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選修三《現(xiàn)代生物技術(shù)》基因工程(2019浙江卷)1.天然的玫瑰沒有藍(lán)色花,這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B,而開藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?,F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰,下列操作正確的是提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA,再擴(kuò)增基因B利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因B利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌,然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞(2019四川卷)2、將大腸桿菌的質(zhì)粒連接上人生長(zhǎng)激素的基因后,重新置入大腸桿菌的細(xì)胞內(nèi),通過(guò)發(fā)酵就能大量生產(chǎn)人生長(zhǎng)激素。下列敘述正確的是A、發(fā)酵產(chǎn)生的生長(zhǎng)激素屬于大腸桿菌的初級(jí)代謝產(chǎn)物B、大腸桿菌獲得的能產(chǎn)生人生長(zhǎng)激素的變異可以遺傳C、大腸桿菌質(zhì)粒標(biāo)記基因中腺嘌吟與尿嘧啶含量相等D、生長(zhǎng)激素基因在轉(zhuǎn)錄時(shí)需要解旋酶和DNA連接酶(2019江蘇卷)3?圖1表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度(bp即堿基對(duì))和部分堿基序列,圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?,F(xiàn)有MspI、BamHI、MboI、SmaI4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C/CGG、G/GATCC、問題:(GATC、CCC/GGG。請(qǐng)回答下列Ir11[111i>miIiii;111i>mi'iiii'i*"111111111GGATCCqdCGGGCCCGGGGGATCCCCTAGG(iGGCCCI..Jl;liI\..11.1lrilIIIITIIb芍亍4如”_山i—^79匕bpn—二血bp,』CCCGGGGGGCCCCCTAGG(1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由連接。(2)若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段,產(chǎn)生的末端是..末端,其產(chǎn)物長(zhǎng)度為若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T—A堿基對(duì)替換,那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段,用限制酶SmaI完全切割,產(chǎn)物中共有種不同DNA片段。若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行,形成重組質(zhì)粒,那么應(yīng)選用的限制酶是。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后,為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌,一般需要用添加-1-ByV_First
的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測(cè),部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá),其最可能的原因是。(2019?天津卷,4、生物分子間的特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于生命科學(xué)研究。以下實(shí)例為體外處理“蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合體”獲得DNA片段信息的過(guò)程圖。ATGCTTC-TACGAAGATGCTTC-TACGAAG據(jù)圖回答:""過(guò)程①酶作用的部位是鍵,此過(guò)程只發(fā)生在非結(jié)合區(qū)DNA,過(guò)程②酶作用的部位是鍵。①、②兩過(guò)程利用了酶的特性。若將得到的DNA片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒,需要過(guò)程③的測(cè)序結(jié)果與酶的識(shí)別序列進(jìn)行對(duì)比,已確定選用何種酶。如果復(fù)合體中的蛋白質(zhì)為RNA酶聚合,則其識(shí)別、結(jié)合DNA序列位基因的—以下研究利用了生物分子間的特異性結(jié)合的有(多選)A、分離得到核糖體,用蛋白酶酶解后提rRNAB、用無(wú)水乙醇處理菠菜葉片,提取葉綠體基粒膜上的光合色素通過(guò)分子雜交手段,用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進(jìn)行染色體定位將抑制成熟基因?qū)敕?,其mRNA與催化成熟酶基因的mRNA互補(bǔ)結(jié)合,終止后者翻譯,延遲果實(shí)成熟。5、圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡(jiǎn)圖,小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點(diǎn),ampR為青霉素抗性基因,tctR為四環(huán)素抗性基因,P為啟動(dòng)因子,T為終止子,ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。(1)將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用EcoRI酶切,酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后,其中由兩個(gè)DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有、、三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組質(zhì)粒,需要對(duì)這些連接產(chǎn)-2-ByV_First
TOC\o"1-5"\h\z物進(jìn)行。用上述3種連接產(chǎn)物與無(wú)任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中,能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是;若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中,能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是。目的基因表達(dá)時(shí),RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是其合成的產(chǎn)物是。在上述實(shí)驗(yàn)中,為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接,酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是。轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過(guò)程如圖所示。質(zhì)粒上有PstI、SmaI、EcoRI、ApaI等四種限制酶切割位點(diǎn)。請(qǐng)回答:構(gòu)建含抗病基因的表達(dá)載體A時(shí),應(yīng)選用限制酶,對(duì)進(jìn)行切割。培養(yǎng)板中的卡那霉素會(huì)抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng),欲利用該培養(yǎng)篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞,應(yīng)使基因表達(dá)載體A中含有,作為標(biāo)記基因。香蕉組織細(xì)胞具有,因此,可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細(xì)胞培育成植株。圖中①、②依次表示組織培養(yǎng)過(guò)程中香蕉組織細(xì)胞的.。為擴(kuò)大可耕地面積,增加糧食產(chǎn)量,黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。我國(guó)科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。獲得耐鹽基因后,構(gòu)建重組DNA耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。獲得耐鹽基因后,構(gòu)建重組DNA分h用的限制性內(nèi)切酶作用于圖中的DNA連接酶作用于處。(填“a”或丁將重組DNA分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功,q?子所q■!9-e931LrP1V■11J處,*cAtcGTc亍“b”)a的常法。既要用放射性同位素標(biāo)記的作探針進(jìn)行分-3-ByV_First
子雜交檢測(cè),又要用方法從個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中,卡那霉素抗性基因(kan)常作為標(biāo)記基因,只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。下圖為獲得抗蟲棉的技術(shù)流程??瓜x基因含kan質(zhì)粒A構(gòu)建重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌培養(yǎng)選擇含重組質(zhì)粒土壤農(nóng)桿菌抗蟲基因含kan質(zhì)粒A構(gòu)建重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌培養(yǎng)選擇含重組質(zhì)粒土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)基因抗蟲植株檢:則再生植株分化愈傷組織誘導(dǎo)選擇離體棉花葉片組織請(qǐng)據(jù)圖回答:A過(guò)程需要的酶有。B過(guò)程及其結(jié)果體現(xiàn)了質(zhì)粒作為運(yùn)載體必須具備的兩個(gè)條件C過(guò)程的培養(yǎng)基除含有必要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、瓊脂和激素外,還必須加入如果利用DNA分子雜交原理對(duì)再生植株進(jìn)行檢測(cè),D過(guò)程應(yīng)該用'乍為探針??茖W(xué)家發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株的卡那霉素抗性基因的傳遞符合孟德爾遺傳規(guī)律。將轉(zhuǎn)基因植株與雜交,其后代中抗卡那霉素型與卡那霉素敏感型的數(shù)量比為1:1。若該轉(zhuǎn)基因植株自交,則其后代中抗卡那霉素型與卡那霉素敏感型的數(shù)量比為___。若將該轉(zhuǎn)基因植株的花藥在卡那霉素培養(yǎng)基上作離體培養(yǎng),則獲得的再生植株群體中抗卡那霉素型植株占%。以重組DNA技術(shù)為核心的基因工程正在改變著人類的生活。請(qǐng)回答下列問題。TOC\o"1-5"\h\z獲得目的基因的方法通常包括和。切割和連接DNA分子所使用的酶分別和。運(yùn)送目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體一般選用病毒,后者的形狀成。由于重組DNA分子成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的頻率,所以在轉(zhuǎn)化后通常需要進(jìn)行—操作。
將人胰島素基因分別導(dǎo)入大腸桿菌與酵母菌,從兩者中生產(chǎn)的胰島素在功能和序列上是是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。相同的。10、(2011年江蘇卷)33.(8分)請(qǐng)回答基因工程方面的有關(guān)問題:(1)相同的。10、(2011年江蘇卷)33.(8分)請(qǐng)回答基因工程方面的有關(guān)問題:(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似(如右圖所示)。圖中引物為單鏈DNA片段,它-4-第_輪循環(huán)<iiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiii引物B[」I[111」ILI變性退火延伸irstTOC\o"1-5"\h\z從理論上推測(cè),第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占的比例為。在第輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段。(2)設(shè)計(jì)引物是PCR技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組引物(只標(biāo)注了部分堿基序列)都不合理(如下圖),請(qǐng)分別說(shuō)明理由。第1組:;第2組:。(3)PCR反應(yīng)體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶,下面的表達(dá)式不能正確反映DNA聚合酶的功能,這是因?yàn)?。⑷用限制酶EcoRV、Mbol單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒,得到的DNA片段長(zhǎng)度如下圖(1kb即1000個(gè)堿基對(duì)),請(qǐng)?jiān)诖痤}卡的指定位置畫出質(zhì)粒上EcoRV、Mbol的切割位點(diǎn)。屁oRVMbol2.5kb14kb11.5kb屁oRV+Mbo\屁oRVMbol2.5kb14kb11.5kb屁oRV+Mbo\r2.5kb5.5kb6kb11、(11年北京卷)T-DNA可能隨機(jī)插入植物基因組內(nèi),導(dǎo)致被插入基因發(fā)生突變。用此方法誘導(dǎo)擬南芥產(chǎn)生突變體的過(guò)程如下:種植野生型擬南芥,待植物形成花蕾時(shí),將■11、(11年北京卷)T-DNA可能隨機(jī)插入植物基因組內(nèi),導(dǎo)致被插入基因發(fā)生突變。用此方法誘導(dǎo)擬南芥產(chǎn)生突變體的過(guò)程如下:種植野生型擬南芥,待植物形成花蕾時(shí),將■地上部分浸入農(nóng)桿菌(其中的T-DNA上帶有抗除草劑基因)懸浮液中以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。在適宜條件下培養(yǎng),收獲種子(稱為、代)
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