動物細胞融合和單克隆抗體的制備-副本

動物細胞融合與單克隆抗體學習目標：舉例說出動物細胞融合與單克隆抗體的原理和應用學習重點和難點：單克隆抗體的制備和應用提問：哪種植物細胞工程技術可以突破不同生物之間的生殖隔離障礙，培育出新的作物類型？

植物體細胞雜交技術你能回憶出植物體細胞雜交的過程嗎？植物體細胞雜交技術過程圖動、植物細胞在結構上有何區(qū)別？無細胞壁全能性受限制，不能發(fā)育成雜種動物動物細胞雜交與植物細胞雜交的不同：不需去除細胞壁不能發(fā)育成新的動物個體思考動物細胞融合的概念

動物細胞融合也稱細胞雜交，是指

或

動物細胞形成一個細胞的過程動物細胞融合融合后形成的單核細胞稱為雜交細胞多個兩個請同學們閱讀課本P52動物細胞融合細胞A細胞B雜種細胞生物：滅活的病毒物理法化學法動物細胞體外融合誘導方式用滅活的病毒誘導動物細胞融合過程細胞核病毒顆粒細胞核滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面先質融合，再核融合細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜連接細胞融合，形成雜種細胞（細胞膜具有一定的流動性）問題討論2、動物細胞融合有什么意義？1、不滅活的病毒能作為誘導劑嗎？病毒一般對生物體是有傷害的。不滅活的病毒會感染細胞，而不能誘導細胞融合。滅活的病毒物理或化學方法喪失感染活性保留融合活性突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。主要用于制備單克隆抗體有何同？不同？動物細胞融合植物體細胞雜交植物、動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理步驟誘導方法用途主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株物理、化學方法（同左）滅活的病毒

物理（離心、振蕩、電激）化學（聚乙二醇）使細胞分散后誘導細胞融合去壁→誘導融合→組培細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞全能性由單個B淋巴細胞經過無性繁殖（克隆），形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產生的化學性質單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。

單克隆抗體特點：

特異性強、靈敏度高抗體是由何種細胞產生的？2.抗體是如何產生的？主要分布于哪里？？單克隆抗體抗體是機體受抗原刺激后產生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。漿細胞產生抗體。主要存在于血清中。B淋巴細胞與抗體的關系動物體內的B淋巴細胞可以產生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。每一個淋巴細胞只能產生一種抗體。..傳統(tǒng)的抗體的生產方法及缺陷是什么？怎樣解決這個問題？？單克隆抗體傳統(tǒng)制備抗體的缺點：傳統(tǒng)制備抗體的方法是：

產量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何獲得化學性質單一、特異性強的抗體？（怎樣才能大量生產單克隆抗體？）單克隆抗體提示：1.什么樣的細胞可以產生抗體？2.什么樣的細胞可以無限增殖？？

設計方案：一個B淋巴細胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞－－能無限增殖雜種細胞單克隆抗體B淋巴細胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中融合細胞幾種類型？骨髓瘤細胞---骨髓瘤細胞B淋巴細胞---B淋巴細胞B淋巴細胞---骨髓瘤細胞多種雜交細胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性克隆上述雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細胞單克隆抗體注射到小鼠體內體外培養(yǎng)2、單克隆抗體的制備過程第1次篩選目的：得到雜交瘤細胞（多種）。第2次篩選目的：在雜交瘤細胞中篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞。該細胞繼承雙親細胞的遺傳特性，既能無限增殖又能產生專一的特異性抗體。雜交瘤細胞有何特點？特異性強，靈敏度高免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合骨髓瘤細胞B淋巴細胞注射特定抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性專一抗體檢驗陽性注射到小鼠體內體外培養(yǎng)單克隆抗體克隆雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細胞多種雜交細胞雜交瘤細胞有何特點？本過程利用的那些技術？動物細胞融合技術動物細胞培養(yǎng)技術是否注射抗原（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細胞有幾種類型？幾種融合細胞？兩次篩選的目的分別是什么？2、單克隆抗體制備過程與傳統(tǒng)制備的抗體相比具有什么特點？①診斷疾病單克隆抗體的應用②用于治療疾病和運載藥物

（導向作用，作為載體，生物導彈=單克隆抗體+藥物，治療腫瘤）（位置準確、療效高、副作用小）兩個過程動物細胞融合過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法一個新細胞一個優(yōu)勢課堂小結你記住了嗎？－－滅活的病毒－－雜交瘤細胞－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）A．結果是相同的 B．雜種細胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導融合的手段相同Ｂ即時訓練

單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是（）①淋巴細胞②小鼠骨髓瘤細胞③B淋巴細胞自身融合細胞④小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞⑤雜交瘤細胞A．②④B．①③C．①②③④D．②③C

下圖為某同學根據雜交瘤技術的方法，設計的生產破傷風桿菌的抗體實驗方案2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？1、該實驗方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細胞能夠產生______制備單克隆抗體B細胞抗體B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

下圖為某同學根據雜交瘤技術的方法，設計的生產破傷風桿菌的抗體實驗方案4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。細胞融合滅活病毒雙親細胞分泌特異性抗體無限增殖B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

下圖為某同學根據雜交瘤技術的方法，設計的生產破傷風桿菌的抗體實驗方案5、C過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段，其中_____代以內的的細胞屬于細胞株。原代傳代50B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數量的細胞群注射到小鼠腹腔AC1、陰性：測試區(qū)中出現(xiàn)一條紫紅色線（對照線C線），表明未懷孕。2、陽性：測試區(qū)中出現(xiàn)兩條紫紅色線（對照線C線和檢測線T線），表明懷孕。不同懷孕階段的檢測線顯色強度隨HCG濃度的改變而改變。3、無效：測試區(qū)無紫紅色線出現(xiàn)或測試區(qū)僅出現(xiàn)