cfdna樣本及文庫(kù)制備流程

cfDNA樣本及文 流Comet介流CometComet介流CometComet設(shè)開(kāi)發(fā)原2CometCometComet基于Firefly技術(shù)進(jìn)行開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)；（專(zhuān)利號(hào)：US20160304954AlComet是以cfDNA為樣本的擴(kuò)增子建3Comet設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)原RandomerrorsdonotcreaterepetitivevariantsintandemsequencesCancermutationscreaterepetitivevariantsintandemsequencesFirefly-ConcatemersequencingforNGSRandomerrorsdonotcreaterepetitivevariantsintandemsequencesCancermutationscreaterepetitivevariantsintandemsequencesRollingCircle4CometComet基于Firefly原理設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)的Comet具有更高的

CYP2C19SNV(nucleotide681inexon

NucleotidePosition5Comet

ysis&Day

Day

Day1- Day2-

Day5day<2hrhands-on6CfDNA樣本及文 流

7 流采

Streck 常 采血

采血

低溫高速離 轉(zhuǎn)移血漿混 -80℃保存或注意事項(xiàng)：1.不同采血管低速離心溫度不一2.兩個(gè)轉(zhuǎn)移血漿的步驟，注意不要吸到分界面以下成分或者沉淀抽提cfDNA（一類(lèi)備案試劑盒MagicPureTMCell-FreeDNA產(chǎn)物cfDNA質(zhì)片段分布質(zhì)控標(biāo)

8文 流試劑 試劑高溫處理冰?。╟fDNA+試劑

恒溫孵

恒溫孵環(huán)化連接產(chǎn)注意事項(xiàng)：1.操作過(guò)程保持在冰上高溫處理過(guò)程恒溫孵育采用PCR文 流試劑 試劑不同溫度孵 PCR擴(kuò)環(huán)化連接產(chǎn)

擴(kuò)增產(chǎn)注意事項(xiàng)：1.操作過(guò)程保持在冰上不同溫度孵育處理結(jié)束后立即放入冰浴多個(gè)樣本操作時(shí)，試劑6文 流純化目的片段，目的片段加barcode磁珠

PCR擴(kuò)擴(kuò)增產(chǎn)

吸 乙 洗脫樣 洗脫

擴(kuò)增文注意事項(xiàng)：1.磁珠提前室溫平衡，純化過(guò)程保持室溫操作棄上清，乙醇，轉(zhuǎn)移洗脫液過(guò)程中不要碰到磁乙醇第二 后干燥時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫濕度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，避免過(guò)度干燥文 流磁珠

室溫育 磁珠

室溫孵 吸 乙

洗 純化文注意事項(xiàng)：1.磁珠提前室溫平棄上清，乙醇，轉(zhuǎn)移洗脫液過(guò)程中不要碰到磁乙醇第二 后干燥時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫濕度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，避免過(guò)度干燥文 流單個(gè)文庫(kù)濃度>0.5ng/uL（Qu