發(fā)光及血流變

發(fā)光及血流變化學發(fā)光免疫技術是近二十年來發(fā)展非常迅速的非放射性免疫技術。化學發(fā)光免疫技術是一項免疫測定技術，繼酶免疫分析技術、放射免疫技術、熒光免疫技術之后發(fā)展的一項新興測定技術。由于這種測定具備很高的特異性和很小的干擾，因此，如同放射免疫分析（RIA）、熒光免疫測定（FIA）等樣利用免疫反應的特異性和化發(fā)光本身的信號特異性形成了目前所說的化學發(fā)光免疫技術。2021/4/272發(fā)光免疫分析技術直接化學發(fā)光免疫分析(CLIA)化學發(fā)光酶免疫分析(CLEIA)電化學發(fā)光免疫分析(ECLIA)2021/4/273工作原理：

化學發(fā)光免疫分析儀是通過檢測患者血清從而對人體進行免疫分析的醫(yī)學檢驗儀器?；瘜W發(fā)光酶免疫分析(CLEIA)是用待測樣本與固相包被在白色不透明微孔板中的抗體結合，再與參與化學反應的標記已知抗體（或抗原）的酶發(fā)生免疫反應后，形成固相包被抗體—待測抗原—酶標記抗體復合物，經洗滌后加入底物，酶催化分解底物發(fā)光，由光量子檢測系統(tǒng)接受，光電倍增管將光信號轉變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯?，再把它們傳送至計算機數據處理系統(tǒng)，計算出待測物的濃度。2021/4/274化學發(fā)光酶免疫分析（CLEIA)的酶辣根過氧化物酶（HRP）堿性磷酸酶（ALP）2021/4/275辣根過氧化物酶（HRP）反應原理：待測樣本與固相包被在白色不透明微孔板中的抗體結合，再與HRP標記的已知抗體（或抗原）發(fā)生免疫反應后，形成固相包被抗體—待測抗原—酶標記抗體復合物，經洗滌后加入魯米諾、H2O2、供氫體（DH2）、化學發(fā)光增強劑底物：1.常用的發(fā)光劑為魯米諾（或其衍生物）2.參與催化反應的H2O2和DH2化學發(fā)光增強劑：用于增強發(fā)光和延長發(fā)光時間，從而提高靈敏度*魯米諾和H2O2在無HRP催化時也能緩慢自行發(fā)光，故配置成兩瓶底物試劑2021/4/276堿性磷酸酶（ALP)反應原理：待測樣本與固相包被在白色不透明微孔板中的抗體結合，再與標記已知抗體（或抗原）的ALP發(fā)生免疫反應后，形成固相包被抗體—待測抗原—酶標記抗體復合物，經洗滌后加入金剛烷（AMPPD）、化學發(fā)光增強劑，在ALP的作用下AMPPD的磷酸脂基水解得到一個穩(wěn)定的中間體AMPD，AMPD經分子內電子轉移裂解為一分子金剛烷酮和一分子處于激發(fā)態(tài)的間氧苯甲酸甲酯陰離子，當其回到基態(tài)時則產生470nm的光，可持續(xù)幾十分鐘。底物：常用的發(fā)光劑為金剛烷（AMPPD）2021/4/277血液流變學血流變儀的工作原理：采用錐/板式測量方式，通過一個低慣性的轉矩馬達對被測試液體施加一個受控應力，驅動軸由一個低阻力磁浮軸承保持在中心位置，它將施加的應力傳遞到被測液體上，其測試頭為錐板式。其測試原理是依據牛頓粘性定理。2021/4/2781920年提出流變的概念：物體產生流動與變形1948年提出生物流變學(Biorheology)：生命現象中的流變學，即血液、淋巴液其他體液、玻璃體，軟組織如血管、肌肉、晶體、甚至骨骼，細胞質等均可發(fā)生流變。到1951年提出血液流變學(Hemorheology)：研究血液及其有形成分的流動性與形變規(guī)律及其相互作用的流變學一、發(fā)展史血液流變學2021/4/279二、血液流變學研究的內容1.宏觀流變學（Macrohemorheology）

2.血細胞流變學（Cellularhemorheology）

3.分子血液流變學（Moleculehemorheology）研究全血在各種切變率下的表觀粘度及血漿粘度。從分子水平上研究血液成分的流變特性及其分子基礎，結構和功能之間的相互關系。研究血液中有形成分的流變學特性。研究全血在各種切變率下的表觀粘度及血漿粘度。研究血液中有形成分的流變學特性。2021/4/2710三、血液的流變學特性層流(laminarflow)或滯流(viscousflow):當流體在管中流動時，若其質點始終沿著與管軸平行的方向作直線運動，質點之間沒有遷移，互不混合，整個管的流體就如一層一層的同心圓筒在平行地流動。2021/4/2711血液在血管中是分層流動的，故越靠近中央流速越快，反之越慢.血液中的血細胞在血管中流動時，表現出明顯的趨軸性，血細胞處于血管的中央，其周圍是血漿層，稱為軸流人體內血液的流動大都屬于層流，在血液流動很快或血管很粗的部位（如在主脈中）容易產生湍流。2021/4/2712四、血液的流變學基礎概念1.內摩檫力（internalfriction）：相鄰快慢兩層之間驅使整體血液流動產生的摩檫力。f=(η·△V/△X)·△S

2.切應力（shearstress）：在單位面積上所承受的粘滯力,驅動各層向切線方向形變的力。τ=f/△S3.切變率（shearrate）：層流中單位距離的兩個液層的流速之差。g=△V/△X單位(秒-1,s-1)△X△V△S兩層接觸面積η內摩擦系數沒有顆?；旌系膯我恍粤黧w在管腔內呈層狀流動，其截面上的流速分布呈拋物線。2021/4/27134.粘度（η）：衡量液體在外力作用下以層流形式流動時，流體內不同的薄層以不同的速度移動的內摩擦力或分子間的內聚力阻礙分子間的相對運動而產生阻力的度量。為切應力（τ）與切變率（g）之比。單位：毫帕斯卡·秒（mPa·S）5.比粘度：比粘度指某液體的粘度與標準參照液的粘度的比值，常與水或生理鹽水（NS）作比較。比粘度值與粘度成正比，液體的粘度愈大通過毛細血管所需的時間愈長，其比粘度也愈高，所以比粘度可以反映粘度的大小。6.非牛頓液體和牛頓液體：全血是非牛頓液體，即全血的粘度是隨切變率的變化而變化；而血漿被看作是牛頓液體，它的粘度與切變率無關。

2021/4/27147血液的相對粘度(ηr)：全血粘度（ηb）/血漿粘度（ηp）8表觀粘度（ηa）：全血等非牛頓液體,在一定切變率下的粘度稱為這種液體的表觀粘度。9還原粘度（ηre）：用HCT校正后的表觀粘度，HCT越高，全血的表現粘度度越大，用全血粘度（ηb）/HCT，以消除HCT對粘度的影響。10血漿粘度：血漿粘度的特點是不隨切變率的變化而變化，不論在高或低切變率范圍內總是一個常數,即為牛頓液體。血漿粘度的高低與其中所含各種蛋白質、糖類、脂類等高分子物質含量有關。其中蛋白質對血漿粘度影響最大。2021/4/271511卡松粘度(c):是足夠高切變率下（紅細胞變形到極限）血液粘度趨向的極限值?！苔?√τc+√ηc√gτ:為切應力τc:為卡森屈服切應力ηc:為卡松粘度g:為切變率12屈服切應力(τc):屈服切應力是低切變率下，纖維蛋白原的橋聯作用使紅細胞形成立體網絡結構而致。故與Hct和血漿蛋白含量有關，其大小影響微循環(huán)中的血液流動性，反映了微循環(huán)中的血液淤積狀況；也影響低切變率下血液流動中的紅細胞的取向和相互作用2021/4/2716五、血液的流變學參數1.全血粘度：（也稱全血表觀粘度）即一定切變率下的粘度，切變率低時全血粘度高，隨切變率的逐漸升高粘度逐漸下降，最后趨向一個平穩(wěn)的數值。低切變黏度反映紅細胞的聚集能力，若紅細胞相互聚集，則血液黏度升高；高切變黏度反映紅細胞的變形能力，若變形能力低，則血液黏度高牛頓粘滯定律：全血粘度是衡量血液流動性的指標，粘度愈高流動性愈差，粘度愈低流動性愈好。全血粘度受紅細胞壓積的改變而改變，一般來說紅細胞壓積高的，全血粘度高。2021/4/2717正常：低切：男17.63～24.47mPa·s；女13.79～20.13mPa·s高切：男3.53～5.05mPa·s；女3.36～4.62mPa·s。增高：提示血細胞壓積或血漿粘度增高，紅細胞聚集性增高，紅細胞變形能力或彈性差。如腦血管病、紅細胞增多癥、冠心病、糖尿病、高血壓、慢性支氣管炎、鏈狀血紅蛋白癥、白血病等。減低：貧血，病理性出血**出現全血粘度較大幅降低時，一般都是儀器或抽血錯誤所致，要看紅細胞壓積是不是有降低，如有是結果可靠性較大。多種疾病僅在低切變率時全血黏度升高，這與低切變引起血流緩慢、紅細胞易于聚集有關。

2021/4/27182.全血比粘度正常：低切男：7.5～10.0,女：5.8～8.1高切男：5.6～6.7,女：4.7～6.01增加：常見于高血壓病、腦血管意外、冠心病和心肌梗塞等。減少：常見于貧血疾病。2021/4/27193.全血還原粘度：指全血粘度與紅細胞壓積之比，即單位紅細胞壓積時的全血粘度值。意義同全血粘度，受紅細胞壓積的改變而改變，一般來說紅細胞壓積高的，全血還原粘度高。正常：男；高切3.74～9.48；低切31.94～58.02

女；高切3.69～9.60；低切26.87～53.91增高：見于腦血管病、紅細胞增多癥、冠心病、糖尿病、高血壓、慢性支氣管炎、鏈狀血紅蛋白癥、白血病等。2021/4/27204.全血還原比粘度：當血細胞壓積濃度為1時的全血粘度值。以全血粘度與血細胞壓積濃度之比表示，即（全血粘度－1）/血細胞壓積。其中（全血粘度－1）為增比粘度，還原比粘度則實際反映單位血細胞壓積產生增比粘度的量，使血液粘度校正到同一血細胞比積濃度的基礎上，以之比較。增比黏度(specificviscosity，ηsp）：表示溶液粘度ηr較溶劑粘度η0增加的倍數正常：低切男：14～20女：12～21高切男：10～13女：9～132021/4/2721*全血高、中、低切值的判斷：（1）高、中、低切都升高，且幅度較大：危險程度依次為高纖維蛋白原＞高紅細胞聚集指數＞高Hct。這是高危人群、一般有高血壓、冠心病等心血管疾病。但是如果其它指標正常，或增加不明顯，那么檢測結果可能有問題，要復查。（2）低切高、高切不高：這一類多為緡錢樣紅細胞聚集引起，可能是紅細胞電荷減少，也可能是溫度過低紅細胞易聚集，引起粘度升高。而這種聚集因為高切變速度的稀釋效應而減少，所以高切不高。由于末梢微循環(huán)是在低切變速度下進行的，所以對于末梢微循環(huán)不好的病人，如老年人、高危人群也有很大的危險性2021/4/2722（3）高、中、低切都略有升高：如果其他指標正常，只有Hct升高一般是正常的生理現象（如到高原）;有時Hct可能很高，而粘度上升并不高,這主要是正常情況下人體有調節(jié)血粘度的能力。當然也可能是高粘血癥代償期。但若其他正常，而血漿粘度高，也可引起全血粘度高,這類病人有可能處于高凝前期，有很強的預報作用。2021/4/27235.血漿粘度：反映體內生物大分子(纖維蛋白原、球蛋白、血脂)對血細胞粘度的影響。正常：男：1.26——1.66增高：主要見于巨球蛋白血癥、白血病、腦血栓降低：對全血粘度有影響，但不大。2021/4/27246.血漿比粘度實際測定時采用血漿和已知粘度的凈水互相比較的方法，二者通過毛細血管的所用時間之比即粘度之比，即血漿的比粘度。正常情況：1.64～1.78增加：常見于高血壓、冠心病、心肌梗塞、由于血漿粘度升高，最大的可能是纖維蛋白原等鏈狀蛋白升高，這類病人可因為鏈狀蛋白形成網狀結構引起全血粘度升高，一般血液處于高凝狀態(tài)，比較危險。由血糖、血脂高引起的血漿粘度一般只是略有升高2021/4/27257.紅細胞沉降率（ESR、血沉）抗凝血放入血沉管中垂直靜置，以紅細胞在一小時后下沉的距離表示紅細胞的沉降速度。反映血細胞的聚集性。正常：男：0～15mm/h；女：0～20mm/h血沉增快,若血沉方程K值正常，則不是因為紅細胞聚集增強，而是因為紅細胞下降逆阻力減低導致血沉增快（如貧血或血液被稀釋時，紅細胞壓積低）。通過血沉方程K值，可排除貧血或血液稀釋對血沉的影響。血沉增快，若血沉方程K值高，則是因為紅細胞聚集性增強導致血沉增快。K正常；0～80.48ESR=K〔-(1-H+lnH)〕→K=ESR/〔-(1-H+1nH)〕ESR：紅細胞沉降率;H：紅細胞壓積;1n：自然對數（1n=log10（），1nH:以e為底的H的對數）2021/4/27268.紅細胞壓積（HCT）：指紅細胞在血液中所占的容積之比。反映血液中血細胞與血漿間的比例，反映血液濃稠性。是影響血液粘度的重要因素，血液粘度隨紅細胞壓積改變而改變。正常：男：0.40～0.50；女：0.35～0