地中海貧血基因檢測

地中海貧血基因檢測二、

發(fā)病機理三、

結(jié)果解讀一、

地中海貧血簡介一、地中海貧血簡介地貧患兒什么是地中海貧血？地中海貧血，又稱海洋性貧血，是由于血紅蛋白的珠蛋白肽鏈基因突變或缺失，使某種珠蛋白肽鏈合成障礙而致的一種遺傳性慢性溶血性貧血。一種常染色體隱性遺傳病。其中α珠蛋白基因位于16號染色體上；β珠蛋白基因位于11號染色體上。地中海貧血地域分布

全球約有4.5%的人攜帶有血紅蛋白病致病基因。中國南方高發(fā)地區(qū)人群攜帶率最高，可達到24%。地中海貧血的危害

貧血骨骼畸形多臟器損傷

組織供氧不足，功能衰退，危機生命

促進機體造血組織缺氧損傷

消化系統(tǒng)過度吸收鐵

鐵過度沉淀引起這些器官功能衰竭而死亡

骨髓過度造血骨板變薄，骨質(zhì)疏松

骨骼畸形，特殊面容地中海貧血分類地中海貧血α點突變/缺失β地中海貧血基因輕型β－地中海貧血、中間型β－地中海貧血、重型β－海貧血遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)癥α地中海貧血基因靜止型、標準型、HbH病、Bart’s胎兒水腫綜合征β點突變地中海貧血遺傳模式圖二、

地中海貧血發(fā)病機理血紅蛋白（Hb）組成HbA(a2β2)：出生后逐漸升高至96.5-97.5%；HbA2(a2δ2)：出生后逐漸升高至2.5-3.5%；HbF(a2γ2)：是新生兒主要血紅蛋白（55%-85%），以后慢慢降低，2周歲＜2%，成人＜1%。α地貧發(fā)病機理α地貧1.重型α地中海貧血是α0地中海貧血的純合子狀態(tài)，其4個α珠蛋白基因均缺失或缺陷，以致完全無α鏈生成，因而含有α鏈的HbA、HbA2和HbF的合成均減少?；颊咴谔浩诩窗l(fā)生大量γ鏈合成γ4(HbBart's)。HbBart's對氧的親合力極高，造成組織缺氧而引起胎兒水腫綜合征。中間型α地中海貧血是α0和α+地中海貧血的雜合子狀態(tài)，是由3個α珠蛋白基因缺失或缺陷所造成，患者僅能合成少量α鏈，其多余的β鏈即合成HbH(β4)。HbH對氧親合力較高，又是一種不穩(wěn)定血紅蛋白，容易在紅細胞內(nèi)變性沉淀而形成包涵體，造成紅細胞膜僵硬而使紅細胞壽命縮短。2.輕型α地中海貧血是α+地中海貧血純合子或α0地中海貧血雜合子狀態(tài)，它僅有2個α珠蛋白基因缺失或缺陷，故有相當數(shù)量的α鏈合成，病理生理改變輕微。3.靜止型α地中海貧血是α+地中海貧血雜合子狀態(tài)，它僅有一個α基因缺失或缺陷，α鏈的合成略為減少，病理生理改變非常輕微。β地貧發(fā)病機理β地貧β地中海貧血的發(fā)生主要是由于基因的點突變，少數(shù)為基因缺失?；蛉笔Ш陀行c突變可致β鏈的生成完全受抑制，稱為β0地中海貧血;有些點突變使β鏈的生成部分受抑制，則稱為β+地中海貧血。1.重型β地中海貧血是β0或β+地中海貧血的純合子或β0與β+地中海貧血雙重雜合子，因為β鏈生成完全或幾乎完全受到抑制，以致含有β鏈的HbA合成減少或消失，而多余的α鏈則與γ鏈結(jié)合而成為HbF(a2γ2)，使HbF明顯增加。由于HbF的氧親合力高，致患者組織缺氧。過剩的α鏈沉積于幼紅細胞和紅細胞中，形成α鏈包涵體附著于紅細胞膜上而使其變僵硬，在骨髓內(nèi)大多被破壞而導致“無效造血”。部分含有包涵體的紅細胞雖能成熟并被釋放至外周血，但當它們通過微循環(huán)時就容易被破壞;這種包涵體還影響紅細胞膜的通透性，從而導致紅細胞的壽命縮短。由于以上原因，患兒在臨床上呈慢性溶血性貧血。貧血和缺氧刺激紅細胞生成素的分泌量增加，促使骨髓增加造血，因而引起骨骼的改變。貧血使腸道對鐵的吸收增加，加上在治療過程中的反復輸血，使鐵在組織中大量貯存，導致含鐵血黃素沉著癥。2.輕型地中海貧血是β0或β+地中海貧血的雜合子狀態(tài)，β鏈的合成僅輕度減少，所以病理生理改變極輕微。3.中間型β地中海貧血是一些β+地中海貧血的雙重雜合子和某些地中海貧血的變異型的純合子，或兩種不同變異型珠蛋白生成障礙性貧血的雙重雜合子狀態(tài)，其病理生理改變介于重型和輕型之間。三、結(jié)果解讀地中海貧血篩查和檢測一線篩查指標血液學表型分析

血常規(guī)

血紅蛋白電泳紅細胞滲透脆性試驗確診指標基于DNA分析

地貧基因分型

地貧基因測序地中海貧血血液學分析指標-地貧-地貧/-地貧-地貧MCV(80~100fL)<80<8080

80MCH(27~32pg)<27<27

2727HbA2(2.5~3.5%)<2.5>3.5>3.5<3.0HbF(<1.0%)<1.01-3~15-35HbVariantsHbCS,HbQSHbE──亨氏小體偶見~++++─偶見─α-地貧基因檢測a11﹒-a3.7-a4.2--SEAa2a1a2CS

CD142TAACAA(終止密碼子Gln谷氨酰胺)QSCD125CTGCCG(LeuPro)

WS

CD122CACCAG(HisGln）﹒-α3.7

、-a4.2、--SEA三種缺失類型覆蓋了中國人群缺失型的95%；CS

、QS

、WS三種點突變覆蓋了中國人群點突變類型的98%。α-地貧基因檢測電泳條帶與基因型的對應(yīng)關(guān)系基因型條帶大小αα1.7kb-α3.72.0kb-α4.21.4kb--SEA1.2kbα-地貧基因型β-地中海貧血主要是基因點變突為主。兩種基因型：β0：β珠蛋白基因發(fā)生突變后，完全不能合成β珠蛋白肽鏈。包括CD41-42，CD31，CD14-15，CD17，CD71-72，IVS-I-1，CD43，CD27/28等β+

：β珠蛋白基因發(fā)生突變后，還能部分合成β珠蛋白肽鏈。包括IVS-II-654,-28，-29，-30，-32，CAP，IVS-I-5,βE等β-地貧基因檢測β-地貧基因型異常結(jié)果分析與處理DNA不純或者太少,電泳驗證;肝素抗凝;PCR程序設(shè)置有誤;凝膠未加染料。1.α-地貧未跑出條帶？沒有PCR產(chǎn)物或者產(chǎn)物較少;配備試劑稱量有誤或者溶液定量差別較大;溶液A.B.CPH調(diào)錯;雜交溫度過高或者洗膜溫度過高(>43℃);顯色時間不夠或顯色過程未避光;H2O2失效。2.β-地貧未顯色或者顯色較弱？異常結(jié)果分析與處理α地貧點突變（CS/QS/WS）其突變位點在3.7和4.2和SEA交界位置，所以α地貧結(jié)果為-α3.7/-α3.7、-α3.7/-α4.2、-α4.2/-α4.2、-α3.7/--SEA、-α4.2/--SEA時，α地貧點突變的膜條為空白。3.α地貧點突變的膜條為空白？4.α地貧點突變結(jié)果為純合子能不能直接報告？不能，要加做α確定是否有缺失。如果α結(jié)果為缺失（包括sea、3.7、4.2）那么結(jié)果則報告為點突變雜合子；如果α

結(jié)果為正常，則報告為點突變純合子。異常結(jié)果分析與處理重新檢測并送血液室做Hb電泳，若結(jié)果一樣，考慮為點突變型HbH病。5.α地貧結(jié)果為SEA雜合子，Hb電泳提示為