LC日常維護(hù)和故障處理

日常維護(hù)和常見色譜故障Page2711溶劑準(zhǔn)備：過濾防止固體顆粒損傷儀器或柱頭使用小于0.5

m過濾膜.有機(jī)物-Teflon水

-Nylon66使用HPLC純?nèi)軇┻^濾裝置真空2溶劑過濾不干凈的溶劑或在溶劑瓶中長(zhǎng)菌的溶劑會(huì)阻塞溶劑過濾器，降低泵的操作性能。遵從下列建議可以提高性能，延長(zhǎng)溶劑過濾器的壽命：使用無菌溶劑瓶避免溶劑長(zhǎng)菌。用濾膜過濾溶劑去除微生物。每?jī)商旄鼡Q或過濾溶劑。避免溶劑瓶直接日照。3溶劑信息避免使用下列對(duì)不銹鋼有腐蝕性的溶劑：鹵化物堿金屬溶液和相應(yīng)的酸溶液。高濃度的無機(jī)酸例如：硝酸和硫酸。能夠形成鹵素自由基或酸的氯化試劑及其混合物。含有過氧化物的色譜級(jí)醚必須用氧化鋁干燥劑。在有機(jī)溶劑中的有機(jī)酸溶液。含有強(qiáng)絡(luò)合劑的溶液。四氯化碳和異丙醇或THF混合液。4NameAceticAcidAcetoneAcetonitrileBenzeneButylAlcoholCarbonTetrachlorideChloroformCyclohexaneCyclopentaneDichloroethaneDichloromethaneDimethylformamideDimethylSulfoxideDioxanEthylacetateEthylAlcoholDi-EthyletherHeptaneHexaneMethylAlcoholMethylethylKetoneI-OctanePentaneI-PropylAlcoholTetrachloroethaneTetrahydrofuranTolueneAceticAcidAcetoneAcetonitrileBenzeneCarbonTetChloroformCyclopentaneButylAlcoholCyclohexaneDichloroethaneCHCl22DMFDMSODioxanEthylacetateEthylAlcoholDi-EthyletherHeptaneHexaneMethylAlcoholMEKI-OctanePentaneI-PropylAlcoholDi-PropyletherCH22Cl4THFTolueneTrichloroethaneWaterXyleneTrichloroethaneWaterXyleneDi-PropyletherImmiscibleMiscible溶劑的相溶性5溶劑的紫外吸收SolventUVCutoff(nm)Acetonitrile190WaterCyclohexane195Hexane200Methanol210Ethanol210DiethylEther220Dichloromethane220Chloroform190240CarbonTetrachloride265Tetrahydrofuran280(210)Toluene280UVCutoffisthewavelengthatwhichabsorbanceequals1AU.6溶劑脫氣目的脫氣方法He脫氣排除溶解在流動(dòng)相中的氧氣和氮?dú)饣亓骷訜崦摎庹婵彰摎獬暶摎?準(zhǔn)備流動(dòng)相流動(dòng)相應(yīng)該：HPLC級(jí)過濾(最大0.45um,0.2um最好)脫氣，尤其在低流速時(shí)相溶8初始化HPLC泵移走溶劑與系統(tǒng)中的氣泡使溶劑組成變化更容易確保分析結(jié)果再現(xiàn)性對(duì)于反相柱使用5～10倍柱體積流動(dòng)相平衡色譜柱Flow柱平衡初始化和平衡9預(yù)柱和保護(hù)柱從泵來的流動(dòng)相預(yù)柱進(jìn)樣口保護(hù)柱分析柱至檢測(cè)器預(yù)柱是針對(duì)流動(dòng)相來保護(hù)色譜柱

保護(hù)柱是針對(duì)樣品來保護(hù)色譜柱10ColumnInstallation柱安裝Eachcolumnhasadefinedflowdirection!Theflowdirectionisshownbythearrowordirectionofwriting.Don’tchangetheflowdirection,thiswilldecreasecolumnperformance.每根柱子都定義一個(gè)流動(dòng)方向.這個(gè)流動(dòng)方向用箭頭或其他方式顯示在柱子上.不要改變隨意改變流動(dòng)方向,這將降低柱性能.11ColumnInstallationWhat’sneeded:Therightconnectorstoavoidanyfutureleak.GuardcolumntoprotectthemaincolumnTherighttools12ColumnInstallationcont.Practicalhints:Fingertighten1/4turnwithwrench13色譜柱保護(hù)過濾所有的溶劑和樣品使用保護(hù)柱儀器在使用完畢，要沖洗整個(gè)系統(tǒng)，移走系統(tǒng)中緩沖液柱子在不使用時(shí)，兩端密封保存在適當(dāng)?shù)娜軇┲斜４嬷幼⒁馍V柱的pH值使用范圍不要高壓沖洗柱子不要高溫下過長(zhǎng)時(shí)間使用硅膠鍵合相14樣品準(zhǔn)備樣品完全溶解在流動(dòng)相中樣品沒有完全溶解過濾樣品，確保樣品中不含固體顆粒用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱的溶劑溶解樣品進(jìn)樣量盡量小15HPLC柱測(cè)試對(duì)于一根新柱子，在流動(dòng)相組成不變的情況下進(jìn)行下述實(shí)驗(yàn)并記錄：1.記錄理論塔板數(shù)N，以及:柱子長(zhǎng)度及內(nèi)徑.測(cè)試樣品名稱及K’值.固定相和流動(dòng)相.流動(dòng)相流速.進(jìn)樣量.溫度.2.峰對(duì)稱性包括苯酚胺3.記錄柱子壓力.16TheGoodUser下列優(yōu)良/常規(guī)實(shí)驗(yàn)操作能夠最大限度降低維修費(fèi)用：清潔的儀器,流動(dòng)相和樣品;如果必要,進(jìn)行過濾。保證溶劑的相溶性。儀器使用完畢，沖洗整個(gè)系統(tǒng)，去掉鹽份，防止污染。對(duì)儀器的維護(hù)和保養(yǎng)進(jìn)行記錄。17混合問題問題：一個(gè)有紫外吸收的流動(dòng)相與一個(gè)沒有紫外吸收的流動(dòng)相動(dòng)態(tài)混合產(chǎn)生噪音，增加靜態(tài)混合器可以降低這種噪音。缺點(diǎn):

增加了死體積++靜態(tài)混合器18基線噪音可能的原因：檢測(cè)池臟檢測(cè)器氘燈能量下降由泵引起的脈沖檢測(cè)器上的溫度效應(yīng)檢測(cè)池中有氣泡通過Time(min.)19基線噪音

停泵

噪音是否依然存在是否檢測(cè)器?泵或流動(dòng)相?

其它要考慮的問題▲是否改變了流動(dòng)相的組成？▲是否改變了檢測(cè)波長(zhǎng)?▲在你的儀器上使用的最后的流動(dòng)相是什么?▲流動(dòng)相是否相溶?▲流動(dòng)相是否干凈?20基線漂移梯度洗脫引起的溫度不穩(wěn)定（RID）流動(dòng)相臟柱子沒有用流動(dòng)相平衡系統(tǒng)中污染物溢出21鬼峰20%-100%MeOH梯度洗脫沒有進(jìn)樣鬼峰－沒有進(jìn)樣就有色譜峰出現(xiàn)。原因－流動(dòng)相臟60153015037151722柱外擴(kuò)展用較短的、窄內(nèi)徑的毛細(xì)管連接進(jìn)樣器和色譜柱以及柱子和檢測(cè)器。確認(rèn)連接管的接頭都相互匹配。使用死體積小的流動(dòng)池減小進(jìn)樣量增加柱外死體積23峰形柱頭塌陷或柱床運(yùn)動(dòng)。泵頭過濾芯(Frit)部分堵塞。組份共流出1·雙峰正常雙峰柱頭塌陷24峰形2·峰擴(kuò)展所有峰都擴(kuò)展柱效降低或有柱塌陷進(jìn)樣體積過大流動(dòng)相粘度大部分峰擴(kuò)展前一次分析樣品的流出物高分子量樣品－蛋白質(zhì)或聚合物25峰形原因：部分峰拖尾正常拖尾正常拖尾二次保留效應(yīng)殘留硅醇的相互作用小峰在大峰后洗脫出來3·拖尾對(duì)稱因子>1.2柱頭有污染物堆積重金屬反應(yīng)所有峰均拖尾柱外效應(yīng)柱子失效26峰對(duì)稱ABS=BAExcellentS=1.0-1.05AcceptableS=1.2UnacceptableS=2AwfulS=427拖尾因子t=A+B2AABExcellentt=1.0-1.05Acceptablet=1.2Unacceptablet=2Awfult=428峰形原因：正常前伸柱子過載4·前伸峰小峰在大峰之前洗脫出來對(duì)稱因子<0.929峰形原因正常負(fù)峰樣品吸收比流動(dòng)相吸收小。5·負(fù)峰溶解樣品的溶劑通過柱子時(shí)平衡被破壞RID中最常見30六通閥手動(dòng)進(jìn)樣閥-六通閥ToWasteSampleLoop(FixedVolume)FromToColumnSampleSyringeLoadInjectToColumnPumpFromPumpToWasteCommonProblemsImpropersyringesizeortypeValveBlockageInjection-portleakageSamplecarryoverCross-portleaks31壓力問題

壓力問題壓力過高壓力過低壓力波動(dòng)???32壓力過高

柱子進(jìn)口過濾芯被污染PURGE閥過濾芯被污染

色譜柱被污染

連接管路，尤其是針座毛細(xì)管堵塞

進(jìn)樣器旋轉(zhuǎn)密封閥被堵塞

進(jìn)樣針或針座被阻塞

壓力測(cè)量使用此閥分割系統(tǒng)33監(jiān)測(cè)高壓34溶劑進(jìn)口過濾芯堵塞連接管路泄漏或其它備件（泵密封