GB/T 18090-2000豬繁殖和呼吸綜合癥診斷方法

TCS.65.020.30B41中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18090—2000豬繁殖和呼吸綜合癥診斷方法Diagnosticmethodsofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome2000-04-26發(fā)布2000-10-01實(shí)施國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

GB/T18090—2000S前言·1圍2診斷方法的種類和選用病毒的分離與鑒定·4免疫過(guò)氧化物酶單層試驗(yàn)(IPMA)5間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）…6間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（間接ELISA）……………·血清中和試驗(yàn)（SN)…8綜合判定·附錄A(標(biāo)準(zhǔn)的附錄）血清學(xué)試驗(yàn)中試劑的配制附錄B(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)豬肺泡巨喔細(xì)胞(PAM)制備、鑒定、保存與復(fù)蘇附錄C（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）繁殖和呼吸綜合癥病毒TCID.測(cè)定

GB/T18090—2000豬繁殖和呼吸綜合癥(簡(jiǎn)稱PRRS)是由PRRS病毒引起的一種接觸傳染性疾病。各種年齡的豬均易感染。遷振母豬感染后可引起流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎及弱胎·仔豬可發(fā)生呼吸障礙和高病死率，其他豬常呈隱性感染或僅出現(xiàn)輕度的呼吸道癥狀。PRRS病毒有歐洲型和美洲型兩種主要抗原型，分別以LV和VR-2332為代表株,型間具有明顯的抗原交叉反應(yīng)性。據(jù)現(xiàn)有資料.我國(guó)流行的毒株為美洲型。本病幾乎發(fā)生于世界各養(yǎng)豬國(guó)家.并于九十年代中期傳入我國(guó)。由于其對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的嚴(yán)重威脅性.國(guó)際獸疫局(1996)己將本病列為B類傳染病。大連動(dòng)植物檢疫局在國(guó)內(nèi)率先開(kāi)展了PRRS的研究工作·建立了具有與國(guó)際同等水平的病毒分離鑒定、間接免疫熒光試驗(yàn)和血清中和試驗(yàn)等診斷方法。其他單位也相繼建立了多種酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)本標(biāo)準(zhǔn)是在綜合我國(guó)科研成果的基礎(chǔ)上,參照國(guó)際獸疫局(OIE)編寫的《哺乳動(dòng)物、禽和蜜蜂A和B類疾病診斷試驗(yàn)和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)》第三版，1996)編寫的。其技術(shù)內(nèi)容與〇IE所推薦的基本一致。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B和附錄C都是標(biāo)準(zhǔn)的附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國(guó)大連動(dòng)植物檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：孫穎杰、蘇永生、潘鳳城、孫延峰、簡(jiǎn)中友

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)豬繁殖和呼吸綜合癥診斷方法GB/T18090-2000Diagnosticmethodsofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬繁殖和呼吸綜合癥(PRRS)的診斷方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬繁殖和呼吸綜合癥的診斷診斷方法的種類和選用PRRS的診斷方法有多種。依據(jù)臨床癥狀和病理變化只可作出初步診斷，確診必須依靠實(shí)驗(yàn)室檢查。目前已建立和應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)有病毒的分離與鑒定、免疫過(guò)氧化物酶單層試驗(yàn)(IPMA)、間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(間接ELISA)和血清中和試驗(yàn)(SN)等。病毒的分離與鑒定多用于急性病例的確診和新疫區(qū)的確定。其余4種方法主要用于檢測(cè)PRRS病毒抗體。IPMA、IFA和間接ELISA三者特異性相似,但以間接ELISA的敏感性最高。應(yīng)用這三種方法一般不易區(qū)別病毒的抗原類型，故多適用于確定病性。SN反應(yīng)具有明顯的抗原型別差異,因此,它既適用于確定病性，也適用于鑒定病毒的抗原類型。中和抗體出現(xiàn)最晚，不適合于早期診斷。本標(biāo)準(zhǔn)指定上述五種實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)為我國(guó)進(jìn)出境和國(guó)內(nèi)生豬PRRS的診斷方法.保證了我國(guó)對(duì)PRRS的診斷與國(guó)外的一致性。在實(shí)際應(yīng)用時(shí)，可根據(jù)需要和條件,從中選用1～2種方法即可。3病毒的分離與鑒定3.1材料準(zhǔn)備3.1.1器材：96孔細(xì)胞培養(yǎng)板、微量移液器、恒溫水浴箱、二氧化碳(CO.)恒溫箱、普通冰箱及低溫冰箱、離心機(jī)及離心管、組織研磨器、孔徑0.2m的微孔濾膜、普通光學(xué)顯微鏡。3.1.2試劑：RPMI1640營(yíng)養(yǎng)液、特牛血清、青霉素(10"IU/mL.)與鏈霉素(10"g/mL)溶液、7.5%碳酸氫鈉溶液等。3.1.3細(xì)胞培養(yǎng)物：豬原代肺泡巨喔細(xì)胞培養(yǎng)物（PAM)或MARC-145或HS.H細(xì)胞。PAM由無(wú)PRRS豬獲取.并經(jīng)批次檢驗(yàn)合格，制備和檢驗(yàn)方法見(jiàn)附錄B。MARC-145或HSH細(xì)胞由國(guó)家指定單位提供。3.1.4樣品3.1.4.1樣品的采取和送檢;在發(fā)病早期，無(wú)菌地采取病豬的血清或腹水。對(duì)病死豬（如流產(chǎn)的死胎)和撲殺豬(如弱胎豬)應(yīng)立即采取肺、扁桃體和牌等組織數(shù)小塊.置冰瓶?jī)?nèi)立即送檢。不能立即檢查者，應(yīng)放－25℃～－30C冰箱中，或加50%甘油生理鹽水.4C保存送檢。3.1.4.2樣品的處理：血清和腹水可直接使用。肺、牌和扁桃體等組織可單獨(dú)使用.也可混合后使用。各組織剪碎后研磨成棚狀·加入RPMI1640營(yíng)養(yǎng)液·制成10%懸液.3000×g離