氣相色譜分析法在藥物分析中的應(yīng)用

氣相色譜分析法在藥物分析中的應(yīng)用（一）經(jīng)驗(yàn)一對于分子量小于500的化合物，若分子結(jié)構(gòu)中不含活潑氫的-OH，-NH2，-NH-，-COOH，-SO3H,-SH,—CONH2,-CONH-,-SO2NH2,-SO2NH-等極性官能團(tuán)，且對熱穩(wěn)定，一般均可采用GC法直接分析。如：維生素E、維生素K1、四烯基萘醌、替補(bǔ)瑞酮、丁咯地爾等。2021/4/272（二）經(jīng)驗(yàn)二對于分子量小于200的化合物，若分子結(jié)構(gòu)中含有-OH，-NH2，-NHR，-SH,-CONH2極性官能團(tuán)，但分子結(jié)構(gòu)中的極性官能團(tuán)總數(shù)不超過2個，且對熱穩(wěn)定，則一般可采用GC法直接分析。如：偽麻黃堿、苯丙醇胺、丁香酚、薄荷醇、龍腦、異龍腦等。2021/4/273（三）經(jīng)驗(yàn)三1.糖類、氨基酸類、肽類、核酸類、蛋白質(zhì)類等強(qiáng)化極性化合物或者生物大分子肯定不能直接進(jìn)行GC分析。2.不符合經(jīng)驗(yàn)一和二中很多分子量小于500的中等極性化合物往往可以直接進(jìn)行GC分析。如：硝苯地平、尼莫地平、尼群地平、尼索地平等地平類降血藥，地西泮、硝西泮等西泮類安眠藥。2021/4/274二、哪些化合物經(jīng)過衍生化后可以進(jìn)行GC分析對于分子量小于500，但由于分子結(jié)構(gòu)中含有-OH，-NH2，-NH-，-COOH，-SH,-CONH2,-CONH-七鐘活潑氫的極性官能團(tuán)，且難以氣化，無法直接進(jìn)行GC分析的化合物，一般需經(jīng)過衍生化后進(jìn)行GC分析。實(shí)際上藥物中直接進(jìn)行GC分析的不到15%，但經(jīng)過衍生化處理后70~80%的藥物可進(jìn)行GC分析。2021/4/275三、當(dāng)待測物用GC法和HPLC法均可分析時應(yīng)如何選擇情況1：常規(guī)藥物制劑主成分分析時，一般選用進(jìn)樣準(zhǔn)確度和精密度高的HPLC法進(jìn)行分析。如測定沒有紫外吸收或紫外吸收很弱的揮發(fā)性油類成分的主成分或輔料的藥物制劑，則采用GC法進(jìn)行分析。2021/4/276情況2：化學(xué)藥品、中成藥、中藥中間體和中藥制品中殘留溶劑檢測一般采用GC法。原因：GC的FID和ECD檢測殘留溶劑的靈敏度高于HPLC的檢測器。2021/4/277情況3：中藥中農(nóng)藥殘留檢測要根據(jù)農(nóng)藥的種類、實(shí)驗(yàn)室的條件、實(shí)驗(yàn)成本綜合考慮作出選擇。GC-ECD：有機(jī)氯類農(nóng)藥GC-NPD：有機(jī)磷類農(nóng)藥GC-MS和HPLC-MS：測定農(nóng)藥殘留有優(yōu)勢高的專屬性和靈敏度情況4：體內(nèi)藥物分析方面，要根據(jù)方法的專屬性、靈敏度、方便程度三個方面來考慮。2021/4/278第六章

氣相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用第二節(jié)

氣相色譜法在中藥分析中的應(yīng)用一、中藥材分析三、中藥中農(nóng)藥殘留的分析二、中成藥和中藥制品的分析2021/4/279一、中藥材分析GC在中藥材分析中主要用于藥材中揮發(fā)性油類有效成分或指標(biāo)性成分，以及測定藥材中農(nóng)藥的殘留量。如：薄荷藥材中薄荷醇和薄荷酮，丁香藥材中丁香酚，石菖蒲藥材中的α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚揮發(fā)性成分等，以及殘留的有機(jī)氯、磷、擬除蟲菊類農(nóng)藥。藥材中不易氣化的組分可以衍生后進(jìn)行GC分析。2021/4/2710二、中成藥和中藥制品的分析GC在中成藥和中藥制品分析中主要用于藥材中揮發(fā)性油類有效成分或指標(biāo)性成分，以及測定藥材中農(nóng)藥的殘留量。還用于測定中成藥和中藥制品中有機(jī)溶劑的殘留量。2021/4/2711三、中藥中農(nóng)藥殘留的分析農(nóng)藥殘留分析特點(diǎn)：樣品中農(nóng)藥殘留量很低，屬痕量分析（fg/kg~mg/Kg)；常用的農(nóng)藥有數(shù)百種，各類農(nóng)藥性質(zhì)差異大，分析方法需根據(jù)各類農(nóng)藥的特點(diǎn)而定；樣品種類多，組成各異、各類樣品的農(nóng)藥殘留檢測的錢處理方法差異較大；測定樣品中農(nóng)藥殘留量時，對方法的靈敏度要求高，而準(zhǔn)確度和精密度要求不高。2021/4/2712農(nóng)藥殘留分析主要采用毛細(xì)管柱氣相色譜法進(jìn)行分析，配以高靈敏度和專屬性的檢測優(yōu)勢。器在農(nóng)藥殘留分析中具有很大的農(nóng)藥殘留分析前處理——對農(nóng)藥提取、并對提取液凈化、濃縮。檢測2021/4/2713（一）樣品的前處理技術(shù)——檢測的關(guān)鍵環(huán)節(jié)作用萃取及濃縮被測痕量農(nóng)藥，提高方法靈敏度消除樣品基質(zhì)對測定的干擾，通過樣品提取液進(jìn)行凈化，除去提取時的共萃取物。2021/4/27141.提取提取方法要根據(jù)待測農(nóng)藥的性質(zhì)、檢測方法和樣本決定，遵循盡量完全提取出待測農(nóng)藥，且共萃取物盡量少原則。提取溶劑的選擇原則：相似相溶原理注意：所用溶劑對氣相色譜檢驗(yàn)應(yīng)無干擾2021/4/2715提取技術(shù)液液萃取振蕩萃取索氏萃取超聲波萃取微波萃取加速溶劑提取超臨界流體提取固相微萃取2021/4/27162.提取液的凈化和濃縮由于萃取過程中不可避免將樣品中的油脂、蠟質(zhì)、葉綠素及胺類、糖類、酚類等可溶于提取溶劑的物質(zhì)一起被萃取出來，嚴(yán)重影星殘留量大的分析。凈化——將被測農(nóng)藥與干擾物質(zhì)的分離2021/4/2717凈化要求與方法：主要取決于農(nóng)藥和樣本的性質(zhì)以及最終的檢測方法，并保證具有一定的回收率。凈化方法：液-液分配法、吸附柱色譜法、固相萃取法、凝膠色譜法。2021/4/2718（二）氣相色譜分離與分析目前農(nóng)藥殘留分析向著多類型、多殘留檢測方法發(fā)展，同一方法中同時要求檢查幾種。幾十種甚至上百種農(nóng)藥的殘留量?！捎么罂趶矫?xì)管柱、大體積進(jìn)樣技術(shù)的氣相色譜分析法。2021/4/2719農(nóng)藥殘留分析常用固定液：非極性的HP-1，HP-5或同級品中等極性的HP-1701，HP-50或同級品。有機(jī)氯農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯：OV-17,OV-1701氨基甲酸酯殺蟲劑：SE-54有機(jī)磷農(nóng)藥：OV-1012021/4/2720農(nóng)藥殘留分析常用檢測器：ECDFPDNPDMSD常用檢測器通用檢測器2021/4/2721（三）農(nóng)藥鑒定方法單一以保留時間定性鑒定殘留農(nóng)藥并不十分可靠。往往在第一根色譜柱上所得的陽性鑒別結(jié)果應(yīng)在第二根色譜質(zhì)作進(jìn)一步確認(rèn)或至少以另一種其他方法技術(shù)作為支持。2021/4/2722常用確證方法質(zhì)譜法——可準(zhǔn)確鑒定化合物結(jié)構(gòu)，用于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的確證。雙柱法——采用不同的色譜柱再次進(jìn)行分析。衍生化法——采用小規(guī)模的化學(xué)反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物再通過色譜技術(shù)進(jìn)行復(fù)驗(yàn)。2021/4/2723（四）應(yīng)用實(shí)例2021/4/2724第六章

氣相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用第三節(jié)

氣相色譜法在化學(xué)藥物分析中的應(yīng)用一、化學(xué)藥物的鑒別三、有機(jī)溶劑殘留測定二、化學(xué)藥物有關(guān)物質(zhì)的鑒別與檢查四、含量測定2021/4/2725一、化學(xué)藥物的鑒別藥物分析中色譜法鑒別實(shí)驗(yàn)常采用對照品法。一般很少單獨(dú)采用GC法進(jìn)行鑒別，除有機(jī)溶劑殘留測定外，含量或有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下才采用GC法的化學(xué)藥品常同時進(jìn)行GC法鑒別。2021/4/2726二、化學(xué)藥物有關(guān)物質(zhì)的鑒別與檢查對已知有關(guān)物質(zhì)的檢查，最常用的GC檢測器為FID。對未知有關(guān)物質(zhì)的檢查，最常用的GC檢測器為MSD

GC對有關(guān)物質(zhì)的分析，最關(guān)鍵的是方法的耐用性和粗放度。不同實(shí)驗(yàn)室對同一樣品的檢測結(jié)果應(yīng)一致，如有偏差也應(yīng)在允許的范圍內(nèi)。2021/4/2727建立有關(guān)物質(zhì)的分析方法時，除了檢出限和定量限的考察，最好在色譜系統(tǒng)的系統(tǒng)適用性中提供雜質(zhì)對照、雜質(zhì)混合樣品，建立色譜系統(tǒng)的評價(jià)體系。GC中對色譜參數(shù)調(diào)整范圍均有規(guī)定2021/4/2728三、有機(jī)溶劑殘留測定有機(jī)溶劑毒性避免使用的溶劑——為已知的致癌物質(zhì)或較強(qiáng)潛在致癌作用的物質(zhì)，對人體具有不可接受的毒性和對環(huán)境造成毒害的有毒試劑限制使用的溶劑——為已知的致癌物質(zhì)或較強(qiáng)潛在致癌作用的物質(zhì)，和對環(huán)境造成毒害的有毒試劑一般量存在對人體無害的溶劑——日攝入量低于50mg時，不需任說明溶劑限度定為5mg/L。2021/4/2729對沒有足夠毒理學(xué)數(shù)據(jù)的有機(jī)溶劑，人三氟乙酸、三氯乙酸、石油醚、異丙醚、異辛烷、甲基四氫呋喃、甲基異丙酮、1,1-二甲氧基甲烷、1,1-二乙氧基丙烷、2,2-二乙氧基丙烷等制定殘留水平限度時給出合理解釋。測定溶劑殘留可以選擇填充柱或毛細(xì)管柱，進(jìn)樣方式可以自由選擇。頂空進(jìn)樣和毛細(xì)管柱成為目前溶劑殘留溶劑控制的趨勢。2021/4/2730

《中國藥典》（2005年版）規(guī)定測定溶劑殘留方法:

1.毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣等溫法柱溫：40~100C載氣：氮?dú)猓?.0~1.2mL/min頂空瓶溫度（水位溶劑）：75~85C進(jìn)樣口溫度：200C檢測器：FID，250C頂空瓶平衡時間：30~60min2021/4/2731

2.毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣程序升溫法柱溫：30C維持7min，升溫速率8C/min升至120C，維持15min非極性色譜系統(tǒng):極性色譜系統(tǒng):柱溫：60C維持6min，升溫速率8C/min升至100C，維持20min2021/4/2732載氣：氮?dú)猓?.0mL/min進(jìn)樣口溫度：200C檢測器：FID，250C頂空瓶溫度（水位溶劑）：7