GB/T 16551-2020豬瘟診斷技術(shù)

ICS11220

B41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T16551—2020

代替

GB/T16551—2008

豬瘟診斷技術(shù)

Diagnostictechniquesforclassicalswinefever

2020-12-14發(fā)布2020-12-14實(shí)施

國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T16551—2020

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范圍

1………………………1

規(guī)范性引用文件

2…………………………1

縮略語(yǔ)

3……………………1

臨床癥狀與病理變化

4……………………2

臨床癥狀

4.1……………2

病理變化

4.2……………2

結(jié)果判定

4.3……………2

樣本的采集保存運(yùn)輸和處理

5、、…………2

器材

5.1…………………2

試劑

5.2…………………2

樣品采集

5.3……………3

保存與運(yùn)輸

5.4…………………………3

樣本處理

5.5……………3

實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)診斷方法

6…………………3

免疫熒光抗體試驗(yàn)

6.1(FAT)…………3

免疫過(guò)氧化物酶試驗(yàn)

6.2(IPT)…………4

豬瘟病毒分離與鑒定

6.3………………5

豬瘟病毒檢測(cè)方法

6.4RT-nPCR……………………6

豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法

6.5RT-PCR……………6

實(shí)驗(yàn)室抗體檢測(cè)方法

7……………………6

豬瘟病毒中和試驗(yàn)

7.1…………………6

豬瘟病毒阻斷抗體檢測(cè)方法

7.2ELISA………………9

豬瘟抗體間接檢測(cè)方法

7.3ELISA……………………9

豬瘟病毒化學(xué)發(fā)光抗體檢測(cè)方法

7.4…………………9

綜合判定

8…………………10

附錄規(guī)范性附錄試劑配制

A()…………11

附錄規(guī)范性附錄豬瘟病毒測(cè)定

B()TCID50…………14

附錄規(guī)范性附錄校準(zhǔn)品的制備

C()……………………15

Ⅰ

GB/T16551—2020

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)代替豬瘟診斷技術(shù)與相比主要技術(shù)變化如下

GB/T16551—2008《》。GB16551—2008,:

修改了范圍見(jiàn)第章年版的第章

———“”(1,20081);

增加了規(guī)范性引用文件見(jiàn)第章

———“”(2);

增加了縮略語(yǔ)見(jiàn)第章

———“”(3);

修改了臨床及病理學(xué)診斷部分并更名為臨床癥狀與病理變化見(jiàn)第章年版的

———“”,“”(4,2008

第章

2);

增加了樣本的采集保存運(yùn)輸和處理部分見(jiàn)第章

———“、、”(5);

修改了病原學(xué)診斷部分并更名為實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)診斷方法見(jiàn)第章年版的第章

———“”,“”(6,20083);

刪除了兔體交互免疫試驗(yàn)部分見(jiàn)年版的

———“”(20083.1);

修改了免疫酶染色試驗(yàn)和直接免疫熒光抗體試驗(yàn)部分更名為免疫熒光抗體試驗(yàn)

———“”“”,“

和免疫過(guò)氧化物酶試驗(yàn)見(jiàn)年版的

(FAT)”“(IPT)”(6.1、6.2,20083.2、3.4);

修改了病毒分離與鑒定試驗(yàn)部分更名為豬瘟病毒分離與鑒定見(jiàn)年版的

———“”,“”(6.3,20083.3);

刪除了豬瘟病毒反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)見(jiàn)年版的

———“(RT-PCR)”(20083.5);

增加了豬瘟病毒檢測(cè)方法和豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法見(jiàn)

———“RT-nPCR”“RT-PCR”(6.4、6.5);

修改了血清學(xué)診斷部分并更名為實(shí)驗(yàn)室抗體檢測(cè)方法見(jiàn)第章年版的第章

———“”,“”(7,20084);

修改了熒光抗體病毒中和試驗(yàn)部分并更名為豬瘟病毒中和試驗(yàn)見(jiàn)年版的

———“”,“”(7.1,2008

4.1);

刪除了豬瘟單抗酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)見(jiàn)年版的

———“”(20084.2);

增加了豬瘟病毒阻斷抗體檢測(cè)方法豬瘟抗體間接檢測(cè)方法和豬瘟病毒

———“ELISA”“ELISA”“

化學(xué)發(fā)光抗體檢測(cè)方法見(jiàn)

”(7.2、7.3、7.4)。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人王琴趙啟祖徐璐王在時(shí)張乾義夏應(yīng)菊范學(xué)政鄒興啟朱元源李翠

:、、、、、、、、、、

丘惠深趙耘徐嫄

、、。

本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為

:

———GB/T16551—2008。

Ⅲ

GB/T16551—2020

引言

豬瘟是由豬瘟病毒感染豬引起的

(Classicalswinefever,CSF)(Classicalswinefevervirus,CSFV)

一種高度接觸性致死性傳染性疾病可造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失和社會(huì)影響被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織

,。(OIE)

列為必須報(bào)告的疫病我國(guó)規(guī)定為一類動(dòng)物疫病

,CSF。

豬包括野豬是本病唯一的自然宿主發(fā)病豬和帶毒豬是本病的傳染源不同年齡性別品種的豬均

,,、、

易感一年四季均可發(fā)生感染豬在發(fā)病前能通過(guò)分泌物和排泄物排毒并持續(xù)整個(gè)病程與感染豬直

,。,。

接接觸是本病傳播的主要方式病毒也可通過(guò)精液胚胎豬肉和泔水等方式間接傳播人其他動(dòng)物如

,、、,、

鼠類和昆蟲(chóng)器具等均可成為重要傳播媒介

、。

是黃病毒科瘟病毒屬的成員之一只有個(gè)血清型個(gè)基因型

CSFV(Flaviviridae)(Pestivirus),1,3,

個(gè)基因亞型不同基因型間有很好的抗原交叉反應(yīng)近年來(lái)由于臨床上出現(xiàn)了持續(xù)性感染

10,。,CSFV

所致的無(wú)典型臨床癥狀和病理變化的慢性和隱性感染形式以及多種疫病混合感染的現(xiàn)象的臨

,,CSF

床診斷和病理學(xué)診斷只能作為初步診斷的依據(jù)對(duì)病原的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是確定病毒感染的主要方

,CSF

法要求診斷技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)更加特異和敏感由于診斷的需求和診斷技術(shù)的發(fā)展已

,。,GB/T16551—2008

經(jīng)不適應(yīng)要求針對(duì)感染普遍存在病毒載量低病毒血癥時(shí)間短等特點(diǎn)最適用于活體動(dòng)物的檢

。CSF、,

測(cè)樣本首先是扁桃體其次為抗凝全血若為病死動(dòng)物可采集扁桃體脾臟腎臟胰臟回腸回盲瓣

,;,、、、、、、

腸系膜淋巴結(jié)和頜下淋巴結(jié)等含毒量較高的臟器進(jìn)行檢測(cè)采用抗原免疫檢測(cè)法免疫熒光抗

。CSFV[

體試驗(yàn)免疫過(guò)氧化物酶試驗(yàn)可檢測(cè)

(Fluorescentantibodytest,FAT)/(Immunoperoxidasetest,IPT)]

感染組織和細(xì)胞中的病毒抗原用于確診如果結(jié)果可疑或者樣本不足可以通過(guò)核酸檢測(cè)技術(shù)確認(rèn)

,;,。

如果樣本量大可采用豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法進(jìn)行初篩陽(yáng)性者采用豬瘟病毒

,RT-PCR,RT-nPCR

檢測(cè)方法和序列測(cè)定進(jìn)行確診和基因分型上述都不能確診的樣本采用經(jīng)典的分離技術(shù)確診

;,CSFV,

分離的病毒可用于進(jìn)一步研究上述三類方法均為推薦的方法

。OIE。

目前實(shí)施疫苗全面免疫是我國(guó)防控的重要手段抗體檢測(cè)主要用于疫苗的

,CSFCSF,CSFVCSF

免疫效果評(píng)價(jià)而對(duì)于一些不實(shí)施免疫疫苗的國(guó)家和地區(qū)來(lái)說(shuō)抗體檢測(cè)可以作為未免疫豬

,CSF,CSF

瘟疫苗豬群感染的診斷依據(jù)而在我國(guó)方法已成為監(jiān)測(cè)免疫后抗體保護(hù)水平評(píng)

CSF。,ELISACSFV、

價(jià)豬群免疫效果的最主要手段根據(jù)檢測(cè)目的不同可選擇不同的方法對(duì)于我國(guó)疫苗采取的全

,,。CSF

面免疫后而開(kāi)展的大規(guī)模普查間接抗體檢測(cè)方法能夠更加真實(shí)地反映中和抗體水平為免疫

,ELISA,

程序制定和抗體水平監(jiān)測(cè)提供可靠的數(shù)據(jù)支持阻斷抗體檢測(cè)方法因其特異性強(qiáng)可用于引種

;ELISA,

的種豬檢測(cè)化學(xué)發(fā)光抗體檢測(cè)方法是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法利用化學(xué)發(fā)光底

;,

物提高檢測(cè)的靈敏度同時(shí)增加檢測(cè)的線性范圍本標(biāo)準(zhǔn)中的化學(xué)發(fā)光抗體檢測(cè)方法中采用了

,。CSFV

抗體的校準(zhǔn)品并在檢測(cè)中繪制校準(zhǔn)曲線可以使抗體檢測(cè)結(jié)果相對(duì)定量另外采用該方法進(jìn)

CSFV,,。,

行檢測(cè)能夠大大縮短檢測(cè)時(shí)間適應(yīng)于田間推廣使用最終的抗體確認(rèn)可采用金標(biāo)準(zhǔn)方法病毒中和

,,?！啊?/p>

試驗(yàn)方法和兩類方法均為推薦的方法也是國(guó)際

(Virusneutralizationtest,VNT)。ELISAVNTOIE,

貿(mào)易指定試驗(yàn)

。

本標(biāo)準(zhǔn)中涉及了種病原和種抗體的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法均可用于病原和抗體的

5CSF4CSFV,CSF

定性檢測(cè)使用者可根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)條件能力水平以及待檢樣本的實(shí)際情況選擇合適的方法

。、。

本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)提請(qǐng)注意聲明符合本文件時(shí)可能涉及和與蛋白表達(dá)及純化

,,7.27.3CSFVE2

相關(guān)的專利的使用

。

本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)對(duì)于該專利的真實(shí)性有效性和范圍無(wú)任何立場(chǎng)

、。

該專利持有人已向本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)保證他愿意同任何申請(qǐng)人在合理且無(wú)歧視的條款和條件下

,,

Ⅳ

GB/T16551—2020

就專利授權(quán)許可進(jìn)行談判該專利持有人的聲明已在本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)備案相關(guān)信息可以通過(guò)以下

。。

聯(lián)系方式獲得

:

專利持有人姓名中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所

:。

地址北京中關(guān)村南大街號(hào)

:8。

請(qǐng)注意除上述專利外本文件的某些內(nèi)容仍可能涉及專利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專

,。

利的責(zé)任

。

Ⅴ

GB/T16551—2020

豬瘟診斷技術(shù)

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬瘟的臨床癥狀與病理變化樣本的采集保存運(yùn)輸和處理實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)診斷方法

,、、,

以及實(shí)驗(yàn)室抗體檢測(cè)方法等

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬家豬野豬的豬瘟診斷

(、)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注明日期的引用文件僅注日期的版本適用于本

。,

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB19489

豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法

GB/T27540RT-PCR

豬瘟病毒阻斷抗體檢測(cè)方法

GB/T34729—2017