GB/T 15805.2-2008魚類檢疫方法第2部分：傳染性造血器官壞死病毒(IHNV)

犐犆犛６５．０２０．３０

犅４１

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜１５８０５．２—２００８

部分代替ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５

魚類檢疫方法

第２部分：傳染性造血器官壞死病毒

（犐犎犖犞）

犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犿犲狋犺狅犱狊狅犳犳犻狊犺—

犘犪狉狋２：犐狀犳犲犮狋犻狅狌狊犺犪犲犿犪狋狅狆狅犻犲狋犻犮狀犲犮狉狅狊犻狊狏犻狉狌狊（犐犎犖犞）

２００８０７３１發(fā)布２００８１１０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書

犌犅／犜１５８０５．２—２００８

前言

ＧＢ／Ｔ１５８０５《魚類檢疫方法》分為下列部分：

———第１部分：傳染性胰臟壞死病毒（ＩＰＮＶ）；

———第２部分：傳染性造血器官壞死病毒（ＩＨＮＶ）；

———第３部分：病毒性出血性敗血癥病毒（ＶＨＳＶ）；

———第４部分：斑點(diǎn)叉尾病毒（ＣＣＶ）；

———第５部分：鯉春病毒血癥病毒（ＳＶＣＶ）；

———第６部分：殺鮭氣單胞菌；

———第７部分：腦粘體蟲；

……

本部分為ＧＢ／Ｔ１５８０５的第２部分。

本部分代替ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５《淡水魚類檢疫方法第一部分》中的第４章。

本部分與ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５的第４章相比主要變化如下：

———增加了用ＰＣＲ方法鑒定ＩＨＮＶ；

———增加了資料性附錄“ＩＨＮ病毒Ｎ基因的全序列（１１７６ｂｐ）”；

———結(jié)構(gòu)格式按ＧＢ／Ｔ１．１—２０００的規(guī)定，作為部分編寫。

本部分的附錄Ａ為規(guī)范性附錄，附錄Ｂ為資料性附錄。

本部分由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。

本部分由全國(guó)水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本部分起草單位：農(nóng)業(yè)部全國(guó)水產(chǎn)技術(shù)推廣總站、中華人民共和國(guó)深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局。

本部分主要起草人：孫喜模、江育林、陳愛平、陳輝、朱澤聞。

本部分所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５。

Ⅰ

書

犌犅／犜１５８０５．２—２００８

魚類檢疫方法

第２部分：傳染性造血器官壞死病毒

（犐犎犖犞）

１范圍

ＧＢ／Ｔ１５８０５的本部分規(guī)定了用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（ＲＴＰＣＲ）檢測(cè)傳染性造血器官壞死病毒

（ＩＨＮＶ）的方法。

本部分適用于ＩＨＮＶ的分離與鑒定，ＩＨＮ的流行病學(xué)調(diào)查、診斷、疫情監(jiān)測(cè)，以及口岸出入境、國(guó)內(nèi)

跨區(qū)域移動(dòng)的檢疫。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過ＧＢ／Ｔ１５８０５的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件，

其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本部分達(dá)成協(xié)議的

各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本部分。

ＧＢ／Ｔ６６８２—１９９２分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（ｎｅｑＩＳＯ３６９６：１９８７）

ＧＢ／Ｔ１８０８８—２０００出入境動(dòng)物檢疫采樣

３試劑和材料

３．１ＩＨＮＶ參考毒株：由農(nóng)業(yè)部指定的動(dòng)物病原微生物菌（毒）種保藏機(jī)構(gòu)提供。

３．２水：ＧＢ／Ｔ６６８２—１９９２，一級(jí)，并要用焦碳酸二乙酯（ＤＥＰＣ）處理，除去ＤＮＡ和ＲＮＡ酶。

３．３Ｔａｑ酶：－２０℃保存，不要反復(fù)凍融或溫度劇烈變化。

３．４逆轉(zhuǎn)錄酶ＡＭＶ：－２０℃保存，不要反復(fù)凍融或溫度劇烈變化。

３．５ＲＮＡ酶抑制劑（Ｒａｎａｓｅ）：－２０℃保存，不要反復(fù)凍融或溫度劇烈變化。

３．６ｄＮＴＰ（含ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ各１０ｍｍｏＬ／Ｌ）。

３．７引物：所選取的基因?yàn)椋桑龋危值模位蛑械钠?，兩?duì)引物，濃度為４０μｍｏＬ／Ｌ，Ｆ１和Ｒ１擴(kuò)增

該基因中的７８６ｂｐ片斷，而Ｆ２和Ｒ２則從７８６ｂｐ片斷中再擴(kuò)增３２３ｂｐ片斷。

上游引物Ｆ１：５′ＴＣＡＡＧＧＧＧＧＧＡＧＴＣＣＴＣＧＡ３′；

下游引物Ｒ１：５′ＣＡＣＣＧＴＡＣＴＴＴＧＣＴＧＣＴＡＣ３′；

上游引物Ｆ２：５′ＴＴＣＧＣＡＧＡＴＣＣＣＡＡＣＡＡＣＡＡ３′；

下游引物Ｒ２：