實(shí)驗(yàn)動物基本操作

實(shí)驗(yàn)動物基本操作第一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日

為了確保實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性和可重復(fù)性，必須掌握規(guī)范的動物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)。嫻熟的動物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)和技巧，是實(shí)驗(yàn)研究的保證。動物具有自衛(wèi)能力，不會講話，不領(lǐng)人情，更不會自動服從。減少動物的應(yīng)激反應(yīng)或傷害，避免實(shí)驗(yàn)人員出現(xiàn)意外和受傷。第二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備理論準(zhǔn)備：了解動物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識查閱關(guān)于實(shí)驗(yàn)方法的參考文獻(xiàn)制定研究計(jì)劃和方案條件準(zhǔn)備：動物、儀器、器械、藥品實(shí)驗(yàn)場所和飼養(yǎng)場所第三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第五頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)動物的抓取與固定性別鑒定年齡的大致判斷妊娠檢查分組與編號本章主要內(nèi)容常規(guī)采血方法給藥途徑與方法麻醉方法處死方法第六頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第一節(jié)實(shí)驗(yàn)動物的抓取與固定原則：安靜環(huán)境動作輕柔和熟練善待動物：多一份愛就多一份收獲第七頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日小鼠第八頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第九頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日大鼠第十頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日豚鼠第十一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第十二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日家兔第十三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第十四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第十五頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第十六頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日狗第十七頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第十八頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第十九頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日貓第二十頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日猴第二十一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日

第二十二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第二節(jié)性別鑒定實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時有雌雄各半、雌雄不拘等。性成熟后，雌雄動物易區(qū)分：外生殖器第二性征新生動物？冬季天冷時的兔子？第二十三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日大鼠和小鼠第二十四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日兔、豚鼠第二十五頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第三節(jié)年齡的大致判斷提供實(shí)驗(yàn)動物時要有動物出生和生長記錄。根據(jù)卡片記錄來準(zhǔn)確判斷年齡。如無記錄則要根據(jù)該動物的生長曲線、牙齒、爪子或者毛色特征來大致判斷。第二十六頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日常用實(shí)驗(yàn)動物成年體重───────────────────────────

動物

小鼠

大鼠

豚鼠

家兔

貓

狗──────────────────────────

體重

18-28g

180-280g

350-650g

2-3kg

1.5-2.5kg

9-15kg─────────────────────────第二十七頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日小鼠ICR生長曲線第二十八頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日CBA/J生長曲線第二十九頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日初生小鼠即可發(fā)聲，嗅覺和味覺敏感3日臍帶脫落，開始長毛并出現(xiàn)胡須第三十頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日4－6日雙耳聳立第三十一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日7－8日開始爬行，下門齒長出，被毛濃密第三十二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日9－11日有聽覺，被毛長齊第三十三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日9－11日聽覺發(fā)育完全，被毛長齊第三十四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日12－14日開眼，上門齒出，開始采食、飲水第三十五頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日能跳躍，能抓取東西第三十六頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第三十七頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第三十八頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日3周后可斷奶獨(dú)立生活雄鼠：6.90g雌鼠：6.40g第三十九頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日SD生長曲線大鼠第四十頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第四十一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日初生仔鼠無毛、閉眼、耳孔閉合、6-7克第四十二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日耳朵張開第四十三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日開始長毛第四十四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日被毛明顯第四十五頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日8-10天下門齒長出第四十六頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第四十七頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日14-17天開眼第四十八頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第四十九頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日19天第一對臼齒長出第五十頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日21天第二對臼齒長出、可以斷乳雄鼠：52g，雌鼠：50g第五十一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日豚鼠一般年幼豚鼠牙齒短而白，爪軟而短，眼睛圓亮，行動活潑，被毛有光澤，且緊貼身體。而老年豚鼠則相反，牙齒和爪均較長，眼睛朦朧，行動遲緩。可根據(jù)體重粗略地判斷年齡。同日齡豚鼠，雌性體重略高于雄性。實(shí)驗(yàn)對年齡要求比較嚴(yán)格時，必須由卡片記錄提供準(zhǔn)確年齡。日齡/d初生720306090120180體重/g50-115100-120150-200170-220240-300330-400400-470520-600第五十二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日兔年齡判斷的重要標(biāo)志：門齒和爪。門齒：青年兔：潔白、短小、整齊。老年兔：暗黃、厚長、不整齊、破損。趾爪：＜1歲，紅多于白，=1歲，紅色與白色相當(dāng)，＞1歲，白多于紅色。另外，家兔皮薄而緊，眼神明亮，行動活潑的為青年兔；皮厚而松，眼神頹廢，行動遲緩的為老年兔。第五十三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日狗主要依據(jù)牙齒的生長情況、磨損程度、外形、顏色等來綜合鑒定:20—30天開始長牙，第10個月牙齒已全部長出。隨著年齡的增長，乳齒脫落而長出恒齒。2-4個月，更換門齒，5—6個月更換犬齒。幼年狗的牙齒潔白而無磨損，1—2歲時，下頜的前門齒逐漸被磨損，2—3歲時，前門齒的尖銳端被磨損而消失。而上頜前門齒在2—3歲時才開始磨損。在4—5歲時，其尖銳端也被磨損消失，且牙齒發(fā)黃。到10—12歲時，牙根全部磨損。第五十四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日年齡

犬齒更換和磨損情況2個月以下僅有乳齒(白、細(xì)、尖)2～4個月更換門齒4～6個月更換犬齒(白，牙尖圓鈍)6～10個月更換臼齒1歲牙長齊，潔白光亮。門齒有尖突2歲下門齒尖突部分磨乎3歲上、下門齒尖突大部分磨平4～5歲上、下門齒開始磨損呈微斜面，并發(fā)黃6～8歲門齒磨成齒根，犬齒發(fā)黃、磨損9～10歲唇部、胡須發(fā)白10歲以上門齒磨損，犬齒不齊全，牙根黃，唇邊胡須全白第五十五頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第四節(jié)妊娠檢查臨床檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查：外部檢查法摸胎法陰道檢查法：大小鼠、豚鼠、地鼠直腸檢查法：大動物超聲波檢查法孕酮含量測定法青蛙試驗(yàn)：猴第五十六頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日大小鼠陰道涂片檢查第五十七頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日陰栓檢查第五十八頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第五節(jié)分組與編號動物實(shí)驗(yàn)之前，必須對動物進(jìn)行隨機(jī)分組，再編號標(biāo)記。隨機(jī)化分組：避免人為影響第五十九頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日一、分組例1：將14只小鼠隨機(jī)分成兩組。①先將小鼠編為1～14號，②在隨機(jī)數(shù)字表上任點(diǎn)一數(shù)，按任意方向連續(xù)抄14個隨機(jī)數(shù)字?；蛘哂糜?jì)算器產(chǎn)生隨機(jī)數(shù)字。編排如下：第六十頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日動物編號1234567891011121314隨機(jī)數(shù)日1622779439495443548217379323歸組BBABAABABBAAAA③奇數(shù)代表A織，偶數(shù)代表B組④A組：356811121314B組：1247910⑤調(diào)整分組：接剛才隨機(jī)數(shù)字23繼續(xù)抄表得隨機(jī)數(shù)字78，用78除以8（因?yàn)樾枰袮組的8個數(shù)字調(diào)整掉一個），得余數(shù)6，所以把A組的第6個動物，即12號動物調(diào)整到B組。第六十一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日⑥最終分組A組：3568111314B組：124791012注意：如果A組多3個，則再取1個隨機(jī)數(shù)字，除以7。如果除盡，則寫下除數(shù)當(dāng)做余數(shù)。第六十二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日例2：12只大鼠隨機(jī)分為3組①大鼠編號1~12②在隨機(jī)數(shù)字表上任點(diǎn)一數(shù)，按任意方向連續(xù)抄12個隨機(jī)數(shù)字。③每個數(shù)分別用3除，記錄余數(shù)（整除記下3）④根據(jù)余數(shù)分組大鼠編號：1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12隨機(jī)數(shù)字：08，27，01，50，15，29，39，39，43，79，69，10余數(shù)：2，3，1，2，3，2，3，3，1，1，3，1組別：B，C，A，B，C，B，C，C，A，A，C，A第六十三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日⑤A：3，9，10，12B；1，4，6C：2，5，7，8，11⑥調(diào)整分組：接剛才隨機(jī)數(shù)字10繼續(xù)抄表得隨機(jī)數(shù)字61，用61除以5（因?yàn)樾枰袰組的5個數(shù)字調(diào)整掉一個），得余數(shù)1，所以把C組的第1個動物，即2號動物調(diào)整到B組。⑦最終分組

A：3，9，10，12B；1，2

，4，6C：5，7，8，11第六十四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日例2：6只大鼠隨機(jī)將每只分為1組①大鼠編號1~6②在隨機(jī)數(shù)字表上任點(diǎn)一數(shù)，按任意方向連續(xù)抄6個隨機(jī)數(shù)字。③每個數(shù)分別用6、5、4、3、2、1除，記錄余數(shù)（整除記下除數(shù)）④根據(jù)余數(shù)分組:余數(shù)3則把C記下；余數(shù)1，則把剩下的第1個字母A記下；第3個余數(shù)1，把剩下的第1個字母B記下……大鼠編號：1，2，3，4，5，6隨機(jī)數(shù)字：33，46，10，52，68，07除數(shù)：6，5，4，3，2，1余數(shù)：3，1，2，1，2，1，A組別：BCDEF第六十五頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日二、編號和標(biāo)記1、染色法：淺色動物

3.5-5％苦味酸溶液（黃色）

0.5%中性紅或堿性品紅溶液（紅色）

2％硝酸銀溶液（咖啡色，涂后光照10分鐘）煤焦油酒精溶液（黑色）龍膽紫溶液（紫色）第六十六頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第六十七頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日2、打耳孔法：小型動物第六十八頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日3、剪趾法：小型動物139號？第六十九頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日4、剪尾法：大、小鼠，僅限與兩組間區(qū)分5、針刺法(紋身)：刺號鉗，中、大型動物6、號牌法：耳標(biāo)簽、項(xiàng)圈、腿圈，中、大型動物7、剪毛法：大動物8、籠子標(biāo)號第七十頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第七十一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日三、去毛1、剪毛：彎頭剪毛剪2、拔毛：大小鼠尾靜脈、家兔耳緣靜脈注射3、剃毛：將剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸溫肥皂水潤濕，用剃刀順著被毛方向剃毛；如用電動剃毛推剪，則逆被毛向剃毛。第七十二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日4、化學(xué)脫毛：常用脫毛劑①8%硫化鈉水溶液②硫化鈉3份，洗衣粉1份、淀粉7份，加水調(diào)成糊狀③硫化鋇50克，氧化鋅25克，淀粉25克，加水100毫升調(diào)成糊狀④硫化鈉10克，生石灰15克，加水到100毫升，適合犬和其他大動物。第七十三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第六節(jié)常規(guī)采血方法正式實(shí)驗(yàn)前后，常需采血測定生化指標(biāo)。第七十四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日1、大小鼠：眶靜脈叢（竇）：少量多次采大小鼠血。小鼠0.2～0.3ml，大鼠0.4～0.6ml摘眼球：用于一次大量采小鼠血，可得到4～5％體重的血量。尾靜脈：用于少量多次采大小鼠血。第七十五頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日眶靜脈叢采血第七十六頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日摘眼球采血尾靜脈采血第七十七頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日剪頭：用于一次性大量采小鼠血，可得到0.5～1.0ml的血量大血管：包括頸動脈（靜脈），股動脈（靜脈），腋下動脈（靜脈），腹主動脈。此方法不常用于小鼠采血，而多用于大鼠一次性大量采血。可得5ml左右血量。心臟采血：小鼠少用，可用于大鼠一次性（開胸，右心室）或多次采血（不開胸）。第七十八頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日鼠斷頭器第七十九頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日2、家兔：耳緣靜脈：可反復(fù)采血，每次5～10ml。耳中央靜脈：可反復(fù)采血，每次10～15ml。第八十頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日心臟采血可用于一次性（開胸）或多次采血（不開胸）。一次性開胸采血可得到80～100ml血量。頸動靜脈采血：用于一次性采血，需要手術(shù)，可得血量80～10ml。第八十一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第八十二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日3、豚鼠：心臟采血：可用于一次性（開胸）或多次采血（不開胸）。一次性開胸采血可得到5～10ml血量。背跖靜脈采血：用于少量反復(fù)采血。第八十三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日4、犬貓：前肢內(nèi)側(cè)頭靜脈、后肢外側(cè)小隱靜脈。也可頸靜脈（動脈）或心臟采血5、豬：前腔靜脈采血或耳大靜脈采血6、羊：頸靜脈采血7、猴：前肢頭靜脈、后肢皮下靜脈或耳緣靜脈等。8、禽類：翼下靜脈第八十四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第八十五頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第八十六頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第八十七頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第八十八頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第八十九頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日常用實(shí)驗(yàn)動物的

最大安全采血量與最小致死采血量動物種類最大安全采血量(mL)最小致死采血量(mL)小鼠0.10.3大鼠12豚鼠510家兔1040

狗50300

猴1560第九十頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第九十一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日采血場所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25～28℃，冬季，15～20℃為宜；采血用具有采用部位一般需要進(jìn)行消毒；采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑。采血時要注意第九十二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日常用抗凝劑：肝素：抑制凝血酶活力，阻止血小板凝集。純品肝素1mg＝125U，10U~20U抗1ml血凝集，但通常應(yīng)用2~3倍劑量。用法：可配成1%肝素溶液，用時取0.1ml于試管內(nèi)，100℃烘干，每管可抗凝5~10ml血?；蛴?%肝素溶液濕潤采血注射器。肝素可改變蛋白質(zhì)等電點(diǎn)，當(dāng)用鹽析法分離蛋白作分類測定時，不可用肝素抗凝。第九十三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日枸櫞酸鈉：使凝血必需的鈣離子失活。常用3~5%水溶液，堿性較強(qiáng)。草酸鹽合劑：草酸銨1.2g，草酸鉀0.8g，福爾馬林1.0ml，加蒸餾水至100ml。使凝血必需的鈣離子失活。每毫升血加草酸鹽合劑0.1ml。氟化鈉：每毫升血加6mg。第九十四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日其他體液采集1、胸水、腹水采集：穿刺2、消化液采集：唾液，胃液，胰液，膽汁3、精液采集：中、大動物用假陰道，小動物穿刺附睪來采集精液。4、腦脊液采集：手術(shù)或小腦延髓池抽取5、骨髓采集：大動物活體穿刺，小動物處死后取股骨或胸骨骨髓第九十五頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日6、尿液采集：代謝籠收集導(dǎo)尿管采集膀胱穿刺壓迫排尿第九十六頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第七節(jié)給藥途徑與方法在動物實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、動物種類、藥物類型來決定動物的給藥途徑與方法。第九十七頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日1、自動口服：加入飼料或飲水2、投喂藥片：掰開口，放到舌根部3、灌胃（i.g)4、直腸給藥

5、呼吸道給藥

6、滴鼻

7、點(diǎn)眼第九十八頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第九十九頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日8、經(jīng)皮膚給藥：常用于檢測藥物、毒物、化妝品等的透皮吸收、局部作用、致敏作用等。家兔和豚鼠選擇脊柱兩側(cè)皮膚，大小鼠常采取浸尾方式。

9、皮內(nèi)注射(i.d)：一般用于接種或過敏實(shí)驗(yàn)。將藥液注射在真皮和表皮之間。第一百頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日10、皮下注射(s.c)：頸背部、腋下、腿、側(cè)腹。11、肌肉注射(i.m)：股內(nèi)側(cè)部肌肉。第一百零一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日12、腹腔注射(i.p)：下腹部腹中線兩側(cè)第一百零二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日13、靜脈注射(i.v)：小鼠：尾靜脈大鼠：尾靜脈、陰莖靜脈、舌下靜脈、淺背側(cè)跖靜脈大小鼠尾部有4對動靜脈，其中背腹各有1根動脈、兩側(cè)各有1根靜脈很明顯。第一百零三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日尾靜脈注射第一百零四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日陰莖靜脈注射舌下靜脈注射第一百零五頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日猴的后肢皮下靜脈注射淺背側(cè)跖靜脈第一百零六頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日豚鼠：淺背側(cè)跖靜脈、耳靜脈注射家兔：耳靜脈注射豬：耳緣靜脈第一百零七頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第一百零八頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日貓、狗：前肢內(nèi)側(cè)頭靜脈、后肢外側(cè)小隱靜脈注射第一百零九頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日14、腦腔注射15、關(guān)節(jié)腔注射：16、椎管內(nèi)注射：注射入蛛網(wǎng)膜下腔17、淋巴囊內(nèi)注射：蛙和蟾蜍第一百一十頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日注射途徑小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.2～1.01～32～55～105～15肌肉0.1～0.20.2～0.50.2～0.50.5～12～5靜脈0.2～0.51～21～53～105～15皮下0.1～0.50.5～10.5～21～33～10幾種動物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）第一百一十一頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第八節(jié)麻醉方法對動物實(shí)施麻醉，是動物福利的措施。如不實(shí)施麻醉，動物嚴(yán)重應(yīng)激，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至死亡。動物清醒狀態(tài)下，可能會傷及人員。第一百一十二頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日1、麻醉方法：全麻吸入麻醉，靜脈注射、腹腔注射。局麻浸潤麻醉。根據(jù)手術(shù)，按皮下、筋膜、肌肉、腹膜、骨膜等順序逐步深入注射到術(shù)野周圍。第一百一十三頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日第一百一十四頁，共一百二十三頁，2022年，8月28日常用麻醉劑的用法及劑量麻醉劑動物種類給藥途徑劑量(mg/kg)常用濃度(％)戊巴比妥鈉犬、兔靜脈303

腹腔40～503大鼠、小鼠、豚鼠

腹腔40～502硫噴妥鈉

犬、兔

靜脈15-202

大鼠

腹腔401

小鼠

腹腔15-201氯胺酮犬、貓

腹腔10-4010

大鼠、小鼠

腹腔100～20010

氯醛糖

兔

靜脈80-1002

大鼠

腹腔502烏拉坦

兔

靜脈750-100030

大鼠、小鼠皮下或肌肉800-100020