雜環(huán)類藥物的分析

第八章雜環(huán)類藥物的分析第一節(jié)吡啶類藥物第二節(jié)喹啉類藥物第三節(jié)托烷類藥物第四節(jié)吩噻嗪類藥物

第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物第六節(jié)含量測定返回主目錄基本要求練習(xí)與思考

一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)

硫酸阿托品氫溴酸東莨菪堿（atropinesulfate）(copolaminehydrobromide）第三節(jié)托烷類藥物（二）主要化學(xué)性質(zhì)1.水解性本類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有酯的結(jié)構(gòu)，易水解。以阿托品為例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)。2.堿性

阿托品和東莨菪堿的結(jié)構(gòu)中，五元脂環(huán)上含有叔胺氮原子,具有較強(qiáng)的堿性,易與酸成鹽。如阿托品的pKb1為4.35。3.旋光性氫溴酸東莨菪堿結(jié)構(gòu)中含有不對(duì)稱碳原子，呈左旋體，比旋度為-24ο至-27ο，而阿托品結(jié)構(gòu)中雖然也含有不對(duì)稱碳原子，但因外消旋化而為消旋體，無旋光性。利用此性質(zhì)可區(qū)別阿托品與東莨菪堿。

4.生物堿沉淀反應(yīng)本類藥物具有堿性，可與生物堿沉淀劑生成沉淀。如：阿托品+氯化汞醇試液黃色沉淀東莨菪堿+氯化汞醇試液白色沉淀生物堿水解莨菪酸發(fā)煙硝酸三硝基衍生物(黃色)KOH（C2H5OH）深紫色的醌型產(chǎn)物5.Vitali反應(yīng)《中國藥典》2015版二、鑒別試驗(yàn)1、紅外分光光度法2、Vitali反應(yīng)3、硫酸鹽（或氫溴酸鹽）1、紅外吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照?qǐng)D譜一致2、顯托烷類鑒別反應(yīng)3、顯硫酸鹽（硫酸阿托品）或氫溴酸鹽（氫溴酸山莨菪堿鹽）的鑒別反應(yīng)三、雜質(zhì)檢查（二）檢查方法（一）檢查項(xiàng)目按照中國藥典要求檢查酸度、其他生物堿、干燥失重等中國藥典（2015版）對(duì)含量測定有相關(guān)規(guī)定

如：原料非水滴定法制劑紫外-可見分光光度法（波長420nm）四、含量測定第四節(jié)吩噻嗪類藥物一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與典型藥物奮乃靜癸氟奮乃靜鹽酸氟奮乃靜鹽酸三氟拉嗪（二）主要化學(xué)性質(zhì)1.紫外和紅外吸收光譜特征硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)л系統(tǒng)

三個(gè)最大吸收峰別在：205nm、254nm、300nm由于2位、10位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。

硫氮雜蒽母核的硫?yàn)槎r(jià)，易氧化為砜和亞砜，其紫外吸收光譜有明顯不同，它們具有四個(gè)峰值。另外，取代基R和R’的不同，則可產(chǎn)生不同的紅外光譜2.還原性二價(jià)硫易氧化，遇不同氧化劑如硫酸、硝酸、三氯化鐵試液及過氧化氫等，隨著取代基的不同，而呈不同的顏色。

3.與金屬離子絡(luò)合呈色

本類藥物中未被氧化的硫，可與鈀離子形成配位化合物，其氧化產(chǎn)物則無此反應(yīng)。此性質(zhì)可用于鑒別和含量測定，并具有專屬性，可消除氧化產(chǎn)物的干擾。4.弱堿性母核上N原子的堿性極弱，側(cè)鏈N原子的堿性較強(qiáng)，易于酸成鹽，可用非水滴定法測定含量。

（一）紫外特征吸收和紅外吸收光譜

本類藥物可用UV和IR鑒別，Ch.P中UV鑒別實(shí)例如下：

藥物名稱溶劑濃度（μg/ml）λmax（nm）AE1%1cm鹽酸氯丙嗪鹽酸（9→1000）52540.46915306——鹽酸異丙嗪鹽酸（0.01mol/L）6249—883~937奮乃靜無水乙醇72580.65—癸氟奮乃靜乙醇10260——鹽酸氟奮乃靜鹽酸（9→1000）10255—553~593鹽酸三氟拉嗪鹽酸（1→20）10256—630鹽酸硫利達(dá)嗪乙醇8264與315——二、鑒別試驗(yàn)

（二）顯色反應(yīng)

1.與氧化劑的顯色反應(yīng)

藥物名稱硫酸硝酸過氧化氫

鹽酸氯丙嗪顯紅色,漸變淡黃色—鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色,放置生成紅色沉淀,加熱即溶解,后顏色漸變深溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色奮乃靜——顯深紅色;放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色,溫?zé)帷笞兂杉t褐色鹽酸三氟拉嗪—生成微帶紅色的白色沉淀;放—置后,紅色變深,加熱后變黃色

鹽酸硫利達(dá)嗪顯藍(lán)色—

—

2.與鈀離子絡(luò)合顯色反應(yīng)

利用分子結(jié)構(gòu)中未被氧化的硫與金屬鈀離子絡(luò)合形成有色絡(luò)合物，如與癸氟奮乃靜形成紅色絡(luò)合物。（一）檢查項(xiàng)目

鹽酸氯丙嗪和鹽酸異丙嗪的檢查項(xiàng)目基本相同三、雜質(zhì)檢查（二）檢查方法因雜質(zhì)對(duì)照不易獲得，故采用自身稀釋對(duì)照的HPLC注意事項(xiàng)

避光操作，現(xiàn)用現(xiàn)配四、含量測定返回原料藥制劑鹽酸異丙嗪非水滴定法HPLC鹽酸氯丙嗪非水滴定法紫外-可見分光光度法第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥物NNClH3CO地西泮第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥物NNClH3CO地西泮123456789阿普唑侖奧沙西泮氯氮卓NNNCH3OClH一、主要性質(zhì)1、弱堿性七元雜環(huán)上的N原子具有強(qiáng)堿性，但苯基的取代使堿性降低。因此采用非水滴定法測定含量。2、水解性七元雜環(huán)上的N原子具有強(qiáng)堿性，但在強(qiáng)酸性溶液中可水解。一、主要性質(zhì)3、紫外吸收特征2個(gè)苯環(huán)、1個(gè)七元雜環(huán)可形成較長的共軛體系，因而有紫外吸收，可用于鑒別和含量測定?？偨Y(jié)弱堿性（雜環(huán)上具有N原子）水解性(強(qiáng)酸條件下N-C=O)紫外吸收特征（共軛體系）二、鑒別試驗(yàn)中國藥典規(guī)定方法1、硫酸-熒光反應(yīng)（溶于硫酸，紫外光下顯黃綠色）2、紫外-可見分光光度法（共軛體系）3、紅外分光光度法4、有機(jī)氯化物（7位上接了CL原子）1.硫酸-熒光反應(yīng)

本類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，顯不同顏色的熒光。例如：

地西泮黃綠色

黃色氯氮卓黃色

紫色艾司唑侖+H2SO4亮綠色+稀硫酸天藍(lán)色硝西泮淡藍(lán)色

藍(lán)綠色奧沙西泮淡黃綠色補(bǔ)充

氯化銅焰色反應(yīng)

分子結(jié)構(gòu)中含有氯元素的藥物，在銅網(wǎng)上燃燒發(fā)出CuCl2綠色火焰。此反應(yīng)藥典未用于本類藥物鑒別。三、含量測定原料藥非水滴定法制劑HPLC降解產(chǎn)物的檢查

地西泮注射液列入此項(xiàng)檢查，因本品在貯藏過程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等雜質(zhì)。采用HPLC法進(jìn)行檢查。返回小知識(shí)含量測定(一)非水溶液滴定法應(yīng)用實(shí)例

1.游離弱堿性藥物測定

異煙肼、尼可剎米、地西泮及氯氮卓等?；谶@些藥物分子結(jié)構(gòu)中氮原子的弱堿性，可用非水溶液滴定法直接測定其含量。由于這些藥物的堿性強(qiáng)弱不同，測定時(shí)所采用溶劑、指示劑及其指示終點(diǎn)的方法也不盡相同。

藥物名稱取樣量(g)溶劑指示劑終點(diǎn)顏色

尼可剎米0.15冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍(lán)綠色地西泮0.2冰醋酸、酸酐10ml結(jié)晶紫綠色氯氮卓0.3冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍(lán)色（二）鈀離子比色法優(yōu)點(diǎn)：鈀離子比色法可選擇性地用于未被氧化的吩噻嗪類藥物的測定。max~500nm吩噻嗪類藥物

+Pd2+pH2±0.1紅色絡(luò)合物在max處測定A，以對(duì)照法定量（一）直接分光光度法

供試品不需提取分離，溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲屑纯蛇M(jìn)行含量測定。

1.奧沙西泮原料的測定在229nm，采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法測定。

2.鹽酸異丙嗪片的測定在249nm，采用E1cm1%＝910測定。

3.鹽酸異丙嗪注射液的測定

測定波長的選擇：注射液處方加VC作抗氧劑，可還原異丙嗪紅色氧化產(chǎn)物，從而防止異丙嗪氧化變色。VC在鹽酸異丙嗪最大吸收波長249nm處有吸收，干擾注測定。因此選用299nm波長測定鹽酸異丙嗪注射液的含量時(shí)，維生素C在此波長處則不產(chǎn)生干擾,但E1cm1%＝108。三、紫外分光光度法(二)萃取后分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液鹽酸氯丙嗪氨水堿化氯丙嗪乙醚提取乙醚層鹽酸提取鹽酸氯丙嗪max254±1nm處測定A，E1cm1%＝915（三）萃取-雙波長分光光度法

本法是USP（24）收載的方法，用于鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定，主要用來校正樣品中氧化物對(duì)測定的干擾。測定原理利用氯丙嗪的最λmax為254nm，其氧化物在此波長也有吸收，同時(shí)在277nm氧化物也有吸收，且其A254=A277.而氯丙嗪在此波長無吸收。因此，可由兩波長處測得△A計(jì)算氯丙嗪含量。四、氣相色譜法（一）硫酸阿托品片的含量測定

USP(24)采用的方法。以后馬托品作為內(nèi)標(biāo),采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法。

測定方法

(1)內(nèi)標(biāo)溶液的制備：(2)供試品溶液與對(duì)照品溶液的制備：(3)色譜系統(tǒng)：色譜柱為1.8m×2mm的玻璃柱；擔(dān)體為與碳酸鈉混合于900℃熔融后，經(jīng)酸和堿處理的硅烷化藻土；固定相為3%的OV-17（即50%甲基，50%苯基的聚硅氧烷）；載氣為氮?dú)?，流速?5ml/min；檢測器為氫火焰離子化檢測器。

(4)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液1μl，進(jìn)樣6次，所得的對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)峰面積之比的RSD不大于2.0%；對(duì)照品峰和內(nèi)標(biāo)峰的分辨率Rs＜4.0；T＜2.0。

(5)測定方法：取供試液和對(duì)照液各進(jìn)樣1μl，記錄各峰面積，用下式計(jì)算所取片粉中硫酸阿托品[(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O]的重量:[(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O]的重(mg)=(694.85/676.83)(W/10)(Ru/Rs)（二）人血漿中硝苯地平的氣相色譜法測定及藥代動(dòng)力學(xué)研究

(一)反相高效液相色譜法

1.地西泮注射液的反相HPLC法

地西泮注射液曾用萃取后分光光度法測定含量，因萃取不完全，及有關(guān)物質(zhì)和分解產(chǎn)物等對(duì)測定有干擾，故中國藥典自1995版改用HPLC法。此法操作簡便，可消除干擾。注射液中地西泮的平均回收率為99.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%。

(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：ODSC18；流動(dòng)相為甲醇-水(70:30)；檢測波長為254nm。n＞1500，R＞1.5。

(2)內(nèi)標(biāo)溶液的制備：取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。五、高效液相色譜法

(3)測定方法：取地西泮對(duì)照品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。吸取5μl～10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖；另取本品適量(約相當(dāng)于地西泮5mg），同法測定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。2.高效液相色譜法測定硫酸阿托品片的含量

色譜條件:色譜柱為SpherisorbC185μm流動(dòng)相為0.025mol/L磷酸(三乙胺調(diào)pH為3.0)-乙腈(80:20)；柱溫為30℃；檢測波長為215nm；n=5880。

線性關(guān)系：精取硫酸阿托品適量，用流動(dòng)相制備成22.4、44.8、67.2、89.6、112μg/ml溶液，進(jìn)樣3次，每次20μl，所得峰面積與濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，呈良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)r=0.9995，其線性范圍為22.4μg/ml～112μg/ml。

回收率試驗(yàn)：

樣品測定：

3.高效液相色譜法測定血漿中地西泮濃度

本法以艾司唑侖為內(nèi)標(biāo)，用氯仿-異丙醇混合溶劑提取，氮?dú)饬鞔蹈?，用甲醇溶解后進(jìn)樣，測定了剖腹產(chǎn)產(chǎn)婦及胎兒血漿中地西泮濃度。其回收率在92.86%～98.77%之間；日內(nèi)與日間精密度（RSD）分別為1.61%～3.00%和2.18%～5.18%。該法具有