GB/T 15805.2-2008魚類檢疫方法第2部分：傳染性造血器官壞死病毒(IHNV)

犐犆犛６５．０２０．３０

犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜１５８０５．２—２００８

部分代替ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５

魚類檢疫方法

第２部分：傳染性造血器官壞死病毒

（犐犎犖犞）

犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犿犲狋犺狅犱狊狅犳犳犻狊犺—

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２００８０７３１發(fā)布２００８１１０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜１５８０５．２—２００８

前言

ＧＢ／Ｔ１５８０５《魚類檢疫方法》分為下列部分：

———第１部分：傳染性胰臟壞死病毒（ＩＰＮＶ）；

———第２部分：傳染性造血器官壞死病毒（ＩＨＮＶ）；

———第３部分：病毒性出血性敗血癥病毒（ＶＨＳＶ）；

———第４部分：斑點叉尾病毒（ＣＣＶ）；

———第５部分：鯉春病毒血癥病毒（ＳＶＣＶ）；

———第６部分：殺鮭氣單胞菌；

———第７部分：腦粘體蟲；

……

本部分為ＧＢ／Ｔ１５８０５的第２部分。

本部分代替ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５《淡水魚類檢疫方法第一部分》中的第４章。

本部分與ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５的第４章相比主要變化如下：

———增加了用ＰＣＲ方法鑒定ＩＨＮＶ；

———增加了資料性附錄“ＩＨＮ病毒Ｎ基因的全序列（１１７６ｂｐ）”；

———結(jié)構(gòu)格式按ＧＢ／Ｔ１．１—２０００的規(guī)定，作為部分編寫。

本部分的附錄Ａ為規(guī)范性附錄，附錄Ｂ為資料性附錄。

本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本部分由全國水產(chǎn)標準化技術(shù)委員會歸口。

本部分起草單位：農(nóng)業(yè)部全國水產(chǎn)技術(shù)推廣總站、中華人民共和國深圳出入境檢驗檢疫局。

本部分主要起草人：孫喜模、江育林、陳愛平、陳輝、朱澤聞。

本部分所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５。

Ⅰ

書

犌犅／犜１５８０５．２—２００８

魚類檢疫方法

第２部分：傳染性造血器官壞死病毒

（犐犎犖犞）

１范圍

ＧＢ／Ｔ１５８０５的本部分規(guī)定了用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（ＲＴＰＣＲ）檢測傳染性造血器官壞死病毒

（ＩＨＮＶ）的方法。

本部分適用于ＩＨＮＶ的分離與鑒定，ＩＨＮ的流行病學(xué)調(diào)查、診斷、疫情監(jiān)測，以及口岸出入境、國內(nèi)

跨區(qū)域移動的檢疫。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過ＧＢ／Ｔ１５８０５的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件，

其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵根據(jù)本部分達成協(xié)議的

各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本部分。

ＧＢ／Ｔ６６８２—１９９２分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法（ｎｅｑＩＳＯ３６９６：１９８７）

ＧＢ／Ｔ１８０８８—２０００出入境動物檢疫采樣

３試劑和材料

３．１ＩＨＮＶ參考毒株：由農(nóng)業(yè)部指定的動物病原微生物菌（毒）種保藏機構(gòu)提供。

３．２水：ＧＢ／Ｔ６６８２—１９９２，一級，并要用焦碳酸二乙酯（ＤＥＰＣ）處理，除去ＤＮＡ和ＲＮＡ酶。

３．３Ｔａｑ酶：－２０℃保存，不要反復(fù)凍融或溫度劇烈變化。

３．４逆轉(zhuǎn)錄酶ＡＭＶ：－２０℃保存，不要反復(fù)凍融或溫度劇烈變化。

３．５ＲＮＡ酶抑制劑（Ｒａｎａｓｅ）：－２０℃保存，不要反復(fù)凍融或溫度劇烈變化。

３．６ｄＮＴＰ（含ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ各１０ｍｍｏＬ／Ｌ）。

３．７引物：所選取的基因為ＩＨＮＶ的Ｎ基因中的片段，兩對引物，濃度為４０μｍｏＬ／Ｌ，Ｆ１和Ｒ１擴增

該基因中的７８６ｂｐ片斷，而Ｆ２和Ｒ２則從７８６ｂｐ片斷中再擴增３２３ｂｐ片斷。

上游引物Ｆ１：５′ＴＣＡＡＧＧＧＧＧＧＡＧＴＣＣＴＣＧＡ３′；

下游引物Ｒ１：５′ＣＡＣＣＧＴＡＣＴＴＴＧＣＴＧＣＴＡＣ３′；

上游引物Ｆ２：５′ＴＴＣＧＣＡＧＡＴＣＣＣＡＡＣＡＡＣＡＡ３′；

下游引物Ｒ２：