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植物生理學(xué) 過(guò)氧化氫酶的活性的測(cè)定_第3頁(yè)
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過(guò)氧化氫酶的活性的測(cè)定－紫外線吸收法一、原理HO在240nm波長(zhǎng)下有強(qiáng)烈吸收，過(guò)氧化氫酶能分解過(guò)氧化氫，22使反應(yīng)溶液吸光度（A）隨反應(yīng)時(shí)間而降低。根據(jù)測(cè)量率的變化速240率即可測(cè)出過(guò)氧化氫酶的活性。二、材料與設(shè)備植物材料：植物的葉實(shí)驗(yàn)材料：紫光分光光度計(jì)、離心機(jī)、研缽、250ml容量瓶、0.5ml吸管1支、10ml試管1支試劑：0.2mol/LpH7.8磷酸緩沖液0.1mol/HO（用0.1mol/L高錳酸鉀標(biāo)定）22三、操作步驟1、酶提取液：稱取葉片0.5g置于研缽中，加入pH7.0的磷酸緩沖液研磨成為勻漿，并用緩沖溶液清洗研缽數(shù)次（共用6ml磷酸緩沖液，緩沖液分幾次加入），取上部澄清液在4000rpm下離心15min,上清液即為過(guò)氧化氫酶粗提液。保存?zhèn)溆谩?、測(cè)定：取10ml試管1支，按表20-2順序加入試劑。紫外線吸收法測(cè)定HO樣品配置表22在管中加入0.3ml0.1mol/L的HO，加完后立即計(jì)時(shí)，并迅速倒入石22英比色杯中，240nm下測(cè)定吸光度，每隔一分鐘讀數(shù)一次，共測(cè)三分鐘，測(cè)完后，按下式計(jì)算酶活性。四、結(jié)果計(jì)算以lmin內(nèi)減少0.1的酶量為一個(gè)酶活單位（U）△AXV240T-過(guò)氧化氫酶活性（u/gFW/min）=0?1XVXtXFW=0.043X4.6一0.1一0.2一0.3一3=10.99五、實(shí)驗(yàn)反思1、影響過(guò)氧化氫酶活性測(cè)定的因素有哪些？過(guò)氧化氫酶提取自植物的新鮮葉片中，新葉與舊葉的酶活性存在差異，所以葉片的選擇會(huì)影響酶活性的測(cè)定。溫度的變化也會(huì)引起酶活性的測(cè)定研磨是否充分，洗滌是否洗干凈也會(huì)影響。2、實(shí)驗(yàn)測(cè)得的吸光度較小（吸光度的起始值較低），酶活性較小，可能是選取的葉片較老，實(shí)驗(yàn)中的失誤，用滴定管滴定時(shí)，滴定的蒸餾水超過(guò)

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