A、單核細(xì)胞增多見(jiàn)于某些感染，如結(jié)核、傷寒、黑熱病、亞急性感染性心內(nèi)膜炎等；某些血液病。B、單核細(xì)胞減少一般意義不大。

1.中性粒細(xì)胞

胞體圓形，直徑10-15μm，為紅細(xì)胞的兩倍。胞質(zhì)豐富，粉紅色，含較多細(xì)小均勻的紫紅色中性顆粒。細(xì)胞核染色質(zhì)粗糙不勻，排列緊密，為深紫紅色。

根據(jù)核形狀分類(lèi)：中性桿狀核粒細(xì)胞中性分葉核粒細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)：核徑最窄處小于最寬處1/3為分葉核核徑最窄處大于最寬處1/3為桿狀核外周血正常血細(xì)胞形態(tài)嗜酸性粒細(xì)胞

細(xì)胞圓形，直徑13-15um，略大于中性粒細(xì)胞。胞漿內(nèi)充滿(mǎn)粗大、整齊、均勻、排列緊密、有立體感的桔紅色嗜酸性顆粒，偶見(jiàn)少許淡藍(lán)或無(wú)色胞漿。嗜酸性粒細(xì)胞容易破碎，顆?？煞稚⒂诩?xì)胞周?chē)?。嗜堿性粒細(xì)胞

細(xì)胞圓形，直徑10-12um，略小于中性粒細(xì)胞。胞漿少，常呈淡紅或淡紫紅色，含少量粗大、不均勻、排列不規(guī)則的紫黑色嗜堿性顆粒，常蓋于核上，及細(xì)胞邊緣。嗜堿性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞單核細(xì)胞細(xì)胞圓形或不規(guī)則形，為外周血中最大的細(xì)胞，直徑15-25um，胞漿豐富，染淡藍(lán)或灰藍(lán)色，呈毛玻璃樣半透明，含有大量細(xì)小、灰塵樣嗜天青顆粒，可見(jiàn)空泡。細(xì)胞核大，呈不規(guī)則圓形、腎形、馬蹄形或不規(guī)則分葉，有時(shí)折疊扭曲。染色質(zhì)細(xì)致、疏松如網(wǎng)狀。淋巴細(xì)胞

大淋巴細(xì)胞：體積較大，直徑10-15um，胞漿豐富，呈透明藍(lán)色，常有少量粗大、大小不均的紫紅色嗜天青顆粒。細(xì)胞核染色質(zhì)疏松。小淋巴細(xì)胞：細(xì)胞圓形，直徑6-10um，胞漿很少，有的僅在核的一側(cè)出現(xiàn)一線(xiàn)藍(lán)色胞漿，甚至完全沒(méi)有。細(xì)胞核圓形，偶見(jiàn)凹陷，染色質(zhì)粗糙致密，可有塊狀。（二）、外周血細(xì)胞常見(jiàn)的病理形態(tài)中性粒細(xì)胞的毒性變化1、大小不等2、中毒顆粒3、空泡變性4、杜勒小體（D?hlebody）5、退行性變1、大小不等2、中毒顆粒3、空泡變性4、杜勒小體（D?hlebody）5、退行性變中性粒細(xì)胞核象變化1、中性粒細(xì)胞核象左移外周血中中性桿狀核粒細(xì)胞增多和桿狀核階段以前的幼稚階段細(xì)胞出現(xiàn)稱(chēng)為核象左移。（1）輕度核象左移>6%，只有桿狀核粒細(xì)胞。（2）中度核象左移>10%，有少量的晚、中幼粒細(xì)胞。（3）重度核象左移>25%，可見(jiàn)早幼粒、原始粒，伴有中毒顆粒等質(zhì)變化。2、中性粒細(xì)胞核象右移外周血中中性分葉核粒細(xì)胞增多伴多分葉，同時(shí)分5葉核以上的細(xì)胞>3%時(shí)稱(chēng)為核象右移。常見(jiàn)于造血功能衰退或造血物質(zhì)缺乏、DNA減少的表現(xiàn)。如：惡性貧血、應(yīng)用抗代謝藥物等。在疾病的進(jìn)行期突然出現(xiàn)核象右移的變化，則表示預(yù)后不良。淋巴細(xì)胞的病理形態(tài)1、異形淋巴細(xì)胞2、具有衛(wèi)星核的淋巴細(xì)胞衛(wèi)星核的淋巴細(xì)胞其他異常白細(xì)胞巨多核中性粒細(xì)胞棒狀小體Pelger-Hu?t畸形Chediak-Higashi畸形Alder-Reilly畸形May-Hegglin畸形巨多核中性粒細(xì)胞巨桿狀核粒細(xì)胞與過(guò)分葉粒細(xì)胞棒狀小體Pelger-Hu?t畸形Chediak-Higashi畸形Alder-Reilly畸形May-Hegglin畸形

骨髓造血干細(xì)胞---------紅系祖細(xì)胞--------原紅細(xì)胞----早幼----中幼----晚幼------網(wǎng)織紅細(xì)胞--------成熟紅細(xì)胞造血微環(huán)境Epo紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

（redbloodcellcount,RBC）紅細(xì)胞在正常情況下幾乎占血容量的1/2，平均壽命是120天，每天約有8%的衰老和退化變性的紅細(xì)胞經(jīng)脾破壞，血紅蛋白降解，可參與鐵、膽色素、蛋白質(zhì)代謝和血紅蛋白的重新合成。

紅細(xì)胞外形：雙凹圓盤(pán)形，平均直徑7.2μm，厚約2μm，無(wú)核。

主要成分（除水外）：血紅蛋白占34%----能結(jié)合多種氣體，O2和CO2，并協(xié)同維持酸堿平衡。RBC計(jì)數(shù)方法與參考值測(cè)定方法及評(píng)價(jià)1、顯微鏡計(jì)數(shù)法2、血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)法參考值成年男性（4.0-5.5）×1012/L成年女性（3.5-5.0）×1012/L新生兒（6.0-7.0）×1012/LRBC計(jì)數(shù)的質(zhì)量控制1、計(jì)數(shù)誤差同白細(xì)胞計(jì)數(shù)。2、白細(xì)胞的影響若白細(xì)胞過(guò)高者需要扣除：(1)直接扣除(2)在高倍鏡下識(shí)別計(jì)數(shù)五、血紅蛋白(hemoglobin,Hb)測(cè)定五、血紅蛋白(hemoglobin,Hb)測(cè)定血紅蛋白結(jié)構(gòu)：由珠蛋白和亞鐵血紅素結(jié)合組成?？臻g結(jié)構(gòu)：每個(gè)血紅蛋白有4條珠蛋白肽鏈每條肽鏈包裹1個(gè)亞鐵血紅素，形成具有四級(jí)空間結(jié)構(gòu)的四聚體。分類(lèi)：（每個(gè)珠蛋白分子含兩條α鏈和兩條非α鏈）

正常人：HbA

（α2β2）占90%，成人主要血紅蛋白。HbA2（α2δ2）占2%-3%，成人次要血紅蛋白。HbF

（α2γ2）占1%以下，胎兒主要血紅蛋白。注意事項(xiàng)：

1.如α-鏈或β-鏈合成障礙，使三種正常血紅蛋白比例異常，即各型地中海貧血；如多肽鏈發(fā)生氨基酸置換、丟失、加長(zhǎng)，稱(chēng)為血紅蛋白病。

2.病理情況下可出現(xiàn)硫化血紅蛋白SHb一、氰化高鐵血紅蛋白法由國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）推薦，并經(jīng)WHO確認(rèn)為血紅蛋白測(cè)定的參考方法。主要優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定可靠，試劑容易保存，能測(cè)定除SHb以外的所有血紅蛋白，并易于建立質(zhì)控。測(cè)定方法及評(píng)價(jià)原理除SHb外，Hb被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白，再與CN-結(jié)合，生成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋白HiCN，吸收峰為λ540nm毫摩爾消光系數(shù)為44L·mmol-1·cm-1

。因此根據(jù)標(biāo)本的吸光度，即可求得血紅蛋白總量（不含SHb）。器材和試劑

a.分光光度計(jì)、移液管、微量吸管、試管等

b.血紅蛋白轉(zhuǎn)化液操作

a.取指血20ul，加到5ml血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中，混勻，靜置5分鐘。

b.用分光光度計(jì)比色。波長(zhǎng)540nm，以空白轉(zhuǎn)化液調(diào)零，測(cè)定吸光度“A”。計(jì)算

Hb（g/L）=A××251

＝A×367.76445844×1000注意事項(xiàng)：

a.KCN為劇毒藥品，要小心對(duì)待，實(shí)驗(yàn)完后要用次氯酸鈉溶液處理后才能棄倒。

b.血紅蛋白轉(zhuǎn)化液不能貯存在塑料瓶中，否則CN-下降使結(jié)果偏低。

c.若沒(méi)有符合標(biāo)準(zhǔn)的分光光度計(jì)，應(yīng)用HiCN

參考液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，求出K值=∑A（理論值）/∑A（測(cè)定值）。成年男性120-160g/L成年女性110-150g/L新生兒170-200g/L參考值二、血細(xì)胞分析儀測(cè)定法臨床意義1、紅細(xì)胞和血紅蛋白增多成年男性RBC>6.0×1012/L,Hb>170g/L

成年女性RBC>5.5×1012/L,Hb>160g/L

（1）相對(duì)增多：因脫水，血液濃縮所致。如嚴(yán)重腹瀉、大面積燒傷等。絕對(duì)增高組織缺氧骨髓幼紅細(xì)胞有絲分裂

RBC

Epo刺激腎生理性升高高原生活和劇烈運(yùn)動(dòng)，新生兒病理性升高嚴(yán)重的慢性心肺疾病繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥。真性紅細(xì)胞增多癥為原發(fā)性紅細(xì)胞增多癥，屬造血干細(xì)胞疾病。長(zhǎng)期組織缺氧2、紅細(xì)胞和血紅蛋白減低生理性貧血妊娠中晚期：血容量增加，血液稀釋。

6個(gè)月至2歲：血容量增加速度大于RBC與Hb的生成速度。有些老年人：攝取、利用營(yíng)養(yǎng)和造血功能減退。病理性貧血紅細(xì)胞的丟失、破壞，造血原料不足，骨髓造血功能障礙等原因

分級(jí)：輕度貧血：成年男性Hb＜110g/L

成年女性Hb＜100g/L

中度貧血：Hb＜90g/L重度貧血：Hb＜60g/L

極度貧血：Hb＜30g/L紅細(xì)胞形態(tài)檢驗(yàn)一、正常形態(tài)在良好的血涂片上，正常紅細(xì)胞的大小、形態(tài)較為一致，平均直徑7.2μm，呈粉紅色圓盤(pán)狀。向心性淺染紅細(xì)胞形態(tài)檢驗(yàn)一、正常形態(tài)在良好的血涂片上，正常紅細(xì)胞的大小、形態(tài)較為一致，平均直徑7.2μm，呈粉紅色圓盤(pán)狀。向心性淺染。紅細(xì)胞形態(tài)檢驗(yàn)二、大小異常

1.紅細(xì)胞大小不均紅細(xì)胞直徑相差一倍以上，常見(jiàn)于各種重癥增生性貧血，尤其見(jiàn)于重癥巨幼細(xì)胞貧血。紅細(xì)胞大小不均小紅細(xì)胞直徑小于6μm者稱(chēng)為小紅細(xì)胞，正常人偶見(jiàn)。提示血紅蛋白合成障礙，可能由于缺鐵和珠蛋白代謝異常所致。見(jiàn)于缺鐵性貧血和珠蛋白生成障礙性貧血。常伴有中心淺染區(qū)擴(kuò)大。大紅細(xì)胞直徑大于10μm，見(jiàn)于急性溶血性貧血（由于不全成熟的紅細(xì)胞增多）及巨幼紅細(xì)胞性貧血（是由于葉酸或維生素B12缺乏，DNA合成障礙，血紅蛋白合成過(guò)剩，脫核后形成大紅細(xì)胞或巨紅細(xì)胞）。巨紅細(xì)胞直徑大于15μm，見(jiàn)于巨幼細(xì)胞貧血。細(xì)胞中心淺染區(qū)消失。三、形態(tài)異常

1.球形紅細(xì)胞球形紅細(xì)胞直徑小于正常，厚度增加常大于2μm，無(wú)中心淺染區(qū)，似球形。常見(jiàn)于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥；在自身免疫性溶血性貧血、新生兒溶血病及紅細(xì)胞酶缺陷所致溶血性貧血等也可見(jiàn)到。球形紅細(xì)胞球形紅細(xì)胞橢圓形紅細(xì)胞

橢圓形紅細(xì)胞呈卵圓形、桿形，長(zhǎng)度可大于寬度3-4倍，是細(xì)胞膜酶缺陷所致，在遺傳形橢圓形紅細(xì)胞增多癥病人血涂片中此細(xì)胞可在25%以上。橢圓形紅細(xì)胞靶形紅細(xì)胞

中心區(qū)和細(xì)胞周緣染色深，其間為不染色的蒼白環(huán)。是由于Hb含量不足而且分布不均。見(jiàn)于低色素性貧血，尤其是珠蛋白生成障礙性貧血。靶形紅細(xì)胞棘狀紅細(xì)胞

紅細(xì)胞表面有刺狀突起，大小不一、形態(tài)各異。常見(jiàn)于遺傳性β脂蛋白缺乏癥及脾切除、酒精中毒性肝病、尿毒癥。棘狀紅細(xì)胞5.其它異形紅細(xì)胞鐮形紅細(xì)胞口形紅細(xì)胞四、染色異常

1.低色素性紅細(xì)胞：血紅蛋白含量低，中心淺染區(qū)擴(kuò)大。常見(jiàn)于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鐵粒幼細(xì)胞貧血。

2.高色素性紅細(xì)胞：血紅蛋白含量高，染色深，中心淺染區(qū)縮小或消失。見(jiàn)于巨幼細(xì)胞貧血。

高色素性紅細(xì)胞3.嗜多色性細(xì)胞：屬于尚未完全成熟的紅細(xì)胞，細(xì)胞較大，由于胞漿中含有多少不等的嗜堿性物質(zhì)RNA而被染成灰藍(lán)色。見(jiàn)于白血病、溶血性貧血。五、結(jié)構(gòu)異常

1.嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞：指在瑞氏染色下，胞漿內(nèi)存在嗜堿性黑藍(lán)色顆粒（核糖體聚集變性所致）的紅細(xì)胞，顆粒大小不一、多少不均，屬于未完全成熟紅細(xì)胞。常作為鉛中毒診斷篩選指標(biāo)。

五、結(jié)構(gòu)異常

2.卡波氏環(huán)：在成熟或幼稚紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，呈紫紅色線(xiàn)圈狀或“8”字形，可能是胞漿中脂蛋白變性，見(jiàn)于巨幼細(xì)胞性貧血和鉛中毒。

嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞

3.染色質(zhì)小體：位于成熟或幼紅細(xì)胞的胞漿中圓形，1-2μm，紫色，為核殘余物，常見(jiàn)于巨幼細(xì)胞貧血、溶血性貧血等。

4.有核紅細(xì)胞：即幼稚紅細(xì)胞，出現(xiàn)在外周血為病理現(xiàn)象，見(jiàn)于各種溶血性貧血、白血病。七、血小板計(jì)數(shù)

（bloodplateletcount,BPC或PLT）血小板（platelet）是骨髓中成熟巨核細(xì)胞的胞質(zhì)脫落而來(lái)。受血小板生成素的調(diào)節(jié)，約1/3的血小板滯留在脾竇和脾髓的細(xì)胞間（脾池化），平均壽命7-14天。

血小板具有黏附、聚集、釋放等功能，在止血、凝血過(guò)程中有重要作用。測(cè)定方法及評(píng)價(jià)1、顯微鏡計(jì)數(shù)法2、血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)法質(zhì)量控制1、器材2、計(jì)數(shù)時(shí)間3、鏡下觀(guān)察4、血涂片觀(guān)察參考值（100-300）×109/L1、生理變化日間變化、運(yùn)動(dòng)、飲食、女性月經(jīng)期、妊娠等。2、病理變化（1）血小板減少血小板生成障礙、血小板消耗過(guò)多、血小板分布異常、先天減少。（2）血小板增多原發(fā)性增多、反應(yīng)性增多。臨床意義八、血小板形態(tài)檢查一、正常血小板形態(tài)胞體小，直徑2-5μm，呈圓形、橢圓形、或不規(guī)則形；胞質(zhì)淡蘭色或粉紅色，中心為紫紅色的顆粒區(qū)，無(wú)核。二、異常血小板形態(tài)1、大小異常2、形態(tài)異常3、分布異常四、嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)（一）、原理用嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液，將血液稀釋一定倍數(shù)，并破壞紅細(xì)胞和大部分其他白細(xì)胞，并使嗜酸性粒細(xì)胞著色，滴入計(jì)數(shù)池，計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，換算成每升血中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。（二）、試劑伊紅、95%苯酚、40%甲醛、蒸餾水（三）、操作

1.在小試管中加稀釋液0.38ml2.將20μl血標(biāo)本加入管內(nèi)，溶解紅細(xì)胞，然后滴入計(jì)數(shù)池。

3.靜置3-5min，低倍鏡計(jì)數(shù)兩個(gè)計(jì)數(shù)室中10個(gè)大方格內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。（四）、計(jì)算嗜酸性粒細(xì)胞/L=10個(gè)大方格內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)×20×106（五）、注意事項(xiàng)

1.本試驗(yàn)應(yīng)在半小時(shí)內(nèi)計(jì)數(shù)完畢。

2.在血液稀釋混勻中，不要用力振蕩。

3.住院病人作嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，應(yīng)固定時(shí)間，以免受日間生理變化影響。

4.注意與中性粒細(xì)胞區(qū)別。（六）、臨床意義

1.生理變化勞動(dòng)、寒冷、精神刺激等使嗜酸性粒細(xì)胞降低，白天低，夜晚高，上午波動(dòng)較大，下午比較恒定。

2.病理變化增多：過(guò)敏性疾病、寄生蟲(chóng)病、某些傳染病、皮膚病、某些惡性腫瘤、某些血液病減少:長(zhǎng)期使用腎上腺皮質(zhì)激素，某些傳染病早期。還可用于觀(guān)察急性傳染病、大手術(shù)和燒傷病人預(yù)后，測(cè)定腎上腺皮質(zhì)功能和腦垂體前葉功能。五、紅斑性狼瘡細(xì)胞檢驗(yàn)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）多見(jiàn)于青壯年女性，是自身免疫性結(jié)締組織病。臨床表現(xiàn)復(fù)雜，缺乏特異性診斷，LE細(xì)胞檢查成為一種重要輔助診斷。（一）、LE細(xì)胞形成的3個(gè)條件

1.患者血清存在LE因子（IgG型抗核蛋白抗體）

2.受累或退變的細(xì)胞核

3.具有吞噬能力的細(xì)胞（二）、LE細(xì)胞的形態(tài)特征

1.前期白細(xì)胞在LE因子作用下腫脹，溶解成前期LE細(xì)胞，胞質(zhì)崩解，核成云霧狀游離均勻體。

2.花簇期有吞噬功能的中性粒細(xì)胞圍繞于均勻體，形成花形細(xì)胞簇。

3.吞噬期中性粒細(xì)胞完全吞噬均勻體?；ù仄贚E細(xì)胞（三）、LE細(xì)胞的檢查方法

1.去纖維蛋白法

2.血塊法（四）、注意事項(xiàng)

1.采血后立即檢查

2.孵育時(shí)間要適當(dāng)

3.鏡檢時(shí)注意事項(xiàng)（五）、臨床意義發(fā)現(xiàn)LE細(xì)胞還要結(jié)合臨床表現(xiàn)及抗核抗體的檢查，才能確診。第三節(jié)血液其它檢驗(yàn)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血細(xì)胞比容測(cè)定紅細(xì)胞平均值計(jì)算紅細(xì)胞平均直徑和曲線(xiàn)測(cè)定嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)紅細(xì)胞沉降率測(cè)定紅斑狼瘡細(xì)胞檢查網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（reticulocyte,Ret）一、定義：是未完全成熟的紅細(xì)胞，是晚幼紅細(xì)胞脫核后到完全成熟紅細(xì)胞之間的過(guò)渡型細(xì)胞。其胞漿內(nèi)還殘存著多少不等的嗜堿性物質(zhì)（RNA），經(jīng)燦爛甲酚藍(lán)、新亞甲藍(lán)等活體染色法染色，嗜堿物質(zhì)凝成顆粒，其顆粒又聯(lián)綴成線(xiàn)，而構(gòu)成淺藍(lán)或深藍(lán)的網(wǎng)織狀結(jié)構(gòu)，稱(chēng)網(wǎng)織紅細(xì)胞。根據(jù)Ret的形態(tài)特征和成熟程度可分為四型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型。二、染色原理

網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)RNA的磷酸基（帶負(fù)電荷）能與燦爛甲酚藍(lán)、新亞甲藍(lán)等堿性染料的有色反應(yīng)基（帶正點(diǎn)荷）結(jié)合，形成核酸與堿性染料復(fù)合物的多聚體，凝成顆粒，其顆粒又聯(lián)綴成線(xiàn)，而構(gòu)成淺藍(lán)或深藍(lán)的網(wǎng)織狀結(jié)構(gòu)，凡含有兩個(gè)以上深染顆粒（具有線(xiàn)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)）的無(wú)核紅細(xì)胞，即為網(wǎng)織紅細(xì)胞。三、器材和試劑

1.標(biāo)準(zhǔn)生物顯微鏡、試管、Miller窺盤(pán)（直徑19mm，厚1mm，內(nèi)含大小兩個(gè)正方格—A、B，面積比為9：1）、載玻片、推片等。BAMiller窺盤(pán)新亞甲藍(lán)染液貯于棕色瓶?jī)?nèi)，用前過(guò)濾，為WHO所推薦燦爛甲酚藍(lán)染液貯于棕色瓶?jī)?nèi)，用前過(guò)濾天青B溶液煌焦油藍(lán)染液四、操作

1.取小試管一支，加染液和血液各2滴，混勻。

2.置37℃水浴箱15min，取出后微振2min，推片。

3.將Miller窺盤(pán)放入目鏡，選擇合適部位計(jì)數(shù)，Miller窺盤(pán)的小格A內(nèi)計(jì)數(shù)所有無(wú)核紅細(xì)胞，大格B內(nèi)計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞。五、計(jì)算

1.網(wǎng)織紅細(xì)胞%=×1002.絕對(duì)值計(jì)算：最后單位表示成（×109/L）大格網(wǎng)織紅細(xì)胞總數(shù)小格紅細(xì)胞總數(shù)×9六、正常參考值

相對(duì)值成人0.5%-1.5%

新生兒2%-6%

絕對(duì)值（24-84)×109/L七、臨床意義可以用來(lái)反映骨髓紅系造血狀態(tài)的指標(biāo)，貧血的鑒別診斷和療效判定，可用于化療和放療所致骨髓抑制及其恢復(fù)情況的監(jiān)測(cè)。

1.網(wǎng)織紅細(xì)胞增加：表示骨髓紅細(xì)胞生成旺盛，如溶血性貧血。急性失血后5-10天網(wǎng)織紅細(xì)胞達(dá)高峰，2周后恢復(fù)。網(wǎng)織紅細(xì)胞持續(xù)升高提示慢性失血。

2.網(wǎng)織紅細(xì)胞減少：表示骨髓造血機(jī)能減弱，如再障。臨床將貧血病人網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值低于15×109/L，作為急性再障的診斷指標(biāo)。紅細(xì)胞比積測(cè)定定義：紅細(xì)胞比積（Hct、PCV）：又叫紅細(xì)胞體積分?jǐn)?shù)，指在一定條件下經(jīng)離心沉淀壓緊的紅細(xì)胞在全血標(biāo)本中所占體積的比值。溫氏（Wintrobe）法材料和試劑

Wintrobe管：長(zhǎng)110mm，內(nèi)徑3mm，自下到上有0-100mm刻度。

Pasteur吸管：吸管下端細(xì)長(zhǎng)，上部膨大，頂端配有橡皮乳頭帽?？捎脦чL(zhǎng)穿刺針的注射器代替。離心機(jī)

EDTA鹽干燥抗凝管操作

a.采靜脈血標(biāo)本2ml，立即放入抗凝管中，混勻。盡量用空腹血。

b.充分混合血標(biāo)本2分鐘以上，使RBC分布均勻，Hb安全氧合。

c.將吸管尖端深入Wintrobe管管底，自下而上慢慢將血放入管內(nèi)到100mm刻度處。要避免充入氣泡。

d.以3000r/min的速度離心半小時(shí)。離心后血液分為五層（從上至下）：最上層為血漿；白色乳糜層主要使血小板；灰紅色層為白細(xì)胞和有核紅細(xì)胞；呈黑色一薄層為被白細(xì)胞代謝還原成的還原血紅蛋白層；最下層為含氧血紅蛋白層。

e.讀取以黑色紅細(xì)胞層為準(zhǔn)的紅細(xì)胞柱高，除以100。正常參考值

成年男性：0.40-0.50成年女性：0.37-0.48臨床意義

a.紅細(xì)胞比積增高生理性增高：高原生活、劇烈運(yùn)動(dòng)、新生兒。病理性增高：原發(fā)性和繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥、脫水、燒傷。

b.紅細(xì)胞比積減低各種貧血。

c.根據(jù)Hct了解血液濃縮程度。

d.Hct是計(jì)算MCV、MCHC的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)之一。

e.Hct是影響全血粘度的決定性因素之一。紅細(xì)胞平均值計(jì)算

通過(guò)紅細(xì)胞比積、計(jì)數(shù)紅細(xì)胞、測(cè)定血紅蛋白量這三個(gè)數(shù)據(jù)，間接計(jì)算出平均紅細(xì)胞容積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（MCH）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC），以便分析病人紅細(xì)胞形態(tài)特征，有助于貧血的分類(lèi)與鑒定。一、平均紅細(xì)胞容積（MCV）

指紅細(xì)胞群體中各個(gè)紅細(xì)胞體積的平均值。單位：fl（10-15L）

MCV=×1015flHctRBC二、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（MCH）

指紅細(xì)胞群體中各個(gè)紅細(xì)胞血紅蛋白含量的平均值。單位：pg（10-12g）

MCH=×1012pgHb(g/L)RBC（L-1）三、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）指測(cè)Hct時(shí)被壓緊的RBC的血紅蛋白濃度（g/L）

Hb(g/L)MCHC=HctMCV、MCH、MCHC參考值MCV(fl)MCH(pg)MCHC(g/L)成人82-9227-31320-3601-3歲小兒79-10425-32280-350新生兒86-12027-36250-370MCV、MCH、MCHC的臨床應(yīng)用貧血類(lèi)型MCVMCHMCHC常見(jiàn)疾病或病因正常細(xì)胞性正常正常正常急性失血、溶血、再障、白血病等大細(xì)胞性>正常>正常正常巨幼貧單純小細(xì)胞性<正常<正常正常繼貧小細(xì)胞低色素性<正常<正常<正常缺鐵、地中海、慢性失血四、紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW）定義：是反映周?chē)t細(xì)胞間體積差異的參數(shù)，通過(guò)變異系數(shù)定量的表示紅細(xì)胞體積分布的離散程度。原理：血細(xì)胞自動(dòng)分析儀通過(guò)電阻的改變，產(chǎn)生脈沖信號(hào)的強(qiáng)弱。正常參考值：成人：≤15.0%

新生兒：男≤15.9%

女≤16.2%臨床意義：

a.與MCV聯(lián)合應(yīng)用于貧血的形態(tài)學(xué)分類(lèi)

b.用于缺鐵性貧血的篩選診斷

c.用于缺鐵性貧血與輕型珠蛋白生成障礙性貧血鑒別診斷。紅細(xì)胞平均直徑和紅細(xì)胞直徑曲線(xiàn)測(cè)定測(cè)定方法與評(píng)價(jià)顯微鏡測(cè)定法（用目鏡測(cè)微計(jì)）參考值

6.7-7.7μm(7.2μm)臨床意義

1、直徑正常

2、直徑增大

3、直徑減少嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù)原理用甲醇固定，堿性美藍(lán)染色，胞質(zhì)染成藍(lán)綠色，顆粒染成深藍(lán)色。計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中所見(jiàn)到的嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞數(shù)。參考值≤0.03%臨床意義主要用于鉛、