臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)：11 補(bǔ)體的檢測及應(yīng)用

第十七章補(bǔ)體檢測及應(yīng)用

P197一.概述：（一）補(bǔ)體的定義及性質(zhì)：complement：補(bǔ)體是存在于人和動物血清中的一組經(jīng)激活后具有酶活性的球蛋白，一般情況下處于未激活狀態(tài)。補(bǔ)體的特性：穩(wěn)定性差，各種理化因素都可使之失活：如酸、堿、紫外線照射、劇烈震蕩等約90％的補(bǔ)體成分由肝細(xì)胞合成，少數(shù)由巨噬細(xì)胞、腸上皮細(xì)胞、脾細(xì)胞等產(chǎn)生補(bǔ)體成分均為糖蛋白，大多為β球蛋白，少數(shù)為α或γ球蛋白。實(shí)驗(yàn)室滅活補(bǔ)體的條件為：56oC、30'；室溫下2天補(bǔ)體也可自然失活；由于補(bǔ)體的穩(wěn)定性差，容易失活，因此作補(bǔ)體的檢測必須用新鮮血清（二）補(bǔ)體的組成：由三部分組成1.補(bǔ)體的固有成分：C1-C9，其中C1又包括C1q、C1r、C1s，共9種成分11種蛋白分子。其中C9的分子量最小、C3含量最高；2.補(bǔ)體的調(diào)節(jié)蛋白：如C4調(diào)節(jié)蛋白、C1抑制物、S蛋白等；3.補(bǔ)體受體；如C1qR、C3aR等；（三）補(bǔ)體的激活：三條途徑1.經(jīng)典激活途徑：又稱C1途徑激活劑：IgG、IgM形成的AgAb復(fù)合物參與成分：C1－C9激活過程：這是一個(gè)連鎖反應(yīng)，缺少其中任何一個(gè)組分，連鎖反應(yīng)都不能進(jìn)行2.旁路激活途徑：又稱C3途徑激活劑：脂多糖、酵母多糖、IgG4和IgA的聚合物(提供接觸表面)參與成分：C3、C5－C9、B因子、D因子、P因子3.甘露糖結(jié)合凝集素途徑：MBL途徑在感染早期，常采用途徑2、3；產(chǎn)生Ab后，采用途徑1三條激活途徑的比較項(xiàng)目經(jīng)典途徑旁路途徑MBL途徑激活物抗原抗體復(fù)合物細(xì)菌脂多糖、酵母多糖等細(xì)菌N氨基半乳糖或甘露糖參與成分C1-C9C3、C5-C9、B、DC2-C9C3轉(zhuǎn)化酶C4b2bC3bBbC4b2bC5轉(zhuǎn)化酶C4b2b3bC3bBb3bC4b2b3b作用特異性免疫非特異性免疫(早期抗感染)非特異性免疫(早期抗感染)（四）補(bǔ)體的生物學(xué)作用：

1.溶菌、溶細(xì)胞作用：MAC效應(yīng)2.調(diào)理作用(C3b、C4b和iC3b)

3.清除免疫復(fù)合物(C3b、C4b)

4.炎癥介質(zhì)作用

①趨化作用(C3a、C5a)②過敏毒素作用(C3a、C4a、C5a)二.補(bǔ)體的檢測：包括兩方面的檢測功能檢測：總補(bǔ)體活性的檢測、單一補(bǔ)體活性的檢測；量的測定：單一補(bǔ)體量的測定；

活性的檢測多采用溶血試驗(yàn)；量的測定多采用免疫比濁法或單擴(kuò)法溶血試驗(yàn)：綿羊紅細(xì)胞（Ag）與相應(yīng)的Ab－兔抗綿羊紅細(xì)胞抗體（溶血素）結(jié)合后形成致敏羊紅細(xì)胞（一對AgAb復(fù)合物），在補(bǔ)體存在的情況下，啟動經(jīng)典激活途徑，導(dǎo)致致敏羊紅細(xì)胞的細(xì)胞膜穿孔，釋放血紅蛋白，從而發(fā)生溶血。在溶血反應(yīng)中，指示系統(tǒng)是綿羊紅細(xì)胞和溶血素。補(bǔ)體的來源是多只豚鼠的混合血清，其原因?yàn)槎嘀浑嗍笱宓幕旌媳苊饬搜a(bǔ)體成分欠缺，從而使經(jīng)典途徑的連鎖反應(yīng)能順利進(jìn)行。溶血反應(yīng)SRBC+兔抗SRBC抗體(溶血素)新鮮血清(提供補(bǔ)體）溶血+啟動經(jīng)典激活途徑（一）總補(bǔ)體活性檢測：CH50試驗(yàn)

(ComplementHemolysis50%)原理：組成和功能完整的補(bǔ)體系統(tǒng)能使致敏羊紅細(xì)胞發(fā)生溶血；

羊紅細(xì)胞的溶血程度與補(bǔ)體的活性成正比；整個(gè)曲線呈倒“S”型，即隨著補(bǔ)體量增加，溶血程度也增加在50％溶血附近（30％－70%之間），稍微改變補(bǔ)體量，溶血程度變化明顯，因此以50％判定溶血終點(diǎn)較100％更為敏感，所以該試驗(yàn)稱為50％溶血試驗(yàn)（CH50）?？傃a(bǔ)體活性的檢測方法：見P201試管號1:20稀釋血清BB緩沖液溶血素

2%SRBC0.1(ml)1.4(ml)0.5(ml)0.5(ml)0.151.350.50.50.201.300.50.50.251.250.50.50.301.200.50.50.351.150.50.50.401.100.50.50.451.050.50.50.501.000.50.50.001.500.50.5

上述10支試管經(jīng)37oC、水浴30min反應(yīng)離心后與已制備好的50％溶血標(biāo)準(zhǔn)管比較，取吸光度值最接近的一管，則CH50（U/ml）＝1/血清用量×血清稀釋度總補(bǔ)體活性參考范圍：50－100U/ml（二）單一補(bǔ)體的測定：1.單一補(bǔ)體活性的檢測：用免疫溶血法，常用于檢測C3、C4、C1q、B因子等原理：將動物或人血清（提供補(bǔ)體）用一些化學(xué)試劑特異地滅活某個(gè)組分，然后加入致敏羊紅細(xì)胞，由于補(bǔ)體缺少某一組分，則不能被激活，溶血反應(yīng)不能發(fā)生。當(dāng)加入待測血清，如其中含有所缺失的補(bǔ)體成分，連鎖反應(yīng)重又發(fā)生，即可出現(xiàn)溶血。此法可診斷：補(bǔ)體個(gè)別組分先天性缺乏：如C3、C4、C1q、B因子；某一組分有無溶血活性如：多支豚鼠混合血清+氨水（破壞C4）→R4；

R4+致敏羊紅細(xì)胞（抗原抗體復(fù)合物）→

不溶血+待測血清，觀察有無溶血

如溶血，說明待測血清有C4，且C4功能正常如不溶血，說明無C4，或C4功能差2.單一補(bǔ)體量的測定：采用免疫化學(xué)法

采用免疫比濁法或單擴(kuò)法，臨床上常檢測C3。C3含量：1200-1300μg

/ml

（三）補(bǔ)體裂解產(chǎn)物的檢測：C3→C3a+C3b；C3b→C3c+C3d如果血清中出現(xiàn)了C3d，說明補(bǔ)體被激活：血清中C3↓，C3d↑，表明分解↑；

C3↓，C3d正常，表明合成↓；這些指標(biāo)都是以C3d來判斷的，其含量一般小于1mg，檢測方法多用單擴(kuò)法或火箭電泳三.補(bǔ)體檢測的臨床意義：1.補(bǔ)體量↑:多見于急性炎癥感染恢復(fù)期、組織損傷、癌腫等；2.補(bǔ)體量↓：見于補(bǔ)體消耗↑：體內(nèi)有Ag、Ab

反應(yīng)，如SLE、RA、移植排斥反應(yīng)、G-菌感染等；補(bǔ)體合成↓：肝臟疾患：急慢性肝硬化、肝細(xì)胞癌、營養(yǎng)不良患者補(bǔ)體先天性缺乏：具有遺傳性和家族史：C3缺陷導(dǎo)致嚴(yán)重感染、C1抑制物缺陷引起遺傳性血管神經(jīng)性水腫四.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）：原理：補(bǔ)體可與任何一組AgAb復(fù)合物結(jié)合；一旦與某一AgAb復(fù)合物結(jié)合后，便不再與另一復(fù)合物結(jié)合。如：已知Ag＋待測物（Ab？）→AgAb＋C（補(bǔ)體）→＋致敏羊紅細(xì)胞→不溶血結(jié)果判斷：不溶血為陽性，即待測物中有相應(yīng)的Ab或Ag；溶血為陰性，即待測物中無相應(yīng)的Ab或Ag.優(yōu)點(diǎn)：該試驗(yàn)既可測Ag、又可測Ab；Ag既可以是顆粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是塊狀物，因此檢測Ag的范圍廣；可以用于病毒、立克次氏體、細(xì)菌等多種病原體的